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Darwin Sáez Laboratorio De Nutrición Animal
Temas: Determinación de Proteína
Objetivos: Determinar la cantidad de proteína bruta en alimentos ( vicia y balanceado) para animales
mediante el método de Kjeldahl.
PRINCIPIO:
Mediante digestión caliente con H2S04 concentrado y catalizador, el nitrógeno amínico,
imínico y de otros tipos que contiene la muestra se convierte en (NH4)2S04, que
posteriormente por acción de un álcali fuerte (NaOH) se descompone liberando amoniaco
(NH3) que se destila y se recoge en ácido bórico. Finalmente el ácido proporcional a la
cantidad de nitrógeno es valorado por retroceso con un ácido normalizado y a partir de la
cantidad de ácido que ha reaccionado con el amoniaco, se calcula la cantidad de nitrógeno que
mediante multiplicación por un factor, se obtiene la cantidad de proteína bruta.
Equipo y materiales:
Destilador Kjeldahl
Bloque digestor
Sorbona
Balanza Analítica
Bureta
Erlenmeyer 250 mi
Tubos Kjeldahl
Gradilla
Fundamento teórico
El término proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus Mulder, en
1838, tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS , que significa primordial nivel
primario .(2)
Las proteínas como un grupo de biomoleculas , desempeñan una gran variedad de funciones ,
algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras
trasportan y almacenan moléculas pequeñas.(2)
Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica) son proteínas al
igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.(2)
Las proteínas pueden llevar a cabo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de
combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.
La diversidad que presentan las proteínas está en relación con la gran variedad de funciones de
que son responsables en nuestro metabolismo. Sus moléculas están constituidas por unidades,
aminoácidos, a modo de piezas de mecano que, una vez desarmado, son utilizadas por nuestro
organismo para construir las suyas propias y poder desarrollar multitud de funciones im-
portantísimas en nuestro metabolismo.(3)
Tabla 1. Contenido de proteína (%) en diferentes pastos
Fuente: Laboratorio de Nutrición EESC-INIAP. Elaborado: Jorge Grijalva
Ms: Materia seca, PC: Proteína cruda, PD: Proteína digestible, PNDR: proteína no digerible
Tabla 2. Contenido de proteína (%) en diferentes marcas de balanceados
MS PC PD PND
trebol blanco+pasto azul+alfalfa. Ray grass 22,45 20,6 15 5,6
Alfalfa plena floración 24,6 22,3 17,3 5
Alfalfa despues de la floración 27,6 22,9 16,5 6,4
Avena antes de la floración 24,7 7,5 4,3 3,2
Avena Inicio de la floración 27,4 5,7 2,7 3
Cebada, antes de la floración 20,4 8,8 5,4 3,4
Centeno, antes de la floración 20,3 9,3 5,8 3,5
Holco, antes de la floración 25 14,1 8,8 5,3
Holco, inicio de la floración 28,8 14,2 8,1 6,1
Kikuyo, antes de la floración 22,4 15,3 9,7 5,6
Kikuyo, inicio de la floración 21,3 15 9,3 5,7
Pasto azul antes de la floración 24,4 16,5 8,7 7,8
Pasto azul inicio de la floración 24,5 14,5 7,8 6,7
Rye grass perenne antes de la floración 17,2 19,5 14,6 4,9
Rye grass perenne inicio de la floración 23,5 17,5 13,1 4,4
Rye grass bianual antes de la floración 21,3 14,7 11 3,7
Rye grass bianual inicio de la floración 25 11,3 8,4 2,9
Trebol blanco antes de la floración 20,5 25,5 21,1 4,4
Trebol blanco inicio de la floración 18,8 24,8 19,8 5
Trebol rojo antes de la floración 21,2 24,9 20,7 4,2
Trebol rojo inicio de la floración 21,4 22,1 18,3 3,8
Vicia antes de la floración 19,7 25,2 18,9 6,3
%PASTOS
humedad MS PB
% % %
la fortaleza 12 88 16
winavacas estandar 13 87 14
winavaca energía 13 87 13
wayne 13 87 14
super lechero 13 87 14
super lechero AP 13 87 16
super lechero praderas 13 87 14
nutrifot leche TDN 68 13 87 16
winavacas producción 13 87 16
lechero plus 13 87 12
nutrifot leche TDN 75 13 87 18
nutrifort leche TDN 78 13 87 18
fortyvaca 13 87 18
winavaca alta producción 13 87 18
BALANCEADOS
Método Kjeldahl
Actualmente todos los métodos para determinar el contenido proteico total de los alimentos
son de naturaleza empírica. Un método absoluto es el aislamiento y pesado directo de la
proteína pero dicho método se utiliza sólo a veces en investigaciones bioquímicas debido a
que es dificultoso y poco práctico. (4)
En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad
para el análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno
