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Técnicas histológicas
MV. Johilmer J. Álvarez Gil. Abril 2018.UCLA-DCV Anatomía Microscópica y Embriología Veterinaria.
Universidad Centroccidental Lisandro AlvaradoDecanato de Ciencias VeterinariasÁrea de Anatomía Microscópica
Departamento de Ciencias Básicas
BIENVENIDOS……..
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TEJIDO
SISTEMA
CÉLULA
Átomo Moléculas
PROCARIOTA: núcleo carecede membrana nuclear
EUCARIOTA: núcleo poseemembrana nuclear
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EPITELIAL CONECTIVO MUSCULAR NERVIOSO
ÓRGANO
TEJIDO
SISTEMA
CÉLULA
Átomo Moléculas
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ORGANISMOS
UNICELULARES PLURICELULARES
Protozoarios
Metazoarios
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1 cm 10 mm (milímetros)
1 mm 1000 µm (micrómetros)
1 µm 1000 nm (nanómetros)
1 nm 10 Å (Angströn)
1 µm 1 x 10-3 = 0,001 mm
SISTEMA INTERNACIONAL DE LONGITUD
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Anatomía Microscópica
HISTOLOGÍA
Es la ciencia que estudia las características
estructurales de células, tejido u órgano que
solo son observables por medio del
microscopio.
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Anatomía Macroscópica vs Anatomía Microscópica
• Disección de tejidos
• Observación a simple vista
• Toma de muestra y preparación de los tejidos
• Observación con microscopio
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El conjunto de procedimientos aplicados auna muestra biológica a fin de prepararlopara poderlo observar a través de unmicroscopio.
Técnica histológica
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Procedimientos
Técnica histológica
Vitales Postvitales
Métodos para estudio “In vivo”
Procedimientos histológicos que se
realiza en células, tejidos u
organismos vivos en su estado
natural, con el uso de microscopios
ópticos especiales
Técnica de coloración vital”
Definición
Tipos de coloración vital
Intravital
(se inyecta a
organismos vivos)
Supravital
(se aplica a células
o tejidos vivos)
Métodos para estudio “In vitro”
Cultivo de células
Definición
Condiciones (4)
Desventajas (2)
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Procedimientos
Técnica histológica
Vitales Postvitales
Métodos para estudio “In vivo”
Métodos para estudios
de tejidos muertos”Técnica de coloración vital”
Definición
Tipos de coloración vital
Intravital
(se inyecta a
organismos vivos)
Supravital
(se aplica a células
o tejidos vivos)
Métodos para estudio “In vitro”
Cultivo de células
Definición
Condiciones (4)
Desventajas (2)
Procedimiento histológico que se
realiza en células, tejidos u órganos de
organismos sin signos vitales, a fin de
preservar su estructura evitando los
procesos postmortem, y ser
observados con microscopio óptico.
Técnica de la parafina
1. Toma de la muestra
2. Fijación
3. Deshidratación
4. Aclaración
5. Inclusión en parafina
6. Formación de los bloques de parafina7. Microtomía u obtención de cortes
Procedimientos histológicos que se
realiza en células, tejidos u
organismos vivos en su estado
natural, con el uso de microscopios
ópticos especiales
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Es hidrocarburo sólido a temperatura ambiente, blanco, inodoro, y
líquido en temperaturas elevadas, de color translúcida, se obtiene de la
destilación del petróleo y se emplea generalmente para fabricar velas,otros usos como en cosmetología y técnicas histológicas.
Parafina…
Parafina sólida Parafina fundida
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Técnica de la parafina
1. Toma de muestra
Procedimientos:
Biopsia: toma de fragmentos de tejidos
u órganos de un organismo vivo.
Necropsia: toma de fragmentos de tejidos u órganos
De un organismo muerto.
PASOS:
1. Muerte del animal (natural o eutanasia).
2. Extracción de los órganos con delicadeza en la manipulación.
3. La muestra debe ser tomada con prontitud.
4. La muestra debe ser representativa del órgano o tejido.
5. El tamaño de la muestra debe ser de 1 cm 3.
6. Cortes con bisturí realizando movimientos deslizantes sin presión.
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2. FijaciónTécnica de la parafina
Definición: paso de la técnica de parafina que consiste en utilizar agentes fijadores en la
muestra biológica, a fin de detener el proceso postmorten (autolisis) para conservar de manera
integra la estructura de la muestra.
