Microbiological Method Validation

7/23/2019 Microbiological Method Validation

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Aseguramiento de la calidad y validacinAseguramiento de la calidad y validacinde metodologas para el anlisis microbiolgicode metodologas para el anlisis microbiolgico

NORMA ISO 17025NORMA ISO 17025

Bqca. Alicia I. Cuesta


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Bqca. Alicia Irene Cuesta 2

SEGURIDAD e INOCUIDAD ALIMENTARIASEGURIDAD e INOCUIDAD ALIMENTARIA

Mtodos analticosMtodos analticos

Manejo sanitario

Sistema de calidad

ETA

Normas

Alimentos sanosAlimentos sanos


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Normas

VIDA UTILVIDA UTIL

Sistema de calidad

Mtodos analticosMtodos analticos

CALIDAD HIGIENICACALIDAD HIGIENICAY SENSORIALY SENSORIAL

Manejo sanitario

Alimentos sanosAlimentos sanos


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Generalidades de la Norma ISO 17025Generalidades de la Norma ISO 17025Los resultados de los mtodos analticos:Los resultados de los mtodos analticos:

Basados en principios de aseguramiento de la calidad.Basados en principios de aseguramiento de la calidad. ValidadosValidados

Acreditados segn la Norma ISO 17025Acreditados segn la Norma ISO 17025

Son internacionalmente reconocidos

Considerados de referencia para la evaluacinde conformidad de los productos de intercambioen el comercio internacional.


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Es la norma vigente para acreditar laboratorios.

Esta norma tiene todos los requisitos que deben cumplirEsta norma tiene todos los requisitos que deben cumplirlos laboratorios de ensayos si desean demostrar quelos laboratorios de ensayos si desean demostrar queposeen:poseen:

Un sistema de calidad.Son tcnicamente competentesCapaces de generar resultados tcnicamente vlidos.

Hay un reconocimiento mutuo con otrosHay un reconocimiento mutuo con otroslaboratorios del mundo.laboratorios del mundo.

NORMA ISO 17025: 2005NORMA ISO 17025: 2005General requirements for competence of calibration and testingGeneral requirements for competence of calibration and testing laboratory.laboratory.


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La ley est por encima de las normas

La Norma ISO 17025no contempla el cumplimiento de :

requisitos regulatoriosy de seguridad relacionados con el funcionamiento del

laboratorio.

La Norma dice :QUQU hay que hacer? (Requisito)

El laboratorio dice elCMO?CMO? (cmo se implementa el requisito)


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ACREDITACIN (NormaACREDITACIN (Norma ISO 17025ISO 17025 ))Determinar la competencia tcnica del personalDeterminar la competencia tcnica del personaly la validez tcnica de las operaciones.y la validez tcnica de las operaciones.

Tiene que demostrar competenciaTiene que demostrar competencia

Los resultados de ensayo de un laboratorioque tiene competencia tcnicasern

CONFIABLES Y EXACTOSCONFIABLES Y EXACTOS


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Particularidades de ensayos microbiolgicosParticularidades de ensayos microbiolgicosA diferencia de las ciencias qumicas y fsicas,en microbiologa se trabaja conmicroorganismos que se multiplican por divisinbinaria y crecencrecen exponencialmente.

Los ensayos microbiolgicos incluyenensayos de

esterilidad, deteccin, aislamiento, recuento eesterilidad, deteccin, aislamiento, recuento eidentificacin de microorganismos y susidentificacin de microorganismos y susmetabolitos.metabolitos.


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Pilares sobre los que se apoya laPilares sobre los que se apoya laCOMPETENCIA TECNICACOMPETENCIA TECNICA

COMPETENCIA TECNICA

PERSONALMTODO

Equipamiento

Ambiente


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Laboratorio da resultados confiables y exactos?

ValidadaValidadano est validadano est validadaValidacin de laValidacin de lametodologametodologa

Adecuados ysuficientes

Riesgo deRiesgo decontaminacincontaminacin

cruzadacruzada

Adecuados ysuficientes

Instalaciones yInstalaciones ycondicionescondicionesambientalesambientales

EquiposEquipos

Personal no estPersonal no estadecuadamenteadecuadamente

capacitadocapacitado

capacitado,desarrolla bien su

tarea.

capacitado,desarrolla bien su

tarea.PersonalPersonal

Caso 3Caso 2Caso 1Situacin del

laboratorio conrespecto a:


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Los objetivos de un sistema de calidad son:Los objetivos de un sistema de calidad son:

PREVENCIN: Evitar que se produzcan errores eineficiencias.

DETECCIN: Identificar los elementos causantes de loserrores.

CORRECCIN Y MEJORA: Eliminar las causas de loserrores y mejorar los procesos.

DEMOSTRAR: Evidenciar objetivamente que se hacumplido con los requisitos


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ENSAYO MICROBIOLGICO

Las operaciones que se realizan dentro del

laboratorio de microbiologa pueden dividirse enaquellas que son crticas para la calidad deresultados del ensayo y aquellas que tienen un

menor impacto.

Las operaciones crticas deben ser:

controladas,monitoreadas ydocumentadas.


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Las personas son el motor de los sistemas de calidadLas personas son el motor de los sistemas de calidady por lo tanto este es un punto crtico y que la normaISO/IEC 17025 lo trata extensamente.

Tiene que haber motivacin interna para planificar,implementar y mantener el sistema de calidad!!

Aseguramiento de calidadAseguramiento de calidadNorma ISO 17025Norma ISO 17025

PERSONALPERSONAL


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Requisitos Personal (Norma ISO 17025):El personal debe contar con conocimientos, experiencia y competencia deacuerdo a las tareas y responsabilidades que tenga asignadas.COMPETENCIA DEL PERSONAL: La competencia involucra conocimientos,habilidades, comprensin y actitudes. La evaluacin debe ser continua.El laboratorio debe tener documentado el personal autorizado para cadaensayo.PERSONAL AUTORIZADO: personal que posee el reconocimiento formal desu capacidad para realizar en forma correcta una determinada tarea que se leha sido asignada.Todo el personal tcnico que trabaja en el laboratorio de microbiologa debe

recibir un adecuado entrenamiento de modo de asegurar que ejecuta en formaidnea las operaciones relacionadas con el ensayo.La capacitacin es un requisito muy importante del sistema de calidad.CAPACITACIN DEL PERSONAL: Definicin: proceso continuo y sistemticodestinado a la formacin, entrenamiento, actualizacin o perfeccionamientoespecfico del personal.La direccin debe definir y mantener actualizados los perfiles de puestos delpersonal directivo, tcnico y de apoyo clave afectado a los ensayos.PERFIL DEL PUESTO DE TRABAJO: Definicin: Son los requisitos mnimos deformacin acadmica y experiencia que debe tener el personal para acceder alpuesto de trabajo.


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CAPACITACIN DEL PERSONAL

Entrenamiento:Actividad de ensear las habilidades que una persona

necesita para desarrollar su labor en un determinadopuesto de trabajo.Tiene carcter eminentemente prctico .Se relaciona directamente con la tecnologa, tiles,

equipos, etc. que se usan en el puesto de trabajo. Formacin:Actividades de incorporacin de conocimientos generalesy especficos necesarios para que el personal puedadesarrollar su labor en un determinado puesto de trabajo.Se hace referencia a la formacin acadmica del personal.


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Norma ISO17025:2005 punto 5.2.2

La direccin del laboratorio debe formularlas metas con respecto a la educacin, lalas metas con respecto a la educacin, la

capacitacin y las habilidades del personal delcapacitacin y las habilidades del personal dellaboratorio.laboratorio.El laboratorio debe tener una poltica yprocedimientos para identificar las necesidades decapacitacin del personal y para proporcionarla.El programa de capacitacin debe ser pertinente alas tareas presentes y futuras del laboratorio.

Se debe evaluar la eficacia de las acciones decapacitacin implementadas.


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Capacitacin del personalCapacitacin del personalLABORATORIO MICROBIOLOGIALABORATORIO MICROBIOLOGIA

Todo el personal tcnico debe recibir un adecuadoentrenamiento que incluyen:

Tcnicas bsicas de microbiologa para la manipulacinde cultivos y muestras en condiciones de esterilidadAdecuado criterio para el manejo de materialpotencialmente infeccioso.Conocimiento de normas de bioseguridad, etc.


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Requisitos Norma ISO 17025: PERSONAL

COMPETENCIA TECNICA

Calificacin bsica

CAPACITACION:Identificacin de las

necesidades de capacitacin.Planificacin de la capacitacin.Realizacin de la capacitacin

Documentacin.

Descripcin de actividadesy responsabilidades del personal

DE APOYO

Relacin de dependencia

LABORATORIO

CONDUCCIN TCNICO


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Requisitos:

Las instalaciones del laboratorio de ensayo(incluye fuente de energa, luz y condicionesambientales) deben ser capaces de facilitar

la realizacin correcta de los ensayos.


INSTALACIONES Y CONDICIONESINSTALACIONES Y CONDICIONESAMBIENTALESAMBIENTALES


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Instalaciones (cont)

Debe haber una efectiva separacin entre reasvecinas en las que se realizan actividades

incompatibles.

Se deben tomar medidas para prevenir la

contaminacin cruzada.La ubicacin, el diseo y la distribucin de lasLa ubicacin, el diseo y la distribucin de lasdiferentes reasdiferentes reas que integran el laboratorio

deben minimizar el riesgo de contaminacinminimizar el riesgo de contaminacin delas muestras y los cultivos.


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MEDIDAS PARA PREVENIR LA CONTAMINACIN CRUZADAMEDIDAS PARA PREVENIR LA CONTAMINACIN CRUZADA.

