Parte Mecánica Del Microscopio

8/16/2019 Parte Mecánica Del Microscopio

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1. --Un microscopio simple es aquel que utiliza una sola lente de aumento. Es el microscopio más

básico. El ejemplo más clásico es lalupa. El microscopio óptico estándar utiliza dos sistemas de

lentes alineados.2. --Se denomina microscopio compuesto a aquellos instrumentos que poseen más de una lente de

objetivo. Estos se utilizan especialmente para analizar objetos transparentes o que se encuentran

cortados en finas láminas.3. El microscopio confocal permite reconstruir imáenes tridimensionales o incrementar el contraste a

trav!s de un colimador de orificio delimitante que permite eliminar la luz que queda desenfocada.

Este microscopio se usa especialmente en biolo"a # en el estudio de semiconductores$. %os microscopios de antimateria son instrumentos que se basan en una antipart"cula de los

electrones &positrones' para brindar imáenes de alta calidad. Se lo utiliza para detectar defectos en

las superficies de semiconductores. (racias a estos microscopios es posible detectar fallas en

materiales que antes eran imposibles de )allar. El microscopio de antimateria fue desarrollado por un

rupo de cient"ficos alemanes*. --El microscopio de campo obscuro enfoca un )az de luz mu# intenso que tiene la forma de un

cono )ueco # se concentra en la muestra a observar. El objeto dispersa la luz que recibe # se )ace

visible en contraste con el fondo obscuro. Este microscopio se utiliza para observar elementos

biolóicos sin pimentar # transparentes+. --El microscopio de contraste de fases es mu# ,til para el estudio de c!lulas vivas #a que permite

observarlas sin que sea necesario teirlas.El efecto lo lora al utilizar las d!biles diferencias de los

"ndices de refracción de las diversas secciones de la c!lula. e esta manera/ se obtiene una imaen

en el que racias a los contrastes se observan las diferentes secciones0. --El microscopio de fluorescencia es una variación del microscopio de luz ultravioleta en el que los

objetos son iluminados por ra#os de una determinada lonitud de onda. %a imaen observada es el

resultado de la radiación electroman!tica emitida por las mol!culas que )an absorbido la ecitación

primaria # reemitido una luz con ma#or lonitud de onda. ara dejar pasar sólo la emisión secundaria

deseada/ se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador # encima del objetivo. Se usa

para detectar sustancias con autofluorescencia &vitamina ' o sustancias marcadas con

fluorocromos.4. %os microscopios de luz polarizada son instrumentos que poseen dos polarizadores. Uno de ellos/

se ubica entre el condensador # la muestra mientras que el seundo se encuentra entre el

observador # la muestra. El material utilizado es el cuarzo #a que permite el paso de luz polarizada.

Estos microscopios se usan para identificar substancias cristalinas/ amiloides/ coláeno/ asbesto/

cristales de urato/ s"lice/ queratina/ entre otros5. Un microscopio electrónico es aqu!l que utiliza electrones en luar de fotones o luz visible para

formar imáenes de objetos diminutos. %os microscopios electrónicos permiten alcanzar

ampliaciones )asta *666 veces más potentes que los mejores microscopios ópticos/ debido a que la

lonitud de onda de los electrones es muc)o menor que la de los fotones 7visibles9.1 microscopio electrónico de transmisión &8E9' utiliza un )az de electrones para observar una

muestra. ara lorar visualizar la muestra debe ser mu# delada para permitir que los electrones la

atraviesen para brindar la imaen. %a capacidad máima de aumento que tiene esta clase de

microscopios es de un millón.

http://es.wikipedia.org/wiki/Lentehttp://es.wikipedia.org/wiki/Lentehttp://es.wikipedia.org/wiki/Lupahttp://es.wikipedia.org/wiki/Lupahttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_compuestohttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_de_luz_ultravioletahttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Radiaci%C3%B3n_electromagn%C3%A9ticahttp://es.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9culahttp://es.wikipedia.org/wiki/Vitamina_Ahttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Electr%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Electr%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fot%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fot%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Luz_visiblehttp://es.wikipedia.org/wiki/Luz_visiblehttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_%C3%B3pticohttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Lentehttp://es.wikipedia.org/wiki/Lupahttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_compuestohttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_de_luz_ultravioletahttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Radiaci%C3%B3n_electromagn%C3%A9ticahttp://es.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9culahttp://es.wikipedia.org/wiki/Vitamina_Ahttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Electr%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fot%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Luz_visiblehttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_%C3%B3pticohttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_onda


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16. El microscopio petrográfico o de polarización se utiliza para identificar # estimar cuantitativamente

los componentes minerales de lasrocas.11. El microscopio de luz ultravioleta no es un dispositivo para observar directamente con la vista sino

que sus resultados se obtienen a trav!s de fotoraf"as. Es ideal para analizar ácidos nucleicos.

