Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i...
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TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS
UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA
UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO”
DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL
SECCION DE MICROBIOLOGÍA
Microbiología Médica I
Yudy Aranguren, 2014
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PASOS PARA EL DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO:
1.- MUESTRA:
2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram
3.- CULTIVO
4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS
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PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO DE
COCOS GRAM POSITIVO
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PRUEBA DE LA CATALASA
La determinación de la presencia de la enzima catalasa
• Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de
24-48 horas de incubación, con en peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%.
• La liberación de O2 indica la presencia de la enzima catalasa.
H2O2 + catalasa = H2O + ½ O2
Son catalasa positivo:
Son catalasa negativo:
PRUEBA PRIMARIA: Para cocos Gram positivos
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PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS A NITRITOS
• Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos
por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa
- +
• Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de:
- Reactivo A: solución de dimetilnaftilamina 0,6%.
- Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 0,8%.
• Se observa un cambio de color:
• Positivo: Rojo ladrillo
• Negativo: Sin cambio de color
PRUEBA PRIMARIA: Para cocos Gram positivos
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AGAR SALADO MANITOL
• La fermentación de un carbohidrato (azucares) por
un microorganismo en particular ayuda a su
identificación.
- +
FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS
• La acidez que se produce en el medio se
pone en evidencia a través del cambio de
color de un indicador de pH
• Se puede evidenciar la producción de gas
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Presencia de la enzima COAGULASA
PRUEBA PRIMARIA: Para diferenciar especies del género Sthaphylococcus
SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA (antibiótico)
PRUEBA SECUNDARIA: Para diferenciar especies del grupo Sthaphylococcus Coagulasa negativa
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PRUEBA DE LA COAGULASA
COAGULASA
POSITIVA NEGATIVA
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
+ -
+
-La determinación de la presencia de la enzima
coagulasa:
• Se pone en contacto una pequeña cantidad de
cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e
incubar 4 horas a 37ºC.
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PRUEBA DE SENSIBILIDAD
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SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
SENSIBLE-SIN CRECIMIENTO
RESISTENTE-CON CRECIMIENTO
Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus
SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
NOVOBIOCINANOVOBIOCINA
Con crecimiento alrededor del disco de Novobiocina
Sin crecimiento alrededor del disco de Novobiocina
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-+
CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL
COCOS GRAM POSITIVOS
• Género Staphylococcus crece a altas
concentraciones de sal (7% NaCl)
• Género Streptococcus NO crece a
altas concentraciones de sal (7% NaCl)
• Género Enterococcus crece a altas
concentraciones de sal de 6,5% pero NO a 7%
NaCl
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Agar Salado Manitol: Crecimiento con o sin fermentación de manitol
1.- Género Streptococcus no crece a 7% de NaCl
3.- Staphylococcus aureus
crece y fermenta el manitol
(color amarillo del medio)
2.- Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus
Crecen y NO fermentan el manitol (color rosado del medio)
CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL
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PATRONES DE HEMÓLISIS
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PATRONES DE HEMÓLISIS
ALFA
BETA
GAMMA
AGAR SANGRE
BETA: Lisis total de los glóbulos rojos
GAMMA: Sin lisis
ALFA: Lisis parcial de los glóbulos rojos
PRUEBA PRIMARIA: Para diferenciar especies del género Streptococcus
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Prueba de CAMP: Las especies del genero Streptococcus del grupo B ( BETA
HEMOLITICOS) produce un factor que aumenta la beta hemólisis de una cepa
indicadora de Staphylococcus aureus.
Streptococcus pyogenes
Staphylococcus aureus
Streptococcus agalactiae
PRUEBA DE CAMP
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TIPO DE HEMÓLISIS
AUTOEVALUACIÓN
NO HEMOLITICO
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http://www.youtube.com/watch?v=Zks-2AZuZ1Y&feature=related
CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA ESTREPTOCOCOS
BETA HEMOLITICOS
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Extracto soluble de la pared celular por acción enzimática + Partículas de látex cubiertos
de anticuerpos específicos
CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS
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Hardy Diagnostics StrepPro-1.mp4
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PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA
Con crecimiento alrededor del disco de Bacitracina
Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina
PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Beta hemolíticos
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DISCO DE OPTOQUINADISCO DE
OPTOQUINA
Sin crecimiento alrededor del disco de Optiquina
Con crecimiento alrededor del disco de Optiquina
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA
Streptococcus pneumoniae
StreptococcusGrupo Viridans
PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Alfa hemolíticos
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PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS
Streptococcus pneumoniae lisado en presencia de Bilis
Streptococcus mitis NO lisado en
presencia de Bilis
PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Alfa hemolíticos
![Page 23: Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i -2011](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022081420/556b60e2d8b42a280c8b4baf/html5/thumbnails/23.jpg)
PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO DE
BACILOS GRAM NEGATIVOS
![Page 24: Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i -2011](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022081420/556b60e2d8b42a280c8b4baf/html5/thumbnails/24.jpg)
4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS
PASOS PARA EL DIAGNOSTICO:
1.- MUESTRA:
2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram
3.- CULTIVO
![Page 25: Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i -2011](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022081420/556b60e2d8b42a280c8b4baf/html5/thumbnails/25.jpg)
FERMENTACIÓN DE LACTOSA EN
MEDIO MAC CONKEY
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• Permite conocer la presencia o ausencia del
“citocromo C” en bacterias y es una característica
fisiológica muy utilizada en taxonomía
PRUEBA DE LA OXIDASA
• Este reactivo es rápidamente transformado a
un producto oxidado de color púrpura dentro
de 30 segundos en presencia de citocromo
oxidasa.
• Se toma una pequeña cantidad de cultivo
bacteriano de 24-48 horas de edad y se
transfiere a un trozo de papel filtro
previamente embebido en n,n-dimetil p-
fenilendiamina
Prueba de oxidasa
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PRUEBA DE MOVILIDAD• Permite conocer si las bacterias en estudio son móviles o no, eso ayuda
en el proceso de clasificación
• Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriológica, y tras incubar 24 h, se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.
![Page 28: Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i -2011](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022081420/556b60e2d8b42a280c8b4baf/html5/thumbnails/28.jpg)
• Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que se produzca el Indol
• Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack (P-dimetil-aminobenzaldehido )
• Se determina la presencia de Indol a través de la formación de un anillo rojo en la superficie del caldo
PRUEBA DEL INDOL
+ -
![Page 29: Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i -2011](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022081420/556b60e2d8b42a280c8b4baf/html5/thumbnails/29.jpg)
Determina si el organismo bacteriano en cuestión se desarrolla o no en un medio que contiene citrato como única fuente de carbono.
PRUEBA DEL CITRATO
+ -Medio citrato de Simmons
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KLIGLER: Agar triple azucar hierro
En el bisel: LACTOSA
En el Taco: GLUCOSA
+
+-
-
![Page 31: Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i -2011](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022081420/556b60e2d8b42a280c8b4baf/html5/thumbnails/31.jpg)
KLIGLER: Agar triple azucar hierro