En la prctica esto se puede lograr:

Separando las actividades en tiempo y espacioSeparando las actividades en tiempo y espacio.

Mediante la construccin del laboratorio segn undiseo sin camino de regresodiseo sin camino de regreso se puede obtener una

reduccin significativa del riesgo de contaminacincruzada.

Llevando a cabo los procedimientos de una maneraLlevando a cabo los procedimientos de una manera

secuencialsecuencial, usando las precauciones apropiadas paraasegurar la integridad de la muestra y del ensayo.Por ejemplo uso de recipientes hermticamente cerrados.


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SEPARACIN DE REAS DEL LABORATORIO:

No es aceptableque

el laboratorio de microbiologa

ocupe una sola sala polivalente.

Requisito: El rea analtica debe estar separadade la de preparacin de medios de cultivo y lavado

de material.


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Separacin de reas del Laboratorio:Es conveniente separar las siguientes reas:

zona de recepcin y almacenamiento de muestras. Preparacin, muestreo y pesada de muestras.( importante si seanalizan productos en polvo) Examen de muestras incluyendo su incubacin. Manipulacin de patgenos.

Mantenimiento de microorganismos de referencia. Verificacin de la esterilidad. Preparacin de los medios y equipos incluyendo su esterilizacin Descontaminacin.El rea de Lavado de material ( despus de la descontaminacin)pueden compartirse con otras partes del laboratorio (precaucincontaminacin con trazas de sustancias que afecten crecimientomicrobiano).


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El diseo del laboratorio depender de los ensayosque se llevarn a cabo (depende del alcance de lasmetodologas)

Ejemplo si adems de realizar ensayos por mtodostradicionales se llevan a cabo ensayos empleando tcnicas

de biologa molecular se necesitarn reas adicionales.

El laboratorio debe tomar las medidas necesarias paradebe tomar las medidas necesarias parareducir al mnimo el riesgo de contaminacinreducir al mnimo el riesgo de contaminacin

siempre que dicho riesgoriesgosea importante para el tipo de ensayos realizadossea importante para el tipo de ensayos realizados.


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Medidas para de disminuir el riesgo de contaminaciny facilitar la limpieza y desinfeccin de las diferentes reas.

Medidas relativas a los materiales :Medidas relativas a los materiales :

Facilitar la limpieza:Las paredes, techos suelos y superficies de trabajo del

laboratorio deben ser lisas.

Las superficies de madera de las instalaciones yaccesorios deben estar protegidas y selladas.

Evitar maderas rugosas y sin revestir.


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Medidas relativas al diseo:Medidas relativas al diseo:

Espacio disponible:Las reas del laboratorio deben ser suficientemente espaciosas.El espacio necesario estar de acuerdo con el volumen de muestras analizadasy la organizacin interna del laboratorio.

Facilitar la limpieza:Las uniones entresuelo, paredes y techos deben ser cncavas.Contar con canillas, adecuadamente ubicadas, para el lavado de manos delpersonal.

Ventilacin:Las reas de trabajo deben estar apropiadamente ventiladas y a unatemperatura adecuada.Puede hacerse por ventilacin natural o forzada, o mediante el uso deacondicionadores de aire. En este ltimo caso, los filtros deben revisarse,

mantenerse y reemplazarse peridicamente, acorde al tipo de trabajo que serealiza.

Otros:Evitar uso de cortinas y/o persiana internasEn caso de uso incluirlas en el plan de limpieza


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Otras medidas :Otras medidas :

Ausencia de documentos obsoletos, objetoso mobiliario innecesario en el rea del laboratorio.

Minimizar la apertura de puertas y ventanas durante larealizacin del ensayo.

Contar para el lavado de manos del personal con canillasno manuales, el jabn desinfectante debe estar dispuestoen dispensadores y toallas descartables para el secado.

Los armario estanteras, equipos deben estar colocadosde forma de evitar acumulacin de polvo.Ejemplo armarios hasta el techo.


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Se debe controlar el acceso yel usode las reasque afecta lacalidad de los ensayos.

El acceso al laboratorio debe estar restringido slo al personal tcnicoo a personas autorizadas.

CONDICIONES AMBIENTALESCONDICIONES AMBIENTALESREQUISITO:El laboratorio debe asegurarse que

las condiciones ambientales, bajo las cuales se realizan los

ensayos microbiolgicos,no invaliden los resultadosde ensayo ni comprometan la calidadrequerida de los resultados.


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Ejemplos decondiciones ambientales no deseables

Sala de preparacin demuestras

Interfiere en la pesada de lamuestra, polvos deshidratadospara preparacin de medios de

cultivos o reactivos

Niveles deruido o

vibracin excesivos.

Funcionamientode estufas, congeladores y

heladeras

-Variacin de las condiciones deensayo.-Prdida de viabilidad cepas dereferencia por descongelacin.-Conservacin inadecuada de la

muestra, reactivos y medios decultivo.

Suministro elctricointerrumpidoo deficiente

Sala de siembra y depreparacin de muestras

Contaminacin de las muestras ycultivos

Mayor polvo ensuspensin en el aire

Sala de siembra y depreparacin de muestras

Contaminacin de las muestras ycultivos

Deficiente esterilidadbiolgica

Lugar a monitorearEfecto posible sobre el ensayoCondicionesAmbientales


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Requisito

El laboratorio debe establecer:

Un programa documentado de limpieza y desinfeccinprograma documentado de limpieza y desinfeccin

que tenga en cuenta los resultados de vigilancia de las condicionesambientales y la posibilidad de contaminacin cruzada.

Objetivo: Organizar las tareas de limpieza y desinfeccin del laboratorio de

microbiologa. Establecer la frecuencia de realizacin de las mismas Se detallan las superficies a limpiar y/o desinfectar, el nivel de

limpieza requerido (trapeo hmedo, trapeo mojado, etc.), losdesinfectantes a preparar y su modo de uso.

El personal que realiza la limpieza.


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PLAN DE HIGIENE.

Son los procedimientosoperativos empleados durante la

realizacin del trabajo en ellaboratorio.Tiene como principal objetivo

evitar la contaminacin en todaslas etapas del ensayolo que implicara obtener resultadoserrneos, la infeccin del personal,

etc.


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PLAN DE HIGIENE.

El laboratorio debe trabajar tomando las siguientes precauciones :Relativo al trabajo propiamente dicho.Por ejemplo:Asegurarse que el rea de trabajo est limpia y que no haya corrientes de aire.Limpiar la superficie de trabajo con un desinfectante adecuado, antes y despus del trabajo.

Durante la siembra y manipuleo estril de muestras no hablar y evitar toser.Abrir los tubos de ensayo y botellas cerca de la llama.Trabajar tan rpido como sea posible, evitando movimientos innecesarios.la manipulacin del material patgeno o txico requiere trabajar en reas cerradas o bajo campanasde flujo laminar, especialmente cuando se abren las cajas de Petri.Evitar la formacin de aerosoles. Se pueden formar al abrir las cajas de Petri, los tubos, las botellas olos frascos, al usar mezcladores, jeringas, centrfugas, etc. y cuando se esterilizan ansas hmedas.

Relativo al rea de trabajo:Utilizar vestimenta de uso exclusivo en el laboratorio, guardapolvo de color claro, limpio y en buenascondiciones, no debe ser usado fuera del rea de trabajo del laboratorio.Dejar en zona de oficinas o externa al laboratorio los abrigos. portafolios, etc. Y en el rea dellaboratorio no comer, beber, fumar.Relativo a la Higiene del personal tcnico:

Antes y al finalizar la labor en el laboratorio, el personal tcnico debe lavarse las manos con unproducto adecuado (jabn desinfectante).El personal debe tener uas cortas y limpias, el pelo debe estar recogido, no tener anillos ni pulseras.Uso de barbijo si es necesario.El personal que presente infecciones serias en manos o cara no debe realizar exmenesmicrobiolgicos.


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MONITOREO AMBIENTAL:MONITOREO AMBIENTAL:

La calidad microbiolgicaLa calidad microbiolgicadel aire y las superficiesdel aire y las superficies

del laboratorio en microbiologaEs un indicador de la efectividad

de las tareas realizadas segn el:Plan de limpieza, desinfeccin y mantenimientoPlan de higiene.

Procedimiento: MONITOREO AMBIENTALEstablece :Metodologa para la toma de muestra. Lugares de toma de muestra. Lmites de tolerancia o criterios de aceptacin o rechazo.

Frecuencia de monitoreo.Acciones correctivas a tomar en caso de desvos de los lmitesestablecidos.Esto se aplica tanto a control ambiental del rea analtica del laboratoriocomo para la campana de flujo laminar.


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El programa de muestreo paramonitoreo ambiental puedeincluir

(dependiendo del ensayo que realiza el laboratorio):

Determinacin cuantitativa de microorganismospresentes en el ambiente (recuento total o recuento dedeterminados tipos de microorganismos como por ejemplohongos)

Determinacin cualitativa de algunos patgenos y/oindicadores dependiendo de los ensayos que realiza ellaboratorio (Ejemplo: Enterobacterias, Coliformes,

Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Listeria spp,Staphylococcus aureus).


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MTODOS PARA CONTROLCALIDAD DEL AIRE:

Mtodo pasivo, por sedimentacinMtodo pasivo, por sedimentacin.Se realiza el recuento de microorganismos viables que se posansobre una superficie de medio de cultivo (tcnica cualitativa).No existe relacin entre la cantidad de colonias encontradas en por

placa y el volumen de aire.Mtodo activo, por impacto.Mtodo activo, por impacto.Se realiza el recuento de microorganismos viables retenidossobre una superficie de medio de cultivo forzando undeterminado volumen de aire.

