I. Reactivacin de cepasSe reactivaron 12 cepas, las cuales fueron analizadas, se inocularon en medio lquido, caldo Casoy para Bacillus y caldo Nutritivo para Pseudomonas.-80C 12 cepas Se descongel las 12 cepas a 4C 4C

Caldo Casoy o Caldo nutritivo50uL

5mL

Incubadora

150 RPM 24 a 48 h 28C Shaker

II. Inoculacin en medio LMC + TriptfanoLuego de 48 horas despus de la reactivacin, se inocul las 12 poblaciones de bacterias en LMC ms triptfano.25uLLMC + triptofanoCaldo Casoy o Caldo nutritivo

5mL5mL

Incubadora

Refrigeradora

4C 150 RPM 48 h 28C Shaker

III. Tcnica colorimtricaInculo

Dispensar en la cmara y tomar fotos.Medir primero el blanco y ajustar. Tomar las medidas de cada muestraEspectrofotmetroCalibrarlo a 530nmEsperar 30 minutos Despus de la adicin.Adicionar 1mL del reactivo de Salkowski, a cada tubo de ensayo en condiciones de oscuridad, incluyendo a nuestro blancoHabitacin oscuraTubos de ensayo250 uL250 uLMicrocentrfugaTubos EppendorfTemperatura ambiente 12000 RPM por 5 minutosCada inculo por duplicado500 uL48 h500 uL

Inoculacin de las bacterias en LMC + triptfano C5C4C1C2C3C1: Huaral Bac 01-25 C2: Huaral Bac 01-37 C3: Huaral Bac 01-85 C4: Huaral Bac 01-84 C5: Huaral Bac 01-82

C6: Huacho Bac 01-37 C7: Huacho Bac 01-13 C8: Huacho Bac 01-32 C9: Huacho Bac 01-34 C10: Huacho Bac 01-36 C11: Huacho Ps 01-1 C12: Huacho Bac 01-35

Fuente: Laboratorio de Ecologa Microbiana y Biotecnologa-UNALM

C12C8C6

C11C10C9C7

Fuente: Laboratorio de Ecologa Microbiana y Biotecnologa-UNALM

Comparacin de color en cmaraControlA7A12A11A10A9A8A6A5A4A3A2A1

A1: Huacho Bac 01-37 A2: Huaral Bac 01-25 A3: Huacho Bac 01-35 A4: Huaral Bac 01-82 A5: Huaral Bac 01-84 A6: Huaral Bac 01-85 A7:Huacho Bac 01-32 A8: Huacho Bac 01-13 A9: Huacho Bac 01-37 A10: Huacho Bac 01-34 A11: Huacho Bac 01-36 A12: Huacho Ps 01-1Control: LMC + triptfano + SalkowskiFuente: Laboratorio de Ecologa Microbiana y Biotecnologa-UNALM