Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

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Publicación trimestral. Año 5, Número 1 Enero - Marzo 2015 Editor: Dr. Sergio Francisco Camacho Gutiérrez Urólogo Pediatra Editores Asociados: Dra. María Lucía Pérez Ricárdez Infectóloga Pediatra Dr. Froylán Hernández Lara González Nefrólogo Pediatra Tinción de Gram. Importancia Fundamento Técnica Aplicaciones en Microbiología Práctica clínica Espacio Bioético PEDIATRIKA Es una publicación trimestral. Toda correspondencia debe dirigirse a: Dr. Sergio Camacho, Calle 29 A Sur # 3302, colonia el Vergel, C. P. 72400, Puebla, Puebla, México Teléfono: (222) 2 42 28 14 Página: www.pediatrika.com www.urologo-pediatra.com.mx Blog: www.pediatrika2010.blogspot.com correo: [email protected] Tinción de Gram. Dr. Sergio Francisco Camacho Gutiérrez Urólogo Pediatra Introducción: Iniciamos este 5º año de edición del boletín, la permanencia de este medio de comunicación ha sido posible por aquellos que desean compartir. Para este número invité a un selecto grupo de profesionales quienes compartirán con nosotros todo lo relacionado con la Tinción de Gram. Método cuya utilidad sigue estando vigente y que fue descrito por el Dr. Gram en el siglo 19. La carrera es larga, el conocimiento infinito. Panel de expertos: NAGC: M.D.E. Narmí Adelaída Gutiérrez Cázares. Química farmacobióloga. [email protected] RCRG: D. en C. Rosa del Carmen Rocha Gracia. Microbióloga. [email protected] PLZ: D. en C. Patricia Lozano Zarain. Microbióloga. [email protected] GCC: M.C. Gerardo Cortés Cortés. Microbiólogo. [email protected] ZGC: M.C. Zita Gutiérrez Cázarez. Microbióloga. Hospital para el Niño Poblano. [email protected] GAPF: Q.F.B. Gustavo Armando Parada Flores. Hospital para el Niño Poblano. [email protected] MLPR: Dra. María Lucía Pérez Ricárdez. Infectóloga Pediatra. Hospital para el niño Poblano. lucia2857@hotmailcom CNC: Dra. Cruz Netza Cardoso. Maestría y Doctorado en Bioética UNAM. Trabaja en la ciudad de Puebla. Editora de la revista Bios & Ethos. [email protected] ISSN 2007-4247 Pediatrika

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PEDIATRIAMICROBIOLOGÍATINCIÓN DE GRAMBIOÉTICAINFECTOLOGÍABOLETÍN INTERNET

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Page 1: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

Publicación trimestral.

Año 5, Número 1 Enero - Marzo 2015

Editor: Dr. Sergio Francisco Camacho Gutiérrez Urólogo Pediatra Editores Asociados: Dra. María Lucía Pérez Ricárdez Infectóloga Pediatra Dr. Froylán Hernández Lara González Nefrólogo Pediatra

Tinción de Gram. Importancia Fundamento Técnica Aplicaciones en

Microbiología Práctica clínica

Espacio Bioético

PEDIATRIKA

Es una publicación trimestral. Toda correspondencia debe dirigirse a: Dr. Sergio Camacho, Calle 29 A Sur # 3302, colonia el Vergel, C. P. 72400, Puebla, Puebla, México

Teléfono: (222) 2 42 28 14 Página: www.pediatrika.com www.urologo-pediatra.com.mx Blog: www.pediatrika2010.blogspot.com

correo: [email protected]

Tinción de Gram.

Dr. Sergio Francisco Camacho Gutiérrez Urólogo Pediatra

Introducción:

Iniciamos este 5º año de edición del boletín, la

permanencia de este medio de comunicación ha sido

posible por aquellos que desean compartir.

Para este número invité a un selecto grupo de

profesionales quienes compartirán con nosotros todo

lo relacionado con la Tinción de Gram.

Método cuya utilidad sigue estando vigente y que

fue descrito por el Dr. Gram en el siglo 19.

La carrera es larga, el conocimiento infinito.

