Sin título de diapositiva - Facultad de Agronomía | … Biotecnologia … · · 2011-10-26•...
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Sumario
Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Conclusiones
Producción de embriones in vitro
Criopreservación
Introducción
Inseminación artificial
Superovulación / Transferencia de embriones
Micromanipulación
Referencias
Transgénesis
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Inseminación artificial
Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
La inseminación artificial es la técnica reproductiva mas difundida
Oviducto
Sitio de fertilización
Unión útero-tubal
Útero
CervixVagina
107 105 103
102
Gradiente en el número de espermatozoides viablesdespués del servicio en el tracto genital de la hembra
Técnica de inseminaciónartificial en el ganado bovino:
- Simple- De bajo costo- Efectiva
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
• Aumento del progreso genético- Aumento de la eficiencia de estimación del valor . genético (ensayo de progenie)
- Uso intensivo de un macho de alto valor genético
- Rápida difusión de la genética superior
• Control de enfermedades venéreas
• Eliminación de costos asociados al toro
• Uso de machos incapacitados
• Transporte y conservación prolongada de material genético
• Utilización de semen sexado
Ventajas y aplicaciones de la inseminación artificial
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Producción de semen en el ganado bovino
Región Centros de
colección de semen
TorosDosis
producidas frescas
Dosis producidas congeladas
África 18
69
71
188
17
239
602
55.204 1.484.850
Norteamérica
646
9.627
530
9.228
268
19.803
0 43.270.500
Sudamérica 0 5.917.269
Europa 2.694.903 115.176.785
40.102
Lejano Oriente 8.874.920 63.938.027
Oriente Medio 16.794 2.559.640
Total 11.641.821 232.347.071Adaptado de: Vishwanath, Theriogenology, 2003.
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Inseminación artificial con semen sexado
Especie Diferencia X-Y (%)
Humana 2,8
Porcina 3,6
Equina 3,7
Canina 3,9
Bovina 3,8
Ovina 4,2Adaptado de: Johnson and Welch, Theriogenology, 1999.
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
El uso de semen sexado para inseminación artificial de bovinos es aún limitado
• Alto costo de la tecnología- Utilización de semen fresco (no criopreservado)- Separación de 1x107 espermatozoides de cada sexo por hora con una pureza de 90%
- Equipamiento costoso
• Menor fertilidad- Dosis de inseminación reducidas (2x106)- Espermatozoides con reducida fertilidad
• Utilización de semen sexado- Test de progenie- Aumento de la presión de selección- Asociado con otras tecnologías (superovulación y transferencia de embriones, fertilización in vitro)
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Superovulación / Transferencia de embriones
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La superovulación y transferencia de embriones permite incrementar la tasa reproductiva de hembras de alto valor genético
Superovulación
Recuperaciónde embriones
Receptoras
Sevicio natural o inseminación
artificial
Crías de la donante
Donante
Transferenciade embriones
Superovulación
Recuperaciónde embriones
Receptoras
Sevicio natural o inseminación
artificial
Crías de la donante
Donante
Transferenciade embriones
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Las respuestas a los tratamientos superovulatorios son muy variables
Hormonas utilizadas:
• Gonadotrofinas extraídas de la hipófisis de porcinos u ovinos (pFSH y oFSH)
- Relación FSH/LH variable- Vida media corta, múltiples aplicaciones- Riesgo de Encefalopatía Espongiforme Bovina (EEB)
• Gonadotrofina de yegua preñada (eCG)- Vida media larga, anticuerpos anti-eCG
• Gonadotrofina de la menopausia humana (hMG)
- Alto costo
• FSH y LH recombinante- Alto costo
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Desarrollo y tránsito embrionario en el tracto genital
Día 0 = Celo
Día 1
Día 2 Día 3Día 4 Día 5
Día 6-8
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Morfología embrionaria
Embriones bovinos día 4 Embriones bovinos día 8
Tomado de: Lattanzi et al., Biol. Reprod., 2003.