%os elementos ópticos se componen de cuarzo # fluorita #a que el vidrio no puede utilizarse debido a

que no transmite la luz ultravioleta.12. --Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticos. 8ambi!n se le conoce

como microscopio de luz/ &que utiliza luz o 7fotones7' o microscopio de campo claro. El desarrollo

de este aparato suele asociarse con los trabajos de nton van %eeu:en)oe;. %os microscopios de

%eeu:en)oe; constaban de una ,nica lente pequea # convea/ montada sobre una planc)a/ con un

mecanismo para sujetar el material que se iba a eaminar &la muestra o esp!cimen'. Este uso de una

,nica lente convea se conoce como microscopio simple/ en el que se inclu#e la lupa/ entre otros

aparatos ópticos.13. --Microscopio electrónico de barrido o SEM &Scanning Electron Microscope'/ es aquel que utiliza

un )az de electrones en luar de un )az de luz para formar una imaen. 8iene una ran profundidad

de campo/ la cual permite que se enfoque a la vez una ran parte de la muestra. 8ambi!n produce

imáenes de alta resolución/ que sinifica que caracter"sticas espacialmente cercanas en la muestra

pueden ser eaminadas a una alta manificación. %a preparación de las muestras es relativamente

fácil pues la ma#or"a de SE9s sólo requieren que estas sean conductoras.1$. microscopía de iones en campo &


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la eolo"a &en el análisis de la composición mineralóica # tetural de las rocas' #/ por supuesto/ en el campo

de la biolo"a &en el estudio de estructuras microscópicas de la materia viva'/ por citar alunas disciplinas de

la ciencia.

@asta a)ora se da uso en el laboratorio de )istolo"a # anatom"a patolóica/ donde la microscop"a permite

determinadas aplicaciones dianósticas/ entre ellas el dianóstico de certeza del cáncer / numerosas

estructuras cristalinas/ pimentos/ l"pidos/ prote"nas/ depósitos óseos/ depósitos de amiloide/ etc!tera.

arte mecánica del microscopio

Esquema de un microscopio óptico.

* A Foco: dirie los ra#os luminosos )acia el condensador.

%a parte mecánica del microscopio comprende el pie/ el tubo/ el revólver/ el asa/ la platina/ el carro # el tornillo

microm!trico. Estos elementos sostienen la parte óptica # de

iluminaciónB además/ permiten los desplazamientos necesarios para

el enfoque del objeto.

El pie soporte: ?onstitu#e la base sobre la que se apo#a el

microscopio # tiene por lo eneral forma de C o bien es

rectanular. !ase o pie: Es la parte inferior del microscopio que

permite el sost!n estable del mismo.

"a columna o brazo:llamada tambi!n asa/ es una pieza en

forma de ?/ unida a la base por su parte inferior mediante

una bisara/ permitiendo la inclinación del tubo para mejorar la

captación de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo

en su porción superior # por el etremo inferior se adapta al pie.

A!razoD Es la estructura que sujeta el tubo/ la platina # los

tornillos de enfoque asociados al tubo o a la platina. %a unión

con la base puede ser articulada o fija.

El tubo: tiene forma cil"ndrica. El tubo se encuentra en una carretera superior de la columna mediante

un sistema de cremalleras/ las cuales permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos. A #ubo: es la

cámara oscura que porta el ocular # los objetivos. uede estar unida al brazo mediante una cremallera

para permitir el enfoque.

El tornillo macrom$trico o macroscopico: irando este tornillo/ asciende o desciende el tubo del

microscopio/ deslizándose en sentido vertical racias a un mecanismo de cremallera. Estos movimientos

laros permiten el enfoque rápido de la preparación.

