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    Mineralizacin de PCB por la cepa modifcadagenticamente Cupriavidus necator JMS34 y su aplicacin

    para la biorremediacin de los PCB en el suelo

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    Cepas a utilizar

    Cepa desarrollada genticamenteel locus pb obtenido del genomaxenovorans Burkholderia

    Cepa NativaPresencia de microfora nativa reduce la degrddacion de losPBC por la cepa Bur!olderia "enovorans #B4$$

    %ste estudio contribuye al desarrollo de biocatalizadoresme&orados para la recuperacin de ambientes contaminadoscon PCB'

    Cupriavidus necator JMP(34 )*3

    cepa JMS34

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    Construccion de cepasgenticamente mejoradas:

    %l pl6smido p789$(: 1ue lleva resistencia a la !anamicina5 .ue trans.erido de %' coli SM($ a C' necator JMP(34) *3

    Purifcacin de ,;< y la digestin se realizaron porprocedimientos est6ndares'

    ) Sac+ para la digestion) sondas biotilizdas2 complementarias a los genes

    del bpC =enBan! accession number *>>(::5 y bp;=enBan! accession number *>>(:35

    @ueron amplifcadas por PC/ utilizando el pl6smidop789$(: como plantilla

    Primers bpC( y y bpC: se utilizaron para amplifcar lasonda BPAC

    Primers bp;( y bp;: para amplifcar la sonda bp;

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    #a degradacin de PBC por C'nec6tor JMS34 .ue evaluado usando

    clulas resistentes de cultivos encrecimiento e"ponencial en mediom0nimo de !sal con bi.enil y carbn

    como .uente de energ0a' los tuboscon cada congnere PBC en unaconcentracin fnal de :8$ uM'

    no de los tubos de PCB .ue usadoen el an6lisis de CB,s en .ase acuosay el contenido del otro tubo .ue

    suministrado para ectraccionor 6nica cuantifcaion de PBCs'

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    Anlisis de CBA, PCB , y cloruro

    Para la cuantifcaion de de CB, PBCs en medio li1uido se relealizocon un sistema AP#C

    Para el an6lisis de PBC/ la .ase mvilconsistio en D$E de acetonitrilo y:$E de agua

    Cloruro .ue cuantifcado atraves deun protocolo de especto.otometria7iocianato de de mercurio5

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    experimentos de

    ioaumentacin en

    microcosmos # a muestra del suelo $):$ cmpro.undidad5.ue recolectada en uncampo de agricultura en el Centro

    de Cile provincia Fuillota5 en unaplantacin de la .ruta ca1ui

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    %l suelo contiene las siguientes

    caracter0sticas2 %l suelo es ligeramente acido con pA >'8

    Suelo .ranco arenoso GE de arcilla/ 3$'8E

    loam y >$'8 de arena5 Contenido de carbono de (3/G g'!g('

    Contenido de nitrgeno ('> g'!g)(

    elacin nitrgenoHcarbn de D'-Contenido

    de materia organica del 4/>E %l suelo no tenia anterior istoria de

    contaminacin de PBC' %l suelo se seco a3$IC y luego se tamizo

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    Cada microcosmo contiene 38g de sueloseco en :8$ml %rlenmeyer' Microcosmo .ue

    establecido usando suelo no esterilizado ysuelo esterilizado autoclave por 3$ min a(:(IC/ ( bar/ 3 tiempos intervalos de :4 5

    ,dem6s el suelo simple .ue suplementado

    con bi.enil como sustrato' #os microcosmos .ueron bioestimulados

    gracias a C' nec6tor 9MS34 y B'"enovorans

    7odo microcosmos se incubaron a 3$I C/con agitacin :-$ rpm5/ durante >3 d0asestudio por duplicado

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    Cuanti!cacin de microorganismos "#$%&'B&(( en el suelo

    na alicuota de muestra .ue tomada para

    inocular en el medio de agar selectivo1ue conten0a !anamicyna y telurito desodio como marcador' #as clulas eranvisibles por la reduccin del telurito a

    teluro elemental

    #os PBCs .ueron cuantifcados en suelos

    por un cromatgra.o de gases Per!in%lmer acoplado a un espectrmetro demasas y utiilizado para su cuantifcacin

    Cuanti!cacin de PBC en suelo

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    %S#7,;S

    Cepa modifcada era capaz de

    cerecer en cuelos con bi.enil como.uente de carbono y energia ypoocos capaz de crecer en varios

    compuestos de acuerdo a su numerode cloros'

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    Crecimiento de las cepas "#$%&en i)enil y CBAs

    Capacidad de la cepa JMS34 encrecer en bi.enil

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    ;egradacion de CB,s P #, C%P,&ms34

    Se utilizo .ructosa como .uente de carbono adi.erentes concentraciones

    #as clulas crecieron en la presencia de 3)metil)benzoate m)toluate5 capaz de inducir genes y suconcentracin .ue determinada por un an6lisis deAP#C

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    *egradacin de PCBs por C+nector "#$%& en medio liuido+

    4 PCB congneres .ueron selccionadospara degradar PBC por la cepa JMS342 dosmonoclorados bii.enil 3)CB y 4)CB y dosdiclorados bi.enilo 3/8)CB y :/4)CB

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    Biorremediacion de PCBs en suelos'

    Se evaluo la efciencia de C' nec6tor como un biocatalizadorpara la remediacin de PBCs en dos tipos de suelos

    Bioamuentacion para me&orar la digestion en la poblacionnatural bacteriana

    $-.'/$ N/ .$0.12'.$

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    %sta fgura muestra el numero declulas de la cepa JMS34 y la #B4$$

    en suelo

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    Se analiz el rol de la microbiota nativa en ladegradacion de PBC por las dos cepas en

    suelos estriles

    #os ensayos con suelos estriles seutilizan para introducirmicroorganismos e"genos y

    degradar contaminantes espec0fcos

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    ;iscusin #as v0as metablicas para PCBs y CB,s pueden ser combinadas en

    un microorganismo'

    %l locus de la bp de la b' "enovorans lb4$$ codifca uno de lasme&ores v0as de degradacin de los PBC

    #a cepa JMS34 suporto el crecimiento usando 3cba y 4cba como.uente de carbon y energ0a

    Policlorado se necesita la presencia de un inductor natural m)toluato5

    #a cepa JMS34 degrado el GGE de 3)cb y 4)cb y un D:E de :/4)cben una semana en un suelo no esteril' %n el mismo suelo la cepalb4$$ degrado en una semana apro"imadamente el 8$E de estosPBC

    #os resultados del estudio indican 1ue la cepa C' necator JMS34tiene competitiva venta&as en suelos no estriles

    #a e.cacia de la cepa JMS34 para la biorremediacin de suelos noesteril suguiere un uso potencial para la biorremedaicion desuelos contaminados con PCB