Mtodos rpidos y automatizacin en Microbiologa alimentaria.El mtodo ideal... Rpido Preciso Selectivo eficaz (sensible y especfico) de coste moderado fcil de usar automatizado (equipo resistente y porttil).-

Microbiologa tradicional vs rpida Tradicional: Costosa, Poco volumen de muestras, Laboriosa, Tiempo Rpida: Reduce costos, Gran volumen de muestras, Automatizable, < TiempoAnalisis Microbiologico:1)Toma y preparacin de muestras: .Alimentos slidos y/o lquidos (agua y otros): Diluidor gravimtrico Homogeneizadores: Stomacher, Masticator, Pulsifier..Otras automatizaciones: preparadores, distribuidores, batera de diluciones decimales. Superficies: hisopo, cinta adhesiva, esponja, laminocultivo, placa Rodac. Aire: colector automtico2) Siembra y recuento de clulas: Recuento de clulas viables Medios de cultivo cromognicos y fluorognicos Siembra en espiral ISO-GRID Petrifilm SimPlate Anaerobiosis: doble tubo de Fung, tubo de Lee, Oxyrase En tiempo real (tincin vital): Citometra de flujo,filtracin por epifluorescencia directa3) Miniaturizacin: Microplaca, TEMPO. Sistemas de Identificacin: API, Enterotube II, Crystal ID, Micro-ID, RapID, OBIS, dentificacin automatizada miniaturizada: BiOLOG4) Medida de seales de crecimiento bacteriano: (biomasa; componentes, metabolitos o actividades celulares)- Impedancia (Bactometer, RABIT (Rapid automated bacterial impedance technique), BacTrac ) y conductancia- ATPBioluminiscencia- Colorimetra: BacT/ALERT, Omnispec bioactivity monitor, BioSys/MicroFoss- Inmunologa: ELISA (enzyme-linked inmunosorbent assay)ELFA (enzyme-linked fluorescentassay): VIDAS, TECRA UNIQUE PLUS, Bio-Tek, Transia, AssuranceEIA Aglutinacin del ltex Inmunodifusin lateral: VIP, Reveal Separacin inmunomagntica: Dynabeads, EIAFoss- Biologa molecular: Hibridacin (sondas de ADN y ARNr): GENE-TRAK y GeneQuence Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR, polymerase chain reaction): 100veces ms sensible que ELISA detecta cantidades muy bajas de ADN (o ARN. Ciclos repetidos de 3 pasos: 1.Desnaturalizacin(90-95 C, ~1 min)2. Hibridacin (40-60 C, ~45 s)3.Elongacin (70-75 C, ~2 min)

Caracterizacin por ADN: PFGE (fingerprinting),

Microbiologa Predictiva

Disciplina cuyo objetivo es el desarrollo de modelos matemticos que permitan predecir el comportamiento de los microorganismos en los alimentos en funcin de las condiciones de procesado o almacenamiento.

La microbiologa predictiva es una descripcin de las respuestas de los microorganismos a las condiciones ambientales particulares ambientales (temperatura, pH y actividad de agua)Utiliza modelos matemticos (construidos con los datos de las pruebas de laboratorio ) y software informtico para describir grficamente estas respuestas. Los Modelos microbiolgicos predictivos no sustituyen a los anlisis de laboratorio, ni a la formacin y el juicio de un microbilogo de alimentos con experiencia. Deben utilizarse con gran precaucin y slo ser utilizados por personal entrenado y con experiencia con una comprensin de las limitaciones de uso.Se estudia el comportamiento de los microorganismos en los alimentos, en funcin de factores que afectan el crecimiento o muerte de los mismos. A partir de los datos obtenidos experimentalmente se generan ecuaciones matemticas, con las cuales se puede predecir el comportamiento de bacterias en un alimento. La ecuacin que determina el crecimiento, muerte o inactivacin del m.o se denomina Modelo Predictivo Microbiano.

Factores que afectan el crecimiento bacteriano:

- Factores Intrinsecos: Nutrientes, Potencial Redox, pH. Aw- Factores Extrinsecos: Temperatura, HR, Atmosfera Ambiental- Factores Implcitos: Sinergismo, Antagonismo, Velocidad de Crecimiento- Factores Tecnolgicos: Tratamientos trmico, Irradiacin.

Curva de Crecimiento bacteriano

Comportamiento del crecimiento bacteriano

Curva de Supervivencia

Aumento de Temperatura

Caractersticas de un modelo ideal: Simple, Permitir predecir el comportamiento de los microorganismos en los alimentos. Debe estar fundamentado en una base biolgica que permita explicar el comportamiento observado (diferenciar entre funcin matemtica y modelo).

Tipos de modelos: Modelos cinticos de crecimiento. Modelos Time-to-growth: tiempo fase lag -microorganismos patgenos. Modelos de crecimiento/No crecimiento (growth/nogrowth) o modelos probabilsticos: evaluacin de riesgos en sistemas APPCC. Modelos de inactivacin y muerte. Modelos de supervivencia: microorganismos patgenos.

Aplicaciones de la Microbiologa Predictiva