El tornillo microm$trico o microscopico: mediante el ajuste fino con movimiento casi imperceptible

que produce al deslizar el tubo o la platina/ se lora el enfoque eacto # n"tido de la preparación. %leva

acoplado un tambor raduado en divisiones de 6/661 mm/ que se utiliza para precisar sus movimientos #

puede medir el espesor de los objetos.

http://es.wikipedia.org/wiki/Histolog%C3%ADahttp://es.wikipedia.org/wiki/Histolog%C3%ADahttp://es.wikipedia.org/wiki/Anatom%C3%ADa_patol%C3%B3gicahttp://es.wikipedia.org/wiki/Anatom%C3%ADa_patol%C3%B3gicahttp://es.wikipedia.org/wiki/Anatom%C3%ADa_patol%C3%B3gicahttp://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1ncerhttp://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1ncerhttp://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1ncerhttp://es.wikipedia.org/wiki/Foco_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Foco_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Bisagrahttp://es.wikipedia.org/wiki/Bisagrahttp://es.wikipedia.org/wiki/Luzhttp://es.wikipedia.org/wiki/Luzhttp://es.wikipedia.org/wiki/Espejohttp://es.wikipedia.org/wiki/Histolog%C3%ADahttp://es.wikipedia.org/wiki/Anatom%C3%ADa_patol%C3%B3gicahttp://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1ncerhttp://es.wikipedia.org/wiki/Foco_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Bisagrahttp://es.wikipedia.org/wiki/Luzhttp://es.wikipedia.org/wiki/Espejo


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#ornillos macro microm$trico: Son tornillos de enfoque/ mueven la platina o el tubo )acia arriba #

)acia abajo. El macrom!trico lo )ace de forma rápida # el microm!trico de forma lenta/ para un enfoque

más preciso. ueden llevar incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el tubo a una

determinada altura.

"a platina: es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se va a

observar. resenta un orificio/ en el eje óptico del tubo/ que permite el paso de los ra#os luminosos a la

preparación. %a platina puede ser fija/ en cu#o caso permanece inmóvilB en otros casos puede ser

iratoriaB es decir/ mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

%latina: Es una plataforma )orizontal con un orificio central/ sobre el que se coloca la preparación/ que

permite el paso de los ra#os procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. os pinzas

sirven para retener el portaobjetos sobre la platina # un sistema de cremallera uiado por dos tornillos de

desplazamiento permite mover la preparación de adelante )acia atrás o de izquierda a derec)a #

viceversa. uede estar fija o unida al brazo por una cremallera para permitir el enfoque.

"as pinzas: son dos piezas metálicas que sirven para sujetar la preparación. Se encuentran en la

platina.

El revólver: es una pieza iratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. l irar

el revólver/ los objetivos pasan por el eje del tubo # se colocan en posición de trabajo/ lo que se nota por

el ruido de un pión que lo fija. 0 A &evólver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes

aumentos/ # que rota para poder utilizar uno u otro/ alineándolos con el ocular.

Sistema óptico

El sistema óptico es el encarado de reproducir # aumentar las imáenes mediante el conjunto de lentes que

lo componen. Está formado por el ocular # los objetivos. El objetivo pro#ecta una imaen de la muestra que el

ocular lueo ampl"a.

• El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la cercan"a de la

pieza con el ojo del observador. 8iene como función aumentar la imaen formada por el objetivo. %os

oculares son intercambiables # sus poderes de aumento van desde * )asta 26. Eisten oculares

especiales de potencias ma#ores a 26 # otros que poseen una escalamicrom!tricaB estos ,ltimos tienen

la finalidad de medir el tamao del objeto observado. 'cular : lente situada cerca del ojo del observador.

?apta # ampl"a la imaen formada en los objetivos.