Mtodos para control calidad del aire: MTODO PASIVO YACTIVOLos resultados de ambos mtodos no son comparables (el principiode muestreo y las unidades en las cuales se expresan son diferentes).

SE RECOMIENDA INTERPRETAR TENDENCIAS Y NOOBSERVACIONES AISLADAS.(tomar siempre la muestra en un mismolugar)


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Mtodos para control calidad del aire:Normas IRAM 14071-1:2002 EXPOSICIN DE PLACAS:

Toma de muestra: durante un tiempo estipulado, se exponen placas dePetri (o sea se abren las placas) con medio de cultivo no selectivo, en el rea detrabajo y durante el proceso de siembra.

reas a monitorear o zonas de toma de la muestra: salade siembra y sala de preparacin de muestras.

Medio de cultivo usado. Ejemplo PCA.

Tiempo y temperatura de incubacin: Luego de la exposicin alaire, las placas se cierran e incuban durante Ejemplo 72 horas a 30 C.

Frecuencia de realizacin de los controles. Ejemplo mensual.

Criterio de conformidad:nmero mximo de colonias por tiempo de

exposicin de las placas. Ejemplo durante 15 minutos se permite hasta 15

colonias. Los resultados se expresan como unidades de colonias (ufc) por placa


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Mtodos para Control calidadMtodos para Control calidad

de superficies:de superficies:

IncubacindirectaPlanaContacto, presin ytiempo estndar

Caja decontacto

o Petrifilm

Siembra de

volumenconocido

Irregular

Superficies100cm2Esponja embebidaen medio especficoEsponja-trapeado

Siembra directaDelimitadaHisopo estrilHisopado

SiembraTipo de

superficieRecoleccinMtodo

Normas de consulta: Mtodos para Control calidad de superficies: ISO 18593:2004 Microbiologyof food and animal feeding stuffs -- Horizontal methods for sampling techniques from surfacesusing contact plates and swabs


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Instalaciones y condiciones ambientalesInstalaciones y condiciones ambientales

Equipamiento necesario

Reglas de accesoy utilizacinde las reas

Separacin dereas dondese realizan

actividades incompatibles

Plan de higiene

Monitoreo ambiental

Limpieza y orden

LABORATORIO


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REQUISITO:

El laboratorio debe asegurarse quela calidad de los medios de cultivo y reactivos

sea apropiada para los ensayos realizados.

Este es un punto crtico!

Cmo se asegura su calidad?


MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

Q itQ it


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Qu necesita unQu necesita unmicroorganismo para crecer?microorganismo para crecer?

MEDIOS DE CULTIVO:Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento,la reproduccin y la identificacin de los

microorganismos.Contienen sustancias nutritivaspH adecuadoDeben estar estriles.

Incubacin:Depende del metabolismo del microorganismo acultivar.La atmsfera empleada.(aerobio, microaeroflico,anaerobio)Tiempo.Temperatura.


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1.Segn su estado fsico: lquidos, semislidos y slidos.

2.Segn su finalidad en microbiologa:

No selectivos: contienen suficientes nutrientes como parasoportar el crecimiento de gran variedad de microorganismos.

Selectivos: permiten el crecimiento de slo un tipo demicroorganismo.

Enriquecido: son medios no selectivos que se le agregasustancias como ser sangre, suero, albmina, etc... Paramicroorganismos exigentes.

Diferenciales: son medios de cultivo que permitenestablecer diferencias entre diferentes tipos microorganismos.

Clasificacin de medios de cultivo:Clasificacin de medios de cultivo:


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Los medios de cultivo se preparan:

1. En el laboratorio a partir de sus diferentescomponentes.2. A partir de productos en polvo deshidratados

comerciales o3. Pueden adquirirse medios listos para su uso.

La calidad de un medio de cultivo depende de la calidad delos ingredientes bsicos, la correcta formulacin, calidaddel procedimiento de preparacin, ausencia de inhibidores,envasado y almacenamiento.

Normas de consulta: ISO 7218:1996(E) Microbiology offood and animal feeding stuff-General rules formicrobiological examinationsy ISO/TS 11133-1:2000


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Requisitos de los medio de cultivoprovistos por el fabricante :

Los lotes de medios deben estar debidamente identificados.(TRAZABILIDAD)

Cada lote recibido debe ir acompaado de evidencias delcumplimiento de las especificaciones de calidad.

El fabricante debe proveer informacin acerca de lasespecificaciones de calidad del medio de cultivo, debe incluir lo

siguiente:Nombre del medio y lista de componentes, incluido cualquier suplemento.Fecha de vencimiento del medio.Condiciones de almacenamiento.Control de esterilidad.Control del crecimiento de los microorganismos de inters (target) y de losmicroorganismos no deseados (no target) y criterios de aceptabilidad.Controles fsicos y criterios de aceptabilidad aplicados.


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Manejo de los medios de cultivo:

1.El laboratorio debe registrar la fecha :de recepcinde apertura del envase.de caducidad

2. El almacenamiento debe realizarse en lascondiciones apropiadas.Envases: deben estar hermticamente cerrados.(especialmente medios deshidratados)

No deben utilizarse medios deshidratados quepresenten apelmazamiento o un cambio de color.


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CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA DESTILADACONTROL DE CALIDAD DEL AGUA DESTILADA

Para la preparacin de medios, soluciones y tampones,debe utilizarse agua destiladaque haya sido sometida a

controles peridicosque aseguren su calidad.Controles peridicos:Requisitos del agua destilada:

-Conductividad.- pH- Contaminacin microbiana- Libre de sustancias bactericidas, inhibidoras ointerferentes.-Se debe llevar un registro actualizado de los mismos.


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Procedimiento para preparacinde medios de cultivo, diluyentes y reactivosLos medios de cultivo, soluciones y reactivos deben

prepararse, almacenarse y utilizarse de acuerdocon un procedimiento documentado.

En dicho procedimiento debe haber una descripcin del

equipamiento necesario.El laboratorio debe colocar una etiqueta indicando laidentificacin y otros datos en los medios de cultivo y

reactivos.(TRAZABILIDAD)Debe haber un registro de preparacin de medios decultivo y reactivos.


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LAVADO DE MATERIAL:

Otro aspecto a tener en cuenta es el correctolavado del material reciclable.

El laboratorio de debe contar con un instructivoinstructivo para estatarea.Pasos:

Descontaminacin material de vidrio.Enjuague y se lavado con agua caliente y detergenteapropiado ( extran neutro diluido al 2%)

Enjuague n de veces con agua corriente y luego un n deveces con agua destilada. Eliminar el detergenteEl material se seca en estufa y se acondiciona para seresterilizado.


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Control de esterilidadControl de esterilidad de los medios de cultivo y diluyentes:de los medios de cultivo y diluyentes:

Fue efectivo el proceso de esterilizacin de los medios decultivo y diluyentes?

PRUEBA: se incuban en estufa de cultivo.

La temperatura y tiempo de incubacin para esta prueba secorresponden con las condiciones usadas durante el ensayo.

Se realiza este ensayo sobre el 1% de las placas o tubo delcomienzo y 1% de las placas o tubos del final de verter odistribuir los medios o diluyentes.

Este procedimiento se realiza por cada vez que se esterilizaun lote de medio de cultivo o diluyente en autoclave o seesteriliza por filtracin.

Aseguramiento de calidad de los medios de cultivo:


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Aseguramiento de calidad de los medios de cultivo:Posibles problemas

Sobrecalientamiento del medio durante la preparacinpH medido incorrectamentePobre calidad del agua.Pobre calidad del medio deshidratado.

Formacin deprecipitado

Pobre calidad del agua.Pobre calidad del medio deshidratado.

pH medido incorrectamente.Contaminacin externa con qumicos.Sobrecalientamiento del medio durante la preparacin

pH incorrecto

Sobrecalientamiento del medio durante la preparacinPeso incorrecto del agarAgar mal disuelto o incompleta mezcla de los ingredientes

Falla en lasolidificacin delmedio slido

Posible causaAnormalidad

Aseguramiento de calidad de los medios de cultivo:


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gPosibles problemas

Sobrecalientamiento del medio durante la preparacinpH incorrecto.Formulacin inadecuada.

Pobre calidad del medio deshidratado.Suplementos agregados incorrectamente Ej: con el medio demasiadocaliente o en alta proporcin.

Selectividad pobre

Pobre calidad del agua.Formulacin inadecuada Ej. ingredientes y suplementos mal pesados.Sobrecalientamiento del medio durante la preparacinPobre calidad del medio deshidratado

Medio inhibitorio/Productividad baja

Sobrecalientamiento del medio durante la preparacinpH incorrectoContaminacin externa.

Pobre calidad del agua o del medio deshidratado.

Color anormal

Posible causaAnormalidad


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EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

El objetivo es definir la: metodologa para evaluar la

PRODUCTIVIDAD y SELECTIVIDAD de medios decultivo slido, semislido o lquidos ya preparados yesterilizados, utilizados en el laboratorio demicrobiologa.

Cultivo de trabajo (segn Instructivo de cultivos dereferencia) Se prepara un cultivo en fase estacionariade la cepa a partir de la cepa de reserva almacenadas

en el laboratorio en un caldo no selectivo (por ejemplocaldo cerebro corazn)

PRODUCTIVIDAD:PRODUCTIVIDAD:


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Definicin: rendimiento, recuperacin, crecimientode un microorganismo que se espera que desarrolle enel medio de cultivo.

