SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.
-
Upload
chico-linan -
Category
Documents
-
view
17 -
download
2
Transcript of SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.
![Page 1: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/1.jpg)
SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS
Curso de Biología Parasitaria2007
![Page 2: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/2.jpg)
TPX GPX
SOD
![Page 3: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/3.jpg)
SISTEMA GLUTATIÓN
NADPH
NADP+
GlutatiónGlutatiónreductasareductasa
GlutarredoxinaGlutarredoxina
red red
ox ox
Blancos
red
ox
GlutatiónGlutatión
red
ox
redox Glutatión Glutatión peroxidasaperoxidasa
SISTEMA TIORREDOXINA
NADPH
NADP+
Tiorredoxina Tiorredoxina reductasareductasa TiorredoxinaTiorredoxina
red red
ox ox ox
red
Tiorredoxina Tiorredoxina peroxidasaperoxidasa Blancos
red
ox
![Page 4: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/4.jpg)
TIORREDOXINA GLUTATIÓN REDUCTASA
Tiorredoxina Tiorredoxina glutatión glutatión reductasareductasa
TiorredoxinaTiorredoxina
red red
ox ox
NADPH NADP+
Blancos
red
ox
Tiorredoxina Tiorredoxina peroxidasaperoxidasa Blancos
red
oxdominioTR
dominioGrx
![Page 5: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/5.jpg)
ORGANIZACIÓN DE LA TR, GR, Grx y TGR
dominio Grx
dominioTR
TR CVNVGC FAD NADPH región interfase GCUG
Grx CPYC GSH
GR CVNVGC FAD NADPH región interfase
TGR CVNVGC FAD NADPH región interfase GCUGCPYC GSH
![Page 6: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/6.jpg)
![Page 7: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/7.jpg)
TCTGTATATTAGTGCATGTCATCTAAAATGGCTCCAATTCCCGATGATACTTCTTCGTGG
GCTAAAACGGCCGTATTTGACTTTGTGGTCCCGACGCCCCAGGATACTACACGGGGTTTG
GGCTATCGAACTCAGCTTCGCAGCATTAACGTAGAGTATGTTAATGCTTTTGCTGAGGTG
GTCGATCCGCATACAATAAAATACACGAAGAAAAACAAGGAAACCGGCACCGTGACCGCA
TCCGTAGCGATGAAGGCTGGTGCAACCAAGGCTGATTTCGACCGTACCATAGGGATTCAC
CCCACTTGTTTTGAGGGGTTTACTACAATGCACGTGACAAAAGACTCGGGCGCCAGCGCT
AAGGTGACCGCTTGCTGAGGTTAATTCCCTGCTGGAGGTTTTCAGTCGGTTATGTTTATC
CGTTCACTTTCCAACCAATCCGTGTTTTGTGAAAAGACCCTGAGCTTGGTAAATCCTATC
CCGTCCCGGGAGCCAAGTTGTAGGGGATGCCCGCATGGGCCAAACGAACGGCAGCCCCCC
CCCCCCCCCTTCTTTGATTACGAAATCTCTCATTTAACATGTTGTGCAGTCTTTATGTCT
TTCTCCGAAAAAAAAAAAAAA
OBTENCIÓN Y ANÁLISIS UN ADNc DE LA TR DE F. hepatica
720
1740
60
480
780
1800
1860
2040
2100
2160
2301
![Page 8: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/8.jpg)
EL ELEMENTO SECIS
G - CG - CU - AU - AC - GG UA - UG UU - AC - GC - GC - GA - GG - AA - T
2012 2067
AA
U
UA
C
U
G
C UA
CC
G
GUUUUGUAAG A
G - CC - GC - GC - GU - A
GCCCGCAUGGG
núcleoSECIS
tallo inferior
bucle de adenosinas
tallo superior
5 pb
lazo3 nt
![Page 9: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/9.jpg)
Fasciola 1 ----------------------------------------MAPIPDDTS-----------SmanTGR 1 -----------------------------------------MPPADGTS-----------EgraTGR 1 -------------MFGCHCLRRACTPLSAIACFFNPRRTAMAPIGGSAEQV---------
Fasciola 9 ---------SWVKKTINSSAVLLFSKS--------RCPYCRAVKQIFNDDKVNHAVIELD
SmanTGR 8 ---------QWLRKTVDSAAVILFSKT--------TCPYCKKVKDVLAEAKIKHATIELDEgraTGR 38 ---------EKLRNKINNAAVLVFAKS--------FCPYCKKVMERFNNLKIPFGYLDLD