"os ob(etivos: se disponen en una pieza iratoria denominada revólver # producen el aumento de

las imáenes de los objetos # oranismos/ #/ por tanto/ se )allan cerca de la preparación que se

eamina. %os objetivos utilizados corrientemente son de dos tiposD objetivos secos # objetivos de

inmersión. 2 A 'b(etivo: lente situada en el revolver. mpl"a la imaen/ es un elemento vital que permite

ver a trav!s de los oculares

%os ob(etivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia aluna entre ellos # la

preparación. En la cara eterna llevan una serie de "ndices que indican el aumento que producen/ la

abertura num!rica # otros datos. s"/ por ejemplo/ si un objetivo tiene estos datosD plan $6F6/+* #

http://es.wikipedia.org/wiki/Ojohttp://es.wikipedia.org/wiki/Ojohttp://es.wikipedia.org/wiki/Ojohttp://es.wikipedia.org/wiki/Escalahttp://es.wikipedia.org/wiki/Ocularhttp://es.wikipedia.org/wiki/Ocularhttp://es.wikipedia.org/wiki/Objetivo_(fotograf%C3%ADa)http://es.wikipedia.org/wiki/Ojohttp://es.wikipedia.org/wiki/Escalahttp://es.wikipedia.org/wiki/Ocularhttp://es.wikipedia.org/wiki/Objetivo_(fotograf%C3%ADa)


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1+6F6/10/ sinifica que el objetivo es planacromático/ su aumento $6 # su apertura num!rica 6/+*/

calculada para una lonitud de tubo de 1+6 mm. El n,mero de objetivos var"a con el tipo de

microscopio # el uso a que se destina. %os aumentos de los objetivos secos más frecuentemente

utilizados sonD $/ 16/ 26/ $6 # +6.

El ob(etivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes. araobservar a trav!s de este objetivo es necesario colocar una ota de aceite de cedro entre el objetivo

# la preparación/ de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro.

(eneralmente/ estos objetivos son de 166 # se distinue por uno o dos c"rculos o anillos de color

nero que rodea su etremo inferior.

Sistema de iluminación

Este sistema tiene como finalidad diriir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la preparación u

objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. ?omprende los siuientes elementosD

Fuente de iluminación: se trata clásicamente de una lámpara incandescente de tunsteno sobrevoltadaB enversiones más modernas con leds. or delante de ella se sit,a un condensador &una lente converente' e/

idealmente/ un diaframa de campo/ que permite controlar el diámetro de la parte de la preparación que

queda iluminada/ para evitar que eceda el campo de observación produciendo luces parásitas.

El espe(o: necesario si la fuente de iluminación no está construida dentro del microscopio # #a

alineada con el sistema óptico/ como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos carasD

una cóncava # otra plana. (oza de movimientos en todas las direcciones. %a cara cóncava se emplea de

preferencia con iluminación artificial/ # la plana/ para natural &luz solar'. %os modelos más modernos no

poseen espejos sino una lámpara que cumple la misma función que el espejo.

)ondensador: está formado por un sistema de lentes/ cu#a finalidad es concentrar los ra#os

luminosos sobre el plano de la preparación/ formando un cono de luz con el mismo ánulo que el del

campo del objetivo. El condensador se sit,a debajo de la platina # su lente superior es eneralmente

planoconvea/ quedando la cara superior plana en contacto con la preparación cuando se usan objetivos

de ran abertura &los de ma#or ampliación'B eisten condensadores de inmersión/ que piden que se llene

con aceite el espacio entre esa lente superior # la preparación. %a abertura num!rica máima del

condensador debe ser al menos iual que la del objetivo empleado/ o no se lorará aprovec)ar todo su

poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera

mediante un tornillo/ bajándose para su uso con objetivos de poca potencia. )ondensador: lente que

concentra los ra#os luminosos sobre la preparación.

http://es.wikipedia.org/wiki/Ledhttp://es.wikipedia.org/wiki/Ledhttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%A1mparahttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%A1mparahttp://es.wikipedia.org/wiki/Rayo_luminosohttp://es.wikipedia.org/wiki/Rayo_luminosohttp://es.wikipedia.org/wiki/Rayo_luminosohttp://es.wikipedia.org/wiki/Ledhttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%A1mparahttp://es.wikipedia.org/wiki/Rayo_luminoso


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*iafragma: el condensador está provisto de un diaframa-iris/ que reula su abertura para ajustarla

a la del objetivo. uede emplearse/ de manera irreular/ para aumentar el contraste/ lo que se )ace

cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovec)ar la resolución del sistema óptico. $

A *iafragma: reula la cantidad de luz que llea al condensador

8!cnica )istolóica

Se denomina t$cnica +istológica al conjunto de

operaciones a que se somete una materia

oranizada &tejido biolóico'/ a fin de que sea posible su estudio por medio del microscopio/ posibilitando la

observación de estructuras no visibles al ojo )umano.