Segn el medio de cultivo, se usa una cepa apropiada dereferencia target para evaluar la productividad(ver anexo B de la norma ISO/TS 11133-2:2000)

EJEMPLO: En un medio de cultivo no selectivocomo por ejemplo el PCA se evala eladecuado desarrollo de las cepas target oblanco.En este caso se usan E. coliATCC 25922,S. aureusATCC 6538 y B. subtilisATCC 6633

SELECTIVIDAD:SELECTIVIDAD:


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SELECTIVIDAD:SELECTIVIDAD:

Definicin: la supresin del crecimiento de unmicroorganismo que se espera sea inhibidoen el medio de cultivo.

Segn el medio se usa una cepa apropiada de referenciano-target para evaluar la selectividad(ver anexo B de la norma ISO/TS 11133-2:2000)

En un medio de cultivo selectivo como por ejemplo Caldo Lauril sulfato (LST)se evala el desarrollo de las cepas target y no target.En este caso las cepas target que se usan sonE.coliATCC 25922, C.freundiiATCC 43864

y las cepas no target Enterococcus faecalisATCC 29212.Evala reacciones caractersticas: gas y turbidez.


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En medios selectivos y/o diferenciales hay que evaluar:

El crecimiento de las cepas target

Hay que prestar atencin tambin a laapariencia, tamao y morfologa de las

colonias (especificidad)

El crecimiento de las cepas

no-target debe estar en parte ocompletamente inhibido.


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PARA EVALUAR CADA LOTE DE MEDIO DE CULTIVOPARA EVALUAR CADA LOTE DE MEDIO DE CULTIVOsegn Norma ISO/TS 11133segn Norma ISO/TS 11133--2:20002:2000

SE PUEDE EMPLEAR LOS SIGUIENTES MTODOS:SE PUEDE EMPLEAR LOS SIGUIENTES MTODOS:

a)Pruebas cuantitativas

b) Pruebas semi-cuantitativas

c) Pruebas cualitativas

MEDIO DE REFERENCIAMEDIO DE REFERENCIA


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El uso de un medio de referencia especficoes obligatorio en los mtodos de cuantitativos

(ver anexo B de la norma ISO/TS 11133-2:2000)

Para las pruebas semi-cuantitativas o cualitativas,

el uso de un medio especfico de referenciao un medio de cultivo que da una la reaccin positiva"ayuda al nterpretar los resultados.

El medio de referencia debe ser de conocida buena calidad

(por ejemplo ser un medio listo para el usode calidad asegurada por el proveedor)


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PRODUCTIVIDAD:

Pruebas cuantitativas: la proporcin de Productividad PRes definido como sigue:

PR = Ns /No

dondeNs: es el recuento total de colonias obtenido en el medio decultivo a probar (obtenido de uno o ms placas)No: es el recuento total de colonias obtenido en el medio decultivo de referencia definido obtenido de uno o ms placasque debe ser 100 ufc.

PRODUCTIVIDAD: Pruebas cuantitativas


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PRODUCTIVIDAD: Pruebas cuantitativas

CRITERIO DE CONFORMIDAD:Anexo B de la norma ISO/TS 11133-2:2000.

All figuran: Los microorganismosTiempo y temperatura de incubacinCriterios

Medio de referencia que debe usarse segn el medio aevaluar. PR debe ser mayor o igual a un valor lmite para que elmedio de cultivo sea conforme.En general para que los medios no selectivos como elPCA sea conforme, el PR debe ser a 0,7.

PRODUCTIVIDAD:


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Ejemplo Pruebas cuantitativas

Se desea evaluar la productividad del PCA.El medio de referencia usado es agar tripticasa soya (TSA)

2) Ns ( dil -6):100 ufcNo ( dil -6): 230 ufc

PR = Ns /NoPR= 0,4 esto quiere decir que el medio testeadono es conforme en cuanto a su productividad.

1) Ns ( dil -6):140 ufcNo ( dil -6): :170 ufc

PR = Ns /No

PR= 0,8 esto quiere decir que el medio testeado es conforme

PRODUCTIVIDAD:


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PruebasPruebas semisemi--cuantitativas.cuantitativas.

Se inocula en forma de estras diluciones delcultivo con ansa calibrada de acuerdo a la figura o

modelo.Las placas inoculadas se incuban a temperaturay tiempo que depende del medio de cultivo

evaluado y se observa el crecimiento.Se evala la productividad del medio teniendo encuenta el valor de cada estra con crecimiento.

PRODUCTIVIDAD :


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Pruebas cualitativasSe llevarn a cabo visualmente asignandoun score de crecimiento.

Score para medios slidos:0 no hubo crecimiento1 hubo crecimiento dbil2 hubo buen crecimiento.

Score para medios lquidos:0 no hubo turbidez

1 hubo turbidez muy tenue2 hubo buena turbidez


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SELECTIVIDAD:

Para llevar a cabo la prueba de la selectividad,el medio de cultivo selectivo a evaluar y un medio de la

referencia se inoculan con un microorganismo y nivelapropiado.

Se emplea una suspensin del microorganismode no-target que contiene 104cfu a 106cfu por ml seinocula en la placa o en el tubo de medio.


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Certificado de controlCertificado de control

de calidad de un medio dede calidad de un medio decultivo no selectivocultivo no selectivo


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ReactivosEVALUACIN DE LA CALIDAD DE LOS REACTIVOS:

El laboratorio debe asegurarse quela calidad de los reactivos utilizados seaapropiada para los ensayos realizados.

Ejemplo: Reactivos usados para revelar pruebas bioqumicas

Realizo controles positivo y negativo utilizando

microorganismos que sean trazables a colecciones decultivos nacionales o internacionales reconocidas.

Sntesis


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En microbiologa se le da especial nfasis a la calidad de losmedios de cultivo y reactivos, tal que aquella sea apropiadapara los ensayos realizados.

Un punto crtico a tener en cuenta a la hora de implementar y la ISO17025 y acreditar el laboratorio es la preparacin, esterilizacin yevaluacin de la calidad de los medios de cultivo empleados pararealizar el ensayo.Las recomendaciones internacionales de organismos de acreditacin

se basan en la Norma ISO/TS 11133-1:2000 y ISO/TS 11133-2:2000.Esto implica una revisin de las prcticas cotidianas realizadas porel laboratorio y a su vez la seguridad que los medios usados son

adecuados a la finalidad prevista.



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Cultivos de referencia:Cultivos de referencia: REQUISITOREQUISITOPara acreditar o mantener laacreditacin de un ensayo, el laboratorio de microbiologa debe contarcon cultivos de referencia.

El nmero y la eleccin del gnero y especie de las mismas dependerde los ensayos que se efectan y las necesidades particulares de estosltimos.El laboratorio debe elaborar e implementar un procedimientodocumentado para el uso y manejo de cultivos de referencia. EsNECESARIOS PARA DEMOSTRAR TRAZABILIDAD.

Definicin de Material de referencia : Material o sustancia queposee valores de una o ms propiedades suficientemente

homogneas y bien conocidas para permitir su uso en la calibracinde aparatos, la evaluacin de un mtodo de medicin o la atribucin devalores a estos materiales.( COGUANOR NGR/ISO/IEC 43-1)

CULTIVOS DE REFERENCIA

Para qu son necesarios


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Bqca. Alicia Irene Cuesta67

q

los cultivos de referencia ?

Evaluacin de la calidad de los medios de cultivo.

Realizar controles de calidad interno durante laejecucin de los ensayos.Realizar controles de calidad de reactivos.Pruebas confirmatorias.

Ejemplo prueba de CAMPValidar mtodos microbiolgicos.Aseguramiento de la calidad de los resultados de

ensayo de mtodos microbiolgicos.

Cultivos de referencia:Cultivos de referencia:


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Definicin:Trmino colectivo que se refierea cepas de referencia, cepas de reserva y cepas de trabajo.

Se debe tratar de un cultivo puro .(PUREZA).

Genticamente estables.( ESTABILIDAD)( mantenimiento de caractersticas genotpicas y fenotpicas)

Clulas microbianas capaces de crecer (VIABILIDAD).Cepas de referencia: Las colecciones suministran las cepas

con instrucciones para su recuperacin.

Requisitos:

CEPAS DE REFERENCIA:CEPAS DE REFERENCIA:


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PARA DEMOSTRARLA TRAZABLIDAD DEBEN OBTENERSE DIRECTAMENTEDE UNA COLECCIN NACIONAL O INTERNACIONAL DECULTIVO DE REFERENCIA RECONOCIDO.

Son microorganismos definidos: Por lo menos a nivel de gnero y especie. catalogados.

muy caracterizados. de origen conocido.[ISO 11133-1:2000]

Se comercializan liofilizadas.

Los organismos de acreditacin deben considerar vlidala fuente de dnde provino la cepa.


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En la prctica para cumplir con el requisito prevenir

mutaciones, deterioro o alteracin de las caractersticastpicas de las cepas deel nmero de repiques a partir de la cepa de referenciadebe ser limitado

( en general es aceptado hasta 5 repiques a partir de lacepa de referencia )Si una cepa se adquiere por cualquier va que no sea lapropia coleccin, NO se puede mencionar utilizando el

nmero que tienen en esa coleccin, sino solamente comoderivada de la cepa de coleccin.


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Cepas de coleccinde referenciahttp://www.atcc.org

CEPAS DE REFERENCIA:


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Identificacin de la cepa.Gnero y especie del microorganismoTIPO y N de coleccin.N de lote.Fecha de recepcin.Control de calidad de la cepa dereferencia Conforme (SI/NO).Fecha de caducidad de la cepa.Personal responsable.