Fasciola 53 KRPDGAKIQQVLSQISGISTVPQVFVRGEFVGDSSTISKLKKEDKLTEVIKK-NTYDYDLSmanTGR 52 QLSNGSAIQKCLASFSKIETVPQMFVRGKFIG DSQTVLKYYSNDELAGIVNE-SKYDYDLEgraTGR 82 LKKNGSDYQKMLQEITGRTTVPQVFFRGEFIG GCDDVMAID-DDTIVKKANE-MKYDYDM
Fasciola 292 V VGASYVALECAGFLTRFGF DTTVMVRSIFLRGFDQQMADMIGEYMKEHGTKFVRSCVPTSmanTGR 291 VIGASYVALECAGFLASLGG DVTVMVRSILLRGFDQQMAEKVGDYMENHGVKFAKLCVPDEgraTGR 318 CVGASYVSLECAGFLSSIGC DVTVMVRSIFLRGFDQQMAGLISDYIAKYGVKFVRPCVPT
Fasciola 584 TKD -ASAKVTACUGSmanTGR 584 TKK -VSPIVSGCU GEgraTGR 610 TKS
SGSGSG-ASATVTGCUG
SmanTGR 111 IVIGGGSGGLAAGKEAAKYGAKTAVLDY VEPTPIGTTWGLGGTCVNVGCIPKKLMHQAGLEgraTGR 140 VIIGGGSGGLALAKESAKSG AKVALLDFVVPTPMGTTWGLGGTCVNVGCIPKKLMHQAAL
Fasciola 112 VVIGGGSGGLAASKEAARFGAKTAVFDFVVPTPQDTTRGLGGTCVNVGCIPKKLMHQAAL
ANÁLISIS DE LA SECUENCIA AMINOACÍDICA
Grx
sitio de unión al FAD centro redox
sitio de unión al NADPH
selenocisteína
![Page 10: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/10.jpg)
66 kDa
PURIFICACIÓN DE LA ENZIMA NATIVA
![Page 11: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/11.jpg)
ENSAYOS DE ACTIVIDAD TR, Grx y GR
ESSE + GSH GSSE + ESH (reacción espontánea)
GSSE + GSH GSSG + ESH (actividad Grx)
NADPH+ +NADP+DTNB 2 TNB (actividad TR)
GSSG + NADPH + H+ 2GSH + NADP+ (actividad GR)
NADPH
NADP+
TGRTGR
red
ox
TiorredoxinaTiorredoxina
red
ox ox
red
InsulinaInsulina
![Page 12: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/12.jpg)
LA ENZIMA PURIFICADA POSEE ACTIVIDAD TR
NADPH
NADP+
GlutathioneGlutathionereductasereductase
GlutaredoxinGlutaredoxin Targets
red red red
ox ox ox
GlutathioneGlutathione
red
ox
ox
NADPH
NADP+
Thioredoxin reductaseThioredoxin reductase(TR)(TR)
ThioredoxinThioredoxin Targets
red red red
ox ox
Targets redox
![Page 13: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/13.jpg)
LA ENZIMA PURIFICADA POSEE ACTIVIDAD GR
NADPH
NADP+
GlutathioneGlutathionereductasereductase GlutaredoxinGlutaredoxin
red red red
ox ox ox
GlutathioneGlutathione
red
ox
ox
NADPH
NADP+
Thioredoxin reductaseThioredoxin reductase(TR)(TR)
ThioredoxinThioredoxin Targets
red red
ox ox
targets
LA ENZIMA PURIFICADA POSEE ACTIVIDAD GRX
![Page 14: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/14.jpg)
NADPH
NADP+
GlutathioneGlutathionereductasereductase GlutaredoxinGlutaredoxin Targets
red red red
ox ox ox
GlutathioneGlutathione
red
ox
ox
NADPH
NADP+
Thioredoxin reductaseThioredoxin reductase(TR)(TR)
ThioredoxinThioredoxin Targets
red red red
ox ox
Targets redox
El dominio Grx recibe electrones de dominios TR y
también podría recibir del sistema glutatión
![Page 15: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/15.jpg)
La fusión de dominios hace posible la transferencia de electrones a blancos de
ambos sistemas
Tiorredoxina Tiorredoxina glutatión glutatión reductasareductasa
TiorredoxinaTiorredoxina
red red
ox ox
NADPH NADP+
Blancos
red
ox
Tiorredoxina Tiorredoxina peroxidasaperoxidasa Blancos
red
oxdominioTR
dominioGrx
![Page 16: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/16.jpg)
A partir del gen de la TGR se producen dos isoformas de ARNm por empalme alternativo en trans
1 2 1 2
TRGrxSL
SL Grx TR
región codificante
![Page 17: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/17.jpg)
mit MFGCHCLRRACTPLSAIACFFNPRRTAMAPIGGSAE..
