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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

PROFESOR: BQF. Carlos García MSc.

ALUMNA: Mónica Elizabeth Lapo Lapo

CURSO: 5to PARALELO: “A” 10

GRUPO: N° 7

Fecha de elaboración de la práctica: Lunes, 8 de junio del 2015.

Fecha de presentación de la práctica: Lunes, 15 de junio del 2015.

PRÁCTICA N° 2

TÍTULO DE LA PRÁCTICA: INTOXICACIÓN POR FORMALDEHIDO

TOXICO: Formaldehido

ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: Cobayo

VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Vía Intraperitonial

VOLUMEN ADMINISTRADO: 8ml

TIEMPOS:

Inicio de la práctica: 07:45am Hora de administración del toxico: 07:52am Deceso del animal:07:53am (1min) Final de la práctica: 10:30 am

SÍNTOMAS:

Muerte rápida.

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

1. Observar la reacción que presenta el cobayo ante la intoxicación por formaldehido.

2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el

toxico.

3. Conocer mediante pruebas de identificación la presencia de formaldehido.

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MATERIALES SUSTANCIAS

Jeringuilla de 10cc

Campana

Equipo de disección

Bisturí

Vaso de precipitación

Erlenmeyer

Equipo de destilación.

Tubos de ensayo

Pipetas

Agitador

Guantes de látex

Mascarilla

Mandil

Cloruro de fenilhidrazina

Agua destilada

Nitroprusiato de Sodio

formol

Cloruro Férrico

Ácido sulfúrico

Leche

Hidróxido de sodio

Ácido clorhídrico

Ferrocianuro de potasio

Hidróxido de potasio al 12%

Acido cromotropico

Diluyente

EQUIPOS

● Balanza analítica

Campana de gases

Cinta

Tapón de vidrio y de caucho

Mechero de alcohol

Fósforos

Probeta

Espátula

Panema

Pinza para tubos

PROCEDIMIENTO

1. Antes de ingresar al laboratorio debemos tener puestas nuestro equipo de

protección (bata de laboratorio, guantes, gorro, mascarilla y zapatones).

2. Desinfectar el área de trabajo con alcohol de 700 y tener todos los materiales

necesarios para desarrollar la práctica.

3. Una vez dada las indicciones por parte del profesor iniciamos dicha práctica.

4. Administrar 8ml de formaldehido al cobayo por vía intraperitoneal

5. Colocar el cobayo en la panema.

6. Observar las manifestaciones que se presentan y en qué tiempo se da su

deceso.

7. Con la ayuda del bisturí procedemos a realizar la disección al cobayo

8. Colocar las vísceras una vez trituradas (picadas lo más finas posibles) en un

recipiente adecuado (balón volumétrico).

9. Pesar 2 gr de ácido tartárico y diluirlo en 50 ml de Agua destilada

10. Colocar la solución de ácido tartárico sobre la muestra para acidularla

11. Medir 20 ml de NaOH 0.1 N para recoger el Cianuro de sodio de la destilación.

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO

1. Reacción de Schiff:

A una pequeña porción de la muestra, se añade 1ml de permanganato de

potasio al 1% después de mezclar se adiciona unas gotas de ácido sulfúrico

puro, se deja reposar por tres minutos y agregan algunas gotas de solución

saturada de ácido oxálico (hasta que decolore la mezcla); la mezcla adquiere

un color madera que se decolora totalmente luego de agregarle nuevamente

algunas gotas de ácido sulfúrico puro. Finalmente se le añade 1ml de fushina

bisulfatada (Reactivo de Schiff), con lo cual se produce un intenso color violeta

en caso de positivo.

2. Reacción de Rimini

A 5 ml de destilado se agregan 10 gotas de cloruro de fenilhidracina al 4 %, 4

gotas de solución de nitroprusiato de sodio al 2.5% recién preparado y 1ml de

solución de hidróxido de sodio, se produce una coloración azul intensa.

3. Con la Fenilhidracina

En un medio fuertemente acidificado con ácido clorhídrico a una pequeña

cantidad de muestra se agrega un pedacito de cloruro de fenil hidracina, 2-4

gotas de solución de ferricianuro de potasio al 5 – 10% y algunas gotas de

hidróxido de potasio al 12% se obtiene una coloración rojo grosella.

4. Reacción de Marquis

Se toma 1ml de destilado y se agregan 5ml de ácido sulfúrico concentrado, se

agita luego con una solución sulfúrica de morfina (0.2 gr de cloruro de morfina

en 10ml de ácido sulfúrico concentrado), se obtiene enseguida o después de

algún tiempo un color violeta.

