Separación e Identificación de Aminoácidos de Jugos de Frutos

7/18/2019 Separacin e Identificacin de Aminocidos de Jugos de Frutos

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INSTITUTO POLITCNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

ANTECEDENTES

La cromatografa (chromo= color y graphie=escritura, escribir encolores) fue inventada el 1903 por el botnico ruso !i"hail #s$ett%&smailov y 'craiber utiliaron lminas de vidrio para colocar capas muydelgadas de almina y luego aplicaron e*tractos vegetales, dando as laprimera forma de cromatografa de capa +na% gon 'tahl (19-.) di/ elnombre de cromatografa de capa +na, estandari/ los procedimientos,euipos y adsorbentes dando un auge a esta tcnica simple,econ/mica y e+ciente%

FUNDAMENTOLa cromatografa en capa +na (en ingls thin layer chromatography o#L2) es una tcnica analtica rpida y sencilla ue permite4 5eterminar el grado de purea de un compuesto% 'e puede determinaras, por e6emplo, la efectividad de una etapa de puri+caci/n%4 2omparar muestras% 'i dos muestras corren igual en placa podran seridnticas% 'i, por el contrario, corren distinto entonces no son la mismasustancia%4 7ealiar el seguimiento de una reacci/n% s posible estudiar c/modesaparecen los reactivos y c/mo aparecen los productos +nales o, lo

ue es lo mismo, saber cundo la reacci/n ha acabado%l fundamento de la separaci/n implica ue los aminocidos cuyacadena lateral (7) tenga un carcter ms apolar, tendrn tendencia adesplaarse con la fase m/vil, mientras ue los aminocidos ue seanpolares, ya sean con carga o sin carga, sern retenidos por la faseestacionaria% llo es as, porue la fase m/vil est formada por solventesue son ms apolares ue el agua, ue es el solvente de la faseestacionaria%

8na mecla comple6a ue no se separa por completo en un solocromatograma, usa la cromatografa bidimensional%

asada en el principio anterior, con la diferencia en la tcnica,la muestra se aplica en una esuina y el cromatograma se corre enforma paralela a uno de los bordes del papel, al terminar elprimer cromatograma la ho6a se rota 90: y se realia una cromatografaparalela al segundo borde utiliando otro sistema de solventes% 5adoue cada compuesto migra a una velocidad caracterstica en un sistema

;rctica


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de solventes determinado, la segunda cromatografa deberaincrementar en grado sustancial la separaci/n de la mecla decomponentes%

Los dos adsorbentes (faseestacionaria) ms ampliamenteutiliados son la gel de slice('i>?) y la almina (l?>3),ambas de carcter polar% Laalmina anhidra es el msactivo de los dos, es decir, es el

ue retiene con ms fuera a loscompuestos@ por ello se utiliapara separar compuestosrelativamente apolares(hidrocarburos, haluros de

aluilo, teres, aldehdos y cetonas)% l gel de slice, por el contrario, seutilia para separar sustancias ms polares (alcoholes, aminas, cidoscarbo*licos)% l proceso de adsorci/n se debe a interaccionesintermoleculares de tipo dipolo4dipolo o enlaces de hidr/geno entre elsoluto y el adsorbente% l adsorbente debe ser inerte con las sustanciasa analiar y no actuar como cataliador en reacciones de

descomposici/n% l adsorbente interacciona con las sustancias medianteinteracci/n dipolo4dipolo o mediante enlace de hidr/geno si lopresentan%#ras la eliminaci/n del disolvente, se determina la posici/n de loscomponentes con un reactivo de revelado (ninhidrina), y se determina laposici/n de cada mancha relativa al frente alcanado por el solvente,calculndose el correspondiente valor de 7f% La identi+caci/n de talescompuestos se suele realiar comparando sus 7f con los de compuestosde referencia (patrones) de naturalea umica conocida%

Rf= Frente o distania de! so!"to

Frente o distania de! diso!#ente

OB$ETI%O

;rctica


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'eparar los aminocidos presentes en el 6ugo del 6itomate por

cromatografa bidimensional en capa +na% &denti+car los aminocidos separados por comparaci/n de susvalores de 7f con los de soluciones tipo de aminocidos%

2omparar el grado de resoluci/n de la cromatografabidimensional, con el de la unidimensional%

RESULTADOS&n cada placa cromatografa se observan manchas de diferentestamaAos correspondientes a cada uno de los aminocidos y a diferentesdistancias% 5e acuerdo a la relaci/n de migraci/n para las sustanciasau utiliadas se obtuvieron los siguientes valores de 7f para cada una

de ellas%

Fi'"ra (& 2romatograma 1 8nidimensional% Base m/vil cloroformoCmetanolCamoniaco, deiuierda a derecha% minocidos rginina, Lisina, Dlutamina, Eistidina, Dlicina, ;rolina,!etionina, Benilalanina, #riptofano, #irosina%

