UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

Alumno: Miguel Angel Quillay Davila.

Curso: Quinto Paralelo: B

Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc

Grupo N°2

Fecha de Elaboración de la Práctica: martes 13 de junio del 2014

Fecha de Presentación de la Práctica: martes 30 de junio del 2014

PRÁCTICA N° 4

Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO.

Animal de Experimentación: Rata Wistar

Vía de Administración: Vía Parenteral (Intraperitoneal)

Tiempos:

Inicio de la práctica: 07:45am

Hora de administración del toxico al cobayo: 7:48 am

Deceso del animal: 08:20am

Inicio de la destilación: 08:45 am

Final de la práctica: 10:30 am

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

1. Determinar la presencia del toxico presente en una rata mediante pruebas de reconocimiento.

2. Distinguir la sintomatología de la intoxicación con cloroformo de otras sustancias toxicas ya utilizadas.

3. Conocer el grado de intoxicación y el tiempo de latencia en el que el cloroformo intoxica y mata a la rata

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Síntoma:

Vomito Cefalea Vértigo Nauseas

MATERIALES Balanza Bisturí Bureta Campana Cinta plástica Cocineta Cronómetro Equipo de destilación. Equipo de disección Erlenmeyer Espátula Fosforo Gorro Guantes de látex Jeringuilla de 10cc Lámpara de alcohol Mandil Mascarilla Panema Perlas de vidrio Pinzas Pipetas Porta tubo Probeta Soporte universal Tabla de disección Tubos de ensayo Varilla Vasos de precipitación 200 y 500 ml. Zapatones en caso de usar sandalias.

PROCEDIMIENTO

1. Preparamos la solución problema

2. Administramos cloroformo 10ml por vía peritoneal

3. Colocamos el cobayo en la panera

4. Observamos las manifestaciones que se presentan y en qué tiempo el cobayo muere

5. Sacamos el cobayo del panera y lo colocamos en la tabla de disección

6. Sujetamos al animal sus extremidades en la tabla

7. Con la ayuda del bisturí procedemos a abrir la rata.

8. Observar las manifestaciones que se presentan y en qué tiempo muere.

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SUSTANCIAS

Cloroformo Alcohol de 95ª Nitrato de plata Potasa alcohólica Percloruro de hierro Nitrato de plata Beta naftol Solución alcohólica concentrada de potasa Timol Lejía de sosa Piridina Cristal de yodo Clorhidrato de piperacina Benedict

EQUIPOS Balanza analítica

9. Colocando las vísceras afectadas, en un vaso de precipitación, procediendo a picar lo más

fino posible

10. Armamos correctamente el equipo de destilación (método de soxhleth), asegurando que

no existan fugas que conlleven a pérdidas del destilado.

11. Adicionamos a las vísceras acido tartárico (25 ml) y calentamos con la lámpara de

alcohol esto con movimiento circular durante 30 minutos (el destilado fue recibido en

NaOH).

12. Con el destilado procedimos a realizar las reacciones de identificación del cloroformo en

medios biológicos.

13. Una vez terminada la práctica se limpia todo el material y el área utilizada.

REACCIONES DE RECONOCIMIENTO:

1. Ensayo a la llama:

En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95% que contienen un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con una llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.

2. Reacción de Dumas:

Al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos milímetros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio. CHCl3 + 4KOH --- 3ClK + HCO2K + 2H2O. Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos proporciones a una proporción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frío o un precipitado en caliente. A la otra proporción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelven en amoniaco diluido.

3. Reacción de Lustgarten:

Al calentar la muestra con unos miligramos de beta – naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul. Se sustituye el B-naftol por timol el color es amarillo más o menos oscuro; con Resorsinol la coloración es roja – violácea y con la piridina rojo.

4. Reacción de Fujiwara:

En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de legía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agita, ponemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposos; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina. Esta reacción sensible para unos pocos microorganismos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica.

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5. Reacción de Roseboom:

Se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla – rojiza al disolverse al alcaloide

6. Reacción de Benedict:

Si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del tóxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.

GRÁFICOS:

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO.