%asos de la t$cnica +istológica

>btención del material )istolóico para estudiar

roceso de fijación

%avados

es)idratación

claramiento

=nfiltración

=nclusión

9icrotom"a

8inción

http://es.wikipedia.org/wiki/Diafragma_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Diafragma_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Diafragma_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Tejido_biol%C3%B3gicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Inclusi%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Microtomohttp://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Diafragma_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Tejido_biol%C3%B3gicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Microscopiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Inclusi%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Microtomohttp://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n


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>bservación &Este ,ltimo no es considerado como un paso de la t!cnica )istoloica por varios

autores'

Obtención del material histológico

%os tejidos se pueden obtener de diferentes formasD

Giopsia

biopsia

Hecropsia &llamada vularmente autopsia'

Fijación

En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem. Unos

de los fijadores más usado es el formol al 16I & formalde)ido'. En el caso de que utilicemos más adelante el

microscopio electrónico/ usaremoslutaralde)"do &para prote"nas' u osmio &para l"pidos'.

Lavados

Se debe lavar el tejido para quitar el eceso de fijador.

Deshidratación

Suena inco)erente que se deba lavar el tejido # despu!s des)idratarlo. El eceso de fijador al momento de la

infiltración/ incluso en la microtom"a/ podr"a afectar los cortes )istolóicos/ # por ello se debe lavar. %a

des)idratación se )ace empleando diferentes soluciones de alco)ol de concentración creciente.

Aclaramiento

En este paso se sustitu#e el alco)ol por un disolvente de parafina. El más usado es el ilol &ileno' #a que

como la muestra está des)idratada/ el ilol entrará )asta lo más profundo del tejido. 8ambi!n el tejido pierde

color # adquiere un tono acaramelado.

Infiltración

En este paso la muestra se coloca en parafina l"quida/ cabe mencionar que se debe usar parafina )istolóica.

?omo se )a dic)o en el paso anterior el tejido está completamente lleno de ilol/ a)ora debido a ósmosis sale

el ilol # entra la parafina.

%a des)idratación/ aclaramiento e infiltración pueden ser realizadas manualmente pero )o# en d"a se realizan

de modo automático en máquinas espec"ficas.

Inclsión

qu" se forman bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras a estudiar. 8ambi!n )a#

maquinas especializadas para la inclusión en parafina de tejidos. espu!s de su inclusión # posterior secado/

estos se deben poner a enfriar en un conelador para su posterior corte.

http://es.wikipedia.org/wiki/Biopsiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Necropsiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Necropsiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Formaldehidohttp://es.wikipedia.org/wiki/Glutaraldeh%C3%ADdohttp://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADnahttp://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADnahttp://es.wikipedia.org/wiki/Osmiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Osmiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Osmiohttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADpidohttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADpidohttp://es.wikipedia.org/wiki/Cortes_histol%C3%B3gicoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Cortes_histol%C3%B3gicoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Parafinahttp://es.wikipedia.org/wiki/Parafinahttp://es.wikipedia.org/wiki/Xilolhttp://es.wikipedia.org/wiki/Xilolhttp://es.wikipedia.org/wiki/Xilenohttp://es.wikipedia.org/wiki/Xilenohttp://es.wikipedia.org/wiki/%C3%93smosishttp://es.wikipedia.org/wiki/Biopsiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Necropsiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Formaldehidohttp://es.wikipedia.org/wiki/Glutaraldeh%C3%ADdohttp://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADnahttp://es.wikipedia.org/wiki/Osmiohttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADpidohttp://es.wikipedia.org/wiki/Cortes_histol%C3%B3gicoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Parafinahttp://es.wikipedia.org/wiki/Xilolhttp://es.wikipedia.org/wiki/Xilenohttp://es.wikipedia.org/wiki/%C3%93smosis


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Microtom!a

Se realizan cortes )istolóicos mu# delados se,n lo requerido o la costumbre del laboratorio donde se

realice la t!cnica. %os cortes van desde 6/* micras )asta 4 u 16 micras. %os cortes se ec)an al bao de

flotación # se JpescanJ con un portaobjetos/ se marcan con la fec)a/ el tipo de tejido # la tinción con que se

van a procesar. El ánulo de corte entre el cuc)illo del microtomo # el bloque )a de estar entre 16K # 1*K. Una

vez realizado el corte se da un bao de aua destilada/ para que la parafina se estire. Un buen corte

)istolóico debe tener un rosor aproimado de 3-* micras para que sea fácilmente atravesado por la luz.

