REPORTE DE PRACTICA DE IDENTIFICACION DE

PROTEINAS.

Bioquímica.

Integrantes:

Camacho Luna Vanessa.

Cornejo López Karla Geraldine.

Esquivel Fonseca Jennifer

Esmeralda Hernandez Rudy Alejandro

Gonzales López Marisol.

OBJETIVO:

Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la

identificación por el reactivo BIURET.

Identificar la presencia de proteínas en diversos alimentos por medio de la

reacción de Biuret, observando la desnaturalización de una proteína

Adquirir información acerca de las propiedades físicas y químicas de las proteínas

Comprobar la solubilidad de las proteínas en diferentes solventes

INTRODUCCIÓN:

Las proteínas son elementos vitales para los organismos, encontrándose en

plantas y animales en una proporción elevada. Hay una gran variedad de

proteínas y cada una desempeña una función biológica específica que puede ser

de reserva, de sostén, transporte, estructural, etc. Químicamente las proteínas

están constituidas por combinaciones complejas de carbono, hidrogeno, oxigeno,

nitrógeno y otros elementos en menor proporción como son azufre cobre y fosforo.

Cuando la estructura de la proteína se desorganiza, se dice que se encuentra

desnaturalizada y esto trae como consecuencia la perdida de la actividad

biológica. La desnaturalización puede lograrse por medios físicos como el calor o

químicos como una variación de pH, observándose una disminución en la

solubilidad y la formación de un coagulo. Este método es utilizado para demostrar

la presencia de proteínas. También se puede identificar proteínas mediante el uso

de sustancias que al ponerse en contacto con ellas, producen una coloración

específica, tal es el caso de la Reacción de Biuret.

La reacción debe su nombre al Biuret, una molécula formada a partir de dos de

urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción

la presencia de proteínas. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución

acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de una

compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación

entre iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que

forman parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a

540nm.

MARCO TEORICO:

Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por

aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones

vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta

inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes

principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los

animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero.

El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las

proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas;

c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a

su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda

mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.

La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en

muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2

tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio

sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el

primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en

cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más

cómoda.

Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido

conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar

la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso

molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus

órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de

las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo

para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también

proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de

los hidratos de carbono.

Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás

hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.

REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

MATERIAL

1 gradilla

pescado, espinaca, levadura,

Tubos de ensaye

Albúmina, grenetina y caseína

REACTIVOS

NaOH al 10%

Sulfato cúprico al 1% en gotero

PROCEDIMIENTO

1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).

2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.

3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de

un color rosa o violeta (máximo 10 gotas).

4. Reportar a que gota aparece el color.

REACCION XANTOPROTEICA

MATERIAL REACTIVOS

Tubos de ensaye proteínas

Gradilla NaOH concentrado (gotero)

Baño maría HNO3 concentrado

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.

2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.

3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.

4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él

vire de color. Observar y reportar resultados.

Resultados:

Espinacas 10 gotas

Levadura 7 gotas

Grenetina 10 gotas

Pescado 4 gotas

Leche 4 gotas

Huevo 4 gotas

REACCION XANTOPROTEICA

MATERIAL REACTIVOS

Tubos de ensaye proteínas

Gradilla NaOH concentrado (gotero)

Baño maría HNO3 concentrado

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.

2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.

3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.

4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él

vire de color. Observar y reportar resultados.

Mis proteínas

Resultado

Proteínas Cantidad de

gotas

Color

Espinaca 10 No cambio

Levadura 8 Anaranjado

Leche 10 Cambio a un

poco anaranjado

Pescado 7 Anaranjado

Greatinina 9 Cambio muy

poco anaranjado

muy bajo

COAGULACIÓN POR CALOR

MATERIALES: 16 tubos de ensaye Acido acético al 1%

Gradilla Acetona

Baño maría Éter Tetracloruro de carbono

Butanol Proteínas

NaOH concentrado con gotero

PROCEDIMIENTO:

1. Calentar o hervir 5ml de solución de proteínas

2. añadir 2 gotas de ácisdo acético al 1%

3. colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente manera. Tubo 1= 1 ml de acetona

Tubo 2= 1 ml de éter Tubo 3= 1 ml de butanol Tubo 4= 1 ml de tolueno

4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla. 5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH

concentrado y agitar. 6. Observar y anotar diferencias.