cit MAPIGGSAE..
Las isoformas de ARNm codifican para variantes
citosólica y mitocondrial
¿Hay TGR en los compartimientos mitocondrial y citosólico?
Mic Mit Cit Nuc Tot
66 kDa
![Page 18: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/18.jpg)
Echinococcus granulosus posee variantes mitocondriales y citosólicas de TGR
Entonces...
Tiene E. granulosus TR, GR and Grx convencionales?
![Page 19: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/19.jpg)
En otros plathelmintos:
In Taenia crassiceps:
Tracing GR and TR activities resulted in purification of TGR
(Rendon et al. 2004)
In Schistosoma mansoni:
Auranofin inhibits both TR and GR activities in crude extracts
(Alger and Williams, 2003)
![Page 20: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/20.jpg)
Datamining transcriptomes could provide some answers
October 2003: Schistosoma transcriptomes released
. Schistosoma mansoni (140.000 ESTs, covering 90-95% of the gene complement)
. Schistosoma japonicum (45.000 ESTs)
. Echinococcus granulosus and Echinococcus multilocularis (10.000 ESTs–Oct 2004)
![Page 21: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/21.jpg)
S. mansoni S. japonicumcTGR
38* 18*
mtTGR 4 2
GR 0 0
TR 0 0
cGrx 0 0
mtGrx 8*
0
cTrx1 6 26
cTrx2 2 1
mtTrx 15 3
cTPx1 12 29
cTPx2 30 20
mtTPx 16 10
cGPx 39 20
secGPx 10 1
![Page 22: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/22.jpg)
Similar results in E. granulosus and E. multilocularis
. absence of GR and TR
. presence of cytosolic and mitochondrial Trx and TPx
En plathelmintos, se postula a la TGR como la responsable de llevar a cabo ambas funciones, GR y TR
![Page 23: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/23.jpg)
ESTUDIO DE INMUNOPROTECCIÓN EN CONEJOS CONTRA F. hepatica
semana 0
- 100 μg FhTGR- PBS
1º inmunización
semana 4
- 100 μg FhTGR- PBS
2º inmunización
semana 6
Desafío
- 50 metacercarias
semana 18
Sacrificio
Nº de Parásitos promedio ± DS parásitos/animal
Grupo FhTGR 0,3 ± 0,8 2; 0; 0; 0; 0; 0
Grupo Control 9 ± 1,8 10; 12; 8; 8; 7; 9
![Page 24: SISTEMAS LIGADOS Trx-Glutatión EN PLATHELMINTOS Curso de Biología Parasitaria 2007.](https://reader033.fdocumento.com/reader033/viewer/2022061300/54cfc89349795990548b4e07/html5/thumbnails/24.jpg)
Schistosoma mansoni
Utilizando un ARNi, se observó que la TGR es esencial para la vida del parásito.
Auranofin: inhibidor de la TGR. En ensayos in vitro y utilizando concentraciones fisiológicas se observó que los parásitos mueren rápidamente.
Además, tratando a ratones infectados con este compuesto se observó una reducción del 60% de los parásiros encontrados.