UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MODALIDAD: INVESTIGACIÓN

TEMA:

PARÁMETROS DE CALIDAD Y VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO DE

DILTIAZEM POR ESPECTROFOTOMETRÍA

TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS.

AUTORES:

JENNIFFER LISSETH CAMPUZANO MAGALLANES

CARLA JACQUELINE GUTIÉRREZ CABRERA

TUTOR:

MIGDALIA MIRANDA MARTINEZ, PhD.

GUAYAQUIL – ECUADOR

2018

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ÍNDICE GENERAL

INTRODUCCIÓN. .................................................................................................... 1

FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ........................................................................ 2

HIPÓTESIS .............................................................................................................. 2

OBJETIVOS ............................................................................................................. 2

Objetivos Generales ............................................................................................... 2

Objetivos Específicos ............................................................................................. 2

CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO ........................................................................... 4

I.1 PARAMETROS DE CALIDAD, SU IMPORTANCIA EN LAS BUENAS PRÁCTICAS

DE MANUFACTURA (BPM). ................................................................................... 4

1.1.1 Garantía de la calidad ................................................................................ 4

1.1.2 Buenas Prácticas de Manufactura de productos farmacéuticos ......... 5

I.1.3 Control de calidad ........................................................................................... 5

I.1.3.1 Ensayos habituales en control de calidad ............................................ 6

I.1.3.2 Métodos instrumentales ......................................................................... 8

I.2 VALIDACIÓN DE MÉTODOS DE ANÁLISIS. .................................................. 10

I.2.1 Definición y Objetivos .............................................................................. 10

I.2.2 Clasificación de métodos analíticos ....................................................... 11

I.2.3 Parámetros analíticos de calidad para la validación de métodos.. ........ 12

I.2.3.1 Exactitud ................................................................................................. 12

I.2.3.2 Precisión ................................................................................................. 12

I.2.3.3 Linealidad ................................................................................................ 13

I.2.3.4 Límite de detección ................................................................................ 13

I.2.3.5 Límite de cuantificación ........................................................................ 13

I.2.3.6 Robustez ................................................................................................. 13

I. 3 DILTIAZEM ....................................................................................................... 14

I.3.1 Definición ................................................................................................... 14

I.3.2 Características Físico Químicas.............................................................. 14

I.3.3 Farmacocinética. ....................................................................................... 15

I.3.4 Farmacodinamia ....................................................................................... 16

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I.3.5 Farmacología y Uso .................................................................................. 17

I.3.6 Métodos de extracción y análisis ............................................................ 17

CAPÍTULO II. MARCO METODOLÓGICO .......................................................... 19

II.1 Población, muestra y criterios establecidos ............................................... 19

II.2. Parámetros físico-químicos .......................................................................... 20

II.2.1 Peso Promedio ......................................................................................... 21

II.2.2 Forma y Dimensiones ............................................................................. 21

II.2.3 Fuerza de ruptura ..................................................................................... 22

II.2.4 Friabilidad ................................................................................................. 23

II.2.5 Desintegración ......................................................................................... 23

II.2.6 Valoración del Principio Activo .............................................................. 24

II.2.7 Uniformidad de contenido…………………………………………………..24

II.2.8 Disolución…………………………………………………………………..….25

II.3 Validación del método de análisis para valorar Diltiazem, en Diltiazem 60 mg

tabletas, por espectrofotometría. ........................................................................ 26

II.3.1 Equipos ..................................................................................................... 26

II.3.2 Materiales y Reactivo ............................................................................... 26

II.3.3 Materias primas utilizadas en la validación del método. .................... 27

II.3.4 Requisitos previos para la validación. Características de validación.26

II.3.5 PARÁMETROS DE VALIDACIÓN: CONCEPTOS. ..................................... 27

II.3.6 Valoración del Diltiazem. ......................................................................... 30

CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ..................................................... 31

III.1 Características físico químicas .................................................................... 32

III.2 Validación del método analítico ................................................................... 36

III.2.1 Linealidad…………………………………………………………………..…..35

III.2.2 Precisión intermedia................................................................................... 40

III.2.3Repetibilidad entre concentraciones………………………………………38

III.2.4 Placebo………………………………………………………………………….39

III.2.5 Resumen de los parámetros de validación determinados ......................... 40

IV. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .................................................. 43

IV.1 Conclusiones ................................................................................................. 41

IV.2 Recomendaciones ......................................................................................... 44

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................ 45

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ÍNDICE DE TABLA

Pag.

