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PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL

DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA EL

AISLAMIENTO DE Listeria monocytogenes.

APÉNDICE NORMATIVO C, NOM-210-SSA1-2014

1

Participaron en la elaboración de este protocolo.

Juan Carlos Piliado VelascoLaboratorio de Análisis de Riesgo del Distrito FederalJefe de Laboratorio de Análisis de Riesgo del Distrito [email protected]

Liliana Areli Cano RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinadora de Microbiología Sanitaria.50805200 ext. [email protected]

Maria Esperanza Rodriguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]

Participaron en la revisión de este protocolo.

Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal de Salud Pública de VeracruzJefe de Departamento de Análisis Sanitarios9811390 [email protected]

César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos 50805200 ext. [email protected]

Fabiola Curiel AyalaLaboratorio Estatal de Salud Pública de QuerétaroGerente Técnica Vigilancia Sanitaria(442) 2 20 72 [email protected]

Anastacio Palacios MarmolejoLaboratorio Estatal de Salud Pública de AguascalientesJefe de Departamento de C. Microbiológico449 [email protected]

Q.F.B. Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de JaliscoCoordinadora de Microbiología SanitariaTel. 01 333 833 06 [email protected]

Autorización

Armida Zúñiga EstradaComisión Federal Para la Protección Contra Riesgos Sanitarios.Comisionada de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

Josefina Gutiérrez RamírezComisión Federal para la Protección Contra Riesgos Sanitarios, Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

2

mailto:[email protected]






1. OBJETIVO.

Establecer las directrices para la evaluación del desempeño del Apéndice Normativo C. Método de referencia para el aislamiento Listeria monocytogenes, NOM-210-SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su interés y competencia, mediante la aplicación de este protocolo armonizado.

2. CAMPO DE APLICACIÓN.

Este protocolo es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de implementación del Apéndice Normativo C. Método de referencia para el aislamiento Listeria monocytogenes.

3. MÉTODO DE ENSAYO.

Apéndice Normativo C. Método de referencia para el aislamiento de Listeria monocytogenes; Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, Productos y Servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.

3.1. Diagrama de Flujo.1

El diagrama de flujo es una representación gráfica del método, en todo momento se debe tener acceso al método de prueba original.

1 Para entendimiento de este protocolo y del método de análisis, se define que las colonias sospechosas, típicas y presuntivas son lo mismo.

3

2

2 Para fines de este protocolo, es posible utilizar sólo una colonia para la confirmación. Sin embargo se deben tomar precauciones en la prueba de interferentes.

4

3

3 Alternativamente como se describe en la NOM-210-SSA1-2014, para la utilización de carbohidratos pueden utilizarse pruebas miniaturizadas.

5

4. EQUIPOS E INSTRUMENTOSLos equipos listados a continuación son los requeridos por el método. En el informe de evaluación de desempeño deberá completarse la “Tabla equipos e instrumentos empleados”

Nombre Características Estado deseado

Balanza Granataria Sensibilidad de 0.1 g Verificada el dia de uso

Marco de pesas Clase F1 o E210 ó 20 g;y 100 g ó 200 g ó 500 g

Calibrado

Incubadora Controla temperatura a 25°C ± 1°C.

Calificada4 25 ± 1°C, por 24 h mínimo.Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C adecuadamente inmerso.

Incubadora Controla temperatura 30°C ± 1°C

Calificada 30 ± 1°C, por 24 h mínimo. Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente inmerso.

Incubadora Controla temperatura 36°C ± 1°C

Calificada 36 ± 1°C, por 24 h mínimo. Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de

4 Se entiende que la calificación de los equipos para incubación consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se demuestra mediante el muestreo de la temperatura en diferentes puntos de la cámara y durante un tiempo determinado que aseguren las condiciones de incubación de la prueba.

6

0.5°C, adecuadamente inmerso.

Cuenta colonias Funcionando, lámpara con iluminación.

Mantenimiento vigente lámpara funcionando y lupa limpia sin rayaduras ni roturas.

Homogeneizador Peristáltico o Licuadora5

Funcionando. Mantenimiento vigente.Licuadora no debe presentar fugas en el momento de la operación, los vasos deben ser esterilizables.