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Fi'"ra )&2romatograma ? 8nidimensional% Base m/vil utanolCcido acticoCagua, de iuierdaa derecha% minocidos rginina, Lisina, Dlutamina, Eistidina, Dlicina, ;rolina, !etionina,Benilalanina, #ript/fano, #irosina%

Fi'"ra *&2romatograma 3 idimensional de aminocidos tipo% Base m/vil & cloroformoCmetanolCamoniaco% Base m/vil && butanolCcido acticoCagua%

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Fi'"ra +&2romatograma F idimensional del 6ugo de 6itomate% Base m/vil & cloroformoCmetanolCamoniaco% Base m/vil && butanolCcido acticoCagua%

Ta,!a (- Cro.ato'ra.as "nidi.ensiona!es ti/o desarro!!ados en!as ) fases .0#i!es-

A.ino1ido

(2- Fase M0#i!Cro.ato'ra.a (

)2 Fase M0#i! Cro.ato'ra.a)

Frente de!so!"t

o

Frente de!diso!#ente

Rf Frentede!

so!"to

Frentede!

diso!#ente

Rf

Ar'inina3Ar'4

1%- G%H 0%19?3 1%F G%9 0%1GG?

Lisina 3L5s4 ?%F G%H 0%30G. 1%? G%9 0%1-1H

G!"ta.ina

3G!"4

?%H G%H 0%3HF. 3%3 G%9 0%F1GG

G!iina 3G!54 3%H G%H 0%FHG1 ?%. G%9 0%3?91

Pro!ina 3Pro4 F%3 G%H 0%--1? ?%G G%9 0%3F1G

Tri/t0fano3T6r4

F%- G%H 0%-G.9 3%? G%9 0%F0-0

7istidina37is4

F%H G%H 0%.1-3 1%- G%9 0%1H9H

Tirosina 3T5r4 -%1 G%H 0%.-3H F%G G%9 0%-9F9

Metionina3Met4

.%F G%H 0%H?0- F%H G%9 0%.0G-

Feni!a!anina3P6e4

.%H G%H 0%HG1G -%3 G%9 0%.G0H

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o so!"to e

Lisina L5s 1%0 G%H 0%1?H? 1%0 G%9 0%1?.-Ar'inina Ar' 1%3 G%H 0%1... 1%? G%9 0%1-1H7istidina 7is 1%. G%H 0%?0-0 ?%? G%9 0%?GHFG!iina G!5 ?%0 G%H 0%?-.F ?%- G%9 0%31.FTri/t0fano

T6r?%- G%H 0%3-H9 ?%G G%9 0%3F1G

G!"ta.inaG!"

?%H G%H 0%39GF ?%9 G%9 0%3.G0

Torosina T5r- 3%1 G%H 0%.0?- 3%1 G%9 0%39?FMetionina

Met-F%G G%H 0%.1-3 3%H G%9 0%FH10

Feni!a!anina

P6e

F%H G%H 0%.9?3 -%3 G%9 0%.G0H

Ta,!a +- Cro.ato'ra.a ,idi.ensiona!es /ro,!e.a 3I%4desarro!!ado en !as ) fases .0#i!es-

Rf reiente en !a (2fase .0#i!

Rf en !a )2 Fase.0#i!

A.ino1idoorres/ondiente

8-()9) 8-():; Lisina L5s8-(::: 8-(;(9 Ar'inina Ar'8-);:+ 8-)


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;rolina, #ript/fano, Eistidina, #irosina, !etionina, Benilalanina) paracomparar su valor de factor de retardo (7f) y el color de la mancha delestndar al ser revelada con agentes umicos, conlos datos e*perimentales obtenidos%La mayora de los aminocidos pudo identi+carse en cada una de lasplacas desarrolladas gracias al revelado ue se hio con una soluci/n deninhidrina@ ya ue esta reacciona debido a la presencia del grupo IJ


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Benilalanina%

PREGUNTAS E>TRAS&1%C &nvestigar en la literatura los aminocidos ue contiene el 6ugoempleado como problema% 2ompare con sus resultados y concluya%


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3%C Ns posible cambiar el orden de las fases m/vilesO

'i es posible cambiar el orden, siempre y cuando realicemos laeliminaci/n de la primera fase m/vil con aire caliente para no causarproblemas a la segunda@ ya ue la separaci/n de los aminocidos de6ugo se da en cuanto a las polaridades de cada uno%

F%C &ndiue las posibles fuentes de error en esta tcnica%C


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'"oog, 5ouglas %, 2rouch, B% Pames Ealler%, Q;rincipios de nlisis&nstrumentalR% 'e*ta dici/n% 2engage Learning% !*ico, ?00H% pg H-1

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httpSSbiomodel%uah%esStecnicasScromSinicio%htm

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httpSS$$$%cromlab%esSreacTderTaaTninhydrin%htm

httpSS$$$%uimicaorganica%orgSforoS1CintroduccionCaClaCuimicaC

organica

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