Tabla I. Operacionalización de las Variables. 19

Tabla II. Datos de peso promedio, diámetro y espesor de los lotes del producto Diltiazem 60 mg, innovador

31

Tabla III. Datos de Fuerza de Ruptura de las tabletas de Diltiazem. 32

Tabla IV. Datos de Friabilidad de los lotes de Diltiazem. 32

Tabla V. Datos de Desintegración de Ditliazem 60 mg 33

Tabla VI. Resultados de la uniformidad de contenido. 33

Tabla VII. Resultados de la disolución. 34

Tabla VIII (A). Estudio de linealidad de las tabletas de diltiazem 60 mg 35

TABLA VIII (B). Análisis de varianza 36

Tabla IX. Datos de Precisión intermedia 38

Tabla X. Datos de repetibilidad entre concentraciones. 39

Tabla XI. Datos de Placebo. 39

Tabla XII. Parámetros de validación para Diltiazem. 40

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ÍNDICE DE FIGURAS

Pag.

Figura 1. Estructura del Clorhidrato de Diltiazem. 14

Figura 2. Gráfica de linealidad de las tabletas de Diltiazem 60 mg.

36

Figura 3. Curvas de calibración de linealidad y exactitud.

37

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RESUMEN

En el presente trabajo se realizó el estudio de los parámetros de calidad del

Diltiazem tabletas 60 mg innovador, que se comercializa en Ecuador y se

desarrolló el método de validación por espectrofotometría para este producto. El

control de la calidad de las tabletas innovadoras, demostró que para los tres lotes

estudiados no se presentaron diferencias significativas en ninguno de los

parámetros físico-químicos evaluados. Para la validación del método se encontró

que era lineal en una concentración de 60 mg con un coeficiente de correlación r2

= 0,990, el método además fue preciso, exacto y reproducible y está conforme

para su empleo en los análisis del producto.

XiV

ABSTRACT

In the present work, the quality parameters of Diltiazem tablets 60 mg innovative, which is

marketed in Ecuador and the method of validation by spectrophotometry for this product

was developed. The quality control of the innovative tablets, showed that for the three

batches studied there were no significant differences in any of the physical-chemical

parameters evaluated. For the validation of the method, it was found to be linear at a

concentration of 60 mg with a correlation coefficient r2 = 0.990, the method was also

accurate, exact and reproducible and is suitable for use in the product analyzes.

XiV

CERTIFICADO DEL TRIBUNAL

Acta de Registro de la Sustentación Final

El Tribunal de Sustentación del Trabajo de Titulación de las Srtas. JENNIFFER

LISSETH CAMPUZANO MAGALLANES y CARLA JACQUELINE GUTIÉRREZ

CABRERA, después de ser examinado en su presentación, memoria científica y

de defensa oral, da por aprobado el Trabajo de Titulación.

____________________________ Pilar SoledispaCañarte, MSc.

(Presidente) MIEMBRO DEL TRIBUNAL ________________________________ _______________________________ Kolenyak Dos Santos Fernanda, PhD Jiménez Heinert María Elena, MSc. DOCENTE–MIEMBRO DEL TRIBUNAL DOCENTE–MIEMBRO DEL TRIBUNAL

____________________________ Abg. FRANCISCO PALOMEQUE

SECRETARIO GENERAL

1

INTRODUCCIÓN.

En los últimos años, progresivamente se ha puesto más énfasis en las

pruebas de Validación de Métodos Analíticos dentro de la industria farmacéutica y

por las autoridades reguladoras. La garantía de calidad de los productos

farmacéuticos es un concepto amplio que abarca todos los asuntos que individual o

colectivamente influyen en la calidad de un producto.

En este sentido, debe destacarse la importancia de las pruebas de validación

para formas farmacéuticas orales sólidas de liberación inmediata, tales como

tabletas y cápsulas, ya que son esenciales para evaluar la calidad lote a lote de un

producto farmacéutico, para orientar el desarrollo de nuevas formulaciones y

garantizar la continuidad de la calidad y el rendimiento del producto después de

ciertos cambios, como cambios en la formulación, el proceso de fabricación, el sitio

de fabricación y la ampliación del proceso de fabricación (Rodríguez y col., 2014).