Clasificación de los fijadores;
Físicos Químicos
Compuestos: (ventajas): Líquido de Bouin
Líquido de Zenker
Líquido de Helly
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Lavado de la muestra fijada:
Cualidades
de unbuen fijador
2. Alto poder de
penetración.
4. Conferir dureza
no excesiva.
Es un paso de la fijación que consiste en lavar la muestra biológica con agua
corriente a fin de retirar el fijador para evitar el excesivo endurecimiento y facilitar seccionar en láminas delgadas.
1. Impedir rápidamente
los procesos autolíticos.
3. Fácil manipulación.
5. fácil de
conseguir
y económico.
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Técnica de la
parafina
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PLANOS DE CORTES HISTOLOGICOS
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PROCESO DE COLORACION O TINCIÓN
Es un proceso que consiste en la aplicación de una sustanciacolorante a una célula o tejido, a fin de aportarle color paradestacar y contrastar o distinguir los componentesestructurales de la células o tejidos.
Son sustancias con tinción propia,capaz de ceder color a células ytejidos dado a su afinidad por suscomponentes.
La coloración o tinción
Colorante:
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Teoría físicaSostiene que la coloración se da por un proceso físico de cohesión molecular, es decir, que las partículas disueltas en los colorantes son absorbidos por los componentes celulares.
Teoría químicaSostiene que la coloración se da por un proceso químico de unión iónica, que consiste en que los radicales aniónicos y catiónicos de los colorantes se unen a los radicales catiónicos y aniónicos de los componentes celulares dado a un proceso de neutralización de las cargas.
COLORANTE BÁSICO (+) (-)
Radical básico (+)
Radical
ácido (-)
El radical aniónico (ácido) del colorante es el que
aporta color
COLORANTE ÁCIDOS (-) (+)El radical aniónico del
colorante se unió al radical catiónico de la célula
(citoplasma)Radical básico (+)
Radical
ácido (-)
El radical catiónico (básico) del colorante es el que aporta color
el radical catiónico del colorante se unió al radical
aniónico de la célula (núcleo)
Bases teóricas de la coloración
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Criterios de clasificación de los colorantes
1. Por su origen
Colorantes Naturales
1. Animal: El carmín de color rojo intenso (se extrae de la cochinilla)
2. Vegetal: La Hematoxilina de color azul (se extraede la corteza del campeche), La orceina (se extrae de un tipo de Liquen).
Colorantes Artificiales
Eosina colorante rojo anaranjado es un derivado de la anilina, producto de la destilación de la hulla o carbón.
2. Por el radical que cede color
COLORANTE ÁCIDOS (-) (+) = el radical aniónico aporta el color
COLORANTE BÁSICO (+) (-)= el radical catiónico aporta el color
COLORANTE NEUTRO (+) (-)= ambos radicales aportan color
3. Por los componentescelulares que colorea
Colorantes citoplasmáticos
Colorantes nucleares
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Tipos de coloraciones
Los tejidos se tiñen con soluciones sucesivas de varios colorantes, los cuales colorearán los componentes del tejido según su afinidad.
El tejido se tiñe con un color diferente al delcolorante empleado.
Los tejidos adquieren el mismocolor del colorante empleado.
El tejido se colorea progresivamente consoluciones de diferente concentraciones hastaalcanzar el punto óptimo.
El tejido se colorea con una soluciónconcentrada del colorante y luego seelimina el exceso por medio dediferenciadores.
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TÉCNICA DE COLORACIÓN CON HEMATOXILINA - EOSINA (H - E) O COLORACIÓN DE RUTINA
Hidratación del Tejido
Coloración con Hematoxilina
Coloración con Eosina
Lavado con agua
Deshidratación
Montaje definitivoy obtención de la preparación histológica
Aclaración (diafanización)
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AFINIDAD TINTORIAL
Componente acidófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes ácidos, ejemplo citoplasma.