Panel de expertos:

NAGC: M.D.E. Narmí Adelaída Gutiérrez Cázares.

Química farmacobióloga. [email protected]

RCRG: D. en C. Rosa del Carmen Rocha Gracia.

Microbióloga. [email protected]

PLZ: D. en C. Patricia Lozano Zarain. Microbióloga.

[email protected]

GCC: M.C. Gerardo Cortés Cortés. Microbiólogo.

[email protected]

ZGC: M.C. Zita Gutiérrez Cázarez. Microbióloga.

Hospital para el Niño Poblano. [email protected]

GAPF: Q.F.B. Gustavo Armando Parada Flores. Hospital

para el Niño Poblano. [email protected]

MLPR: Dra. María Lucía Pérez Ricárdez. Infectóloga

Pediatra. Hospital para el niño Poblano.

lucia2857@hotmailcom

CNC: Dra. Cruz Netza Cardoso. Maestría y Doctorado en

Bioética UNAM. Trabaja en la ciudad de Puebla.

Editora de la revista Bios & Ethos.

[email protected]

ISSN 2007-4247

Pediatrika

Page 2: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

Fig. 1. Hans Christian Joaquim Gram (1853-1938).

Dr. Camacho: Gracias por compartir con

nosotros, nos puede comentar acerca de

algunos aspectos históricos?

IMPORTANCIA DE LA TINCIÓN DE

GRAM EN EL DIAGNÓSTICO

MICROBIOLÓGICO DE

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

NAGC: M.D.E. Narmí Adelaida Gutiérrez

Cázares. Química Farmacobióloga, Profesora y

Maestra en desarrollo educativo. Bachillerato

Gral. Oficial Prof. “Fausto Félix Aguilar Quiroz”

Clave: 21EBHO148R .

HISTORIA. GRAM, Hans Christian Joachim

(1853-1938), (figura 1). Descubrió, en Berlín en

1884, el método para teñir las bacterias que

lleva su nombre y que se usa ampliamente para

clasificarlas. Mientras analizaba los tejidos de

pacientes fallecidos por neumonía descubrió

bacterias que mantenían al observarlas al

microscopio la coloración (violeta) y otras no,

realizó la tinción con violeta de genciana,

después fijó con lugol, luego lavo con etanol.

Más tarde Carl Weigert, agrego safranina

después del lavado con etanol. De esta manera

las bacterias se observaban teñidas de rojo, y

fueron llamadas Gram negativas, frente a las

que sí se teñían de violeta que eran las Gram

positivas (figura 2). GRAM, nació en

Copenhague en 1853, su padre fue Frederik

Terkel Julius Gram, abogado y profesor; su

madre fue Louise Cristiane Roulund. Recibió el

título de “Bachiller” de la Escuela

Metropolitana de Copenhague en 1871, era

ayudante del profesor de Botánica y Zoología,

se gradúo en Medicina en 1878. Viajo a Europa

(Estrasburgo, Marburgo, Berlín) donde estudio

Farmacología y Bacteriología entre 1878 y

1885.

Durante varios años ejerció como interno en el

Hospital de Copenhague, después como médico

residente, se habilitó y estuvo como ayudante

en farmacología entre 1886 y 1889. Fue

2

profesor a partir de 1891 hasta 1900, en 1892 es

nombrado Jefe de Medicina Interna en el

Hospital Kongelige Frederiks, puesto que

mantuvo hasta su jubilación en 1923 GRAM fue

un gran clínico que murió en Copenhague el 14

de noviembre de 1938.

Bibliografía

1. www.bookrags.com/biography/hans-christian-joachin-

gram-wob.

2. www.iqb.es/historiamedicina/personas/gram.htm.

A B

Fig. 2. Tinción de Gram de cultivos bacterianos puros y muestras clínicas de pacientes

pediátricos. A. Cepa pura de Staphylococcus aureus (Cocos Gran Positivos, color azul-negro). B.

Cepa pura de Escherichia coli (Bacilos Gram Negativos, color rojo). C. Cocos Gram Positivos, de

una Secreción de Herida Quirúrgica. D. Bacilos Gram Negativos de un Líquido de Diálisis

Peritoneal.