Microscopio de campo oscuro

Funcionando. Mantenimiento vigente.Debe incluir la prueba de iluminación de Kohler.

5. MATERIALESEl material para trabajo debe ser estéril, cuando no se indique otra cosa el material esterilizado por calor seco o calor húmedo se considera estéril hasta un mes después de esterilización siempre que se mantenga la integridad del empaque, por lo que todo el material debe ser adecuadamente identificado, señalando la fecha de esterilización de material y la fecha de uso. Cuando se use material estéril desechable, este deberá ser evaluado por lote en su recepción o documentarse mediante certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser usados después de tres días.

El material de vidrio re-usado deberá demostrar que fue lavado adecuadamente mediante registros de supervisión, y demostrar la ausencia de residuos de detergente.

Los siguientes materiales son de carácter enunciativo, el laboratorio deberá reportar los utilizados y sus características en el informe.

● Asa de platino o níquel de 3 mm de diámetro o 10 µL, alternativamente pueden usarse asas desechables.

● Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora de vidrio o aluminio.

5 El uso del homogeneizador o de la licuadora depende del tipo de muestra, deberá utilizarse el sistema de homogeneización más adecuado para preparar la muestra, y este debe describirse en el informe.

7

● Cajas Petri de vidrio o desechable, diámetro de 15 mm X 90 mm.● Cucharas, tenedores y cuchillos para el manejo de la muestra.● Frascos de vidrio de 250mL con tapa de rosca esterilizables .● Gradillas para tubo de ensaye esterilizables.● Mecheros Bunsen o Fisher.● Perillas o propipetas.● Pipetas estériles de vidrio graduadas de diferentes capacidades: 10 mL, 5

mL y 1 mL con divisiones de 0.5 mL para las dos primeras y 0.1mL para la última, protegidas con tapón de algodón.

● Pinzas.● Pipetas Pasteur.● Tubos de ensaye de 16 X 150 mm y de 20 X 100 mm con tapón de rosca● Tubos para serología de 10 X 75 mm o de 13 X 100 mm con tapón de

rosca

6. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO 6.1. REACTIVOS.

6.1.1. Solución de peróxido de hidrógeno al 3%.6.1.2. Solución salina 0.85%, 0.1% peptona

6.2. MEDIOS DE CULTIVO6.2.1. Agar métodos estándar6.2.2. Agar movilidad6.2.3. Agar Oxford6.2.4. Agar PALCAM6.2.5. Agar sangre de cordero al 5%6.2.6. Agar soya tripticaseína con 0,6% de extracto de levadura (ASTEL)6.2.7. Caldo carbohidrato (ramnosa y xilosa)6.2.8. Caldo Fraser, con la completa concentración de agentes

selectivos.6.2.9. Caldo Fraser medio, con reducción de la concentración de agentes

selectivos.6.2.10. Caldo soya tripticaseína con 0,6% de extracto de levadura

(CSTEL)

6.3. CEPAS6.3.1. Listeria innocua ATCC 33090.

8

6.3.2. Listeria ivanovii ATCC 19119.6.3.3. Listeria monocytogenes ATCC 19115.6.3.4. Rhodococcus equi ATCC 6939 ó NCTC 1621.6.3.5. Staphylococcus aureus ATCC 494446 ó ATCC 25923 ó CIP 5710.

7. MUESTRAS7.1. Cada laboratorio deberá realizar la evaluación del desempeño del método

con al menos una matriz por cada grupo de alimentos indicado en la siguiente tabla.

7.2. En el informe de validación se deberá reportar los criterios para la selección de la muestra considerando el siguiente criterio de selección.

Grupo de alimentos

Tipos de producto

Tipo de producto recibido en el laboratorio.

Matriz representativa mayormente recibida en el laboratorio.

Prioridad para el laboratorio. 7

Productos Cárnicos

CrudoProcesados térmicamenteCongeladosFermentadosCuradoPate

Reportar en el informe



Pescado y Productos de la pesca

CrudosCongelados




Frutas y Vegetales

Crudos Reportar en el informe



Leche y lácteos CrudosCongeladosfermentadosQueso artesanal




Otros Productos Para ser llenado por cada laboratorio




7.3. La selección de las muestras debe realizarse con base en las prioridades del laboratorio considerado, la frecuencia de recepción y los programas prioritarios .