5. Con el Ácido Cromotrópico

Con este ácido en un medio fuertemente acidificado con ácido sulfúrico, el

formaldehido produce una coloración roja después de calentarla ligeramente.

6. Reacción de Hehner

Se mezcla una gota de destilado con algunos mililitros de leche, se estratifica

con ácido sulfúrico concentrado al que se le han agregado trazas de cloruro

férrico (5 gotas de cloruro férrico en 500ml de ácido sulfúrico); en caso positivo,

en la zona de contacto se produce un color violeta o azul violeta.

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GRÁFICOS

1. inyección de 8 ml

de toxico al cobayo,

por vía intraperitoneal

2. Colocar el cobayo en

la panema y observar

sus manifestaciones

3. Proceder a realizar

la disección del

cobayo.

4.- Recoger las

vísceras del cobayo. 5.- Triturar las vísceras Y

colocarlas en un balón de

Aforado

6.- Armar el equipo de

destilación.

7.- Se recoge el destilado, para

las reacciones de identificación.

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO

1) REACCION DE RIMINI

Reacción Negativo coloración marrón

8.- Reacción 1: de

rimini (negativo)

9.- Reacción 2: de

fenilhidracina (negativo)

10.- Reacción 3: con el

ácido cromotropico (+) no característico.

11.- Reacción 4: de

Herner (+) no caracteristico

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2) Reacción de la fenilhdracina

Reacción negativo coloración fucsia

3) Reacción con el ácido cromotropico

Reacción positivo no característico coloración café claro

CN Na + acidular con H2SO4 Adicionando la solución madre

4) Reacción de Hehner

Reacción positivo no característico coloración violeta.

H2SO4

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OBSERVACIONES

Se necesitó solo 8ml de Formldehido para producir el deceso del cobayo.

Al administrar Formaldehido por vía intraperitoneal al cobayo este presentó

una muerte rápida.

CONCLUSIONES

Mediante esta práctica realizada podemos concluir que el toxico utilizado es muy

potente debido a que la muerte fue casi instantánea y en el cual se comprobó que si

hubo presencia de Formaldehido en estos medios biológicos en la cual cada una de

las reacciones fueron de vital importancia para llegar a dicha conclusión.

RECOMENDACIONES

Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio.

Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes,

mascarilla.

Utilizar el bisturí adecuado para realizar la disección.

Preparar correctamente las sustancias a la concentración requerida.

CUESTIONARIO

¿Qué es el formaldehído?

El formaldehído es una sustancia química incolora, inflamable y de olor fuerte

que se usa para fabricar materiales y para producir muchos productos del

hogar. Se usa en productos de madera prensada, como tableros de partículas,

madera contrachapada (conocida también como madera terciada, triplay o

plywood) y tableros de fibra; pegamentos y adhesivos; telas de planchado

permanente; revestimientos de productos de papel y ciertos materiales de

aislamiento. Además, el formaldehído se suele utilizar como fungicida,

germicida y desinfectante industrial y como conservante en los depósitos de

cadáveres y laboratorios médicos. El formaldehído también está presente en el

medio ambiente de manera natural. La mayoría de los organismos vivos lo

producen en pequeñas cantidades como parte de los

procesos metabólicos normales.

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¿Cuáles son los efectos en la salud a corto plazo por la exposición al

formaldehído?

Cuando el formaldehído está presente en el aire a niveles que exceden las 0,1

ppm, algunas personas pueden presentar efectos adversos como ojos llorosos;

sensación de ardor en los ojos, en la nariz y la garganta; tos; sibilancias o

respiración con silbidos; náuseas e irritación de la piel. Algunas personas son

muy sensibles al formaldehído, mientras que otras no tienen reacciones al

mismo nivel de exposición.

¿Cómo se puede limitar la exposición al formaldehído en el hogar?

La EPA recomienda el uso de productos de madera prensada de grado exterior

a fin de limitar la exposición al formaldehído en el hogar. Estos productos

emiten menos formaldehído porque contienen resinas de fenol, en lugar de

resinas de urea. (Los productos de madera prensada incluyen madera

contrachapada, paneles, tableros de partículas y tableros de fibra y no son lo

mismo que los productos de madera tratada a presión, que contienen

conservantes químicos y son para uso en exteriores). Antes de comprar

productos de madera prensada, como materiales de construcción, gabinetes,

armarios y muebles, los compradores deben preguntar sobre el contenido de

formaldehído de estos productos. Los niveles de formaldehído en la vivienda

también se pueden reducir al garantizar una ventilación adecuada,

temperaturas moderadas y la reducción de los niveles de humedad con el uso

de aire acondicionado y deshumidificadores.

¿Cómo entra y sale el formaldehído del cuerpo?

