medios de cultivo
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Medios de cultivo de bacterias
Preparación y colonias de bacterias
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Tipos de mediosLos medios de cultivo se dividen acorde a sus características en generales, selectivos o diferenciales.Generales: permiten el crecimiento de cualquier tipo de bacteria.Selectivos: sólo permiten crecer un cierto tipo, p.ej. sólo un género.Diferenciales: permiten distinguir entre dos o mas bacterias por características coloniales.
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Medios generales• Agar Soya Tripticasa
(TSA)*• Agar marino 2216 o Zobell• Agar Nutritivo**
* añadir 2.0 % NaCl** añadir 2.5 % NaCl
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Medios selectivos
• Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS): Vibrio
• Agar Cetrimida: Pseudomonas
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Medios diferenciales
• Agar Eosina Azul de Metileno: coliformes y E. coli
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Preparación de medios
• Siempre preparar los medios con agua destilada (salvo el Marino).
• Es necesario ajustar simpre el pH.• Todos los utensilios deben estar
perfectamente limpios.• Todos los medios deben esterilizarse de
alguna forma.
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• Los medios se preparan en matraces cónicos con tapa
• Se pesa la cantidad de medio requerida, se disuelve o suspende en el agua.
• Se ajusta el pH.• Se esteriliza a 121°C por 20 min• Se espera a que enfrie (42°C o hasta que se
pueda sostener el recipiente sin quemarse la mano)
• Servir 20 ml Aprox. en cada caja de Petri
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Esterilización
• Tipos de esterilización– Húmeda, autoclave
– Seca, horno
– Gaseosa: óxido etileno, formaldehído o H2O2.
– Filtración:membranas de 0.45 y 0.22 µm.
Es el proceso mediante el cual se destruyen o remueven todos los microrganismos
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Esterilización húmeda• No colocar recipientes completamente cerrados en
la autoclave. • El vapor debe entrar en contacto con todo lo que
se quiere esterilizar• No esterilizar solventes o químicos corrosivos• Si se esterilizan líquidos, bajar la presión
lentamente y dejar enfriar los recipientes dentro de la autoclave
• Se esterilizan mejor los líquidos si se dividen en pequeños recipientes que en uno grande (> 1 lt)
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Esterilización húmeda (Cont.)
• Temperatura: 121 -123°C (250-254°F)• Presión: 15 psi• Tiempo: 10-15 min instrumentos*
20 -30 min líquidos*
* el tiempo depende de que tan llena este la cámara de la autoclave, muy llena mas tiempo.
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Agar TCBS
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agar Marino y TSA
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Colonias en agar TCBS
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Purificación de vibrios
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Colonias en agar Marino
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Vibrios en TSA
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