"inción

@a# muc)os tipos de tinciones para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras o sustancias.

%a tincion más usada o tambi!n llamada 7de rutina7 es la de )ematoilina # eosina &@LE'. Se usa un colorante

llamado )ematoilina que tie las sustacias ácidas o que las contenan/ como el n,cleo que contiene ácido

desoirribon,cleico & H' %a eosina amarillenta tie las estructuras básicas como el citoplasma # demás

oránulos eosinof"licos de la c!lula.

>tra tinción mu# usada es la de apanicolau Usa colorantes comoD

>(+

E*6

@ematoilina de @arris o Gásica se,n el caso

Esta tinción es mu# usada para teir ecreciones corporales como saliva/ orina/ etc. &%a sanre H> es una

ecreción sino un fluido corporal.'

?omo se mencionó anteriormente )a# muc)as tinciones >tros ejemplos sonD

9asson

S?@=


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Pojo ?ono

Observación

?omo se menciono al principio alunos autores no consideran la observación como un paso de la t!cnica

)istolóica sino el objetivo final de la misma. ?omo se puede deducir/ se observa la laminilla al microscopio #

se busca lo que se necesite ver para llear a un dianostico.

%a t!cnica )istolóica es mu# empleada en laboratorios # )ospitales. ermite )acer dianósticos de distintas

enfermedades/ como para saber si un tumor es malino o beninno/ etc.

%asos a seguir para observar una preparación al microscopio óptico

1. ara comenzar/ se coloca en objetivo de menor poder de aumento en posición de trabajo.

Gajamos la platina )asta el tope inferior/ todo lo que se pueda. Este primer paso podemos saltarlo si

)emos dejado el microscopio/ como veremos al final/ uardado de la forma más correcta/ es decir/ si lo

dejamos uardado en estas condiciones.

2. asamos a colocar la preparación sobre la platina de forma que la muestra quede centrada en el

orificio por el que pasará la luz. El portaobjetos debe quedar firmemente sujeto por las pinzas metálicas

que en la platina.

3. )ora #a podemos comenzar con la observación. Se empieza con el objetivo de menor poder de

aumento que )emos puesto en posición en el primer paso. Este normalmente es el de $. odemos

pasar directamente al objetivo de 16 en caso de preparaciones de bacterias o c!lulas de tamao

similar. asamos a realizar el enfoque.

$. Enfoque de la preparación al microscopioD

1. %o primero es acercar la preparación lo máimo posible a la lente del objetivo. araello utilizamos el tornillo macrom!trico mirando desde el eterior/ no mirando a trav!s del ocular.

Si lo )acemos a trav!s del ocular corremos el rieso de que acerquemos demasiado/ incluso que

forcemos el objetivo contra la preparación pudiendo daar tanto el objetivo como la muestra.

2. )ora ponemos los ojos sobre el ocular # mirando a trav!s de el procedemos a

realizar el enfoque rueso. 9oviendo el tornillo macrom!trico lentamente vamos separando la

preparación del objetivo. %leará un momento en que veamos la muestra de forma más o menos

n"tidaB en este momento dejamos de mover el macrom!trico # pasamos a mover el tornillo

microm!trico para ajustar de forma más precisa el enfoque &enfoque fino'.

*. 8ras enfocar la muestra utilizando un objetivo de pocos aumentos/ pasamos al siuiente objetivo

de ma#or aumento. %a imaen puede desenfocarse un poco # tendremos que ajustar el enfoque con eltornillo microm!trico. En alunas ocasiones puede ocurrir que al pasar a un objetivo de ma#or aumento

se pierda por completo la imaenB en este caso será mejor pasar de nuevo al objetivo anterior # volver a

realizar el enfoque. s" vamos pasando a objetivos de ma#ores aumentos. más aumentos/ el objetivo

enfoca de forma más cercana a la preparación. or ello )a# que tener cuidado de que el objetivo no

toque la muestra/ pues se puede estropear tanto la lente del objetivo como la propia preparación.