C D

Page 3: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

Dr. Camacho: ¿Pueden explicarnos el

fundamento de este proceso?

RCRG, PLZ, GCC: D. en C. Rosa del Carmen

Rocha Gracia. Profesor Investigador, Posgrado

en Microbiología y Laboratorio de

Enfermedades Hospitalarias y de la

Comunidad.

D. en C. Patricia Lozano Zarain. Profesor

Investigador, Posgrado en Microbiología y

Laboratorio de Enfermedades Hospitalarias y

de la Comunidad.

M. C. Gerardo Cortés Cortés. Posgrado en

Microbiología. Centro de Investigaciones de

Ciencias Microbiológicas del Instituto de

Ciencias. Benemérita Universidad Autónoma

de Puebla.

FUNDAMENTO. Podemos definir al término

tinción como el proceso mediante el cual las

moléculas de un colorante se adsorben a una

superficie. El uso de colorantes permite

cambiar el color de los microorganismos y

poder realizar su observación en el

microscopio, dado que las bacterias son casi

incoloras y no pueden observarse claramente

sin algún tratamiento previo.

3

La tinción de Gram es una tinción diferencial,

ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las

bacterias en dos grandes grupos: bacterias

Gram negativas y bacterias Gram positivas. El

principio de la tinción de Gram está basado en

las características de la pared celular de las

bacterias, la cual le confiere propiedades

determinantes a cada microorganismo. La

pared celular de las bacterias Gram negativas

está constituida por una capa fina de

péptidoglicano y una membrana celular

externa, mientras que las bacterias Gram

positivas poseen una pared celular gruesa

constituida por péptidoglicano, pero no

cuentan con membrana celular externa; así

pues, la composición química y el contenido de

péptidoglicano en la pared celular de las

bacterias Gram negativas y Gram positivas

explica y determina las características

tintoriales (Figura 3). La pared de las bacterias

Gram positivas es gruesa y consiste en varias

capas interconectadas de péptidoglicano así

como de ácidos teicoicos; generalmente, 80%-

90% de la pared de la célula Gram positiva es

péptidoglicano. La pared de las bacterias Gram

negativas, por otro lado, contiene una capa

mucho más delgada de péptidoglicano, un

espacio periplásmico y una membrana externa

compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos y

lipoproteínas. Sólo del 10%-20% de la pared de

la célula Gram-negativa es péptidoglicano.

La tinción de Gram consiste en colocar como

colorante primario al cristal violeta, que tiene

afinidad por el péptidoglicano de la pared

bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol,

que sirve como mordiente e impide la salida del

cristal violeta por la formación de un complejo

cristal violeta-yodo que satura los espacios del

péptidoglicano de la pared bacteriana. En

seguida, se coloca una mezcla de alcohol-

acetona, que deshidrata la pared bacteriana y

cierra los poros de la misma y también

destruye la membrana externa de las bacterias

Gram negativas debido a que ésta es soluble en

b) Gramnegativo

a) Grampositivo

Peptidoglucano

Proteína

Peptidoglucano

Membrana Externa

Pared Celular

Membrana Plasmática

Lipopolisacárido

Gel Periplásmico

Membrana Plasmática

Pared Celular

Proteína

Pared Celular Grampositiva

Pared Celular Gramnegativa

b) Gramnegativo

a) Grampositivo

Peptidoglucano

Proteína

Peptidoglucano

Membrana Externa

Pared Celular

Membrana Plasmática

Lipopolisacárido

Gel Periplásmico

Membrana Plasmática

Pared Celular

Proteína

Pared Celular Grampositiva

Pared Celular Gramnegativa

Figura 3. Diferencias estructurales entre bacterias Gram positivas y Gram

negativas. Bacterias teñidas con la tinción de Gram: bacilos Gram

positivos (morados) y bacilos Gram negativos (rojos).

Page 4: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

solventes orgánicos, como la mezcla de alcohol-

acetona.