Reconstitucin de las cepas de referencia:Las Cepas de referencia ingresan al laboratorio de microbiologa se registranen planilla segn procedimiento.Las Cepas de referencia se almacenan entre 0-5 C hasta su uso.Las Cepas de referencia se reconstituyen y se siembran utilizando el mediode cultivo, las condiciones de incubacin y el procedimiento indicado en las

instrucciones para cada tipo de microorganismo del organismo proveedor delas cepas.En paralelo, a las Cepas de referencia, se les realiza un control de calidadde pureza y viabilidad y se registra.

REGISTRO DECEPAS DE REFERENCIA:

Control de calidadde pureza y viabilidad:


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Se realiza a diferentes niveles del proceso. CADA VEZ QUE HAGO UNREPIQUE.

Su finalidad es asegurarse que las cepas conservan su viabilidad y suscaracteres bioqumicos.

Frecuencia de realizacin de este control: para las cepas de reservaalmacenadas el laboratorio la establecer en cada caso.

Registro de Control de calidad de pureza y viabilidad de las cepas:

Fecha del control.Identificacin de la cepa. Gnero y especie del microorganismo. TIPO y Nde coleccin.Tipo de cepa (Cepa de referencia, reserva o trabajo).Pruebas a realizar (depende del microorganismo): Coloracin de Gram,

Caractersticas de las colonias en medios selectivos, Pruebas bioqumicas yserolgicas, etc.

En caso de no presentar las caractersticas establecidas se ejecuta laAcciones correctivas establecida en el procedimiento.

Cepas de reserva:Cepas de reserva:


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Definicin: Cepas idnticas obtenidas medianteDefinicin: Cepas idnticas obtenidas medianteun nicoun nico subcultivosubcultivo de una cepa de referencia.de una cepa de referencia.[ISO 11133-1:2000].Las cepas de reserva son una serie de alcuotas de

cultivos idnticos obtenidas en el laboratorio porsubcultivo de la cepa de referencia.

Las cepas de reserva las prepara y conserva el laboratorio.

CREF

Cres Cres CresCresCresCres

REPIQUE UNICO


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A)LIOFILIZACIN.B) CONGELACIN

A BAJASTEMPERATURAS.

MTODOSPARA

LA PRESERVACIN

Y MANTENIMIENTODECEPAS DE RESERVA

obtenidas a partir

de cepas de referencia :

Uso

de agentesCrioprotectores

Cepas de reserva:Cepas de reserva: Dentro del laboratorio (ver plano del laboratorio)Debe haber un lugar destinado a almacenar las cepas de reserva.Debe estar claramente sealado que se trata de cepas potencialmentepeligrosas y su manipulacin restringida a personal autorizado.

A) LIOFILIZACIN. Definicin: es un proceso de

MTODOS PARA LA PRESERVACIN Y MANTENIMIENTO DE CEPAS DE RESERVA


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) p

desecacin desde el estado congelado.Agentes Crioprotectores:Leche descremada de calidad microbiolgica( esterilizacin por vapor fluente) al 10% o 20% P/V.Pueden adicionarse Aditivos como por ejemplo inositol.PRODUCTO: se puede conservar en refrigeracin o atemperatura ambiente por aos.

B) CONGELACIN A BAJAS TEMPERATURAS:Agentes Crioprotectores:Leche descremada de calidad microbiolgica

( esterilizacin por vapor fluente) al 10% o 20% P/V.Pueden adicionarse Aditivos como por ejemplo inositol.Glicerol al 10%Caldo BHI con glicerol 20%.

MTODOS PARA LA PRESERVACIN Y MANTENIMIENTO DE CEPAS DE RESERVA


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B) CONGELACIN A BAJAS TEMPERATURAS:Proceso de congelacin:Equipamiento o insumos para lograr la congelacin

(Congelador o cmara o uso de Nitrgeno lquido).Temperaturas de congelacin:Deseablea -70 o -80 C o menores temperaturas.A temperaturas ms altas como -20 C no es lo ideal pero

tal vez sea la nica forma posible. Es preferible a -40 C.Envases: Uso criovial o tubo estril.PRODUCTO: se puede conservar en a temperaturacongelacin por aos.

Inconveniente:problemas y prdida de las cepas la faltade suministro de energa, falta de insumos o avera delequipamiento.

LA PRESERVACIN Y MANTENIMIENTODE CEPAS DE RESERVA


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MTODOS PARA LA PRESERVACIN Y MANTENIMIENTO DECEPAS DE RESERVA !! Es muy importante un buen mtodo deconservacin de modo de mantener los microorganismos vivos, puros yla cepa microbiana autntica!!

Para lo cual se debe tener en cuenta los conocimientos bsicos deMicrobiologa.Proveer condiciones adecuadas para cada tipo de microorganismo.Las instrucciones del fabricante de los sistemas de preservacin de

cepas disponibles comercialmente deben ser rigurosamente respetadosy observados.En el caso de descongelamiento de las cepas de reserva no debenvolver a congelarse.

El criovial vencido se elimina del cepario y se registra.Las cepas liofilizadas una vez reconstituidas no se pueden volver ausar

FACTORES QUE AFECTANLA VIABILIDAD DE LA CEPA


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La viabilidad de las cepas, sometidas a un proceso de congelacin(para su almacenamiento), est determinada por los siguientes factores:

a)Tipo de cepa. Ejemplo las bacterias Gram positivas resisten mejor que lasGram negativas.

b) El cultivo debe estar en las mejores condiciones posibles antesEl cultivo debe estar en las mejores condiciones posibles antes de serde serexpuesto a bajas temperaturas.expuesto a bajas temperaturas.Condiciones necesarias antes de ser expuesto a bajas temperaturas:

1. La EDAD DEL CULTIVO puede afectar la capacidad del microorganismo de

sobrevivir.Cultivos demasiados jvenes o demasiado viejos son menos resistentes alshock trmico.Ideal es fin etapa logartmica principio fase estacionaria tiene mayorprobabilidad de recuperacin.

( en bacterias en general es 24 horas de incubacin a 37 C)2. Las CONDICIONES DE DESARROLLO tambin juegan un papel importanteEjemplo; Las levaduras que crecen aireadas y agitadas tienen mayor resistenciaa la temperatura que aquellas que desarrollan en un medio slido

Ejemplo: Supervivencia de los microorganismosalmacenados a 20 C en Mast Cryobank


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almacenados a 20 C en Mast CryobankReferencia: Mast Cryobank TM, ETICOR

Microorganismo Supervivencia en

mesesEnterobacter aerogenes 48

Pseudomona aeruginosa 18

Salmonella typhimurium 48

Staphylococcus aureus48

Listeria monocytogenes 48

Listeria ivanovii 48

Rhodococcus equi 48

Bacillus cereus 24

Clostridium perfringes 48


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Cepas de trabajo:Cepas de trabajo:

SubcultivosSubcultivos de microorganismos obtenidos a partir de lasde microorganismos obtenidos a partir de lascepas de reserva para ser utilizados en los ensayos que locepas de reserva para ser utilizados en los ensayos que lo

precisen.precisen.

Obtencin de cepas de trabajo:

Los cultivos de trabajo se obtienen a partir de la Cepas dereserva sobre un medio slido o lquido no selectivo adecuadoutilizando un ansa estril e incubando en condiciones adecuadas.

Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas.

CEPA DE REFERENCIACEPA DE REFERENCIA


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Esquema decultivos dereferencia:

*Controles depureza y pruebasbioqumicas de lacepa.

Referencia:Gua ENAC-04

Reconstitucin

Cultivada una sola vez

Obtencin de CEPAS DE RESERVACEPAS DE RESERVA

Conservacin por distintos mtodos( liofilizacin y congelacin)

(especificar tiempo y condiciones de almacenamiento)

Descongelacin/reconstitucin

CEPAS DE TRABAJO(especificar tiempo y condiciones de almacenamiento)

Utilizacin en el control de calidad, validacin, etc de los ensayos

*

*

*

PASOS a seguir para elmanejo de los cultivos de referencia:


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Adquisicin de cepa de referencia (C Ref):-Requisitos de compra y Registro de la cepa adquirida.

Subcultivo de C Ref:-Control de pureza y viabilidad (REGISTRO).Preparacin de la cepa de reserva (Cres)-Control de pureza y viabilidad peridicos (REGISTRO).-Registro de cada frasco de la nueva cepa de reservaIncorporada al cepario.CONDICIONES CONTROLADAS DEALMACENAMIENTO DE LA CEPA DE RESERVASubcultivo la cepa de reserva (C t):-Control de pureza y viabilidad (REGISTRO).

USO PARA CONTROLES DE CALIDAD

PROVEEDOR DE CEPA

LABORATORIO

LABORATORIO

LABORATORIO


EQUIPOSEQUIPOS


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REQUISITOS: EQUIPOS

El laboratorio debe estar provisto de todos los equiposnecesarios para la correcta ejecucin del ensayo.

Los equipos y su soporte lgicousados en la realizacin delensayo y muestreo deben permitir lograr la EXACTITUDREQUERIDA y cumplir con las especificaciones establecidas

para los ensayos.Hay equipos cuya exactitud es clave en el impacto sobre laincertidumbre de los resultados, por lo que es imprescindible quecumplan siempre con las especificaciones ms relevantes del

mtodo.

Equipos habitualesEquipos habituales

de un laboratorio microbiolgico :de un laboratorio microbiolgico :


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Material de uso general: Material de vidrio o plstico(Ejemplo: tubos de ensayo, placas de Petri, etc.),instrumentos de muestreo, ansas de siembra, etc.

