Seminario Eco3
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ANÁLISIS DE LA CALIDAD DEL AGUA II
DETERMINACIÓN MICROBIOLÓGICA
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS
BIOLÓGICASDEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE ECOLOGÍA MICROBIANA
EQUIPO 3 SEC 1• AGUIRRE CARBAJAL ITZEL
ALEJANDRA• GARCÍA FLORES MIGUEL ANGEL
EQUIPO 3 SEC 2• ANGUIANO AVIÑA
FERNANDO• GARCÍA URIBE TANIA
NAYELI
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OBJETIVO
En una muestra obtenida de un cuerpo de agua determinar en base a la norma oficial mexicana de análisis NMX-AA-042-1987el número más probable (NMP): Microorganismos coliformes totales Microorganismos coliformes fecales
termotolerantes Escherichia coli presuntiva .
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ANÁLISIS MICROBIÓLOGICO DEL AGUAAGUA
Vehículo de microorganismos patógenos causantes de enfermedades.
ENTEROPATÓGENOS
BACTERIAS• Salmonella• Shigella• VibrioPROTOZOARIOS• Entamoeba
histolyticaVIRUS• Hepatitis• Polio
• Causantes de diversas enfermedades
• Dificultad en su aislamiento
COLIFORMES
• Escherichia coli
• Klebsiella spp
• Citrobacter sp
• Enterobacter sp
• Bacilos cortos• G(-)• Aerobios o anaerobios
facultativos• No esporulados• Fermentadores de
lactosa • Productores de gas
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TABLA 1.-CRITERIOS ECOLÓGICOS DE LA CALIDAD DEL AGUA
FUENTE NMP*/100mL
Abastecimiento para potabilización de agua
1000
Riego agrícola 1000
Agua dulce <200
Agua Marina <200
Recreativo en contacto directo <200
Agua potable <2
*de organismos coliformes totales Gaceta Ecológica. Enero de 1990. CE-CCA-001/89
De acuerdo a estos criterios la muestra obtenida de las cascadas de Atlihuetzia que es clasificada como agua dulce debe presentar valores menores a 200 UFC/100 mL
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DETERMINACIÓN DEL NÚMERO MAS PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli PRESUNTIVA
Se basa en la Norma Mexicana de análisis. NMX-AA-042-1987
Método para la detección y enumeración en agua de los m.o. antes mencionados mediante el cultivo en un medio liquido en múltiples tubos y el cálculo de sus NMP
Es aplicable para todo tipo de agua Las pruebas usadas en la detección y confirmación
puede verse como parte de una secuencia continua. De acuerdo al uso que se dará a la muestra será el
número de pasos.
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FUNDAMENTO
La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a 35°C ± 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares.
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PRUEBA PRESUNTIVA
Inoculación de alícuotas de la muestra, diluida o sin diluir, en caldo lactosado
37° C / 24 y 48 hrs,
Turbidez y producción de gas son positivos para coliformes
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CALDO LACTOSADO Es un caldo rico en nutrientes, que no contiene algún
tipo de inhibidor, contiene la siguiente formulación:
FÓRMULA (en gramos por litro)Extracto de carne.........3.0.
Peptona............5.0.
Lactosa...........5.0.
Usado como prueba presuntiva de la presencia de bacterias del grupo coliforme en agua, se usa con concentración doble debido a que es una muestra muy contaminada, para asegurar el crecimiento de los microorganismos presentes en la muestra
Fuente de C y N2
C ---- fermentable
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Como producto de la fermentación de la lactosa se produce finalmente acido y gas, evidenciado en la campana de Durham.
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PRUEBA CONFIRMATIVA
La resiembra de los tubos positivos de la prueba presuntiva en tubos con caldo BLVB
Crecimiento con producción de gas es + para coliformes totales.
A 37⁰ por 48 hrs
Desarrollo con producción de gas es + para termotolerantes.
44⁰C por 48 hrs
En el mismo medio
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Se emplea como medio de cultivo caldo lactosa verde brillante bilis
por ser selectivo ya que solo permite el desarrollo de aquellos
microorganismos que toleran tanto las sales biliares como el
verde brillante.
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CALDO TRIPTONA Formula(g/L)
TRIPTONA .....10.0
CLORURO DE SODIO ....5.0
El triptófano es un a.a que puede ser oxidado por ciertas bacterias para
formar 3 metabolitos, el indol, escatiol, y el indolacetico
La triptona presenta alto contenido en triptófano, el cual
es el sustrato utilizado por los microorganismos para la producción
de indol, ácido pirúvico y amoníaco.
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Reactivo de Kovacs
p-dimetilamino benzaldehído 5gAlcohol amílico 75 mlHCl concentrado 25 ml
+ Complejo colorido rojizo
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PRUEBA COMPLETA
De tubos positivos de BLVB sembrar por estría cruzada en EMB
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MEDIO EMB
FORMÙLA Peptona ..........................................10.0. Lactosa.............................................5.0. Sacarosa............................................5.0. Fosfato Di potásico ............................2.0. Eosina.............................................0.4. Azul de metileno.............................0.065. Agar ................................ 13.5. pH final: 7.2 ± 0.2
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FUNDAMENTO
Medio selectivo y diferencial. Azul de metileno y eosina inhiben Gram
positivos Lactosa y sacarosa permiten desarrollo
de Enterobacterias que los utilizan. Escherichia coli colonias verde metálico Lactosa positivo colonias rosas claro con
centro negro Lactosa negativo colonias incoloras
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FILTRACIÓN A TRAVÉS DE MEMBRANA
En base a la Norma mexicana de análisis NMX-AA-102-1987 se determina el número de coliformes totales presentes en el agua mediante la filtración de volúmenes específicos de la muestra a través de filtros de membrana. Están compuestos de ésteres de celulosa, con poros de 0,45 mm de diámetro que retienen los coliformes totales y otras clases de bacterias presentes en la muestra.