6 Renombrado a S. pseudintermedius ATCC494447 Reportar numéricamente indicando 1 para el más prioritario.

9

7.4. Para la selección de las muestras se deberá contar con aproximadamente 1.5 kg de muestra y almacenar en condiciones adecuadas dependiendo la matriz.

7.5. Verificación de la muestra:7.5.1. Las muestras seleccionadas deberán ser analizadas para la

búsqueda de Listeria utilizando el método en cuestión.7.5.2. Deberá realizarse por triplicado, encontrando resultados negativos

en las tres repeticiones.

8. DESARROLLO EXPERIMENTAL

8.1. Selección de microorganismos8.8.1.1. Microorganismo positivo

8.1.1.1. Listeria monocytogenes ATCC 191158.1.2. Microorganismos interferentes

8.1.2.1. Listeria ivanovii ATCC 191198.1.2.2. Listeria innocua ATCC 33090.

8.2. Preparación y ajuste de inóculo positivo.8.2.1. Previo al ensayo de evaluación se debe identificar la dilución

adecuada de los microorganismos para preparar la suspensión de trabajo, en las concentraciones que se indican más adelante.

8.2.2. El protocolo de preparación del inóculo puede ser elegido a conveniencia del laboratorio, pero debe asegurar que se alcanzan los tamaños de inóculos deseados, este debe describirse en el informe.

8.2.3. Para la preparación del inóculo pueden consultarse la “Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para el Análisis de Alimentos” (CCAYAC-P-062).

8.2.4. Puede usarse la siguiente recomendación. 8.2.4.1. Inocular una asada del microorganismo en 10 mL de caldo

Fraser medio, incubar a 30o C +/- 1o C por 24 h + 2 h. 8.2.4.2. A partir del cultivo hacer una serie de diluciones con

solución salina 0.85% y 0.1% peptona, hasta llegar a la dilución 10-9..

8.2.4.3. Colocar 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7

a 10-9 y adicionar agar cuenta estándar, incubar a 36o C + 1o

C por 24 h + 2 h. Realizar el conteo en cada dilución y

8 Pueden utilizarse cepas aisladas en el laboratorio, siempre que estas cuenten con pruebas de identidad y pureza.

10

registrar los resultados indicando la concentración del microorganismo en cada dilución.

8.2.4.4. Seleccionar la dilución adecuada para que al inocular se obtengan:

8.2.4.4.1. menos de 10 UFC/mL para el cálculo del Límite de detección.

8.2.4.4.2. y más de 100 UFC/mL para los microorganismos interferentes.

8.2.5. Durante la realización de la prueba se deberá verificar el tamaño del inóculo por vaciado en placa, utilizando por lo menos 6 placas.

8.3. Inoculación y análisis de las muestras.8.3.1. Preparar una suspensión de trabajo del microorganismo como se

indica en 8.2.4, utilizando las diluciones encontradas previamente.8.3.2. Medir de 25 g o 25 mL de muestra por separado y transferir al

medio de cultivo de prenriquecimiento primario, repetir como se indica en la tabla 1.

8.3.3. A partir de la suspensión de trabajo de microorganismos inocular un mL a cada una de las preparaciones de la muestra, como se indica en la tabla 1.

8.3.4. Continuar el análisis para la búsqueda de Listeria como se indica en el método de prueba.

8.3.5. Registrar los resultados en los formatos respectivos.Tabla 1. Preparación de muestras

Parámetro Analistas Muestra Número de réplicas

Microorganismo9 Tamaño de Inóculo

Valor esperado

Verificación de la muestra

Al menos un analista

25g 3 Sin inóculo Sin inóculo Ausencia deL. monocytogenes.

Verificación del límite de detección

Al menos 2 analistas, o 2 tiempos diferentes

25g 10 por analista o por

tiempo

L. monocytogenes menos de 10 UFC/mL

Presencia deL. monocytogenes

Interferentes Al menos 2 analistas, o 2 tiempos diferentes

25g 10 por analista o tiempo.