REACCIÓN A LA LLAMA (llama bordeada de verde)

Reacción Positivo característico llama verde

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1.- Animal de experimentación 2.-Administramos el

4.-Con el bisturí empezamos abrir nuestra rata

5.-Sacamos todas las vísceras y las picamos para colocarlas en

un vaso de precipitación

6.-Colocamos todo esto en el balón para destilación

7.- Empieza el proceso de destilación por 30 min

8.- Se realizan los ensayos respectivos

Antes (transparente) Después (llama verde)

REACCIÓN DE DUMAS. (Color rojo en frio o un precipitado en caliente)

Reacción positivo característico

REACCIÓN DE LUSTGARTEN. (color roja – violáceo)

Reacción Positivo no característico color blanco

REACCIÓN DE FUJIWARA. (color rojo)

Reacción positivo característico color rojo

REACCIÓN DE ROSEBOOM. (color amarilla rojiza)

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Antes (transparente) (Negro y precipitado rojo)

Antes (transparente) Después (blanco)

Antes (transparente) Después (rojo)

Color negro y precipitado rojo

Reacción positivo no característico color ladrillo

REACCIÓN DE BENEDICT. (Color verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo)

Reacción Positivo no característico anillo celeste

OBSERVACIONES:

La rata presentó diversa sintomatología como pérdida de actividad motora, estado de sueño

profundo, hinchazón abdominal, hipoxia, además se percibió un fuerte olor por el tóxico, por

lo cual para mejor seguridad las reacciones se realizaron en la campana extractora.

CONCLUSIONES.

En la realización de esta práctica se aprendió a reconocer los síntomas provocados luego de administración de un tóxico (cloroformo) al organismo de un animal de experimentación (cobayo). Es importante mencionar que al realizar las reacciones de reconocimiento de este toxico entre ellas: la reacción con alcohol y nitrato de plata, reacción de dunas, reacción de Lustgarten, , reacción de Roseboom, reacción de Benedict. La mayoría dieron resultados positivos característicos lo que nos indica que si hubo presencia de cloroformo en la muestra.

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Antes (transparente) Después (color ladrillo)

Después (anillo celeste)Antes (transparente)

RECOMENDACIONES:

Asegurarse que el equipo esté correctamente sellado, ya que de esta forma logramos impedir el escape de los vapores en el proceso de la destilación, evitando así una intoxicación. Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, gorro, zapatones, guantes, mascarilla. Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Utilizar pipetas específicas para cada reactivo. Preparar correctamente las sustancias a la concentración requerida Acatar las sugerencias y guías expuestas por el ayudante, para de esta manera obtener muy buenos resultados en la realización de la práctica.

CUESTONARIO

1. ¿Qué produce la exposición del cloroformo?

La exposición a cloroformo puede ocurrir al respirar aire contaminado o al tomar agua contaminada o al tocar sustancias que lo contienen. Respirar cloroformo puede causar mareo, fatiga y dolores de cabeza. Respirar o ingerir cloroformo por períodos largos puede causar daño al hígado y a los riñones. El cloroformo puede causar ulceración de la piel si hay contacto con grandes cantidades.

2. ¿Aplicaciones del cloroformo?

Usado como reactivo relajante por los lípidos orgánicos, el triclorometano es usado para dormir. El cloroformo es un reactivo químico útil debido a la polarización de sus enlaces C−Cl, por lo que es una herramienta apreciada en síntesis orgánica, al proporcionar el grupo CCl2. Además, debido a que es usualmente estable y miscible con la mayoría de los compuestos orgánicos lipídicos y saponificables, es comúnmente utilizado como solvente. Es también utilizado en biología molecular para varios procesos, como la extracción de ADN de lisados celulares. Asimismo, es usado en el proceso de fijación de muestras histológicas post mortem. 

3. ¿Cuáles son las Fuentes de exposición del cloroformo?

Está disponible como disolvente en laboratorio y en la industria farmacéutica. Se ha prohibido su uso como sustancia aromática en pastas de dientes y otros productos como resultado de su efecto cancerígeno en animales después de exposiciones crónicas, la intoxicación aguda y crónica.

4. ¿Cuáles son las principales características del cloroformo?

