Introduccin

Los lpidos son un tipo de biomolcula que se distingue por su solubilidad caracterstica, son insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos no polares, stos se clasifican en dos grupos principales: simples y compuestos. Los lpidos simples ms importantes son el colesterol y los cidos grasos, dentro de los lpidos complejos se pueden mencionar los fosfolpidos y los triglicridos. El colesterol es una grasa presente en todas las clulas del organismo. Se presenta en altas concentraciones en la medula espinal, pncreas y cerbero pero se sintetiza principalmente en el hgado y en el intestino delgado. El colesterol se puede encontrar tambin en una yema de huevo en una cantidad alrededor de 250 mg.En general, los lpidos llevan a cabo tres funciones biolgicas: las molculas de lpidos bajo la forma de bicapas lipdicas son componentes esenciales de las membranas biolgicas, si estos contienen cadenas hidrocarbonadas sirven como depsitos de energa y muchos acontecimientos de sealizacin intracelular e intercelular involucran molculas de lpidos.

Objetivos

Separar los fosfolpidos de la yema de huevo por medio de la cromatografa en capa fina. Determinar la concentracin de colesterol en la yema de huevo por el mtodo de Lieberman-Burchard.

Resultados

Imagen 1. Placas de la cromatografa en capa fina.

Grficas

Absorbencia

Grafica 1. Curva tipo para la concentracin de colesterol

Discusin de resultados

Tabla 1. Reactivos para la identificacin de fosfolpidos.ReactivoFosfolpidos identificados

MolibdatoFosfolpidos en general

BismutoCon colina

NinhidrinaCon grupos amino libres

YodoCon dobles enlaces

A una muestra de yema de huevo se le realiz una cromatografa en capa fina, para identificar con un reactivo especfico distintos tipos de fosfolpidos presentes en la misma, la tabla 1 indica el tipo de fosfolpido revelado por cada uno. Segn las manchas del cromatograma, se esperara segn la literatura que el reactivo de bismuto identificar a la fosfatidil colina y la esfingomielina, el reactivo de ninhidrina identificara al fosfatidil etanol-amina y fosfatidil serina mientras que el yodo revelara a la esfingomielina y triolena por tener las caractersticas estructurales que revelan los reactivos antes mencionados (ver anexo 1).

Se determin la concentracin de colesterol en media yema de huevo usando la reaccin de Lieberman-Burchard, donde el anhdrido actico provoca la condensacin del grupo OH del colesterol y en conjunto con el cido sulfrico, genera un compuesto coloreado verde azulado.Para calcular la concentracin de colesterol en una muestra de 5 L se interpolo la absorbencia de esta muestra en la curva tipo trazada de absorbencia contra diferentes concentraciones de colesterol. La absorbencia de la muestra fue de 0.281, lo que corresponde a una concentracin de colesterol de 0.05 mg (grafica 1) lo que corresponde a 115.99 mg de colesterol en media yema de huevo. Dicho resultado difiere en 7.76% menos que el esperado debido a errores en la preparacin de la solucin de yema de huevo.Conclusiones

Los fosfolpidos separados de la yema de huevo por medio de la cromatografa en capa fina contienen grupos con colina, amino libres y dobles enlaces.Una yema de huevo contiene aproximadamente 240 mg de colesterol.

Bibliografa

1. Campbell M., Farrell S., Bioqumica, cuarta edicin, Editorial Thomson, Mxico, 2004, pg. 221.2. Yaez J., Villar J., Dislipemias, lipoidosis, lipodistrofias y obesidad, Universidad de Sevilla, Espaa, 2002, pgs. 97-103.

Instituto Politcnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas Prctica 8 Separacin de fosfolpidos por cromatografa en capa fina y de determinacin de colesterol en yema de huevo.Bioqumica General Seccin 1.

Anexo 1FosfolipidoEstructura

Fosfatidil serina

Fosfatidil colinaFosfatidilcolina

Fosfatidil etanol-aminaFosfatidil etanol-amina

EsfingomielinaEsfingomielina

IsolecitinaIsolecitina

ColesterolColesterol