L. ivanovii

Listeria innocua

más de100 UFC/mLmás de100 UFC/mLmenos de10 UFC/mL

Presencia deL. monocytogenes.

9 Verificar el tamaño del inóculo después de inocular todas las repeticiones.

11

L. monocytogenes

9. RESULTADOS

Registrar resultados en el informe de desempeño.

10. ANÁLISIS ESTADÍSTICO.Parámetro Análisis Estadístico.

Verificación del tamaño del inóculo positivo

Calcular el promedio de 6 placas.

Verificación de la muestra Reportar como cumple, cuando no hay crecimiento de Listeria monocytogenes.Reportar como no cumple, cuando hay crecimiento de Listeria monocytogenes.


Calcular por cada analista el cociente de resultados positivos sobre el total de resultados realizados y multiplicar por cien.

Interferentes. Calcular por cada analista el cociente de resultados positivos sobre el total de resultados realizados y multiplicar por cien.

11. CRITERIOS DE ACEPTACIÓNParámetro Criterio de aceptación

12

Verificación del tamaño del inóculo positivo

Verificar el tamaño del inóculo por lo menos seis veces, en promedio se deben obtener cuentas de menos de 10 UFC.

Verificación de la muestra Tres réplicas un analista, con ningún resultado positivo.


10 réplicas por cada analista, por lo menos el 80% de las éstas con resultados positivos con un tamaño de inóculo del microorganismo de interés menor a 10 UFC.

Interferentes. 10 réplicas por cada analista, por lo menos el 80 % de las éstas con resultados positivos con un tamaño de inóculo del microorganismo de interés menor a 10 UFC y el inóculo de más de 100 UFC por cada uno de los microorganismos interferentes.

Referencia: Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-P-062. 2012.

13

INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO

DE REFERENCIA PARA EL AISLAMIENTO DE

Listeria monocytogenes. APÉNDICE NORMATIVO C, NOM-

210-SSA1-2014

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Participaron en la elaboración de este Informe .

Maria Esperanza Rodriguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]

César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analitico y Ampliación de CoberturaCoordinador de la Oficina de Proyectos50805200 ext. [email protected]

Participaron en la revisión de este informe.

Liliana Areli Cano RamirezComisión de Control Anlítico y Ampliación de CoberturaQuímico Analista50805200 ext. [email protected]

Anastacio Palacios MarmolejoLESP- AguascalientesJefe de Departamento de C. Microbiológico449 [email protected]

Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de JaliscoCoordinadora de Microbiología SanitariaTel. 01 333 833 06 [email protected]

Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal de Salud Pública VeracruzJefe de Departamento de Análisis Sanitarios(229)9811390 ext [email protected]

Fabiola Curiel AyalaLESP QuerétaroG. Técnica Vigilancia Sanitaria(442) 2 20 72 [email protected]

Geovani Ramírez HernándezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura50805200 ext. [email protected]

Autorización

Armida Zúñiga EstradaComisión Federal Para la Protección Contra Riesgos Sanitarios. CCAYACComisionada de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

Josefina Gutiérrez RamírezComisión Federal para la Protección Contra Riesgos Sanitarios. CCAYACDirectora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

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1. OBJETIVO

Establecer los lineamientos para la elaboración del informe en la evaluación del desempeño del Apéndice Normativo C. Método de referencia para el aislamiento Listeria monocytogenes, NOM-210-SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su competencia.

2. CAMPO DE APLICACIÓNEste informe es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en la implementación y evaluación del Apéndice Normativo C. Método de referencia para el aislamiento de Listeria monocytogenes.

3. EQUIPOS Equipo Descripción:

Identificación, Marca, Modelo

Estado deseado Evidencia del estado

Balanza Granataria

Haga clic aquí para escribir texto.

Verificado el día de uso.


Marco de pesas Haga clic aquí para escribir texto.

Calibrado Haga clic aquí para escribir texto.

Incubadora25°C ± 1°C


Calificada Haga clic aquí para escribir texto.