El cloroformo, triclorometano o tricloruro de metilo, es un compuesto químico de fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración como derivado del metano o del alcohol

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etílico o, más habitualmente en la industria farmacéutica, utilizando hierro y ácido sobre tetracloruro de carbono. A temperatura ambiente, es un líquido volátil, no inflamable, incoloro, de olor penetrante, dulzón y cítrico, descripto por Samuel Guthrie como "de delicioso sabor".5 Se descompone lentamente por acción combinada del oxígeno y la luz solar, transformándose en fosgeno (COCl2) y cloruro de hidrógeno (HCl) según la siguiente ecuación: 2 CHCl3 + O2 → 2 COCl2 + 2 HCl por lo cual se aconseja conservarlo en botellas de vidrio color ámbar y lejos de la luz

5. ¿Cuáles son los usos del cloroformo?

Usado como reactivo relajante por los lípidos orgánicos, el triclorometano es usado para dormir. El cloroformo es un reactivo químico útil debido a la polarización de sus enlaces C−Cl, por lo que es una herramienta apreciada en síntesis orgánica, al proporcionar el grupo CCl2. Además, debido a que es usualmente estable y miscible con la mayoría de los compuestos orgánicos lipídicos y saponificables, es comúnmente utilizado como solvente. Es también utilizado en biología molecular para varios procesos, como la extracción de ADN de lisados celulares. Asimismo, es usado en el proceso de fijación de muestras histológicas post mortem. También tiene la particularidad de permitir "saborear colores", dado que los colores vívidos se pueden saborear gracias a una disrupción entre las neuronas sensitivas del quinto par craneal (nervio trigémino)quien proporciona el sentido del gusto al tercio posterior de la lengua, con su nucleo iridioconstrictor y con el segundo par craneal (nervio óptico) que genera la extraña sensación de saborear colores, ya que ambos nervios poseen los mismos núcleos cerebrales y son estimulados enérgicamente al entrar el cloroformo en contacto con ellos. Debido a que interactúa con ciertos receptores del sistema nervioso, el cloroformo tiene las características de un depresor del sistema nervioso central y genera de suaves a severas alucinaciones psicodélicas en jóvenes y adultos. Ya se utilizaba como anestésico en la práctica médica. 

BIBLIOGRAFÍA

Toxicología Médica Dr. Phil, Dr. Med. H. Funher. Editorial Científico-Médico. Madrid. España. 2010.

WEBGRAFÍA

Baeder, C. y Hofmann, T. Chloroform: Supplementary inhalation embryotoxicity study in Wistar rats.1991. (consultado el 25 de junio del 2014). Disponible: en: http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/TextosOnline/Valores_Limite/Doc_Toxicologica/FicherosSerie2/DLEP%2026.pdf

Komorniski E.; Calistro S. Hospital General De Agudos Juan Fernandez.Intoicacion con Cloroformo. 2010. (consultado el 25 de junio del 2014). Disponible: file:///C:/Users/Usuario/Downloads/cloroformo.pdf

Revisado por: BQF. Carlos García. Mg. Sc.

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Catedrático

FIRMA

Miguel A. Quillay Dávila

GLOSARIO.

Disrupción.- Es un término que procede del inglés disruptive y que se utiliza para

nombrar a aquello que produce una ruptura brusca.

Fosgeno.- Es un importante componente químico industrial utilizado para hacer plásticos y pesticidas. A temperatura ambiente (70 °F / 21 °C), el fosgeno es un gas venenoso. Si es enfriado y presurizado, el gas de fosgeno puede ser convertido en líquido, de forma que pueda ser transportado y almacenado. 

Nervio trigémino o nervio trigeminal (del .: trigeminus, de tres mellizos), también

conocido como quinto par craneal o V par, es un nervio craneal sensitivo. Se suele confundir

con un nervio mixto ya que algunas ramas motoras de otro plexo pasan en forma conjunta a

este, pero el nervio trigémino tiene exclusivamente ramas sensitivas.

Post mortem.- Que significa «después de la muerte», puede referirse a una autopsia 

Triclorometan.-El triclorometano, también conocido como cloroformo, es un líquido claro, volátil, no inflamable y con un olor característico. Se evapora muy rápidamente y posee una solubilidad en el agua escasa, aunque es miscible con la mayoría de los disolventes orgánicos.

ANEXOS

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