Practica 2 Praparacion Fijacion y Tincion Simple de Un Frotis
tincion
-
Upload
bachiusach2008 -
Category
Documents
-
view
4.941 -
download
4
Transcript of tincion
Tinción celular
Técnicas de microscopía óptica más usadas:• Combinación de colorantes basófilos y acidófilos (por
ejemplo, Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory)• Histoquímica (Fosfatasa ácida, PAS [ácido periódico-
Schiff])• Inmuno-histoquímica (uso de Anticuerpos contra
estructuras específicas, conjugados con moléculas fluorescentes [fluoresceína, rodamina, etc] o con enzimas)
Microscopía electrónica de transmisión y de barrido
Hematoxilina-Eosina: Técnica de coloración
•Fijación de la muestra con Formalina (solución acuosa tamponada de formaldehído). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido (proteínas pero no lípidos mal fijador de membranas).
•Lavado y deshidratación (serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol con Xileno, luego inclusión de la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-miento de la parafina Taco cortes de 5-15 de espesor con micrótomo que se montan sobre portaobjetos.
•Coloración con Hematoxilina: extracción de la parafina con Xileno, re-hidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, y tinción con solución acuosa de Hematoxilina.
•Coloración con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración creciente, y tinción con solución alcohólica de Eosina. Lavado con Xileno, agregado de un líquido de montaje no acuoso, y cobertura con un cubre-objetos para lograr un preparado permanente.
Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración
La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmáticos (como los de células musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados).
La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante básico, por lo cual se asocia y colorea estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados):
•Heterocromatina y nucléolos
•RNA ribosomal
•Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)
Ácido periódico-Schiff (PAS): Fundamento
El ácido periódico rompe la unión entre carbonos con hidroxilos adyacentes, y forma grupos aldehído. El reactivo de Schiff reacciona con los aldehídos para dar un color rojo púrpura intenso.
La reacción de PAS tiñe carbohidratos, y se usa para detectar:
•Gránulos de glucógeno
•Moco en diversas células
•Membrana basal de los epitelios
•Fibras reticulares del tejido conjuntivo
Microscopía electrónica: fundamentos vistos en la clase