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
La recolección de embriones se realiza por medios no quirúrgicos
• Circuito cerrado con flujo continuo• Catéter de 3 vías
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Instrumental utilizado para la recolección no quirúrgica
Vagina
Salida de fluido
Entrada de fluido CérvixEntrada de fluido
(1o vía)
Salida de fluido(3o vía)
Entrada de aire(2o vía)
• Catéter de 2 vías: flujo discontinuo
• Catéter de 3 vías: flujo continuo
Entrada y salida de fluido(1o vía)
Entrada de aire
(2o vía)
Entrada y salida de fluido
Balón con aire
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Búsqueda y evaluación de los embriones en el laboratorio
Blastocistos en diferentes estadios
Filtro para retener embriones
Lavado de los filtros
Búsqueda de embriones
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Manejo sanitario de los embriones
Interacciónpatógeno-
embrion
Lavado de embriones
Embriones no aceptables
C
A B
zona pelúcida
patógeno
A B C
A
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Transferencia no quirúrgica de embriones
Pajuelas (0,25 ml) empleadaspara la transferencia (Mintüb, Alemania).
Catéter y puntasplásticas estérilesdescartables. (Minitüb, Alemania)
Catéter de transferencia metálico (Mintüb, Alemania)
Cargado de la pajuela empleada para la transferencia
Embrión en mediode cultivo
Aire
Medio de cultivo
Medio de cultivo
AireAlgodón
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Aplicaciones de la transferencia de embriones • Aumento del progreso genético
- Aumento de la presión de selección- Reducción del intervalo generacional
- Difusión de la mejora genética
• Control de enfermedades
• Importación-exportación
• Conservación de especies en peligro de extinción
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Producción de embriones in vitro
Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Producción de embrionesin vitro Recolección de ovocitos
Ovarios de matadero
Animales vivos (OPU)
Maduración in vitro
Fertilización in vitroDescongelado y capacitación de los espermatozoides
Cultivo in vitro
Transferencia de embriones
Criopreservación
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Recolección de los ovocitos
• Obtención de ovocitos a partir de animales sacrificados para consumo
- Progreso genético mínimo- Garantía sanitaria escasa- Uso en Investigación
Aspiración de los folículos antrales Complejos cúmulus-ovocito Lavado de ovarios
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Maduración nuclear y maduración citoplasmática
• Expansión del cúmulus
• Reinicio de la meiosis
24hs24 h24hs24 h
Vesicula germinal Metafase I Metafase II10-12 h 10-12 h
CP
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Maduración nuclear: reinicio de la meiosis
Inhibidor de la meiosis
Inhibidor de la meiosis
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Evolución de los niveles de MPF y MAP-quinasa.
MPF
MAP-Kinasa
Vesículagerminal
Ruptura de la vesícula germinal
Metafase I Metafase II1er Cuerpo
polar
FertilizaciónOvulación
Pico pre-ovulatoriode LH
Remocióndel ovocitodel folículo
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Fertilización in vitro
Antes de la centrifugación
Después de la centrifugación
Coincubación de ovocitos y
espermatozoides
Semen
45%Percoll
90%Percoll
Diluyente
Espermato-zoides no motiles
Espermato-zoidesmotiles
Gradiente de Percoll
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Activación del ovocito y bloqueo espermático
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Fertilización, descondensación de la cromatina y formación de pronúcleos
1er CP 1er CP 1er CP
2do CP2do CP
Pronúcleos
Segregación de cromosomas homólogos
Descondensación de la cabeza del espermatozoide
Formación de pronúcleos y singamia.
Pronúcleos
Espermatozoidedescondensándose
en el citoplasma
1er CPEspermatozoide que no penetró la zona pelúcida
1er y 2do CP
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Los ovocitos fertilizados se cultivan in vitro por 8 días
Estadiopronuclear
Embrión de2 células
Embrión de 4 - 8 células
Mórula Blastocistoexpandido
Blastocistoprotruído
• Desarrollo de embriones in vitro
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Transferencia de embriões no Brasil
0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006
Ano base
Embr
iões
tran
sfer
idos
FIV TE Total
Fonte: Viana & Camargo, in press
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Sistemas para el cultivo de embriones in vitro
• Co-cultivo: relacionado a altos índices de anormalidades . al nacimiento (mayor tamaño, distocia, malformaciones).
