Practico Nº 7: Micorrizas: bioinoculantes fúngicos...
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Practico Nº 7: Micorrizas: bioinoculantes fúngicos,
estrategia para una agricultura sustentable
Objetivos:
Conocer las características de las endo y ectomicorrizas
Conocer las metodologías y procedimientos para la extracción
y cuantificación de esporas.
Adquirir habilidades y/o destrezas para la coloración y observación
de endomicorrizas.
Valorar la responsabilidad ,interacción, cooperación y respeto para
fomentar una eficiente labor grupal
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Fertilizantes
Fertilizantes biológicos:
Fertilizantes no biológicos:
formulados con organismos vivos
formulados con compuestos químicos orgánicos
(por ej. urea, compost, lombricompuesto, estiércol,
abonos verdes, etc.) o inorgánicos
(por ej. fosfato de amonio, nitrato de amonio, etc.)
INOCULANTE:
Fertilizante biológico que se aplica a la semilla
en el momento de la siembra
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Fertilizantes biológicos
Fijadores de N2: Rizobios
Azospirillum spp.
Anabaena
PGPR (promotores del crecimiento):
Microorganismos solubilizadores de P de vida libre
Hongos micorríticos
Mezcla de microorganismos no definidos
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MICORRIZAS: simbiosis entre un hongo (mycos) y las raíces (rhizos)
de una planta. Ambos participantes obtienen beneficios
ECTOMICORRIZAS ENDOMICORRIZAS
Regiones templadas y frías Amplia distribución geográfica
Árboles y arbustos Todos los tipos de vegetación
+ de 5000 especies Cerca de 200 especies de
principalmente Basidiomycota Glomeromycota
Cambia la morfología de la raíz La morfología de la raíz no cambia
La planta es simbionte obligado La planta es simbionte facultativo
El hongo es simbionte facultativo El hongo es simbionte obligado
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En las ectomicorrizas el micelio invade la raíz sin entrar en el interior
de las células, de aquí el nombre de ectomicorrizas.
Se ubican sobre y entre las separaciones de éstas.
Se pueden observar a simple vista y presentan la llamada Red de
Hartig
ECTOMICORRIZAS
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En las endomicorrizas el micelio invade la raíz, inicialmente es
intercelular, pero luego penetra en el interior de las células radicales,
desde la rizodermis hasta las células corticales.
ENDOMICORRIZAS
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La estructura típica de esta simbiosis es el ARBÚSCULO
Se desarrolla en las células corticales de la raíz por ramificación hifal.
Allí ocurre el intercambio de nutrientes entre la planta y el hongo.
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Las HIFAS cenocíticas de los HMA crecen entre las células
corticales, y producen ENROLLAMIENTOS HIFALES.
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Sólo en algunas especies: VESÍCULAS (estructuras globosas de
reserva)
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ESPORAS (multinucleadas, origen asexual).
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ESPORAS
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FUNCIONES DE LAS MICORRIZAS
BENEFICIOS PARA LAS PLANTA
Incremento de la rizósfera
Incremento de la absorción de nutrientes a la planta al
aumentar la captación de iones especialmente los de
movilidad lenta (P, Zn, Cu)
Mayor tolerancia a situaciones de estrés (sequía,
salinidad, temperaturas bajas, anegamiento, deficiencia de nutrientes)
Control de adversidades abióticas
Control de adversidades bióticas (nematodos, algunos
patógeno fúngicos).
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BENEFICIOS EN LOS ECOSISTEMAS
Rol en la fertilidad física del suelo (Agregación del suelo)
Reciclaje de nutrientes
Incremento de microorganismos beneficiosos del suelo
Importantes en el secuestro del C
Ayudan a las plantas frente al stress de la contaminación
Poseen influencias en el cambio climático global
Mantenimiento de la diversidad vegetal
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¿Cómo se aíslan los MVA?
1. Trabajo de campo:
Recolección de muestras de suelo rizosférico
con propágulos fúngicos (esporas, micelio,
raíces colonizadas)
Recolección de plantas hospedantes
2. Cultivo de plantas-trampa:
Cultivo en invernadero de plantas
hospedantes inoculadas con las muestras
de suelo recolectadas
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¿Cómo se cultivan las endomicorrizas?
MVA incapaces de reproducirse en ausencia de un
hospedante: biótrofos obligados
Cultivo in –vitro de hospedantesCultivo de plantas hospedantes
en condiciones de invernadero
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Aislamiento de esporas para la producción de
inoculo puro
Tomar 50-100 gr de de suelo
Y diluirlo en 1 litro de agua
Agitar la solución y pasar a través de
Los tamices
Llenar la mitad del tubo con lo que se
recolecta de los contenidos de tamices y
agregar (hasta completar el tubo) con una
solución acuosa de sacarosa pura a 80 %
Centrifugar durante
5 minutos 2500-3000 rpm.
volcar sobre tamiz
lavar con
abundante agua
corrienteColocar en una caja de Petri y
observar en lupa
1
2
3
45
6
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Raíz colonizada
Lavado de raíces
con aguaBaño maría
80°C 20min
Lavar con abundante agua
Acidificación
HCL 0,1N
T° Amb. 20min
Retirar el HCL
No enjuagar con agua
Tinción con azul de
Trypan o anilina
Baño maría
90°C 20min
Tinción de raíces
Clarificación
KOH (10%)
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Preparación de los preparados
Se procede a montar las raíces a los porta objetos (10 raíces por porta ubicadas verticalmente)
Observar en microscopio
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Actividades
1-Realizar la tinción de raíces de endo y ectomicorrizas
2-Observación microscópica de ecto y endomicorrizas
Realizar la observación en microscopio óptico de diferentes
estructuras: hifas, vesículas y arbúsculos de endomicorrizas e
hifas en ectomicorrizas.
3-Observación de estructuras simbióticas:
Observar raíces de pino bajo lupa.
Observar cortes histológicos de raíces bajo lupa.
Con bisturí realizar cortes transversales de raíces y
observarlos al microscopio