orgánico. En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los
alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno
orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio. La mezcla digerida
se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución
de ácido bórico. Los aniones del borato así formado se titulan con HCl (H2SO4) estandarizado
para determinar el nitrógeno contenido en la muestra.(4)
Cálculos Y Resultados
Fuente: Darwin Sáez
Nitrógeno %= N ac X Vac X eq ac
Peso muestra
Nitrógeno %= 0,0494 X 0,1134 X 14
0,2043
Nitrógeno %= 3,838
Proteína% = % nitrógeno X k(factor de proteína)
Proteína% = 3,838 X 6,25
Proteína%= 23,99
# muestra descripción peso de muestra(g) volumen titulación(L) factor de prot peso equi % N % proteina
1 vicia 0,2043 0,01134 6,25 14 3,84 23,99
2 vicia 0,202 0,01131 6,25 14 3,87 24,2
2 balanceado 0,2054 0,0088 6,25 14 2,96 18,52
4 control 12,42 6,25 14 4,29 26,84
Cuadro 1. resultados de la determinación de proteína en las muestras de balanceado y vicia en el laboratorio de FCA-UCE
X 100
X 100
Resultados:
Después de haber realizado los cálculos necesarios se puede apreciar en el cuadro 1, las
muestras de vicia que presenta para muestra 1 un 23,99% y para la dos 24,2% de proteína, la
diferencia entre las dos muestras es de 0,21 % de proteína lo cual indique no existe un mal
manejo de las muestras en laboratorio, sabiendo que la diferencia entre los resultados de dos
determinaciones efectuadas una después de otra, por el mismo analista, no debe exceder 0.06
% de Nitrógeno o 0.38 % de proteína. (1)
Del balanceado no se puede efectuar este análisis ya que la muestra 1 se echó a perder en la
práctica.
Conclusiones:
Después de haber establecido cuál de las dos muestras vicio o balanceado tiene la mayor
cantidad de proteína presente en la misma, se puede concluir que la vicia es una fuente muy
importante de proteína ya que presenta un 24% por lo cual se la puede ocupar en diferentes
potreros en combinación con otros cultivos para realizar una mezcla forrajera para
alimentación de animales según su demanda nutricional.
El balanceado como su mismo nombre lo indica se encuentra en un balance entre los
diferentes compuestos que lo forman, por lo que es ideal para ser consumido por los animales
dependiendo así mismo de sus requerimientos nutricionales.
Cuestionario
1. Porque es importante la proteína en una dieta alimenticia
La diversidad que presentan las proteínas está en relación con la gran variedad de
funciones de que son responsables en nuestro metabolismo. Sus moléculas están
constituidas por unidades, aminoácidos, a modo de piezas de mecano que, una vez
desarmado, son utilizadas por nuestro organismo para construir las suyas propias y
poder desarrollar multitud de funciones importantísimas en nuestro metabolismo.
Desde las funciones estructurales y mecánicas (músculos, tendones y ligamentos), las
reguladoras (enzimas y hormonas), de transporte (hemoglobina) y tantas otras, sin
obviar que, aún no específicamente destinadas a esta finalidad, también pueden
actuar como fuente energética proporcionando 4 kcal/g (el mismo valor que el de los
hidratos de carbono).(3)
2. Consultar 5 factores de proteína para diferentes productos
6.25: para carne, pescado, huevo, leguminosas y proteínas en general
5.7 : para cereales y derivados de soya
6.38: leche
5.55: gelatina
5.95: arroz (1)
Bibliografía:
1. INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DE CHILE, 2014. DETERMINACIÓN DE PROTEINAS
Método Kjeldahl (en línea).consultado el 6 de febr. 2015. Disponible en
http://www.ispch.cl/lab_amb/met_analitico/doc/ambiente%20pdf/Proteina.pdf
2. El Rincon del Vago, 2015. Determinación de proteínas(en línea). Consultado en 6 de
febr. del 2015. Disponible http://html.rincondelvago.com/determinacion-de-
proteinas.html
3. Fundación Triptolemos.2015. La importancia de las proteínas en los alimentos (en
línea). Consultado en 6 de febr. del 2015. Disponible en
http://www.triptolemos.org/archivos/La_importancia_de_las_proteinas.pdf
4. Francisco Santiago. Engineering Department.2011. Determinacion De Proteinas Por El
Metodo De Kjeldahl / Kjeldahl Method For Protein Determination(en línea).
Consultado el 6 de febr. Del 2015. Disponible en http://www.grupo-
selecta.com/notasdeaplicaciones/analisis-alimentarios-y-de-aguas-nutritional-and-
water-analysis/determinacion-de-proteinas-por-el-metodo-de-kjeldahl-kjeldahl-
method-for-protein-determination/