- Concentración de O2: 20%
- Medio de cultivo: TCM-199 o Menezo´s B2 + suero fetal . bovino (SFB)
- Líneas celulares: Vero; BRL
- Cultivos primarios: células de la granulosa; células . oviductales
• Medios Definidos: mayores tasas de desarrollo, menor . mortalidad perinatal y porcentaje de malformaciones. . Mayor reproducibilidad.
- Concentración de O2: 5%
- Medio de cultivo: SOF (Synthetic Oviductal Fluid) .. + aminoácidos + seroalbúmina bovina (BSA)
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Los embrionesproducidos in vitroson menosviables que los producidos in vivo
• Características de los embriones producidos in vitro:
- Menor viabilidad
- Mayor sensibilidad al enfriamiento y criopreservación
- Mayor cantidad de lípidos
- Uniones intercelulares anormales
- Menor número de células
- Menor proporción de células en el macizo celular interno
- Mayor incidencia de anormalidades cromosómicas
- Menor tasa de preñez después de la transferencia
- Mayores pérdidas fetales durante la gestación
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Punción folicular (Ovum Pick-Up; OPU)
• Obtención de ovocitos a partir de animales vivos
Dispositivo de OPU
Pared vaginalPared rectal
Ovario
Cervix
Fijación del ovario
Aguja
Dispositivo de OPU
Transductor
Tubo de acero
Tubo interno de acero del sistema de guía
Aguja 19-G
Conector de acero
Tubo de silicona Tubo de
acero
Mango
EcógrafoBomba de vacío
Transductor
Adaptado de: Bols et al., Theriogenology, 1995.
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Aplicaciones de la producción de embriones in vitro
• Investigación básica: - Producción de embriones en diferentes estadios de . desarrollo a bajo costo a partir de ovarios de animales . sacrificados para consumo
• Aplicaciones comerciales:- Producción de mayor número de embriones- Menor intervalo generacional por uso de animales . prepúberes (OPU)- Obtención de embriones de vacas preñadas (OPU)- Obtención de embriones de vacas que no pueden ser . superovuladas y/o con problemas reproductivos (OPU)- Obtención de embriones de animales muertos
• Base para el desarrollo y/o aplicación . de otras técnicas:- Clonación- Producción de animales transgénicos
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Micromanipulación
Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
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Producción de mellizos por microcirugía
División de una mórula fuera de la zona pelúcida.
Apertura de la zona pelúcida para extraer al embrión.
Hemi-embriones después de la división.
Unidad de micromanipulación
Mellizos idénticos producidos por microcirugíaTomado de: Palma, Biotecnología de la
Reproducción, INTA (Argentina), 2001.Tomado de: Palma et al., Rev. Arg. Med. Vet.,1991.
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Biopsia y sexado
PCR
BlastómeroBlastómero
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Inyección intracitoplasmática de espermatozoide(Intracitoplasmic Sperm Injection; ICSI).
Ovocito maduro(metafase II)
Micropipeta
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Inyección pronuclear
Micropipeta
Ovocito fecundado
Pronúcleo
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Transplante nuclear
Enucleación
Célula donante Transplante nuclear
Ovocito en MII
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Producción de quimeras por agregación de células a un blastocisto
Micropipeta
Blastocisto
Células inyectadas
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Criopreservación
Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
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Tasas de enfriamiento para diferentes sistemas de criopreservación
-30
-7
25
-19615 25 90
Tem
pera
tura
(o C)
Tiempo (minutos)
Estabilización
Seeding
0.3 – 0.6 oC/min
VitrificaciónCongelamiento gradual
2.500 – 20.000 oC/min
Adaptado de: Palma,, Biotecnología de la Reproducción, INTA (Argentina), 2001.