Cuenta colonias Haga clic aquí para escribir texto.

Mantenimiento Vigente


Homogeneizador peristáltico o Licuadora


Mantenimiento vigente


Microscopio de campo oscuro


Mantenimiento vigente


Reportó: Haga clic aquí para Supervisó: Haga clic aquí para

16

Nombre, Firma y Fecha

escribir texto. Nombre, Firma y Fecha

escribir texto.

4. MATERIALES

Material Marca Lote Certificado de calidad

Asa de platino o níquel de 3 mm de diámetro o 10 µLO desechable




Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora

Elija un elemento. Haga clic aquí para escribir texto.


Cajas Petri de vidrio o desechable, diámetro de 15 mm X 90 mm.




Cucharas, tenedores y cuchillos para el manejo de la muestra.

Ejemplo: No aplicaHaga clic aquí para escribir texto.

Ejemplo: Lote de esterilización 4555Haga clic aquí para escribir texto.

Ejemplo: Prueba de esterilidad Bitacora 56 folio 55Haga clic aquí para escribir texto.

Frascos de vidrio de 250 mL con tapa de rosca esterilizables

Ejemplo: SchotchHaga clic aquí para escribir texto.

Ejemplo: Lote de esterilización 556556Haga clic aquí para escribir texto.

Ejemplo: Prueba de esterilidad bitácora 555 folio 525 Haga clic aquí para escribir texto.

Gradillas para tubo de ensayo esterilizables ó resistente a temp. de esterilización por vapor


Ejemplo: No aplicaHaga clic aquí para escribir

Ejemplo: no aplicaHaga clic aquí para escribir texto.

17

texto.

Mecheros Bunsen o Fisher Ejemplo: No aplicaHaga clic aquí para escribir texto.



Perillas o propipetas. Ejemplo: No aplicaHaga clic aquí para escribir texto.



Pipetas estériles de vidrio graduadas de diferentes capacidades: 10 mL, 5 mL con divisiones de 0.5 mL y 1 mL con divisiones de 0.1mL

Ejemplo: Marca deschables Haga clic aquí para escribir texto.

Ejemplo: Lote 1444Haga clic aquí para escribir texto.

Ejemplo: Prueba de esterilidad bitácora 555 folio 525 Haga clic aquí para escribir texto.

Pinzas No se usóHaga clic aquí para escribir texto.

No aplicaHaga clic aquí para escribir texto.

No aplica Haga clic aquí para escribir texto.

Pipetas Pasteur No se usóHaga clic aquí para escribir texto.

No aplicaHaga clic aquí para escribir texto.

No aplica Haga clic aquí para escribir texto.

Tubos de ensaye de 16 X 150 mm y de 20 X 100 mm con tapón de rosca

Pirex Haga clic aquí para escribir texto.

No se cuenta con registo adquiridos antes de 20 de mayo de 2000Haga clic aquí para escribir texto.

No requiere Haga clic aquí para escribir texto.

18

Tubos para serología de 10 X 75 mm o de 13 X 100 mm con tapón de rosca

Pirex Haga clic aquí para escribir texto.

45454Haga clic aquí para escribir texto.

No requiere Haga clic aquí para escribir texto.

Reportó:Nombre Firma y Fecha


Supervisó:Nombre Firma y Fecha


5. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO

Reactivo o medio de cultivo

Lote Control de calidadFecha de realización

Solución de peróxido de hidrógeno al 3%

Haga clic aquí para escribir texto. Certificado:Haga clic aquí para escribir texto.

Solución salina 0.85%, 0.1% peptona

Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir texto.

Agar métodos estándar Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir texto.

Agar movilidad Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir texto.

Agar Oxford Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir texto.

Agar PALCAM Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir texto.

Agar sangre de cordero al 5%


Agar soya tripticaseína con 0,6% de extracto de levadura (ASTEL)


Caldo carbohidrato (ramnosa y xilosa)


Caldo Fraser, con la completa concentración


19

de agentes selectivos.

Caldo Fraser medio, con reducción de la concentración de agentes selectivos.