Las bacterias Gram positivas, al contener una

gran cantidad de péptidoglicano, retienen con

mayor fuerza este complejo, mientras que las

Gram negativas no lo pueden retener por tener

menos cantidad de péptidoglicano. Por último,

se coloca safranina, la cual funciona como un

colorante secundario o de contratinción y sirve

para teñir las bacterias que no pudieron retener

el complejo cristal violeta-yodo. Así las

bacterias Gram positivas se observan de color

azul obscuro a morado, mientras que las Gram

negativas se observan de color rosa a rojo. Hay

bacterias de un mismo género que pueden

observarse en la misma muestra como Gram

positivas y como Gram negativas, a este evento

se le llama tinción Gram variable, que es

secundaria a la alteración de nutrientes,

temperatura, pH o concentración de

electrolitos. Pero no todas las bacterias se

pueden teñir por este método ya que carecen

de pared celular (micoplasmas) o la pared tiene

una composición química diferente (como las

micobacterias, que cuentan con una gran

cantidad de ácidos micólicos); por lo que se

usan otras técnicas especiales como la tinción

de Wright, que utiliza eosina y azul de metileno

para teñir compuestos ácidos o básicos.

Bibliografía

1. López-Jácome LE, Hernández-Durán M, Colín-Castro CA,

Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. 2014.

Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología.

Investigación en discapacidad, 3, 10-18.

2. Bartholomew, B. 2014. Random access gram stain

automation: a review of current approaches. Lab

management, 30–32.

Dr. Camacho: ¿Qué hay acerca de la técnica?

ZGC: M.C. Zita Gutiérrez Cázarez.

Microbióloga. Hospital para el Niño Poblano.

Q.F.B. Gustavo Armando Parada Flores. Centro

Universitario Interamericano Plantel Golfo

Centro. Hospital para el Niño Poblano.

4

TÉCNICA

1) Realice un frotis fino a partir de la

muestra biológica en estudio, o bien de

un cultivo puro colocando en un porta-

objetos, una colonia en una gota de

solución salina isotónica estéril y déjelo

secar al aire. Fije el material al

portaobjetos pasándolo tres o cuatro

veces a través de la flama de un mechero

de Bunsen, cuidando que el material no

se queme.

2) Coloque el frotis en un soporte para

tinción y cubra la superficie con el

colorante cristal violeta en solución,

colorante primario, durante un minuto.

Posteriormente lave con agua corriente

de la llave.

3) Cubra el frotis con lugol durante un

minuto y posteriormente lave

nuevamente con agua corriente de la

llave.

4) Sujete el frotis entre el pulgar y el dedo

índice e impregne la superficie con unas

gotas de alcohol-acetona (decolorante),

hasta que el lavado deje de tener color

violeta, (aproximadamente 10 segundos

o menos).

5) Lave con agua corriente de la llave y

coloque el frotis nuevamente en el

soporte para tinción. Cubra la superficie

con el colorante secundario safranina

durante 30 segundos. Lave con agua

corriente de la llave. Coloque el frotis en

posición vertical, dejar secar al aire.

Observe la preparación teñida bajo el

objetivo 100 x con aceite de inmersión

de un microscopio óptico. Las bacterias

Gram positivas se tiñen de azul obscuro;

las Gram negativas de color rojo (figura

6) Coloque el frotis en posición vertical,

dejar secar al aire. Observe la

preparación teñida bajo el objetivo 100 x

con aceite de inmersión de un

microscopio óptico. Las bacterias Gram

Page 5: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

A B

Fig. 4. Tinción de Gram de cultivos puros bacterianos. A. Cepa pura de Staphylococcus

aureus (Cocos Gran Positivos agrupados). B. Cepa pura de Streptococcus spp. (Cocos

Gram Positivos en cadena). C. Streptococcus pneumoniae (Diplococos Gram Positivos

Lanceolados). D. Clostridium perfringens (Bacilos Gram Positivos grandes). E.

Corynebacterium amycolatum (Bacilos Gram Positivos en forma de letras chinas. F.

Campylobacter jejuni (Bacilos Gram Negativos en forma de alas de gaviota). G.

Escherichia coli (Bacilos Gram Negativos).