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Características de los métodos de criopreservación
• Congelamiento Gradual- Formación de cristales de hielo- Baja concentración de crioprotectores: mayor . probabilidad de daño por enfriamiento- Alto costo: equipo para el descenso controlado . de la temperatura
• Vitrificación- No hay formación de cristales de hielo- Alta concentración de crioprotector: mayor . probabilidad de daño osmótico y por toxicidad- Bajo costo: enfriamiento directo en N2 líquido
• Refrigeración- Enfriamiento a 4 oC por 24 a 72 h
Equipo para enfriamiento controlado
Termo de nitrógeno líquido
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Descongelamiento: método de transferencia directa
• Crioprotectores permeables:- Glicerol- Dimetilsulfóxido (DMSO)- Propilenglicol- Etilenglicol
• Crioprotectores impermeables:- Sacarosa- Trealosa- Glucosa- Rafinosa
Solución extractora del crioprotector
Embrión en solución con crioprotectores
Solución extractora del crioprotector
AireAireTapón algodón Sellado
Solución extractora del crioprotector
Embrión en solución con
crioprotectores
Tapón algodón
Solución extractora del crioprotector
Embrión en solución con crioprotectores
Solución extractora del crioprotector
AireAireTapón algodón Sellado
Solución extractora del crioprotector
Embrión en solución con
crioprotectores
Tapón algodón
Solución extractora del crioprotector
Embrión en solución con crioprotectores
Solución extractora del crioprotector
AireAireTapón algodón Sellado
Solución extractora del crioprotector
Embrión en solución con
crioprotectores
Tapón algodón
Solución extractora del crioprotector
Embrión en solución con
crioprotectores
Tapón algodón
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Embriones bovinos transferidos en el año 2002
Embriones producidos in vivo Embriones producidos in vitro
ContinentesFrescos Congelados Total Frescos Congelados
14.342 (2,7%)
4
464
46.630
13.859
5.952
42
66.951
189.124 (34,7%)
97
30
2.040
8.968
5.191
52
119.118 (22,2%)
92.412 (17,2%)
90.371 (16,8%)
32.945 (6,4%)
538.312 16.378
Total
Africa 5.557 8.785 101
América del Norte
89.472 99.652 494
América del Sur
73.952 45.166 48.670
Asia 39.375 53.037 22.827
Europa 41.753 48.618 11.143
Oceanía 17.631 15.314 94
Total 267.740 (48%)
270.572 (52%)
83.329
Adaptado de: Data Retrieval Committee Annual Report, IETS, 2003.
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Conclusiones: aplicaciones biotecnológicas a la reproducción de animales
• Inseminación artificial y congelación de semen- Control de enfermedades de transmisión sexual- Uso intensivo de un macho de alto valor genético- Aumento de la eficiencia de estimación del valor genético . (ensayos de progenie)
• Sincronización e inducción de la ovulación- Aumento de la eficiencia de la producción de terneros- Aumento de la eficiencia del manejo productivo y reproductivo
• Superovulación, transferencia y criopreservación de . embriones
- Uso intensivo de hembras de alto valor genético- Rápida difusión de genética superior: transporte y . comercialización alrededor del mundo a bajo costo- Sanidad Animal: importación de embriones libres de patógenos - Recuperación mas eficaz de individuos exóticos y razas en . peligro de extinción- Conservación in vitro por tiempo indefinido de una amplia . variedad de especies mamíferas
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• Sexado de espermatozoides y embriones- Producción de descendencia del sexo deseado
• Producción in vitro de embriones- Uso mas intensivo de hembras de alto valor genético- Utilización de hembras que no pueden ser superovuladas- Producción de embriones con ovarios de matadero
• Micromanipulación- Producción de mellizos idénticos para investigación o aumentar . la eficiencia de los programas de transferencia de embriones- Clonación por transferencia nuclear, inyección pronuclear o . producción de quimeras para generar organismos transgénicos- Inyección intracitoplasmática de espermatozoides en especies . en las que no es factible la fertilización in vitro
Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Conclusiones: aplicaciones biotecnológicas a la reproducción de animales
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Agrobiotecnología
Biotecnologíaen reproducción animal
Referencias 1. Palma, G.A. Biotecnología de la Reproducción. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA, Argentina), 2001.