Tomando recuento de esto, claramente existe una necesidad real de

desarrollar pruebas de validación de métodos analíticos para productos

farmacéuticos para asegurar la calidad y atender las demandas regulatorias.

El Clorhidrato de Diltiazem es un antagonista de los canales de calcio,

benzotiazepina, utilizado principalmente en el tratamiento de la angina, la

hipertensión y las arritmias supraventriculares, y está comercialmente disponible en

tabletas, tabletas de liberación prolongada, liberación inmediata, cápsulas, cápsulas

de liberación prolongada o formas de dosificación inyectables (Cataldi, 2015).

Es un polvo cristalino blanco, inodoro, que es libremente soluble en agua,

diclorometano, alcohol metílico, cloroformo y ácido fórmico. Es ligeramente soluble

2

en alcohol deshidratado e insoluble en éter. El pH de una solución al 1% en agua es

de 4.3 a 5.3.

Este proyecto pretende evaluar el clorhidrato de diltiazem en tabletas, en el

medicamento innovador, validando el método analítico utilizado para cuantificar el

fármaco.

FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

¿La validación del método analítico utilizado para la determinación de

Diltiazem ayudará al aseguramiento y control de la calidad?

HIPÓTESIS

La validación del método analítico ayuda al aseguramiento de la calidad de las

tabletas de diltiazem

OBJETIVOS

Objetivos Generales

Realizar el control de calidad de tres lotes de las tabletas del diltiazem de

marca comercial y validar el método analítico.

Objetivos Específicos

Realizar el control de calidad de las tabletas de diltiazem innovadora

3

Desarrollar el protocolo para la validación del método analítico, para la

determinación de Diltiazem.

Establecer una evidencia documentada que demuestre el desempeño del

método analítico de cuantificación, si es factible para la obtención de resultados

reproducibles, confiables demostrados estadísticamente.

4

CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO

I.1 PARAMETROS DE CALIDAD, SU IMPORTANCIA EN LAS BUENAS

PRÁCTICAS DE MANUFACTURA (BPM).

1.1.1 Garantía de la calidad

Según las normas ISO 9000, en la industria farmacéutica la administración de la

calidad se define como (“…) el aspecto de la función administrativa que determina y

pone en práctica la "política de la calidad", es decir la orientación y las intenciones

generales de un organismo en lo que respecta a la calidad, en la forma como lo

expresan y lo autorizan las autoridades superiores de dicho organismo (…”).

Para la garantizar la administración de la calidad son necesarios algunos

aspectos básicos entre los cuales se pueden citar (ISO, 9000):

infraestructura apropiada o "sistema de calidad" que abarque la estructura,

procedimientos, procesos y recursos;

acciones sistemáticas necesarias para asegurar la confianza suficiente en

que el producto satisface determinadas condiciones de calidad.

La Garantía de la calidad es un concepto muy amplio que abarca todos los

aspectos que influyen en la calidad del producto individual o colectivamente. Se

puede considerar como el conjunto de medidas que se adoptanpara asegurar que

los productos farmacéuticos tengan la calidad necesaria para el uso al que están

destinados. Por tanto, la garantía de la calidad incorpora las BPM y otros factores,

incluyendo aquellos que van más allá del alcance de este trabajo, tales como el

diseño y la elaboración del producto.

5

1.1.2 Buenas Prácticas de Manufactura de productos farmacéuticos

Las Buenas Prácticas de Manufactura garantizan que los productos se fabriquen

de forma uniforme y controlada y de acuerdo con las normas de calidad apropiadas

al uso que se pretende dar a los productos, y acorde a las condiciones exigidas para

su comercialización. Las reglamentaciones que rigen las BPM tienen por objeto

principal disminuir los riesgos inherentes a toda producción farmacéutica que no

pueden prevenirse completamente mediante el control definitivo de los productos

(Mora, 2009).