Caldo soya tripticaseína con 0,6% de extracto de levadura (CSTEL)






6. CEPAS

Cepas utilizadas Certificado o Control de calidad

Listeria innocua ATCC 33090 Haga clic aquí para escribir texto.

Listeria ivanovii ATCC 19119 Haga clic aquí para escribir texto.

Listeria monocytogenes ATCC 19115 Haga clic aquí para escribir texto.

Rhodococcus equi ATCC 6939 ó NCTC 1621


Staphylococcus aureus ATCC 49444 ó ATCC 25923 ó CIP 5710.






7. MUESTRAS7.1. Criterio de selección de la muestra

Criterio de selección de la muestra

Tipos de producto

Tipo de producto recibido en el laboratorio.

Matriz representativa mayormente recibida en el laboratorio

Prioridad para el laboratorio

20

Productos Cárnicos

CrudoProcesados térmicamenteCongeladosFermentradosCuradoPate


Ejemplocárnico crudoCongelados

EjemploCarne molida congelada

3

Pescado y Productos de la pesca

CrudosCongelados

Reportar en el informeEjemplo Pescado refrigeradoCrudosCongelado


EjemploTilapia

2

Frutas y Vegetales

Crudos Reportar en el informe Ejemplo fruta crudaNo recibe

Reportar en el informeEjemploNo recibe

4

Leche y lácteos FrescoCrudosCongeladosfermentadosQueso artesanal

Reportar en el informeEjemploQueso Fresco

Reportar en el informeEjemploQueso fresco

1

Otros Productos Para ser llenado por cada laboratorio

Ejemplo No aplica

Reportar en el informeEjmploNo aplica

5

Muestra Seleccionada _____________ Cantidad de Muestra _________________Descripción de la muestra_____________________________________________MARCA:__________________, LOTE:__________________, FECHA DE CADUCIDAD:______ Condiciones de preservación:________________________________



Autorizó:Nombre Firma y Fecha


8. DESARROLLO EXPERIMENTAL8.1. Resultados de Verificación de la muestra:

21

Ausencia del Analito

Tamaño de la unidad de análisis:

25 g Fecha del Análisis: Haga clic aquí para escribir una fecha.

Réplica Resultado Valor esperado Cumple (si / no)

1 Haga clic aquí para escribir texto.

Ausencia ☐Si☐No


☐Si☐No


☐Si☐No

Ver Registros: ________________________





8.2. Preparación del Inóculo. (Ver punto 6 en este informe)

8.2.1. Preparación y ajuste de inóculo positivo.Descripción del protocolo para la preparación del inóculo:

Escriba en esta sección el protocolo empleado. por ejemplo:

Se inoculó una asada de Listeria monocytogenes en 10 mL de caldo Fraser medio, se incubó a 30o C +/- 1o C por 24 h + 2 h.

A partir del cultivo se realizaron una serie de diluciones con solución salina 0.85% y 0.1% peptona, hasta llegar a la dilución 10-9.

Se colocó 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7 a 10-9 y se agregó agar cuenta estándar, se incubó a 36o C + 1o C por 24 h + 2 h. Se realizó el conteo en cada dilución y registrar los resultados de la

22

concentración del microorganismo en cada dilución.

Se seleccionó la solución adecuada para obtener:

Menos de 10 UFC/mL para el cálculo del Límite de detección de Listeria monocytogenes.

Más de 100 UFC/mL para Listeria ivanovii.

Se verificó el tamaño del inóculo por vaciado en placa, utilizando 6 placas.

Diluciones empleadas

Tamaño del inóculo Dilución UFC encontradas

Menos de 10 UFC/mL Haga clic aquí para escribir texto.


Más de 100 UFC/mL Haga clic aquí para escribir texto.


Ver Registros: ________________________





8.3. Resultados Verificación de límite de detección.Se prepararon las muestras como se indica en el punto 8.3 del protocolo.

8.3.1. Analista 1

RéplicasResultadoRegistrar Ausencia o Presencia

CálculosNo. total de Presencia x 100 / No. total de alícuotas


Total presencia _______ x 100 = _______ (a)

(a) / 10 = ___________2 Haga clic aquí para escribir texto.

3 Haga clic aquí para

23

escribir texto.








