IB EVALUACION INTERNA DE CIENCIAS NATURALES - BIOLOGIA

IB EVALUACIN INTERNA - BIOLOGA

St. Matthews College North

T.P. N 5: Fotosntesis S2

Alumno:Fecha de realizacin:

Profesor: Marina VegaUnidad 3Fecha de entrega:

Niveles de logro:

2= completamente, 1= parcialmente, 0= no alcanzadoNivel otorgado TOTALComentarios

210

DISEO

Definicin del problema y seleccin de variables

Control de variables

Desarrollo de un mtodo de obtencin de datos

OBTENCIN Y PROCESAMIENTO DE DATOS

Registro de datos brutos

Procesamiento de datos brutos

Presentacin de los datos procesados

CONCLUSIN Y EVALUACIN

Formulacin de conclusiones

Evaluacin de los procedimientos

Mejora de la investigacin

TCNICAS DE MANIPULACIN

Cumplimiento de las instrucciones

Aplicacin de las tcnicas

Seguridad en el trabajo

APTITUDES PERSONALES

Motivacin propia y perseverancia

Trabajo en equipo

Reflexin personal

Confirmo que este informe lo he realizado en forma personal

Firma del alumno:

Fecha:

comentarios generales:

Firma del profesor:

Prctica N 5Fotosntesis

Criterio: OPD, CEOBJETIVO

Calcular y compara tasas de fotosntesis utilizando un colormetroINTRODUCCIN

El proceso de fotosntesis involucra el uso de la energa lumnica para convertir dixido de carbono y agua en azcares, oxgeno, y otros compuestos orgnicos. Este proceso se resume frecuentemente en la siguiente ecuacin:

6 H2O + 6 CO2 C6H12O6 + 6 O2 (1)

Ocurre en dos etapas. La primera, llamada etapa lumnica o dependiente de la luz, requiere energa lumnica. Los productos de esta etapa son utilizados luego para producir glucosa desde dixido de carbono y agua. Ya que las reacciones de la segunda etapa no requieren el uso directo de la luz, se la llama la etapa independiente de la luz o ciclo de Calvin. En la etapa lumnica los fotosistemas absorben fotones de la luz lo que produce que la excitacin de las molculas de clorofila ya que algunos de sus electrones pasan a un estado de mayor energa. Esta energa es pasada en forma aleatoria de pigmento a pigmento en proceso llamado cadena de transferencia de energa de electrones. Gran parte de la energa impulsa la formacin de ATP mientras que otra parte se utiliza para obtener electrones de la molcula de agua, esta reaccin se conoce como fotlisis y sus productos son: oxgeno, electrones y H+. La coenzima NADP+ acepta electrones, por lo tanto toma estos productos y se transforma en NADPH.En 1937 Robert Hill demostr que cloroplastos aislados producen oxgeno en ausencia de CO2. Este descubrimiento fue uno de los primeros indicios de que la fuente de electrones en las reacciones de la fase clara de la fotosntesis era el agua. En su sistema in vitro, Hill us un aceptor artificial de electrones, un compuesto de color azul llamado DCPIP (2,6 diclorofenol indofenol). La ecuacin general de la reaccin de Hill se puede sintetizar como:

Luz

H2O + A AH2 + O2Cloroplastos

Donde A es el aceptor artificial de electrones en su forma oxidada (DCPIP) y AH2 es su forma reducida.

Formalmente la reaccin de Hill se describe como la foto reduccin de un aceptor artificial de electrones por los hidrgenos del agua, con liberacin de oxgeno. En cloroplastos aislados un mtodo conveniente para evidenciar la reaccin de Hill es usar como aceptor artificial de electrones un reactivo que cambie de color una vez reducido, como el 2,6 diclorofenol indofenol, que en su forma oxidada es azul y en su forma reducida es incoloro.

