Puntas para proteína PureSpeed™

Mayor concentración y pureza

Rápidas: solo 15 minutosProcese varias muestras simultáneamente

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Mayor concentración y pureza de proteínasPurificación de proteínas en una punta de pipeta

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• Mayor concentración y pureza que con métodos tradicionales.• Purificación de microlitros a mililitros de anticuerpos y proteínas recombinantes.• Procesamiento simultáneo de entre 1 y 12 muestras de proteína con la pipeta electrónica

E4 XLS de Rainin. • Mayor rapidez que los métodos tradicionales:

obtenga muestras puras en solo 15 minutos.• Poco impacto en las proteínas: mayor actividad proteínica.• No se necesitan otros procesos de concentración.

Flujo de trabajo más rápido y cómodoProteína funcional, pura y concentrada

para proteínas PureSpeed pasa la muestra repetidamente sobre un lecho de resina de bajo volumen muerto preparada para actuar como solución amortiguadora. De este modo, se controla el tiempo de contacto con la resina y se aumenta la cinética de unión. El lavado de gran eficacia elimina todos los contaminantes que puedan generar falsos positivos y la fase final de elución de bajo volumen produce una proteína funcional de concentración elevada.

Las puntas para proteínas PureSpeed™ de Rainin simplifican en gran medida la purificación de anticuerpos y proteínas recombinantes. Este enfoque innovador genera la concentración más elevada de proteína purificada, lo cual diversifica las opciones de las pruebas funcionales.

A diferencia de las columnas de afinidad por gravedad y las columnas por centrifugación, el proceso exclusivo de las puntas

Mediante el protocolo de purificación de proteínas de la pipeta electrónica E4 XLS de Rainin, las puntas PureSpeed ofrecen un método cómodo y económico para purificar microvolúmenes de proteína objetivo en tan solo 15 minutos. Las puntas PureSpeed se suministran en empaques tipo clamshell que contienen 12 puntas. Están disponibles con tres tipos de resina: ProA y ProG, para la purificación de anticuerpos; e IMAC para proteínas recombinantes.

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Amplíe sus aplicaciones con las puntas PureSpeed

Gracias a la rapidez de instalación, el flujo de trabajo mejorado y la reducción de requisitos de reactivos, las puntas para proteínas PureSpeed de Rainin pueden mejorar numerosas aplicaciones proteómicas:

Pruebas funcionalesDeterminación estructuralCribado de expresión objetivoInteracciones entre proteínasDesarrollo de pruebasDesarrollo de procesos

Pruebas de inmunoprecipitaciónCribado de purificaciónDetección de biomarcadorValidación de biomarcadorCribado y selección de colecciones

Caracterización de leadOptimización de leadAnálisis estructuralAnalítica de proteínasEnsayos preclínicosInmunogenia

Prepare varias muestras simultáneamenteLas pipetas electrónicas E4 XLS de 8 o 12 canales de Rainin permiten purificar varias muestras simultáneamente. La imagen adjunta muestra cómo se pueden purificar y enriquecer rápida y fácilmente entre 1 y 6 muestras de proteínas, un control positivo y un control negativo.

Cada fila de microplaca representa una fase del proceso de purificación. La pipeta electrónica E4 XLS de Rainin aspira y dispensa automáticamente las soluciones y guía al usuario durante el proceso.

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Capturar, purificar y enriquecerPureSpeed simplifica el flujo de trabajo

Las puntas para proteínas PureSpeed aportan un flujo de trabajo de purificación más confiable y cómodo para obtener proteínas de alta concentración y funcionalmente puras. El resultado: una mayor productividad y una reducción de los residuos y los riesgos.

• El diseño patentado exclusivo del lecho de resina preparado para actuar como amortiguador mantiene la resina de afinidad en la punta PureSpeed.

• En el modo PureSpeed, la E4 XLS de Rainin guía a los usuarios a través del protocolo a medida que se desarrolla el proceso de purificación.

• Solo se necesita un pequeño volumen de solución amortiguadora para liberar la proteína objetivo y obtener la mayor concentración posible de proteína eluída.

Elución de la proteína enriquecidaAl pasar la solución amortiguadora de elución a través de la punta PureSpeed repetidamente, la proteína objetivo concentrada se desplaza desde la resina de vuelta a un recipiente de muestras limpio. En esta fase, se necesita un mínimo volumen de solución amortiguadora de elución para liberar la proteína objetivo pura y obtener la mayor concentración posible.

Captura de la proteína objetivo El diseño patentado exclusivo del lecho de resina preparado para actuar como amortiguador mantiene la resina de afinidad en la punta para proteínas PureSpeed. A medida que se aspira la muestra en la punta, la proteína objetivo se une a la resina, mientras que el resto de proteínas y contaminantes pasan a través de ella. La muestra se hace pasar repetidamente a través de la resina hasta alcanzar un equilibrio en la unión.

Purificación de la muestra de proteínas Análogamente al procedimiento de captura, varios lavados repetitivos eliminan las proteínas no específicas que queden sin unir y los contaminantes de la punta PureSpeed, de modo que la proteína objetivo concentrada queda unida al lecho de resina de afinidad.