Ver Registros: ________________________

8.3.1.1. Verificación del Tamaño del Inóculo.Aa Analista: Haga clic aquí para escribir texto. Fecha: Haga clic aquí para escribir

una fecha.

Microorganismo Réplica Promedio

UFC UFC UFC UFC UFC UFC

L. monocytogenes Haga clic aquí para escribir texto.







Ver Registros: ________________________

24

Analista:Nombre Firma y Fecha




8.3.2. Analista 2

RéplicaResultadoRegistrar Ausencia o Presencia













Ver Registros: ________________________

8.3.2.1. Verificación del Tamaño del Inóculo.Aa Analista: Fecha:

25



L. monocytogenes

Ver Registros: ________________________





8.4. InterferentesSe prepararon las muestras como se indica en el punto 8.3 del protocolo.

8.4.1. Analista 1

RéplicaResultadoRegistrar Ausencia o Presencia












26


Ver Registros: ________________________

8.4.1.1. Verificación del Tamaño del Inóculo.Aa Analista:Haga clic aquí para escribir texto. Fecha:Haga clic aquí para escribir

una fecha.










L. ivanovii Haga clic aquí para escribir texto.







Listeria innocua Haga clic aquí para escribir texto.







Ver Registros: ________________________

Analista:Nombre Firma y


Supervisó:Nombre Firma y


27

Fecha Fecha

8.4.2. Analista 2

ReplicaResultadoRegistrar Ausencia o Presencia













Ver Registros: ________________________

8.4.2.1. Verificación del Tamaño del Inóculo.Aa Analista:Haga clic aquí para escribir texto. Fecha:Haga clic aquí para escribir

una fecha.


28









L. ivanovii Haga clic aquí para escribir texto.







Listeria innocua Haga clic aquí para escribir texto.







Ver Registros: ________________________





29

9. RESULTADOSParámetro Resultados

obtenidosCriterio de aceptación

Cumple

Verificación del tamaño del inóculo

L. monocytogenes ____UFC

Verificar el tamaño del inóculo por lo menos seis veces, en promedio se deben obtener cuentas de menos de 10 UFC.

☐Cumple☐No cumple

L. ivanovii____ UFCListeria innocua____ UFC

Verificar el tamaño del inóculo por lo menos seis veces en promedio se obtienen cuentas mayores de 100 UFC


Verificación de la muestra

____% Tres repeticiones un analista, 0% resultados positivos.



____% 10 réplicas por cada analista, por lo menos el 80% de estas con resultados positivos con un tamaño de inóculo del microorganismo de interés menor a 10 UFC.


Interferentes. ____% 10 réplicas por cada analista, por lo menos el 80 % de las estas con resultados positivos con un tamaño de inóculo del microorganismo de interés menor a 10 UFC y el inóculo de más de 100 UFC por cada uno de los los microorganismos interferentes.


30

10. Discusión de los resultados

Por ejemplo:Los resultados encontrados demuestran que al aplicar el método se obtienen resultados confiables y reproducibles y por tanto se puede utilizar para el análisis de los productos descritos en este informe.:

11. CONCLUSIÓN

☐Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el MÉTODO DE

REFERENCIA PARA EL AISLAMIENTO Listeria monocytogenes. APÉNDICE NORMATIVO C, NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio) . al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de

Salud Pública de XXXXXXX es adecuado para el análisis del grupo de alimentos

cárnicos.

☐Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se

concluye que el MÉTODO DE REFERENCIA PARA EL AISLAMIENTO Listeria monocytogenes. APÉNDICE NORMATIVO C, NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave

y nombre del documento que describe el método del laboratorio) . al ser aplicado por el

Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX NO es adecuado para el análisis del

grupo de alimentos cárnicos o para la matriz específica.

12. BIBLIOGRAFÍA

12.1. Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS. MÉTODOS DE PRUEBA MICROBIOLÓGICOS. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS. APÉNDICE NORMATIVO C. MÉTODO DE REFERENCIA PARA EL AISLAMIENTO Listeria monocytogenes.

12.2. Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-P-06 2012.

13. ANEXOSAnexe copia de las evidencias referidas en el informe.

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