Equipos volumtricos como pipetas, distribuidoresautomticos, sembradores en espiral, etc.

Instrumentos de medida: termmetros, cronmetros,balanzas, medidor de pH, contadores de colonias, etc.

Estufas, autoclaves, baos termostticos, heladeras,congeladores, campanas de flujo laminar, equipos defiltracin, etc.

Calibracin.


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Definicin: Conjunto de operaciones quePERMITEN ESTABLECER,en condiciones especificadas,LA RELACIN EXISTENTE ENTRE :

los valores indicados por

el instrumento de medida oun sistema de medida

o un material de referenciay

los correspondientes valores conocidos delmensurando.(valores de una magnitud obtenidos

mediante un patrn de referencia)

Calibracin:


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Formas de establecer esta relacin es mediante:Tablas de correccinRectas o curvas de calibracin

otras

CALIBRACION

CORRECCION

Elimina el error

Incertidumbre

Ejemplo:Calibracin de un termmetro


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Qu hago?1.Mido n veces a unaTemperatura y completo la

TABLA 1.2.Esto lo realizo paradiferentes temperaturas (Ti)segn los requerimientos.

3. Calculo la correccin eincertidumbre para cadapunto.

Termmetropatrn(C)

Termmetroa calibrar

(C)

Tx

Bao de agua

Tp

TABLA 1Termmetro a calibrar (Tx)

Termmetro patrn (Tp)

El bao se pone a Ti

Certificado de calibracinde un termmetro


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Ejemplo de resultados

+0.30.042.1

+0.20.236.8

+0.20.230.0

+0.1-0.45.5

Incertidumbre( C)

Correccin( C)

Indicacin deltermmetro

( C)

Certificado de calibracinde un termmetro


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Debe figurar:Descripcin e identificacin delinstrumento que se calibr.Fecha de calibracin.Fecha de emisin del certificado decalibracin nombre del clienteMetodologa empleada para calibrar.Rango de calibracin.Resultados: correccin e incertidumbre

para cada temperatura.

Incertidumbre de la medicin. Definicin: Parmetro

i d l l d d l di i i l


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asociado al resultado de la medicin, que caracteriza ladispersin de los valores que podran ser razonablementeasignados al mensurando. INDICA LA CALIDAD DE UNAMEDICIN.

Tolerancia. Definicin: Indica el rango de variabilidadaceptable para un dado valor. Es un concepto asociado conla especificacin.

Relacin de exactitud (RE)

ISO 100012 recomienda RE>3:1, preferiblemente hasta 10:1

RE = Especificacin

Incertidumbre

VERIFICACIN.

D fi i i C fi i i i d


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Verificacin del instrumento de medicin

VERIFICACIN

TOMODECISION

Reparar/ ajustar

Usarlo para otro equipo

Declararlo fuera de uso

Asignar a latarea de medicin

Definicin: Confirmacin por examen y provisin deevidencia de que los requerimientos especificados hansido satisfechos.Ejemplo: Verificar diariamente una balanza con una pesa calibrada.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)


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Antes de poner en servicio un equipo se lo debe calibrar overificar con el fin de asegurar que responde a las exigenciasespecificadas del laboratorio y est conforme a lasespecificaciones normalizadas pertinentes.El equipo debe ser verificado o calibrado antes de su uso.El laboratorio debe documentar e implementar Programaspara calibracin y/o verificacin limpieza, mantenimiento yesterilidadde los equipos cuando sea necesario. (Los que

tengan una influencia directa en los resultados de los ensayos).REQUISITOS PROVEEDORES DE CALIBRACION DEEQUIPOS:La calibracin de los equipos debe ser llevada a cabo porlaboratorios de calibracin que demuestren su competencia ysu capacidad de medicin y trazabilidad (Laboratorio acreditado oaceptado por el organismo de acreditacin).

Tipo de Equipamiento Requisitos Frecuencia sugerida


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Directrices para calibracinde equipos en el laboratoriode microbiologa.

G-ENAC-04. Gua para laacreditacin de laboratoriosque realizan anlisismicrobiolgicos

Tipo de Equipamiento Requisitos Frecuencia sugerida

Termmetro de referenciaRecalibrado y plenamente

trazableCada 5 aos

Termocupla de referenciaRecalibrado y plenamente

trazableAnualmente.

Termmetro de trabajo

Frente a un termmetro dereferencia en punto de

congelacin y/o rangos detemperatura de trabajo

Anualmente.

Termocupla de trabajo

Frente a un termmetro de

referencia en punto decongelacin y/o rangos de

temperatura de trabajo

Anualmente.

BalanzaCalibracin plenamente

trazableAnualmente.

Pesas de calibracin Calibracin plenamentetrazable

Bianualmente/Anualmente.

Pesas de control

Frente a pesa calibrada o

verificar en la balanza

inmediatamente despus de

la calibracin trazable

Anualmente.

Microscopios

Calibracin trazable al

micrmetro (cuando sea

apropiado)

Inicialmente

Centrifuga

Calibracin trazable o

verificacin con un

tacmetro independiente

Anualmente.

Cronmetro Frente a la hora oficial Anualmente.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)

Es de primordial importancia que el laboratorio cuente con un programa


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Es de primordial importancia que el laboratorio cuente con un programaformal, documentado e implementado de mantenimiento de equipos.El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse a intervalosespecificados.(por el departamento de mantenimiento, por el proveedor, fabricante, etc).

En el documento ISO 7218: 1996 (E), se facilitan directrices sobre elmantenimiento de los equipos.

PARA CADA EQUIPO UTILIZADO EN LOS ENSAYOS EL LABORATORIODEBE TENER:

Identificacin inequvoca y registro del equipo (con su soporte lgico osoftware).

Los resultados de las calibraciones y verificaciones.

Las instrucciones actualizadas de uso y mantenimiento del equipodisponibles (incluido el manual suministrado por el fabricante) para el uso delpersonal del laboratorio.

Autoclave


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Los controles biolgicos:

Evalan la efectividad de la totalidad del proceso deesterilizacin.

Contienen esporasde gnero Bacillus.

En todos los casos los resultados obtenidos de

controles qumicos y biolgicos se deben registrar.

Verificacin de la

temperatura de trabajo:


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Se realiza un monitoreo

continuo de lastemperaturas de las estufas,heladeras, congeladoresusados para la realizacindel ensayo.

La temperatura del baotermosttico se registraantes de su uso.

Registro de control detemperatura:

-Equipo.-N de inventario.

-Instrumento:Correccin eincertidumbre deltermmetro.

-Rango de aceptacin.-Tolerancia.

temperatura de trabajo:


MANIPULACIN DE LAS MUESTRAS


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El laboratorio debe tener procedimientos para : El transporte

La recepcin

La proteccin, el almacenamiento.

La manipulacin

La conservacin o la disposicin final de lasmuestras a ensayar.

MANIPULACIN DE LAS MUESTRAS

Requisitos:MUY IMPORTANTE El l b t i d b t i t


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Requisitos:MUY IMPORTANTE: El laboratorio debe tener un sistemapara la identificacin unvoca de las muestras a ensayar.

La identificacin debe ser conservada a lo largo de la vidade la muestra en el laboratorio.

El sistema debe ser diseado y operado de modo tal queasegure que las muestras no puedan ser confundidasfsicamente o cuando se haga referencia a ellas en registros uotros documentos.

El laboratorio debe tener procedimientos e instalaciones

apropiadas para evitar el deterioro, la prdida o dao deevitar el deterioro, la prdida o dao delas muestraslas muestrasdurante su manipulacin, preparacin yalmacenamiento.

RECEPCIN DE LAS MUESTRAS: Las condiciones de llegada allaboratorio de las muestras deben ser verificadas por el personal

MANIPULACIN DE LAS MUESTRASREQUISITOS:


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RECEPCIN DE LAS MUESTRAS: Las condiciones de llegada allaboratorio de las muestras deben ser verificadas por el personalperteneciente al mismo.Si la muestra es:Insuficiente ose encuentra en mal estado por deterioro fsico, temperaturainapropiada, envase roto o etiquetado defectuoso.El laboratorio debe consultar con el cliente antes de decidir si analiza orechaza la muestra.Debe indicar su estado en el informe del ensayo.Una vez recibidas las muestras se analizarn lo antes posible.La preparacin de las muestras y porciones de ensayo realizado por ellaboratorio inmediatamente antes del ensayo debe efectuarse conforme aprocedimientos documentados basados en normas nacionales ointernacionales, si es que existen, o a mtodos internos validados.Los procedimientos de preparacin de las muestras y porciones deensayo deben disearse teniendo en cuenta las directrices generalescontenidas en los documentos en ISO 6887 e ISO 7218.

Se debe llevar los registros del desarrollo del trabajo.L t t l d li d

MANIPULACIN DE LAS MUESTRASREQUISITOS:


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Se debe llevar los registros del desarrollo del trabajo.Las muestras que se encuentren a la espera de ser analizadasdeben almacenarse en condiciones adecuadas para reducir almnimo cualquier modificacin en la poblacin microbiana presente.

Debe existir un procedimiento documentado para la conservaciny eliminacin de muestras.

Las muestras deben conservarse hasta que se hayan obtenidolos resultados del ensayo, o ms tiempo segn sea necesario.

Cuando se sepa que algunas porciones de muestras de ensayodel laboratorio estn altamente contaminadas, deben

descontaminarse antes de su eliminacin.

Los tiempos lmites de almacenamientoLos tiempos lmites de almacenamientodependern del tipo de productodependern del tipo de productoReferencia: Norma ISO 7218:1996 (E)Referencia: Norma ISO 7218:1996 (E)


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(1) Si no se puede procesar

en ese tiempo, las muestrasse pueden congelar pordebajo -18 C.Esto debe ser mencionado enel informe de ensayo.