Componente basófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes básicos, ejemplo el núcleo.
Componente neutrófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes neutros, ejemplo citoplasma de los neutrófilos.
Componente argirofilo: componente que tiene afinidad por las sales de plata, ejemplo fibras reticulares .
Acidofilia Basofilia
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COLORACION H - E
AFINIDAD TINTORIAL DEL CITOPLASMA ?
AFINIDAD TINTORIAL DEL NÚCLEO ?
CEREBRO. HE (obj.100X - inmersión)- Corteza cerebral. Neurona piramidal
GANGLIO LINFÁTICO. HE (obj.100X - inmersión)- Tejido conectivo reticular. Macrófagos libres y fijos
AFINIDAD TINTORIAL DEL CITOPLASMA ?
AFINIDAD TINTORIAL DEL NÚCLEO ?
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TRICRÓMICA DE MALLORY PARA COLÁGENO
TRICRÓMICA DE MASSON PARA COLÁGENO
IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA PARA FIBRAS RETICULARES
RIÑÓN- Lámina basal.-ÁCIDO
PERYÓDICO-SCHIFF (PAS)
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MICROSCOPÍA
Es el estudio detallado de
células, tejidos y órganos
mediante el uso del
microscopio.
• Identificar células, tejidos y órganos indicados
y/o enfocados.
• Describir las características histológicas que le
permitió identificarlo.
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CLASIFICACIÓN DE LOS MICROSCOPIOS SEGÚN EL TIPO DE LUZ
ÓPTICO
ELECTRÓNICO
Simple
Compuesto
M.Opropiamente
dicho
M.O especiales
Monocular
Binoculares
Campo oscuroContraste de fases
Luz polarizada
Transmisión
Barrido
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TUBO
CABEZAL
ASAREVOLVER
PLATINA
BASETORNILLO
MICROMETRICO
TORNILLOMACROMETRICO
PINZA
CARRO
SISTEMA MECÁNICO
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SISTEMA ÓPTICO
OCULARES
OBJETIVOS
CONDENSADOR
SISTEMA DE ILUMINACIÓN
LÁMPARA
El sistema de iluminación genera,trasmite y modula la intensidad de laluz que incide sobre la preparaciónhistológica.
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MICROSCOPIOS ÓPTICOS ESPECIALES
*Utiliza dos filtros polarizantes: un polarizador que dirige toda la luz hacia el objeto y el analizador que registra la imagen con toda las variaciones sufrida por la luz al atravesar el objeto.
*Se utiliza un condensador especial que desvía la luz para que no llegue directamente al objeto, observándose la imagen sobre un fondo oscuro.
•Diafragma anular: A diferencia del tipo iris,
este diafragma solo deja pasar la luz a
través de una línea circular. Al atravesarlo, la
luz forma un cilindro hueco que ilumina la
preparación.
•Placa anular de fase: Es una lente que se
añade al sistema de lentes del objetivo. Esta
placa enlentece los rayos de luz procedentes
del condensador, y es indispensable que se
encuentre alineada con el diafragma.
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MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS
Microscopio Electrónico
de Transmisión
Microscopio Electrónico
de Barrido
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ARTEFACTOS DE LA PREPARACIONES HISTOLÓGICA
Definición: serie de alteraciones que pueden observarse en los cortes histológicos,
ocasionadas por anomalías en uno o más de los diferentes pasos de la técnica
histológica y que pueden dificultar o incluso imposibilitar la identificación de tejidos yórganos.
Hallazgos frecuentes:
AUTÓLISIS RETRACCIÓN PRECIPITADO
´PLIEGUES MUESCAS BURBUJAS
PELOS O FIBRAS
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Email: [email protected] de consultas: Viernes de 9:00 a.m. -11:00 a.m.
RECOMENDACIONES
1.Desarrollar el programa instruccional.
2.Bibliografía recomendada:
• Histología básica de: Junqueira &
Carneiro.
• Histología Veterinaria de H. Dieter Dellman.
3.Revisar páginas web:
https://anatomiamicrovet.wordpress.com
4. Aclarar dudas con el profesor en su
respectivo horario de consultas.