El formaldehído puede entrar a su cuerpo al usted respirarlo, ingerirlo o cuando

entra en contacto con su piel. El formaldehído es absorbido rápidamente a

través de la nariz y de la parte superior de las vías respiratorias. El

formaldehído también se absorbe rápidamente cuando se ingiere. En cambio,

solamente cantidades muy pequeñas se absorben a través de la piel.

Una vez dentro del cuerpo, el formaldehído es degradado rápidamente. Casi

todos los tejidos del cuerpo tienen la capacidad para degradar formaldehído.

Generalmente es convertido a una sustancia no tóxica llamada formato, que se

excreta en la orina. El formaldehído también puede ser convertido a dióxido de

carbono, el cual se elimina en el aliento. También puede ser degradado para

que el cuerpo lo use para fabricar moléculas más grandes que necesitan los

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tejidos, o puede ligarse al ácido desoxirribonucleico (ADN) o a proteínas en el

cuerpo. El formaldehído no se almacena en la grasa.

BIBLIOGRAFÍA:

Ferrero, L. (1998). Formaldehído: efectos tóxicos y

recomendaciones. Rev. Soc. Venez. Ciencias Morfol, 4(2), 56-61.

Parra, J. E. D., & Zapata, J. J. D. (1999). El formol su génesis, normas,

aplicaciones e incidencia sobre la salud humana. Medicina UPB, 18(1),

35-45.

Orduz, C. E., & Guerrero, J. Asma ocupacional por

formaldehído. Revista de neumología [Internet]. Encolombia.

com.[Abstract. Consultado Noviembre de 2011]. Disponible en://www.

encolombia. com/medicina/neumologia/neum15303trabajos4. htm.

WEBGRAFÍA:

International Agency for Research on Cancer (June 2004). IARC

Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans Volume 88

(2006): Formaldehyde, 2-Butoxyethanol and 1-tert-Butoxypropan-2-ol.

Retrieved June 10, 2011, from:

http://monographs.iarc.fr/ENG/Monographs/vol88/index.phpNotificación de

salida.

AUTORIA

Bioq. Farm. Carlos Garcia MSc.

FIRMA DE RESPONSABILIDAD

Mónica Elizabeth Lapo Lapo

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GLOSARIO

Ulceración:

Es toda lesión abierta de la piel o membrana mucosa con pérdida de sustancia. Las

úlceras pueden tener origen y localización muy variada. Las más frecuentes son las

que afectan a la pared del estómago o duodeno, llamadas úlceras pépticas.

Polimerización:

Es un proceso químico por el que los reactivos, monómeros(compuestos de bajo peso

molecular) se agrupan químicamente entre sí, dando lugar a una molécula de gran

peso, llamada polímero, o bien una cadena lineal o una macromolécula tridimensional.

Broncodilatadores:

Es una sustancia, generalmente un medicamento, que causa que los bronquios y

bronquiolos de los pulmones se dilaten, provocando una disminución en la resistencia

aérea y permitiendo así el flujo de aire.

Dermatitis:

Es una reacción de la piel consecuencia de la exposición a alérgenos (dermatitis

alérgica de contacto) o irritantes (dermatitis irritante de contacto). La dermatitis foto

tóxica ocurre cuando el alérgeno o irritante es activado por la luz del Sol.

ANEXOS:

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INVESTIGACION

FORMALDEHIDO

El formaldehído está considerado como un factor de riesgo laboral de tipo químico,

cuya presencia puede provocar una enfermedad profesional. Las rutas primarías de la

exposición humana potencial al formaldehído son inhalación, contacto cutáneo e

ingestión. Los efectos comunes de la exposición a este aldehído son varios síntomas

agudos, como vómitos, irritación de los ojos, edema pulmonar. También se puede

presentar irritación de la garganta, vértigo, dolor abdominal, diarrea, daño renal,

aparición de una neumonía secundaría, y en casos extremos colapso cardiovascular y

acidosis metabólica.

Hay suficientes pruebas sobre la carcinogenicidad del formaldehído en animales. Sin

embargo, la Agencia Internacional para la Investigación del cáncer (IARC) limitaba la

evidencia sobre su carcinogenicidad en humanos. El formaldehído puede ser un

“facilitador” para otros agentes oncogénicos.

Debido a su alta reactividad, el formaldehído sufre un gran número de trasformaciones

biológicas importantes, como la hidratación, la reacción con el hidrógeno activo de los

tioles, el cianuro de hidrógeno y el fenol. La toxicidad del formaldehído en la célula se

debe a que reacciona con las proteínas produciendo entrecruzamiento entre las

cadenas peptídicas, o de éstas con los grupos amino del DNA. Esta reacción es

mucho más rápida con los nucleótidos libre o con el DNA desnaturalizado que con el

DNA nativo.