2. Stringfellow, D.A. and Seidel, S.M. Manual of the InternationalEmbryo Transfer Society, IETS, 1998.
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Biotecnología AnimalFacultad de Agronomía-UBA
Laboratorio
TransgénesisTransgénesis
Daniel F SalamoneDaniel F [email protected]@agro.uba.ar
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Laboratorio de Biotecnología Animal
Transgenesis animal
¿Por qué es posible?
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Laboratorio de Biotecnología Animal
Transformar un organismo
Transformar el zigoto
Transformar células madres para que colonicen la línea germinal del embrión.
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Producción de quimeras por agregación de células a un blastocisto
Micropipeta
Blastocisto
Células inyectadas
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Laboratorio de Biotecnología Animal
Transformar el zigoto
Microinyección de DNA en el pronucleo masculino.
Transplante nuclear a un ovocito enucleado con células transgénicas.
Transformación mediada por espermatozoide SMGT
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Agrobiotecnología
Animalestransgénicos
La técnica de microinyecciónde cigotasresulta muypoco eficienteen bovinos
Microinyección de cigotas bovinos
Eficiencia en la producción de animalesTransgénicos por microinyección
Eficiencia en la producción de animalesTransgénicos por microinyección
Cigotas microinyectadas 2.800Sobreviven la microinyección 2.500Embriones transferidos a receptoras 250Preñeces 50Terneros transgénicos 1
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Laboratorio de Biotecnología Animal
Transformar célulasTransgenesis transiente. - Transgenesis estable.
•Electroporación
•Lipofection
•CaCl2
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Laboratorio de Biotecnología Animal
Transformar células
Selección:
Resistencia a un antibiotico
Por un cambio fenotípico observable, p.e. GFP.
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Materiales y métodos
Donor Cells
Transfection
selection
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FUSION CELULARFUSION CELULAR
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Clonación utilizando fibroblastos fetales transgénicos y recipientes tratados con roscovina.
Salamone et al. (Auckland, New Zeland, 2003)
.
Tratamiento n Cliv (%) Blast (%) Implantes Pr (%) Nac.
No transfectado 197 122(62) 33(16.7) 16 5(31) 1Transfectado 646 476(74) 128(19.8) 56 25(44.6) 7 Transf. roscovitina 228 191(84) 51(22.3) 30 16(53.3) 6
Total 1071 789 212 102 46 14
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Pampita
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Effect of different sources of donor cells calf recloning on embryo and fetal survival.Salamone et al. (IETS, Portland 2004)
Tratamiento n Blast (%) RecipientesImplantados Preg.30d (%) Preg.
60d(%) Nac
Fibroblastos fetales Transfectados
966 213(22)a 145 63(43)a 36(25)a
3(3)b
2(29)a
46(18)
8
Reclonadofibroblastos oreja 680 119(18)b 101 24(24)b 2
Reclonados cordónumbilical 93 14(15)b 7 3(43)a 1
Total 1739 346(19) 253 90(36) 11
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Expreción de HC recombinante humana en leche
Daniel Salamone et al. (Copenahen, Dinamarca, 2005, 2006)
Expreción de HC recombinante humana en leche
Daniel Salamone et al. (Copenahen, Dinamarca, 2005, 2006)
Day of milking after lactogenesis
10 20 30 40 50 60 70 80 90
hGH
g /
day
0
10
20
30
40
50
60
70
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1 huevo de oro(1,3 kg) por día
Vaca transgénica2 g/L hTPA
10.000 U$S/g30 L por día
U$S 15.000/día U$S 600.000/díaAgrobiotecnología
Animalestransgénicos
AplicacionesProducciónde proteínasrecombinantes humanasen la lecheanimal
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![Page 71: Sin título de diapositiva - Facultad de Agronomía | … Biotecnologia … · · 2011-10-26• Utilización de semen sexado Ventajas y aplicaciones de la ... animal El uso de semen](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022051321/5adac1097f8b9add658d1468/html5/thumbnails/71.jpg)
INITIATION OF PREGNANCIES IN SOUTH AFRICAN RIVERINE RABBIT BY INTERSPECIES NUCLEAR TRANSFER
USING ADIPOSE-DERIVED SOMATIC CELLSM. J. SansinenaM. J. Sansinena11, D. Owiny, D. Owiny22, R. S. Denniston, R. S. Denniston33, D. Salamone, D. Salamone11, D. Barry, D. Barry2,32,3
Interspecies NT Interspecies NT riverineriverine rabbitrabbit
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Laboratorio de Biotecnología Animal
¿Cómo se localizan los genes?
