Pruebas Bioquimicas Salmonella
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INVESTIGACIÓN SALMONELLA
IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA
Permite la identificación genérica de los cultivos de Salmonella y eliminación de cultivos sospechosos falsos
CARACTERISTICAS El genero Salmonella es de la familia Enterobacteriaceae , bacilos Gram Negativos, aerobios y anaerobios facultativos producen ácido a partir de la glucosa.
METODO TSI LIA Y MIO
Se toman 2 colonias aisladas sospechosas y se transfiere a los tubos:
TSI: siembra en picadura al fondo y estriado en la superficie
LIA: Por picadura al fondo y estriado en superficie
MIO: Por picadura al fondo y estriado en superficie
INCUBAR POR 24h a 35°C
RESULTADOS TSI
SUPERFICIE (Rojo=alcalino ; Amarillo=ácido)
Superficie roja/fondo amarillo: el microorganismo solamente fermenta la glucosa. *
Superficie amarilla/fondo amarillo: el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
Superficie roja/fondo rojo: el microorganismo es no fermentador de azúcares.
La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.*
Las Salmonella dan la siguiente reacción sobre TSI:
Alcalina (rojo) en la superficie inclinada.
Acida (amarillo) en el fondo.
Con o sin producción de SH2: (ennegrecimiento o no del medio)
*Solo fermenta Glucosa
RESULTADOS LIA
1- Decarboxilación de la lisina:
-Prueba Positiva: Superficie violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Superficie violeta/fondo amarillo.
2-Desaminación de la lisina:
Superficie rojiza/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.
3-Producción de ácido sulfhídrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite de la superficie y fondo)
Las Salmonella dan la siguiente reacción sobre LIA:
Alcalina (violeta o rojizo) en el fondo del tubo = Lisina Descarboxilasa positiva
Producción de H2S (ennegrecimiento del medio)
NOTA
SI SE PRESENTA UN TSI NEGATIVO Y H2S POSITIVO EN LIA: RETENGA ESTE ULTIMO PARA Salmonella arizonae UTILIZANDO CALDO MALONATO
GUARDAR CULTIVOS CARACTERISTICOS DE Salmonella PARA PRUEBAS ADICIONALES (SIM, SIMMONS, CALDO MANITOL, MR-VP)
RESULTADOS MIO
1-Movilidad:
-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra.
-Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
2-Ornitina decarboxilasa:
-Resultado positivo: color púrpura.
-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio.
3-Prueba del indol:
La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina.
-Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo Kovac.
-Resultado negativo: el color del reactivo Kovac permanece incoloro-amarillento.
Las Salmonella dan la siguiente reacción sobre MIO:
Puede presentarse:
-Resultado positivo: Turbidez o intensificación del color (Ornitina descarboxilasa) y crecimiento mas allá de la siembra (movilidad)
-Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra
INDOL NEGATIVA, SON INMOVILES PERO PRESENTAN MOVIMIENTO OSCILANTE, POSITIVAS A LA DESCARBOXILACION DE ORNITINA
CHRISTENSEN MEDIO (UREA AGAR BASE)
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.
Las Salmonella NO hidrolizan la Urea, Son UREASA NEGATIVA, presentan el color amarillo
REPORTE DE RESULTADOS
REPORTAR COMO PRESENCIA O AUSENCIA DE Salmonella por gramo o mL de muestra
En general Salmonella es negativa a las pruebas de: ureasa, indol, lactosa y sacarosa, oxidasa, xilosa y positiva a las pruebas de descarboxilación de lisina y ornitina, glucosa y catalasa, así como generalmente producen H2S , citrato y TSI positiva, pero existen variantes atípicas con reacciones positivas a lactosa o no descarboxilación de lisina.