Dado que el DCPIP reemplazar al NADP+ en la etapa lumnica, se predice que la solucin experimental (con luz, cloroplastos y DCPIP) se tornar casi incolora por efecto de la fotosntesis. Los cambios de coloracin de una solucin pueden cuantificarse midiendo cunta luz absorbe dicha solucin.Un colormetro es un equipo que posee la capacidad de emitir luz (I0 o intensidad inicial) a determinadas (longitudes de onda), de recibir cualquier remanente de luz que no haya sido absorbido por una muestra (It o intensidad transmitida), y de calcular el cociente entre ambos (It/I0), conocido como Transmitancia (T). Se define absorbancia (A) a una determinada, como el logaritmo de la inversa de la transmitancia. Cuanto ms luz se transmite a travs de una solucin, menos se absorbe, y viceversa.Esto permite cuantificar la aparicin o desaparicin de un determinado producto coloreado (en este caso la forma oxidada del DCPIP) cuando previamente se hace una curva de calibracin contra concentraciones conocidas, o comparar tasas de aparicin/desaparicin del mismo cuando se analizan pendientes.

En el presente trabajo prctico se expondr una solucin de cloroplastos + DCPIP frente a una fuente de luz artificial de diferentes colores, a continuacin se tomarn lecturas de las absorbancias (en funcin del tiempo) utilizando un colormetro.Materiales:-Colormetro y LaBQuest. -Cubas colorimtricas

-Papel Aluminio

-Lmpara

-Cronmetro

-Vaso de Precipitados de 600 o 500ml

-Tubos de ensayo pequeos

-Pipeta de 5 o 10ml -Propipeta

-Pipeta Pasteur

-DCPIP 3.2 mM

-Solucin de Buffer pH = 7.

-Solucin de cloroplastos extrados de pasto fresco-Mechero

-pinza

-Agua Destilada.Preparacin previa y calibracin:

1. El material a utilizar ser entregado por los docentes (cloroplastos hervidos y sin hervir)2. Rotular las pipetas Pasteur con: H (hervido) y S: (sin hervir)

3. Colocar el material en hielo y en oscuridad. No mezclar las pipetas. 4. Marcar una de las cubas con: B (blanco), S (sin hervir), H (hervido) O (oscuridad envuelta en papel aluminio).

5. Preparar una batera de cubas de acuerdo con lo expuesto en la Tabla 1 (buffer, agua destilada, DCPIP sin cloroplastos).BSOH

Buffer pH = 71 ml1 ml1 ml1 ml

Agua Destilada2 ml1 ml1 ml1 ml

DCPIP---------------------1 ml1 ml1 ml

Sol.Clorop.S/Hervir6 gotas6 gotas6 gotas---------------------

Sol.Clorop. Hervid.---------------------------------------------------------------6 gotas

Tabla 1: Tutorial para el llenado de las cubas.

6. Calibrar el colormetro (ver Calibracin del colormetro)Calibracin del colormetro:1. Cambiar la longitud de onda a 635nm. 2. Mantener apretado el botn CAL hasta que el LED rojo sobre el tablero titile.3. Blanco: Agregar a la cuba B (tabla 1) la suspensin de cloroplastos. Esto deja al colormetro calibrado con un blanco (o cero en la medicin de absorbancia) igual a una solucin de cloroplastos sin hervir ms buffer.

Desarrollo experimental:1. Colocar un vaso de precipitados de 500 ml lleno de agua entre la fuente lumnica y las cubas (Fig. 1).2. Colocar 6 gotas de cloroplastos en la cuba S (tabla 1). Tapar e invertir. 3. Colocarla en el colormetro y registrar la absorbancia. Este dato corresponde a tiempo T = 0 (cero).

4. Quitar la cuba del colormetro y colocarla frente a la luz de acuerdo a lo observado en la figura 1. Disparar el cronmetro en este momento.5. Repetir lo mismo para las cubas O y H. Disparar un cronmetro cada vez. 6. Registrar mediciones cada 5 (cinco) minutos (t = 1; 2; n)

7. Repetir el desarrollo experimental pero colocando un filtro de celofn verde sobre el vaso de precipitados y sin contaminacin lumnica externa (as se cambia la longitud de onda a la que se exponen los cloroplastos).

8. Calcular la tasa de fotosntesis para cada set de datos (luz natural sin filtro, luz con filtro verde).

Figura 1: Vista zenital de la disposicin de las cubas y la fuente lumnica.1. Redacte una pregunta de investigacin, una hiptesis y determine las variables del trabajo prctico.

2. Analice y procese los datos obtenidos en la prctica y redacte el informe habitual. Luz

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