Precaucin: En algunosproductos el congelamientoproduce un cambio de lacomposicin de la flora.

Tipos de ProductosTiempos lmites de

almacenamiento (horas)

EstablesTan rpido como seaposible yantes de su fecha de

vencimiento

Fresco o refrigeradosdentro de 24 horas de larecepcin la muestra (1)

Pasteurizados yproductos similares

Tan rpido como seaposible y

antes de su fecha devencimiento

Unidades establesdaadas

Tan rpido como seaposible y dentro de 48

horas


ENSAYOS INTRALABORATORIOS

ENSAYOS INTERLABORATORIOS


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CONTROL DE CALIDAD:CONTROL DE CALIDAD: Es la combinacin de sistemas, procedimientos,actividades, instrucciones y estudios que realiza la organizacin para

controlar y mejorar las operaciones llevadas a cabo. Ejemplo: monitoreodel ambiente, capacitacin del personal, evaluacin de la calidad y esterilidad de los mediosde cultivo, calibracin, verificacin y mantenimiento de equipos

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD:ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD: Es un sistema de actividades que

dan confianza que los sistemas de control de calidad funcionan ypermiten con eficacia obtener resultados analticos de alta calidad.Es un programa de actividades llevadas a cabo por el laboratorio con lafinalidad de verificar que los resultados obtenidos tienen una precisin yexactitud aceptable

y mejorar en conjunto el funcionamiento del mismo.Estos programas son planificados y revisados peridicamenteEjemplo es participacin en ensayos intralaboratorios e interlaboratorios

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDADDE LOS RESULTADOS

Dicho programa debe abarcar todos los ensayos incluidos en elalcance de acreditacin del laboratorio.


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p g yalcance de acreditacin del laboratorio.La frecuencia de realizacin de cada uno de estos Programas quedaestablecida por el laboratorio.ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS DE

ENSAYO: El laboratorio debe tener procedimientos de control deEl laboratorio debe tener procedimientos de control decalidad para monitorear la validez de los ensayos llevados a cabcalidad para monitorear la validez de los ensayos llevados a caboo.Son las actividades que se deben realizar para todos los ensayosacreditados.Comprenden:

1. Control interno: Un programa de controles peridicos es necesariopara demostrar que se controla la variabilidad (por ejemplo, entreanalistas y entre equipos o materiales, etc.). Permite la evaluacincontinua del trabajo el laboratorio.2. Control externo (intercomparaciones):

La participacin en Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (ProficiencyTesting) permite la evaluacin del sesgopermite la evaluacin del sesgo de forma que el laboratoriopueda demostrar que se mantiene dentro de los criterios deaceptacin definidos por normas, reglamentos, por el cliente o por ellaboratorio.

Control interno:

El principal objetivo es asegurar la coherencia de los resultadoEl principal objetivo es asegurar la coherencia de los resultadoss

obtenidos diariamente y el cumplimiento de los criterios estableobtenidos diariamente y el cumplimiento de los criterios establecidos.cidos.C l d l di i d b jC t l d l di i d t b j i i f i


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Control de las condiciones de trabajo:Control de las condiciones de trabajo: proporciona informacinsobre la buena prctica en la realizacin de los ensayos y sobre laesterilidad de los medios y materiales auxiliares utilizado. Evala la

posible contaminacin cruzada. Ejemplo: muestras estriles o control deesterilidad.

ENSAYOS CUANTITATIVOSENSAYOS CUANTITATIVOSControl de la precisin:Control de la precisin: muestras naturales sin inocular y/o

muestras naturales inoculadas con materiales de referencia.Control de recuperacin:Control de recuperacin: muestras inoculadas con materiales dereferencia.

ENSAYOS CUALITATIVOSENSAYOS CUALITATIVOS El Control de la calidad interno debe incluir actividades quegaranticen un adecuado control del lmite de deteccin.control del lmite de deteccin.

Control interno:

Uso de cepas de referencia: Empleo de cepas de referencia

durante la realizacin del ensayo como control positivo, negativo,muestras inoculadas para control


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muestras inoculadas para control.

ENSAYOS INTRALABORATORIO: Son las verificaciones de calidad

para evaluar el desempeo de los analistas del laboratorio en unensayo.Mtodos cuantitativos: Se comparan los resultados obtenidos : Por cada analista perteneciente al laboratorio que realiza porduplicado el anlisis de la muestra (repetibilidad de cada analista). Entre analistas del mismo laboratorio para un ensayo(reproducibilidad entre analistas).Mtodos cualitativos: verifico que los resultados entre analistas seanconcordantes y conformes.

Se comparan los resultados obtenidos entre analistas del mismolaboratorio para un ensayo.

LOS CONTROLES DE CALIDAD INTERNOS NO SON

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDADDE LOS RESULTADOS


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SUFICIENTES.No puedo determinar mediante ellos el Valor verdadero!!

Realizo un Control de calidad externo.Definiciones:Valor verdadero : valor en consistencia con la definicin de unamagnitud (concepto abstracto, no realizable).

Valor asignado o valor de referencia: es el valorconvencionalmenteverdadero.Exactitud de una medicin: Proximidad entre el resultado de unamedicin y el valor verdadero del mensurando.

Ejemplo:Precisin. Justeza y Exactitud


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Resultados precisos y justos:exactos

Resultados precisos y No justos:No exactos

Resultados imprecisos y justos:No exactos

Resultados imprecisos y No justos:No exactos

Clculo del valor de referencia o valor asignado:Clculo del valor de referencia o valor asignado: Uso un material de referencia certificado.


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Casi nunca son estos los casos en ensayos microbiolgicos. Se considera que el valor medio obtenido por el conjunto delaboratorios luego de eliminar los outliers en el propio ejercicio puede

utilizarse como valor de referencia o valor verdadero.

Los programas de ensayos de aptitud organizados externamente porun proveedor de ensayos interlaboratorioCONSTITUYEN UN MEDIO INDEPENDIENTE por el cual unlaboratorio se puede EVALUAR OBJETIVAMENTE

y demostrar la veracidad y precisin de los resultados obtenidos porsus mtodos analticos.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

C tit h i t l l i t d l lid d

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :


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Constituye una herramienta para la evaluacin externa de la calidadde los resultados de ensayo o desempeo del laboratorio.La participacin en estos ensayos PERMITE AL LABORATORIO

COMPARAR SUS RESULTADOS FRENTE A LOS DE OTROSLABORATORIOS.Los laboratorios deben participar regularmente en ensayos deaptitud relacionados con el alcance de su acreditacin, dandopreferencia a los programas de ensayos de aptitud que utilicen

matrices apropiadas.Cuando los resultados de los ensayos NO resultan dentro delintervalo de conformidad o se visualice una tendencia determinadatomar respectivamente acciones correctivas o preventivas, siguiendolos lineamientos establecidos en el Procedimiento Reclamos,sugerencias, no conformidades, acciones correctivas y accionespreventivas.

STAPHYLOCOCCUS aureus - cerealZ-score-2=5257ufc/g valor asignado=21000ufc/g Z-


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Ensayos de Aptitud

InterlaboratorioMtodos cuantitativos(Proficiency Testing) :

Valor de Z-score: Clasificacin

lzl3 Insatisfactorio

0

10

20

30

40

50

60

70

80

insatis

facto

rio

cuestion

able

satisfac

torio

satisfac

torio

satisfac

torio

cuestion

able

insatis

facto

rio

score+2=83891ufc/g

Registro Ensayos de Aptitud Interlaboratorio

Ensayos cualitativos (Proficiency Testing) :Ensayo:Matriz:


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Proveedor del

Ensayo

Interlaboratorio

Identificacin

de las

Muestras

Fecha de

anlisis

de lasmuestras Analista

Metodologa

usada por el

laboratorio

Resultado

obtenido

por ellaboratorio

Valor

asignado

Clasificacin

obtenida

Satisfactorio/Insatisfactorio

Firma del

responsable

IMPORTANTE!!!

Los datos obtenidos atravs


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del programa elaseguramiento de la calidad

deben ser registrados enforma tal

que se puedan detectar las

tendenciasy aplicar tcnicas

estadsticas

para la revisin de losresultados.

Periodicidad de las actividadesde control de calidad


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Se deben establecer considerando diversos factores:La robustez del mtodo utilizado ( en funcin de loscontroles especficos incluidos en el mismo, empleo deplacas duplicadas, mtodo de referencia o de rutina,datos de validacin, etc)

La frecuencia con la que el laboratorio ejecuta dichosensayos.Los resultados histricos de control de calidad yaseguramiento de calidad.

Validacin de los mtodos

microbiolgicosNorma ISO 17025Norma ISO 17025


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Objetivos Generales a desarrollar:

Intentaremos contestar las siguientes preguntas:

Qu es validar un mtodo? Por qu y para qu valido un mtodo? Cmo valido un mtodo? Cundo valido un mtodo?

Ejemplo:Un laboratorio dise una nueva metodologapara la deteccin de E coli O157:H7 basada en el uso de


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para la deteccin de E coli O157:H7 basada en el uso deanticuerpos monoclonales para evaluar la inocuidad y

calidad de alimentos crnicos. Qu caractersticas tendrn que tener los resultadosque arroja dicho mtodo?

Puedo emplearlo inmediatamente para emitirresultados que impliquen una decisin de conformidad ono con las especificaciones alimentarias vigentes?

La respuesta es:Antes de usar un mtodo debo asegurarme que haya sido validado

Necesito que el mtodo sea:Adecuado para el propsito.