RESULTADOS:

Espinacas Levadura Grenetina Pescado Clara de huevo

Acetona Si Si Si Si No

Éter Si Si Si Si No

Butanol No Si No Si No

Tolueno No Si No Si No

DESPUÉS DE AÑADIR EL NaOH:

Espinacas Levadura Grenetina Pescado Clara de huevo

Acetona No

Éter Si

Butanol No No No

Tolueno No No No

OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE

MATERIAL REACTIVOS

2 vasos de precipitados de 250ml leche entera

1 probeta de 100ml HCl 0.2N

1 embudo acetona

2 papel filtro éter

PROCEDIMIENTO

1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado

2. Agregar 100ml de agua destilada

3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8

4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.

5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.

6. Repetir este lavado 4 veces.

7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la

proteína.

8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar

y filtrar. Repetir 4 veces.

9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de

acetona, y filtrar.

10. Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el

polvo 24 horas después.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

.

OBSERVACIONES:

Se observa que con las veces que decantamos la leche, esta se fue haciendo un

poco más clara cada vez, también vimos que se forma un "queso" solo que es un

poco más aguado, es decir no tiene aún la consistencia de tiene un queso.

OBERVACIONES

La práctica es un poco tediosa, por lo cual los alumnos no debemos de perder el

tiempo al momento de realizarla. Para la práctica necesitamos reactivos

peligrosos, por lo cual también debemos de tener mucho cuidado al momento de

utilizar los reactivos para no dañarnos a nosotros ni a quienes tenemos a nuestro

alrededor. Debemos de darle un buen uso al material del t no estar jugando

dentro del laboratorio para evitar accidentes.

Los resultados de nuestra práctica fueron beneficiosos para saber sobre las

reacciones como el reactivo de BIURET en su configuración y la identificación de

las proteínas.

CONCLUCIONES

El objetivo de la práctica fue logrado exitosamente por el equipo. Se logro realizar

las 4 prácticas con resultados satisfactorios. La identificación de las proteínas por

las reacciones y observar sus fue también logrado ya que, lo alumnos pudimos

determinar las proteínas y el motivo de aquellos resultados logrados.

Pudimos observar como en el caso de la segunda práctica como es que

reaccionan las proteínas (algunas) como es provocan un cambio de color gracias

a la reacción de NaOH concentrado (gotero) y HNO3 concentrado.

Mencionado nada mas como un ejemplo de las cuatro prácticas realizadas sobre

la identificación de las proteínas.

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?

Se observa que sus características, y pueden cambiar de coloración, o

precipitarse, o coagularse, o volverse solubles en agua, o insolubles, o volverse

rígidas, o volverse blandas.

2. Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

NHO3 , NaHO,

3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

Realizando la prueba de biuret,así sabremos si es una proteína o no

4. Que coloración da la reacción del Biuret?

Morado,y hay de diferentes tonos hasta llegar al lila.

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?

Si,el reactivo reacciona con cualquier PROTEINA ya sea solida o liquida.

6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es

positiva o negativa? ¿Por qué? Será negativa porque si analizamos un solo

aminoácido, no hay ningún enlace peptídico puesto que este enlace se da entre

dos aminoácidos, y la reacción de Biuret va a dar positivo cuando exista enlace

peptídico (CO-NH) coordinándose con él el Cu en medio alcalino

7. Explica la reacción Xantoproteíca.

es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas

solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da

resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos

aromáticos, especialmente en presencia de tirosina.