8ambi!n puede ocurrir que no se estropee pero que se manc)e de aceite de inmersión si se está


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observando una preparación que #a se )ab"a observado con el objetivo de inmersión. En este ,ltimo

caso )abrá que limpiar la lente del objetivo de forma adecuada.

+. )ómo usar el ob(etivo de inmersiónD El objetivo de inmersión del microscopio óptico se

sumere en un aceite/ llamado aceite de inmersión &com,nmente aceite de cedro'. ara utilizar el

objetivo de inmersión )a# que seuir estos pasosD

1. Gajamos totalmente la platina.

2. Subimos el condensador todo lo que podamos para que se visualice de forma clara #

n"tida el c"rculo que se ilumina en la muestra. En este c"rculo será dónde pondremos una ota del

aceite de inmersión.

3. (iramos el revólver dónde van los distintos objetivos del microscopio )asta que quede

en una posición media entre el objetivo del inmersión # el anterior. s" nos queda el espacio libre

para colocar el aceite sin nin,n obstáculo.

$. onemos una ota de aceite de inmersión en el c"rculo de luz que se debe visualizar

n"tidamente en la preparación. Una ota es una ota/ ni dos ni tres. @a# que poner la cantidad

m"nima que podamos.

*. (iramos el revólver para colocar el objetivo de inmersión en posición de trabajo.

+. 9irando desde fuera del microscopio/ no a trav!s del ocular/ acercamos la platina al

objetivo )asta que la lente frontal del objetivo entre en contacto con el aceite de inmersión. Este

acercamiento )a# que realizarlo de forma lenta. En cuento el aceite # la lente entren en contacto/

paramos.

0. asamos a mirar a trav!s del ocular # enfocamos con el tornillo microm!trico. @a# que

realizar el enfoque con cuidado/ la distancia entre la preparación # el objetivo es realmente cortaQQQ

4. 8ras poner el aceite de inmersión sobre la preparación/ )a# que volver a realizar el

enfoque desde el principio si queremos volver a mirar con un objetivo diferente al objetivo de

inmersión. e lo contrario se corre el rieso de manc)ar la lente de los objetivos.

5. ?uándo terminemos de observar la preparación # queramos retirarla/ primero bajamos

la platina # lueo iramos el revólver para dejar el objetivo de menor aumento en posición de

trabajo. )ora #a podemos retirar la preparación con menor rieso de daar al,n objetivo # de

forma más cómoda.

16. or ,lt imo/ antes de uardar el microscopio/ l impiamos el objetivo de inmersión # los

oculares con papel especial que no ralle las lentes # que absorba el aceite.

)olorantes +istológicos más comunes

%os diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las c!lulas o tejidos/ # estas

propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar partes o áreas espec"ficas. lunos de los

colorantes biolóicos más comunes se listan más abajo. menos que se indique lo contrario la ma#or"a de

estos colorantes se utilizan con c!lulas # tejidos fijados. %as tinciones vitales &que pueden ser utilizadas con

oranismos vivos' se encuentran destacadas.


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,zul brillante de )oomassie

?oomassie blue &tambi!n conocido como azul brillante' es un colorante que tie en forma no espec"fica a

todas las prote"nas con un fuerte color azul. Se utiliza frecuentemente para teir las corridas de prote"nas en

las electroforesis en el.

,zul de metileno

zul de metileno se utiliza para teir c!lulas animales/ para )acer más visibles sus n,cleos. Es tambi!n

utilizado para teir los etendidos de sanre para ser utilizados en citolo"a # como colorante vital en el

recuento de reticulocitos.

-,zul ilo

El Hile blue &o Hile blue '/ es decir azul Nilo/ tie a los n,cleos de color azul. 8ambi!n puede ser utilizado

para teir c!lulas vivas.

!ismarc/ bro0n

Gismarc; bro:n/ Marrón Bismarck / &tambi!n conocido como Bismarck brown Y o Manchester brown' le

imparte un color amarillo a lasmucinas ácidas. Se puede utilizar con c!lulas vivas.