C

D

G

F E

positivas se tiñen de azul obscuro; las

Gram negativas de color rojo (figura 2).

APLICACIONES EN MICROBIOLOGÍA.

En la gran mayoría de los estudios

Bacteriológico el primer paso para realizar el

diagnóstico de una enfermedad infecciosa es el

Examen Microscópico directo de la

muestra biológica, con ello se proporciona

al personal clínico un rápido diagnóstico

presuntivo, además guía al Microbiólogo en la

selección de los medios de cultivo necesarios

para el aislamiento del agente. La tinción de

Gram es una herramienta importante en este

paso, nos ayuda a observar la morfología y

disposición microscópica en los preparados de

las muestras clínicas o cultivos y clasifica a las

bacterias en Gram positivas y Gram negativas.

Si en la tinción observamos Cocos Gram

positivos (CGP) dispuestos en grupos sugieren

Staphylococcus; la disposición en cadena

indica Streptococcus. Los diplococos Gram

Positivos (DCGP), con forma de lanceta son

característicos de Streptococcus pneumoniae.

Los diplococos Gram negativos (DCGN)

arriñonados son característicos de las especies

de Neisseria. Los bacilos grandes Gram

positivos denotan especies de Bacillus o

Clostridium; los bacilos Gram positivos más

pequeños (BGP) sugieren especies de Listeria,

si estos bacilos se observan en disposición

similar a las “letras chinas” sugieren alguna de

las corinebacterias. Los bacilos Gram negativos

(BGN) curvos en muestras de heces diarreicas

indican especies de Vibrio, en forma de alas de

gaviota sugieren especies de Campylobacter.

Los BGN rectos sugieren Enterobacterias o

bacilos no fermentadores (ver figura 4).

Todas estas morfologías descritas nos ayudan a

orientar diagnósticos presuntivos, cuando se

observan en los frotes directos de las muestras

clínicas, conjuntamente con el sitio anatómico

de procedencia de la muestra clínica analizada.