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La E4 XLS de Rainin simplifica todo el procesoDomine la aplicación de purificación de proteínas con la pipeta electrónica E4 XLS de Rainin. Independientemente de si desea purificar una o varias muestras, la E4 XLS no solo le guiará a través del proceso de purificación, sino que también ejecutará automáticamente los pasos de captura, purificación y elución.

Selección del modoUna vez instalado, PureSpeed será un modo estándar en el menú circular de opciones de la E4 XLS.

Personalización del protocoloYa sea un volumen de muestras, una velocidad de flujo o un número de ciclos, se puede acceder fácilmente a todos los pasos del protocolo de purificación de proteínas y optimizarlos para aplicaciones específicas.

Ejecución del protocoloLos protocolos PureSpeed se aprovechan al máximo del panel de control intuitivo y fácil de usar de la E4 y de su estructura de menús circular. Las teclas de función de la E4 permiten al usuario recorrer todos los pasos de un protocolo.

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Las puntas para proteína PureSpeed ofrecen la mayor concentración de proteína pura en comparación con las técnicas tradicionales de columnas por gravedad y centrifugación.

En un experimento paralelo, se preparó y purificó una mezcla maestra de muestras mediante las técnicas habituales de columnas por gravedad y centrifugación, siguiendo las instrucciones del fabricante y con puntas para proteína PureSpeed. Al comparar las concentraciones y niveles de pureza finales, las puntas PureSpeed arrojaron resultados significativamente superiores.

Purificación IgG mediante PureSpeedExcelentes resultados con la E4 XLS

Experimento Lisado E. coli enriquecido con hIgG (Sigma-Aldrich®) hasta alcanzar una concentración final de 0,5 mg/mL. Se purificaron 100 μL o 500 μL de lisado mediante los protocolos PureSpeed y la pipeta Rainin E4 XLS recomendados. Como término de comparación, se llevaron a cabo experimentos de purificación similares con la misma materia prima y columnas por centrifugación tradicionales. Se aplicaron los protocolos recomendados por el fabricante para maximizar la pureza y la concentración. Se llevó a cabo un experimento similar en el que se usó un lisado E. coli enriquecido con 0,01 mg/mL de hIgG y purificado mediante columnas por gravedad tradicionales y puntas PureSpeed.

ResultadosLos geles mostrados contrapuestos en las imágenes 1 y 2 son geles de electroféresis Bis-Tris 4–12 % de NuPAGE® con solución amortiguadora de migración MES. De la elución total, se aplicó una muestra de 4 o 10 μL en cada gel. La recuperación y el rendimiento se calcularon mediante HPLC. Se recuperó hasta un 75 % de la masa IgG original mediante las puntas de proteínas PureSpeed, cuya pureza se comprobó que superaba el 95 %, como muestran los geles. Además, la concentración final de proteína eluida de las puntas PureSpeed era dos o tres veces superior a la de la muestra original de proteína inicial.

Tema de debateComparativamente, las columnas por gravedad y centrifugación emplearon un volumen de resina de afinidad mucho mayor y, aun así, obtuvieron concentraciones inferiores de un producto de menor pureza. Gracias a las puntas de proteínas PureSpeed, las muestras que generalmente quedaban reservadas para las columnas por gravedad presentan ahora las ventajas de un menor tiempo de manipulación y la capacidad de procesar hasta 12 muestras simultáneamente. Además, los investigadores pueden obtener rendimientos y concentraciones elevados con menos resina que la necesaria para preparar la amortiguación de una columna por gravedad, lo cual resulta en un ahorro importante de gastos.

La cuantificación de proteínas se llevó a cabo en 10 µL de eluyente final mediante HPLC. También se evaluó la masa total y la concentración final de proteína purificada (consulte las tablas).

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Figura 1

Gel NuPAGE en el que se observa el lisado E. coli enriquecido con 0,5 mg/mL de hIgG y purificado mediante columna por centrifugación y puntas PureSpeed.

Carril 1: Cadena de proteínas

Carril 2: Lisado E. coli enriquecido con hlgG

Carril 3: Flujo directo

Carril 4: Lisado de 100 mL purificado en columna por centrifugación con ProA de 200 µL

Carril 5: Lisado de 100 µL purificado en puntas PureSpeed con ProA de 5 µL

Carril 6: Lisado de 500 mL purificado en columna por centrifugación con ProA de 200 µL

Carril 7: Lisado de 500 µL purificado en puntas PureSpeed con ProA de 20 µL

Figura 2

Gel NuPAGE en el que se observa el lisado E. coli enriquecido con 0,01 mg/mL de hIgG y purificado mediante columna por gravedad y puntas PureSpeed.