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Transgénesis mediada por Transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT)espermatozoides (SMGT)
Introducción
Se usa a los espermatozoides como vectores Se usa a los espermatozoides como vectores para la entrega del DNA exógenopara la entrega del DNA exógenoLaboratorio de
Biotecnologíade la Reproducción Animal, FA-UBA
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EsperamatozoaEsperamatozoa
PlasmidsPlasmidsLaboratorio de BiotecnologíaAnimal, FA-UBA
SBTE 2007 Materials and Methods Materials and Methods
••Transfection spermTransfection sperm
0.5 0.5 ug of theug of the DNA DNA constructionconstruction//million spermatozoamillion spermatozoa forfor5 5 min atmin at 0ºC, in 0ºC, in NaNa citrate atcitrate at 2.8% 2.8% withwith 100 mM EDTA 100 mM EDTA
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egfp-expressing ovine embryos
SBTE 2007 ResultsResults
57%
Under blue ligth
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3%
egfp-expressing ovine blastocyst
SBTE 2007 ResultsResults
Under bright light.
UnderUnder blue blue ligthligth..
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60%
egfp-expressing porcine embryos
SBTE 2007 ResultsResults
Under bright light.
UnderUnder blue blue ligthligth..
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egfp-expressing equine morulae
SBTE 2007 ResultsResults
29%
UnderUnder blue blue ligthligth..Under bright light.
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egfp-expressing feline embryos (26%) and blastocyst
SBTE 2007 ResultsResults
6%
UnderUnder blue blue ligthligth..Under combination brigth andUnder combination brigth and blue blue ligthligth..
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egfp-expressing bovine embryos (23%) and blastocyst
SBTE 2007 ResultsResults
16%
Under combination brigth andUnder combination brigth and blue blue ligthligth.. UnderUnder blue blue ligthligth..
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SBTE 2007
Ovine embryos
Mosaic Mosaic 6060--80% (80% (sendedsended IETS 2008 IETS 2008 Annual ConferenceAnnual Conference))
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Universidadde Missouri-Colombia
Immerge BioTherapeutics Inc
• Se han transformado cerdos con el gen de la Green Fluorescent Protein mediante transfección de células somáticas en cultivo y posterior clonado.
• Xenotransplante:- La eliminación de genes para la alfa 1-3 galactosil transferasa permitiría obtener cerdos que no posean el residuo galactosa en su endotelio y, por lo tanto, sean menos proclives al rechazo agudo.
Agrobiotecnología
Animalestransgénicos
Transgénesis en cerdos
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Agrobiotecnología
Animalestransgénicos
Recombinaciónhomóloga
Tomado de: McCreath et al., Nature, 2000.