In vitro, el formaldehído induce la formación de enlaces cruzados DNA-proteínas. Este

hecho ha dado lugar a que pueda utilizarse como un biomarcador de la exposición a

formaldehído.

En estudios in vivo se ha descrito que el formaldehído induce roturas de cadena

sencilla en el DNA, transversiones de pares de bases AT a CG. También se ha

detectado la formación de micronúcleos en tejidos expuestos a formaldehído.

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Vías metabólicas de eliminación del formaldehído.

La etapa limitante en la conversión del formaldehído a CO2 es la oxidación del ácido

fórmico a CO2, que es el mayor producto del metabolismo del formaldehído. La

conversión metabólica de formaldehído a ácido fórmico es catalizada en eucariotas

principalmente por la formaldehído deshidrogenasa dependiente de glutatión (FALDH).

También se han descrito otras vías secundarias de metabolismo del formaldehído,

como la vía del tetrahidrofolato, la vía de la catalasa, o mediante el aldehído

deshidrogenasa

Metabolismo del formaldehído por la formaldehído deshidrogenasa dependiente

de glutatión.

La conversión de formaldehído a ácido fórmico es catalizada principalmente por la

acción de la formaldehído deshidrogenasa dependiente de glutatión (FALDH) y la S-

formilglutatión hidrolasa. La reacción espontánea de formaldehído con glutatión (GSH)

da lugar al hemiacetal S-hidroximetilglutatión, que en presencia de NAD+ es oxidado

por la FALDH a S-formilglutatión). El S-formilglutatión es hidrolizado por la S-

formilglutatión hidrolasa a formato y glutatión.

Formaldehído + Glutatión S-hidroximetilglutatión

FALDH

S-hidroximetilglutatión + NAD+ S-formilglutatión + NADH + H+

Dado el alto contenido en GSH de las células animales, vegetales y de los

microorganismos (Meister, 1988), cabe esperar que la mayoría del formaldehído (50-

80%) que se genera en la célula esté unido reversiblemente a GSH para formar S-

hidroximetilglutatión.

Metabolismo del formaldehído vía tetrahidrofolato.

En esta vía, hay conversión de formaldehído a CO2 a partir de la reacción acoplada a

la 10-formiltetrahidrofolato sintasa y la 10-formiltetrahidrofolato deshidrogenasa en el

citosol. Mediante la 10-formiltetrahidrofolato sintasa el formato se compleja con

tetrahidrofolato para dar lugar a 10-formiltetrahidrofolato, pasando a formar parte del

conjunto de compuestos C1, o puede ser oxidado por la 10-formiltetrahidrofolato

deshidrogenasa a CO2.

En términos cuantitativos, sin embargo, la vía dependiente de tetrahidrofolato sólo

tiene un significado mínimo en el metabolismo del formaldehído. En el metabolismo del

formato, por lo contrario, dicha vía es cuantitativamente muy importante.

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En la célula, la mayoría del formaldehído se estima que está en forma de derivado del

glutatión, y solo un 1-3% está unido al tetrahidrofolato en forma de 5,10-metilen

tetrahidrofolato, a pesar de la importancia de este compuesto en varias vías

biosintéticas.

Metabolismo del formaldehído por la catalasa.

Otra vía secundaría para la oxidación del formato es mediante la acción peroxidativa

de la catalasa, localizada en los peroxisomas. Sin embargo, la reacción de la catalasa

es dependiente de la velocidad de generación de H2O2.

En algunos microorganismos, principalmente en levaduras metilotróficas, se ha

descrito la oxidación del formato mediante una formato deshidrogenasa.

Metabolismo del formaldehído por la aldehído deshidrogenasa mitocondrial.

Otra vía secundaría de metabolismo de formaldehído es mediante la aldehído

deshidrogenasa mitocondrial (EC 1.2.1.5). El aldehído deshidrogenasa posee una

amplia especificidad de sustrato. Entre otros sustratos, es capaz de metabolizar el

formaldehído a ácido fórmico según la reacción:

HCHO + NAD (P) + H2O HCOOH + NAD (P)H + H+

En hepatocitos aislados de rata, se ha descrito que la presencia de inhibidores de la

aldehído deshidrogenasa, como la cianamida y el crotonaldehído, reducen la oxidación

de formaldehído a CO2 en un 30-40% aproximadamente. Estos estudios han sido

realizados a altas concentraciones de formaldehído (0,2-1 mM), a las que la aldehído

deshidrogenasa podría jugar un papel importante en su oxidación.

Sin embargo, a concentraciones fisiológicas, no parece que la aldehído

deshidrogenasa pueda contribuir de manera importante en la oxidación del

formaldehído a formato.