Mencionaremos algunos ejemplos, si la

muestra clínica es una secreción de lesiones

cutáneas de un paciente con celulitis y se

5

observan CGP en cadenas sospechamos de

Streptococcus pyogenes, si los CGP se

observan en racimos, tétradas o en pares

entonces nos sugiere la presencia de

Staphylococcus aureus. Si el paciente presenta

una mionecrosis y observamos en la tinción

de Gram BGP grandes generalmente sin

esporas, nos hace pensar en Clostridium

perfringens. Cuando la muestra clínica es

líquido cefalorraquídeo (LCR) y el paciente

presenta meningitis y observamos en la

tinción de Gram CGP en cadenas sospechamos

de Streptococcus agalactiae, si los CGP

observan como DCGP lanceolados entonces

nos indica la presencia de S. pneumoniae, pero

si los CGP se observan en racimos, tétradas o

en pares entonces nos indica la presencia de un

S. aureus o un Staphylococcus coagalasa

negativo (SCN), si el LCR pertenece a un

paciente con una válvula. Por el contrario si

observamos BGN sospechamos de

Enterobacterias, si los bacilos son pleomórficos

probablemente esté presente alguna especies

de Haemophilus, si las formas bacterianas son

DCGN en forma de riñón seguramente se trata

de una Neisseria meningitidis, pero si

observamos BGP pequeños nos sugiere que

probablemente se trate de una Lysteria

monocytogenes. En el caso de muestras de

líquido articular de pacientes con

diagnóstico de artritis si observamos en la

tinción de Gram CGP en cadenas nos sugiere la

Page 6: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

presencia de S. agalactiae, si los CGP se

observan en racimos, tétradas o en pares

entonces pensamos en un S. aureus, si las

formas bacterianas son DCGN en forma de

riñón sospechamos de Neisseria gonorrhoeae,

si observamos BGN probablemente se trate de

alguna Enterobacteria. Si el paciente presenta

una neumonía y la muestra clínica es un

esputo o un líquido pleural y en el examen

microscópico directo con la tinción de Gram

observamos CGP en racimos, tétradas o en

pares sospechamos de S. aureus, si los cocos se

observan como DCGP lanceolados entonces

sospechamos de S. pneumoniae. Pero si

observamos BGN probablemente se trate de

una Enterobacteria y otros bacilos. En el caso

de los Exudados uretrales de pacientes con

uretritis si observamos en la tinción de Gram

de la muestra directa DCGN en forma de riñón

sospecharemos de N. gonorrhoeae. Bibliografía

1. Akter S, Shamsuzzaman SM, Jahan F. Commnunity acquired

bacterial pneumonia: etiology, laboratory detection and

antibiotic susceptibility pattern. J Pathol 2014; 36(2):97-103.

2. Nagata K, Mino H, Yoshida S. Usefulness and limit of Gram

staining smear examination. Rinsho Byori 2010; 58(5): 490-

497.

3. Winn WC, Allen SD, Janda WM, Koneman EW, Procop GW,

Schreckenberger PC, Woods GI. Koneman diagnóstico

microbiológico Texto y atlas en color. 6ª ed. Buenos Aires:

Panamericana; 2008.

Dr. Camacho: Platíquenos acerca de la

práctica cínica.

MLPR: Dra. María Lucía Pérez Ricárdez.

Infectóloga Pediatra, Hospital para el Niño

Poblano.

APLICACIONES EN LA PRÁCTICA

CLÍNICA. Para muchos médicos Infectólogos

la tinción de Gram es el estudio rápido de

mayor valor que nos puede aportar el

laboratorio clínico para el diagnóstico y

tratamiento de las enfermedades infecciosas en

pediatría, incluso para los expertos está por

encima de las pruebas de identificación por

detección de antígenos. Este estudio tiene 4

funciones importantes que reditúan en el

tratamiento adecuado del paciente con

infección:

6

1.- Documenta ampliamente la calidad de la

muestra tomada por la ausencia o presencia

de: micro-organismos, células propias de los

tejidos subyacentes y células del sistema

inmune.

2.- Alerta al Microbiólogo de la presencia de

micro-organismos habituales o de los que

requieren cultivos especiales para su

crecimiento.

3.- Orienta al Microbiólogo durante el proceso

de recuperación por cultivo de los diferentes

organismos: bacterias y levaduras.

4.- Orienta al médico sobre el agente etiológico

para establecer tratamiento empírico adecuado

y oportuno.

Basados en la 4ª función, consideramos que la

identificación de una bacteria (solo morfología

y color) en algún espécimen del paciente,

determina el antimicrobiano para el inicio de la

terapéutica sin tener que esperar de 48-96

horas para el resultado del cultivo.

Aunque la tinción de Gram es un

procedimiento rápido y aparentemente sencillo

es muy importante que se realice por expertos

ya que la interpretación exacta, como ya lo

mencionamos, nos dará información no solo de

los organismos ahí plasmados sino la

celularidad y características de la muestra

recolectada.

Es factible someter a tinción prácticamente

toda muestra de líquidos corporales y tejidos.

La técnica de Gram en el laboratorio clínico

requiere de 5-10 minutos para la coloración de

la muestra y aproximadamente 20-30 minutos

para la observación microscópica y emitir un

resultado probablemente 1 hora después de

haber recuperado el espécimen a estudiar. La

rapidez de la respuesta etiológica es la que da

el valor médico a esta prueba. Tal vez las

muestras más comúnmente estudiadas por esta

práctica sean el líquido cefalorraquídeo (LCR)

y liquido obtenido de algún absceso, colección

o cavidad corporal, sin embargo, es factible

realizar esta tinción a muestra de orina y heces

Page 7: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

con resultados rápidos e importantes para el

tratamiento de los pacientes.