“Cupido” y “Diana”, primeros corderosproducidos por la técnica de “gene targeting”
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Estrategiasalternativaspara la supresión de una proteína
ADN
ARNm
Transcripción
Traducción
Proteína a suprimir
Recombinación homóloga
Silenciamientopor RNAi
X
X
Agrobiotecnología
Animalestransgénicos
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La introducción de secuencias cortas (22pb) de ARNs homólogos de doble cadena desencadena
un proceso que degrada al ARNm blanco y conduce a la supresión de la proteína respectiva
Silenciamientogénico
Degradacióndel ARNm
ADN
Transcripción
ARN doblecadena
Agrobiotecnología
Animalestransgénicos
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Características de los métodos usados para suprimir proteínas
- Afecta al ADN (suprime el gen)
- Requiere dos generaciones para obtener el fenotipo deseado
- La supresión es total
- Proteínas candidatas: PrP, lactoglobulina
- Afecta al ARN (suprime al mensajero)
- El fenotipo deseado se obtiene en la primera generación
- Pueden obtenerse niveles intermedios
- Proteínas candidatas: lactoglobulina, proteínas de la leche, miostatina
Recombinación homóloga Silenciamiento por ARNi
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Proyecto de transgénicosGen tejido Efecto
Hormona del crecimiento
todos Mejorar crecimiento
IGF1 Músculo crecimiento muscular
Oleasa desaturasade las plantas
todos los tejidos mejorar el valor nutricional
Lactoferrin glándula mamaria Resistencia de los credos ala infección
α-Lactalbumina(Wheeler et al, 2001)
glándula mamaria mejoramiento del crecimiento de los lechones
Fitasa(Golovan et al, 2001)
reducir el fósforo en las material fecal
glándula salivar
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Conclusiones –The EnviropigTM
• Enviropigs saludables que digiere fitatos.• Compañias preocupadas por aceptación.• Fuentes de Fosfatos en el mundo se reducen.• Alimentos de cerdos generados de hueso no es
usado en dietas. • Fitasas hay que mezclarla, pelletearla, acumularla,
etc. • Cultivos con menores niveles fitatos no
desarrollan, no se adaptan zonas tropicales, etc.
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Agrobiotecnología
Animalestransgénicos
Transgénesis en bovinos.Producciónde alimentos
Bovinos genéticamentemodificados para mejorar la producción láctea
Incremento beta y Kappa caseina
(Brophy et al., 2003)
Producción de lactoferrina,lizocima en leche (leches humanizadas)
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Resistente a mastitis (lisostafina)
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Cutinasa800 pb800 pb
MarkerMarker1.000 pb 1.000 pb
750750
500500
250250
420 pb420 pb586 pb586 pb
--Primers Primers cutcut: : PCR 1 PCR 1 PCR 3___PCR 3___ PCR2 _ PCR2 _ --Reamplifcación: Reamplifcación: -- + + -- + + -- + +
DNA Cutinasa de DNA Cutinasa de Fusarium solaniFusarium solani,,sin peptido señal ni intrón.sin peptido señal ni intrón.
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Agrobiotecnología
Animalestransgénicos
Transgénesis en cabras
Tomado de: Keefer et al., Biol. Reprod., 2001.
La empresa Nexia (Canadá) ha logrado producir cabras queexpresan fibroína (proteína de la tela de araña) en su leche.
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1796 Edward Jenner, descubre de la “vacuna” antivariólica. Viruela: Causante en el Siglo XVIII de 60 millones de muertes
Siglo XX: En Mayo de 1980, la OMS declara oficialmente la erradicación mundial de la viruela humana
PasadoLas Vacunas: Primer ejemplo de la
utilidad de los animales de granja en la salud humana.
AnimalesTransgénicos
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PresenteFermentador como bioreactor para producir
vacunas y proteínas recombinantespara la salud humana
AnimalesTransgénicos
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•En el siglo XVIII y en oposición a la tecnología de Jenner, se dijo:
“Existen informes fidedignos de niños que habían empezado a mugir y andar en cuatro patas y de gente con cuernos” por haber sido vacunados.
La realidad demostró lo contrario, ¿hoy en el Siglo XXI, escuchamos comentarios similares?
Siempre Se escuchan las voces de los detractores del desarrollo científico
AnimalesTransgénicos Futuro
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Laboratorio de Biotecnología Animal
Minivacas con leche azucarada
Usar nuestra imaginación para generar nuevos productos!!!!!!!!!