Gromuro de etidio

El bromuro de etidio &GE' se intercala en el H # le otora un color rojo naranja fluorescente. pesar de que

no es capaz de teir c!lulas vivas #a que no atraviesa las membranas intactas/ puede ser utilizado para

identificar c!lulas que se encuentran en las etapas finales de la apoptosis/ #a que tales c!lulas poseen unas

membranas muc)o más permeables. or el mismo motivo/ el bromuro de etidio es utilizado como un

marcador de apoptosis en poblaciones celulares # para localizar las bandas de H en una corrida

enelectroforesis en el. Este colorante puede ser utilizado en combinación con naranja de acridina &H' en el

conteo de c!lulas viables. Esta tinción combinada GEFH le otora a las c!lulas vivas un color verde

fluorescente mientras que las c!lulas apoptóticas aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja.

)armín

El carm"n es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio para teir

licóeno/ mientras que las sales de alumbre-carm"n son colorantes que se ad)ieren al n,cleo. %as tinciones

con carm"n requieren del uso de un mordiente/ que usualmente es aluminio o alumbre.

)ristal violeta

El cristal violeta/ al ser combinado con un mordiente adecuado/ tie las paredes celulares de color p,rpura. El

cristal violeta es un componente importante en la coloración de (ram.

*,%

El = es un colorante nuclear &tie el n,cleo' fluorescente/ se ecita con luz ultravioleta para producir una

fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al H. El = se une a las reiones de alta repetición

R8 en los cromosomas. demás no es visible cuando se utiliza con un microscopio de transmisión corriente.

uede ser utilizado en c!lulas vivas o fijadas. %a t!cnica de tinción con = es especialmente adecuada para

el recuento celular.+

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2emato3ilina 8ipo Gásica F cidof"lica

?aracter"sticasD 8ie n,cleos/ ácidos nucleicos # estructuras basof"licas &mitocondrias # ribosomas' en azul.

UsoD 8inción )istolóica eneral

Eosina

%a eosina se utiliza más frecuentemente como contracoloración de la )ematoilina/ impartiendo un color que

va del rosado al rojo al material citoplasmático/ membrana celular / # alunas estructuras etracelulares.

demás imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. %a eosina puede ser utilizada tambi!n en alunas

variantes de la coloración de (ram/ # en muc)os otros protocolos de tinción. e )ec)o eisten dos

compuestos mu# estrec)amente relacionados &aunque no iuales' conocidos como eosina. El más

frecuentemente utilizado es la eosina C &tambi!n conocida como eosina amarillenta' #a que posee una

tonalidad amarillenta mu# suave. El otro compuesto conocido como eosina es la eosina G/ tambi!n conocida

como eosina azulada o rojo imperial/ la cual posee una suave tonalidad azul. %os dos colorantes son

intercambiables/ # el la utilización de uno u otro es más una cuestión de preferencia # tradición.

colorantes #cidos: como por ejemplo la eosina/ colorante carado en forma neativa/ se une a

componentes celulares carados positivamente. Estos componentes carados positivamente se denominan

acidófilos/ porque tienen afinidad por los colorantes ácidos. or ejemplo/ estos colorantes se unen a

rupos aminos de las prote"nas. Estas prote"nas pueden pertenecer al citoesqueleto de la c!lula o )allarse en

la matriz etracelular. ebido al elevado contenido de prote"nas del citoplasma la eosina es un ecelente

colorante citoplasmático. %a eosina se une tambi!n a las membranas plasmáticas/ sin embaro/ se desconoce

la naturaleza qu"mica de esta unión. %as c!lulas que presentan un ran desarrollo de membranas &muc)as

mitocondrias/ muc)o ret"culo endoplasmático liso/ etc.' son sumamente acidófilas/ o sea/ se tien

intensamente con la eosina.

colorantes b#sicosD como por ejemplo el azul de metileno/ colorante carado positivamente/ se une a

componentes celulares carados neativamente. Estos componentes carados neativamente se denominan

basófilos/ porque tienen afinidad por los colorantes básicos. or ejemplo/ estos colorantes se unen al n,cleo #

ciertas reiones del citoplasma.

?omo caso particular/ la )ematoilina no tiene cara/ para teir un tejido se la une a un mordiente que junto a

la )ematoilina forman una laca. %a laca es básica # por lo tanto se une a caras neativas de la c!lula o

matriz etracelular

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Parte Mecánica Del Microscopio

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