Carril 1: Cadena de proteínas

Carril 2: Lisado E. coli enriquecido con hlgG

Carril 3: Flujo directo

Lane 4: Lisado de 5 mL purificado en columna por gravedad con resina ProA de 1 mL

Carril 5: Lisado de 5 mL purificado en puntas PureSpeed con ProA de 80 µL

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Tipo de columna/Volumen de resina/Volumen de muestra inicial

Volumen de elución (µL)

Concentración(mg/mL)

Rendimiento total(µg)

Columna por centrifugación (200 µL-100 µL) 434,1 0,08 35

Columna por centrifugación (200 µL-100 µL) 440,4 0,07 30

Columna por centrifugación (200 µL-100 µL) 441,1 0,06 26

Punta para proteínas de 200 µL PureSpeed (5 µL-100 µL) 15,4 1,45 22

Punta para proteínas de 200 µL PureSpeed (5 µL-100 µL) 16,6 1,35 22

Punta para proteínas de 200 µL PureSpeed (5 µL-100 µL) 17,3 1,45 25

Columna por centrifugación (200 µL-500 µL) 414,3 0,44 184

Columna por centrifugación (200 µL-500 µL) 423,0 0,49 207

Columna por centrifugación (200 µL-500 µL) 425,1 0,43 183

Punta para proteínas para 1000 µL PureSpeed (20 µL-500 µL) 70,1 1,92 134

Punta para proteínas para 1000 µL PureSpeed (20 µL-500 µL) 70,6 1,98 140

Punta para proteínas para 1000 µL PureSpeed (20 µL-500 µL) 79,4 1,73 137

Datos de HPLC que muestran la concentración final de proteínas y el rendimiento total obtenidos de las puntas PureSpeed y de las tecnologías de la competencia.

Tipo de columna/Volumen de resina/Volumen de muestra inicial

Volumen de elución (µL)

Concentración(mg/mL)

Rendimiento total (µg)

Columna por gravedad (1 mL-5 mL) 1000 0,002 2,1

Columna por gravedad (1 mL-5 mL) 1000 0,002 2,2

Punta para proteínas de 1000 µL PureSpeed (80 µL-5 mL) 294 0,11 32,3

Starter kit PureSpeed de Rainin contiene todo lo que necesita para comenzar a trabajar. Incluye la vanguardista pipeta electrónica E4 XLS, configurada con el protocolo de purificación automatizado, un manual de instrucciones y todos los accesorios que necesita para llevar a cabo purificaciones de proteínas.

De mililitros a microlitros…Purificación de proteínas extremadamente simplificada

Referencia MT Descripción

Puntas y accesorios PureSpeed

17012561 PT-2-A5 Resina ProA de 5 µL, punta de 200 µL, 12 puntas

17012562 PT-2-A20 Resina ProA de 20 µL, punta de 200 µL, 12 puntas

17012563 PT-2-G5 Resina ProG de 5 µL, punta de 200 µL, 12 puntas

17012564 PT-2-G20 Resina ProG de 20 µL, punta de 200 µL, 12 puntas

17012566 PT-2-N5 Resina IMAC de 5 µL, punta de 200 µL, 12 puntas

17012567 PT-2-N20 Resina IMAC de 20 µL, punta de 200 µL, 12 puntas

17012568 PT-10-A20 Resina ProA de 20 µL, punta de 1000 µL, 12 puntas

17012569 PT-10-A80 Resina ProA de 80 µL, punta de 1000 µL, 12 puntas

17012570 PT-10-G20 Resina ProG de 20 µL, punta de 1000 µL, 12 puntas

17012571 PT-10-G80 Resina ProG de 80 µL, punta de 1000 µL, 12 puntas

17012572 PT-10-N20 Resina IMAC de 20 µL, punta de 1000 µL, 12 puntas

17012573 PT-10-N80 Resina IMAC de 80 µL, punta de 1000 µL, 12 puntas

17012588 PT-ACC Accesorios PureSpeed

17012623 LR-P2-96P-5 Placa de 96 recipientes Deepwell de 2,2 µL

Starter kits PureSpeed

17012577 PT-S2-A20 Starter kit PureSpeed con E4-200XLS + ProA

17012578 PT-S2-G20 Starter kit PureSpeed con E4-200XLS + ProG

17012576 PT-S2-N20 Starter kit PureSpeed con E4-200XLS + IMAC

17012579 PT-S10-A20 Starter kit PureSpeed con E4-1000XLS + ProA

17012580 PT-S10-G20 Starter kit PureSpeed con E4-1000XLS + ProG

17012581 PT-S10-N20 Starter kit PureSpeed con E4-1000XLS + IMAC

Las puntas PureSpeed de Rainin solamente se adaptan a las pipetas E4 XLS con LTS. Rainin, Pipetting 360° y LTS son marcas comerciales registradas de Mettler-Toledo Rainin, LLC. E4, XLS y PureSpeed son marcas comerciales de Mettler-Toledo Rainin, LLC. NuPAGE es una marca comercial regis-trada de Invitrogen, Inc. Sigma-Aldrich es una marca comercial registrada de Sigma-Aldrich Company, LLC.

www.mt.com/raininSi desea más información

Mettler-Toledo Rainin, LLC7500 Edgewater Drive, Oakland, CA 94621 T: +1 510 564 1600F: +1 510 564 1604

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