La tinción de Gram tiene un gran valor en el

estudio cito-químico del LCR ya que nos

permite identificar los agentes bacterianos

involucrados en meningitis, actualmente:

neumococo, entero-bacterias y meningococo y

aunque en la actualidad Hemophilus

influenzae tipo b prácticamente ha

desaparecido como causa de esta infección (por

la vacunación), durante décadas esta tinción

fue el parteaguas en la identificación de este

agente y esto permitía iniciar tratamiento

empírico orientado inmediato. En pacientes

con meningitis bacteriana que no han sido

tratados, la posibilidad de apreciar la bacteria

causal en el LCR es de hasta el 80%, y del 40-

60% de posibilidad cuando ya han recibido

tratamiento antimicrobiano. Es importante

saber que la sensibilidad depende: del número

de organismos presentes y que esta es mayor

en infecciones causadas por Gram positivos

que en las causadas por Gram negativos. Esta

técnica se utiliza aún en la rutina de estudio

cito-químico del LCR.

La tinción de Gram es de gran utilidad cuando

se sospecha de urosepsis, sin embargo es

desconocido o subestimado por muchos

pediatras, un frotis de orina no centrifugada

con identificación de 1 bacteria en un campo a

alto poder (100x), es diagnóstico de infección

urinaria, una bacteria en la mayoría de los

campos representa 100 000 Unidades

Formadoras de Colonias (UFC), este concepto

aplica para cualquier muestra de líquido

corporal.

En caso de diarrea, la tinción de Gram aplicada

a una muestra de heces nos puede permitir

observar formas características de

Campylobacter que podrán ser corroboradas

por otras tinciones. Igualmente en muestra no

diluida de sangre, tomada de catéter venoso, si

son positivas para alguna bacteria o levadura a

través de la tinción de Gram, son indicadoras

de infección asociada al catéter.

7

Las bondades de la tinción de Gram van más

allá de identificar morfológicamente alguna

bacteria o levadura, también nos permite

apreciar si existe células de diferente estirpe y

la cantidad, por ejemplo la presencia de células

escamosas en una muestra de expectoración

nos habla de contaminación con saliva y células

de cavidad oral, la muestra de expectoración es

muy útil en el diagnóstico etiológico de

neumonía adquirida en la comunidad, en caso

de que la muestra esté contaminada pierde su

utilidad.

Otro tipo de células que observamos en la

tinción de Gram es la presencia de polimorfo-

nucleares o neutrófilos, monocitos-macrófagos

y linfocitos, todos ellos relacionados a la

inflamación que genera la infección. Las

muestras con gran cantidad de bacterias pero

sin células inflamatorias se traducen como

contaminación del espécimen. La presencia de

bacterias en el citoplasma de macrófagos y

neutrófilos confirma la presencia de

enfermedad. Bibliografía

1. Aberg J, Goldman M. Gram stain in Infectious Diseases Handbook, Lexicomp. Hudson Ohio 2012. (Edición electrónica únicamente).

2. Murray PR, Witebsky FG. The Clinician and the Microbiology Laboratory. Clinical Microbiology in Principles and Practice of Infectious Diseases, Mandell GL, Benett JE and Dolin R. Churchill Livingstone Elsevier. 7th Edition. 2010. 244.

3. López-Jácome LE, Hernández-Duran M, Colín-Castro CA, Ortega-Peña S, Cerón-González Guillermo, Franco-Cendejas R. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad; Vol 3 No 1 Enero-Marzo 2014. 10-18.

Page 8: Pediatrika Ene - Mar 2015/ TINCION DE GRAM

COMENTARIO DEL EDITOR:

El Dr. Gram escribió: He publicado un

método, aunque estoy consciente de que

todavía es defectuoso e imperfecto; pero

deseo que en manos de otros

investigadores pueda resultar de

utilidad. En 1884 publicó en el Journal

Fortschritte der Medizin su método de

coloración bacteriana.

Fue miembro de la Comisión Real de

Salud en 1893, miembro honorario del

Colegio de Médicos Sueco en 1905,

perteneció a la Federación de Médicos

Internos de Alemania en 1907 y de la

Federación Danesa de Medicina Interna

en 1932.

Detrás de este método de tinción de

Gram existen seguramente días de

investigación, errores y aciertos para

llegar a establecer los pasos a seguir en

este procedimiento.

No hay duda que la generación de este

conocimiento ha beneficiado a nivel

mundial a una cantidad inmensa de

pacientes.