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Los datos que arroja un ensayo le permiten al usuariotomar decisiones tcnica y administrativamente correctas

para un propsito preestablecido.

La Norma ISO 17025 en el punto 5.4.2 establece que El laboratorio debeutilizar mtodos de ensayo que satisfagan las necesidades del cliente y seanapropiadas para el uso previsto

Definiciones:Validacin: Confirmacin, mediante el aporte de pruebas objetivas, de quese han cumplidos los requisitos para el uso pretendido o una aplicacinespecfica.[ISO 9000: 2000]

Verificacin: Confirmacin, mediante el aporte de pruebas objetivas, de quese han cumplido los requisitos establecidos. [ISO 9000:2000]Demostracin por experimento que un mtodo establecido funciona deacuerdo con las especificaciones en las manos del usuario.

Por qu y para ques necesario

validar un mtodo?Respuesta:El laboratorio microbiolgico tiene la responsabilidad de garantizarque los resultados que l produce son exactos validos y confiables


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que los resultados que l produce son exactos, validos y confiablesde modo de proporcionar informacin til acerca de la inocuidad ycalidad sanitaria de los alimentos.

Si el resultado de un ensayo no es confiable, el ensayo nopresenta ninguna utilidad y sera mejor no realizarlo.

Cuando un cliente recurre a un laboratorio microbiolgico a solicitarun anlisis, lo hace porque necesita resolver un problemay no puede hacerlo por s mismo y espera poder confiar en losresultados.

PARA SABER SI ESE ENSAYO SIRVE PARA LO QUE LOQUIERO USAR.

PARA CONOCER EL COMPORTAMIENTO DEL MTODO.

Evidencias objetivas:Cmo puedo aportarlas?

En el marco de un adecuado criterio microbiolgico, tengodos herramientas fundamentales que permiten sacar


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q pconclusiones:Diseo de experimentos estadsticamente vlidos.Anlisis de los resultados usando mtodos estadsticos.

Antes de realizar la validacin se deben especificar:

ALCANCE:MatrizConcentracin en la que se aplica. Se deben declarar los CRITERIOS DE APTITUD PARA

LOS FINES (teniendo en cuenta los requisitos particularespara un uso especfico previsto).

Buenos resultados del ensayo

Se identifican 6 principios de la prctica analtica, los cuales cuando seimplementan simultneamente conducen a una buena prctica:1 Las mediciones analticas deben hacerse de forma tal que satisfagan


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1.Las mediciones analticas deben hacerse de forma tal que satisfaganun requerimiento acordado (un objetivo definido)2.Deben realizarse utilizando mtodos y equiposque hayan sidoprobados para asegurar que son aptos para un determinadopropsito.3.El personalque realiza las mediciones debe ser competente yestar calificado.

Debe haber una verificacin independiente (externa) y peridica dela competencia tcnicadel laboratorio.5. Las mediciones analticas realizadas en un laboratorio deben serconsistentes con las que se realizan en cualquier otro lugar.

6. Los laboratorios que realicen ensayos deben tener procedimientosbien definidos de control de calidad y de aseguramiento de lacalidad.

MTODO DE REFERENCIA. Definicin: Mtodo investigado a fondo que describe con claridad y


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Mtodo investigado a fondo, que describe con claridad yexactitud las condiciones y los procedimientos

necesarios para medir los valores de una o mspropiedades. Que ha demostrado tener una exactitud y una precisin

apropiadas para el uso que pretende hacerse del

mismo, de manera que puede utilizarse para evaluar laexactitud de otros mtodos empleados para realizar lamisma medicin y, en particular, para caracterizar unmaterial de referencia.

En general se trata de un mtodo normalizado nacionalo internacional.

En nuestro caso ejemplo:

La presencia de E.coli O157:H7 en un alimento puede ocasionar, paran determinado gr po poblacional enfermedad m erte


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un determinado grupo poblacional, enfermedad y muerte.

Tambin, cuando se desee comercializar, la partida de alimento serrechazada en los sitios de control provocando un dao econmico y deprdida de imagen. PROBLEMAS DE INOCUIDAD Y CALIDAD.

Por lo tanto, este mtodo propio desarrollado por el laboratorio debe

ser capaz de:Detectar ese microorganismo.Detectar la presencia del microorganismo en muy pequeascantidades.

Dar los mismos resultados cuando lo repito.Detectar la presencia de ese microorganismo y no de otro.

Validacin Mtodos deensayo microbiolgicos

CUALITATIVOS1 Descripcin detallada del mtodo de ensayo


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Deben ser validados estimando, cuando sea apropiado:

1 Descripcin detallada del mtodo de ensayo.

SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD

REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDADEXACTITUD RELATIVA

LMITE DE DETECCIN

EFECTO MATRICIAL

DESVIACIN POSITIVA Y DESVIACIN NEGATIVA

ValidacinMtodos de ensayo microbiolgicos

CUANTITATIVOS


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Deben ser validados estimando, cuando sea apropiado:

SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD

REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDADEXACTITUD

DESVIACIN POSITIVA Y DESVIACIN NEGATIVA

1 Descripcin detallada del mtodo de ensayo.

LMITE DE CUANTIFICACIN.

LMITE DE DETECCINLMITE DE DETECCIN

Definicin: Es el nmero mnimo de microorganismosque pueden ser detectado por el mtodo pero en


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que pueden ser detectadopor el mtodo, pero encantidades que no pueden estimarse con precisin.

(Aplicado a anlisis microbiolgicos cualitativos)Los resultados de los anlisis cualitativos debenexpresarse como : detectado/no detectadoen una

cantidad o volumen definidos.Determino el lmite de deteccin antes de evaluar lasensibilidad.

Ejemplo: DISEO DE EXPERIMENTOMTODO MICROBIOLGICO

T

Mtodo dereferencia

Mtodo avalidar

Matriz naturalmente o artificialmentecontaminada


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--NO Target 5--NO Target 4

--NO Target 3

--NO Target 2-+NO Target 1

+-Target 5

++Target 4

++Target 3

++Target 2

+-Target 1

Resultadoasignado

TotalResultadoasignado

Resultado del

mtodo

Ejemplo: DISEO DE EXPERIMENTOMTODO MICROBIOLGICO


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DN + NV-/- (NV)-/+ (DN)Negativo

DP + NV

+/- (DP)

NEGATIVO *

NPV + DNTotal

PV + DP+/+ (PV)Positivo

POSITIVO*a validar

*por mtodo de referencia o

por inoculacin de cepa de referencia.

Desviacin negativa (DN)Desviacin negativa (DN). Definicin: Ocurre cuando. Definicin: Ocurre cuandoel mtodo a validar da un resultado negativoel mtodo a validar da un resultado negativo sin confirmacinsin confirmacin yy

el mtodo deel mtodo de referencia da un resultado positivoreferencia da un resultado positivo..Esta desviacin se convierte en un resultado negativo falso cuanEsta desviacin se convierte en un resultado negativo falso cuandodopuede demostrarse que el resultado verdadero es positivopuede demostrarse que el resultado verdadero es positivo


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puede demostrarse que el resultado verdadero es positivo.puede demostrarse que el resultado verdadero es positivo.

DESVIACIN POSITIVA (DP). Definicin: Ocurre cuando:el mtodo a validar da un resultado positivo sin confirmacin yel mtodo de referencia da un resultado negativo.Esta desviacin se convierte en un resultado positivo falso cuandopuede demostrarse que el resultado verdadero es negativo.

FALSOS POSITIVOS: es la probabilidad que el ensayo arroje unresultado positivo cuando la muestra no contiene el analito.

F + = DPc/ DP + NV = 1- ESPECIFICIDAD

FALSOS NEGATIVOS: es la probabilidad que el ensayo arroje unresultado negativo cuando la muestra contiene el analito.F - = DNc/ DN + PV = 1- SENSIBILIDAD

SENSIBILIDAD:SENSIBILIDAD:Definicin: Fraccin del nmero total de cultivos o colonias POSITIVOS

que son correctamente asignados con el mtodoutilizado. [ISO 13843:2000]Sensibilidad %= PV/(DN c + PV) x100


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Capacidad del mtodo de dar positivo cuando las muestras tienen elanalito

Resultado del caso ejemplo: Sensibilidad %= 3/5x100= 60%

Definicin: Fraccin del nmero total de cultivos o coloniasNEGATIVOS que son correctamente asignados con el mtodoutilizado. [ISO 13843:2000]Especificidad %= NV/(DPc + NV) x100Capacidad del mtodo de dar negativo cuando las muestras no tienen el

analitoResultado del caso ejemplo: Especificidad %= 4/5x100= 80%

ESPECIFICIDADESPECIFICIDAD::

EXACTITUD RELATIVA.Definicin: Grado de concordancia entre los resultadosdel mtodo evaluado y los obtenidos utilizando un mtodod f i id


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de referencia reconocido

EXACTITUD RELATIVA %= PV + NV/(PV + NV + DN + DP) x100

LMITE DE CUANTIFICACIN.Definicin: Nmero mnimo de microorganismos dentrode una variabilidad definida que puede determinarse enlas condiciones experimentales del mtodo evaluado.Tengo en cuenta la incertidumbre del mtodo para valoresbajos.

(Aplicado a anlisis microbiolgicos cuantitativos)

Repetibilidad (r). Definicin: Grado deconcordancia entre los resultados de sucesivasmediciones del mismo mesurandomismo mesurandorealizadas en las


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mismas condiciones de medicin.

Reproducibilidad (R). Definicin: G

Microbiological Method Validation

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