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TABLA 2.-VOLUMEN DE AGUA A ANALIZAR
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Se utiliza el Medio Endo para el recuento de coliformes totales. El lauril sulfato y desoxicolato que forman parte de la fórmula del medio permite crecer a los coliformes lactosa positivo pero inhibe el crecimiento del resto de bacterias acompañantes.
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Las colonias lactosa positivo se colorean de rojo por la liberación de fucsina del sulfato de fucsina. Las colonias de E. coli y de los coliformes muestran generalmente un brillo metálico.
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GRÁFICA 1.- RESULTADOS NMP SEC 1
Equi
po 1
Equi
po 2
Equi
po 3
Equi
po 4
Equi
po 5
Equi
po 6
Equi
po 7
0
500
1000
1500
2000
2500
NMP organismos col-iformes totalesNMP organismos Col-iformes fecalesNMP Escherichia coli Presuntiva NMP Escherichia coli completa
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GRÁFICA 2.- RESULTADOS NMP SEC 2
1 2 3 4 5 6 70
500
1000
1500
2000
2500
NMP Organismos Col-iformes Totales/100mLNMP Organismos Col-iformes Fecales/100mLNMP Escherichia coli Presuntiva/100mL
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TABLA 3.-RESULTADOS SECCIONES 1 Y 2 Número más probable de Microorganismos
Coliformes Totales en Muestras de Agua
EqupoNúmero
característicoSec 1
NMP organismos coliformes
totales /100mLSec 1
Número característico
Sec 2
NMP Organismos Coliformes
Totales/100mLSec 2
1 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
2 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
3 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
4 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
5 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
6 3/3/3 ≥2400 2, 2, 0 21
7 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
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TABLA 4.-NÚMERO MÁS PROBABLE DE MICROORGANISMOS COLIFORMES FECALES
EN MUESTRAS DE AGUA
Equipo/EstaciónNúmero
característicoSec 1
NMP organismos Coliformes
fecales /100mLSec 1
Número característico
Sec 2
NMP Organismos Coliformes
Fecales/100mLSec 2
1 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
2 3/3/3 ≥2400 3, 3, 2 1100
3 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
4 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
5 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
6 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
7 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
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TABLA 5.-NÚMERO MÁS PROBABLE EN PRUEBA PRESUNTIVA PARA ESCHERICHIA COLI EN MUESTRAS
DE AGUA
Equipo/Estación
Número característico
Sec 1
NMP Escherichia coli Presuntiva
/100mLSec 1
Número característico
Sec 2
NMP Escherichia coli Presuntiva/100mL
Sec 2
1 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
2 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
3 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
4 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
5 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
6 3/3/3 ≥2400 3, 3, 3 ≥2400
7 3/3/3 ≥2400 2, 1, 0 15
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TABLA 6.-PRUEBA COMPLETA PARA ESCHERICHIA COLI EN MUESTRAS DE AGUA EN AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
Equipo/ Estación Prueba completa EMB Sec 2
1 10 -1 -0.1 +
2 10 -1 +0.1 +
3 10 +1 +0.1 +
4 10 -1 -0.1 +
5 10 -1 +0.1 +
6 10 +1 +0.1 -
7 10 -1 -0.1 +
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TABLA 7.-PRUEBA COMPLETA PARA ESCHERICHIA COLI EN MUESTRAS DE AGUA.
Sec 1Equipo
Número característicoNMP Escherichia coli
completa /100mL
1 3/3/3 ≥2400
2 3/3/3 ≥2400
3 2/3/3 53
4 2/3/3 53
5 1/3/3 29
6 3/2/1 150
7 3/3/3 ≥2400
![Page 28: Seminario Eco3](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022062519/55cf9335550346f57b9cbf91/html5/thumbnails/28.jpg)
CONCLUSIONES
En base a las normas mexicanas de análisis NMX-AA-042-1987, NOM-127-SSA1-1994 y a los criterios ecológicos de la calidad del agua publicados en la Gaceta ecológica de Enero de 1990 CE-CCA-001/89 la calidad microbiológica del agua muestreada es mala superando por mucho los niveles máximos estipulados, por lo que, no es apta para consumo humano u animal, sin embargo, si es tratada puede ser utilizada como agua de riego.
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BIBLIOGRAFÍA
Gaceta Ecológica Enero 1990 Críterios Ecológicos de la Calidad del Agua CE-CCA-001/89
Atlas, R.M. & Bartha, 2003. Ecología microbiana. Fundamentos y aplicaciones. Addison Wesley Massachusets.
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/127ssa14.html
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/gacetas/191/criterios.html