Todas las naciones en las que se invierte

en educación e investigación generan

finalmente conocimiento y este

conocimiento es vendido a través de sus

productos finales y generan riqueza que

genera más investigación y nuevo

conocimiento.

¿Comentarios? [email protected]

8

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ESPACIO BIOÉTICO. Por Dra. Cruz Netza. Cardoso

OBSERVATORIO MEXICANO DE BIOÉTICA (OMEBI)

Los problemas de enseñar bioética

Gracias a la presión que la Comisión Nacional de Bioética, la SEP aceptó que la bioética se implementara como materia obligatoria a nivel de pregrado; actualmente en prácticamente todas las Facultades de Medicina se tiene contemplado un seminario de bioética dentro de los programas académicos. Lo bueno de esta medida es que los futuros médicos ya saben que existe la bioética. Lo malo es que la enseñanza de la bioética está enfrentando varios problemas, el primero es la escasez de especialistas en bioética, lo que conlleva a cubrir dicha enseñanza con profesores que en el mejor de los casos tiene una muy buena voluntad para trasmitir lo mejor posible lo que dicen los libros. El segundo es que algunos de esos improvisados profesores pretenden tener autoridad en la materia con solo haber acumulado ciertas lecturas. Tercero, algunos profesores pretenden imponer su moral a los alumnos ignorantes de que solo están siendo adoctrinados en una visión moral muy particular. Cuarto, no falta el que vea a la bioética solo como un recurso para canalizar inquietudes mesiánicas. Quinto, que la bioética y su mejor virtud acaben siendo banalizados al ser vistos como una materia más que debe aprobarse, con la subsecuente asimilación mecanizada de sus más importantes presupuestos. Al aceptar ser profesor de bioética, en realidad se está aceptando el reto de desarrollar una conciencia, en los futuros médicos, sobre lo que significa ser una persona virtuosa hoy en día; algo que visto en el contexto del deslumbramiento que la ciencia y tecnología ocasionan, puede tornarse en un verdadero cuesta arriba. En esta época de dilución de referentes, ausencia de ídolos y fugacidad en el todo, la virtud puede acabar siendo como algo obsoleto, de utilidad cero que no representa nada a nadie. Y sin embargo, el gigante se niega a morir, la virtud a pesar de todos los pesares sigue siendo un baluarte en la dimensión ética de cualquier persona y de cualquier profesión, podríamos decir que de forma preeminente lo es en la medicina, donde lo humano se manifiesta con la mayor sensibilidad, el nacer, el morir, los dos puntos de mayor impacto en la vida de cualquiera se relacionan con el ámbito médico en una forma por demás simbiótica. Así pues, luchar por el fortalecimiento y desarrollo de médicos virtuosos, aunque parezca una lucha de antemano perdida, una locura de proporciones quijotescas, acaba siendo una batalla que vale la pena pelear, corremos el riego de ganarla.

Hasta la próxima. Que la gentileza de su lectura nos distinga.

PEDIATRIKA, Año 5, número 1, enero – marzo 2015, es una publicación trimestral, editada por Sergio Francisco Camacho Gutiérrez. Calle 29 A Sur # 3302, colonia el Vergel, Puebla, Pue., México, C. P. 72400, teléfono (222) 242 28 14, www.pediatrika.com, www.urologo-pediatra.com.mx, www.pediatrika2010.blogspot.com, [email protected]. Editor responsable: Sergio Francisco Camacho Gutiérrez. Reserva de Derechos al Uso Exclusivo No. 04-2011-060314325000-106; ISSN: 2007-4247; ambos otorgados por el Instituto Nacional del Derecho de Autor. Responsable de la última actualización de este Número, Dra. María Lucía Pérez Ricárdez, calle 29 A Sur # 3302, colonia el Vergel, Puebla, Pue., México, C.P. 72400, fecha de última modificación 18 de diciembre de 2012. Las opiniones expresadas en esta publicación son responsabilidad de los individuos participantes y pueden no reflejar la opinión general del editor y editores asociados del boletín. El boletín puede ser reproducido total o parcialmente con fines académicos citando la fuente. Todos los derechos reservados. Copyright 2015, Pediatrika.