I.1.3 Control de calidad

Dentro de las BPM representaal muestreo, ensayos, establecimiento de las

especificaciones así como a los procedimientos de organización, documentación, y

autorización que aseguren la calidad de los productos que se elaboren. No se limita

a las operaciones de laboratorio, sino que está presente en todas las decisiones

concernientes a la calidad del producto (Miró, 2015).

Los requisitos básicos del control de calidad son los siguientes:

a) Instalaciones adecuadas, personal capacitado, y procedimientos

aprobados.Deben llevarse a cabo muestreos, inspección, ensayo de

materias primas, materiales de envasado, y productos intermedios, a granel,

y acabados.

b) Se deben obtener muestras de materias primas, materiales de

envasado, y productos intermedios para su control de calidad.

c) Los métodos de ensayo deben ser validados.

d) Todos los procedimientos y actuaciones deben quedar

registradospara demostrar que se han llevado a cabo y que cualquier

desviación ha sido plenamente registrada e investigada.

6

e) Los productos terminados deben contener ingredientes que se

ajusten a la composición cualitativa y cuantitativa del producto, conforme a

su descripción en la autorización de comercialización; los ingredientes deben

tener la pureza exigida, los envases apropiados y las etiquetas

correspondientes.

f) Se deben registrar los resultados de la inspección y ensayo de

materiales y de productos intermedios, a granel y terminados, para verificar

si cumplen con las especificaciones; el examen de un producto debe incluir

la revisión y evaluación de la documentación de producción pertinente y un

estudio de las desviaciones de los procedimientos especificados.

g) No se debe autorizar la venta o suministro de ningún lote de

productos antes de su certificación por la(s) persona(s) autorizada(s) en el

sentido de que el lote esté conforme los requisitos de la autorización de

comercialización.

h) Debe retenerse un número suficiente de producto para posibilitar un

examen de éste en el futuro si fuere necesario; los productos retenidos

deben guardarse en el paquete final, a menos que dicho paquete sea

excepcionalmente voluminoso.

i) Debe mantenerse la documentación que respalde la calidad de la

materia prima.

I.1.3.1 Ensayos habituales en control de calidad

Los ensayos analíticos que se realizan en un Departamento de Control de

Calidad son numerosos y diversos, debido las diferentes formas farmacéuticas que

se analizan y a las exigencias de cada producto. Algunas pruebas son específicas

para algunos productos mientras que otros ensayos son más frecuentes y se

ejecutan para casi todos los productos.

7

Dentro de los análisis más frecuentes realizados se encuentran (Castellanos,

2010, Volonté et al., 2013):

Aspecto:Se realiza una descripción cualitativa sobre el producto, ya sea materia

prima, producto terminado o intermedio. Se comprueban distintas características del

producto como pueden ser: apariencia (sólido, líquido, suspensión), color, forma,

tamaño, etc.

Identificación: Este ensayo debe ser lo más específico posible. La falta de

especificidad de un método de identificación puede ser resuelta mediante

combinación de varios métodos.

Ensayo de contenido: Consiste en una determinación cuantitativa del producto,

para establecer su grado de pureza o bien para determinar el contenido de uno o

más componentes.

Sustancias relacionadas: Son posibles impurezas que puede contener una

muestra, tanto derivadas de la degradación de algunos de los componentes de la

muestra como del proceso de producción.

Propiedades físico-químicas: Estas varían en función de la naturaleza del

producto. En preparados líquidos pH, acidez; en sólidos, tamaño de partícula,

dureza, etc.

Ensayo de disolución: Es la medida de como el principio activo es liberado del

producto farmacéutico. Es un ensayo muy importante dentro del control de calidad

de preparados sólidos ya que da una aproximación de la biodisponibilidad del

medicamento en el cuerpo.

Ensayo de uniformidad de dosificación: Es una medida de homogeneidad del

producto.

Ensayos biológicos: Este tipo de ensayos se realizan utilizando organismos

microbiológicos para evaluar determinadas propiedades del fármaco. Se suelen

8

realizar para muestras líquidas de las cuales debe evaluarse su esterilidad o su

carga microbiológica, o bien para antibióticos y vacunas para determinar su

efectividad.

I.1.3.2Métodos instrumentales (Romero, 2001)

Cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC): Se aplicaen ensayos de

contenido, caracterización de impurezas (acoplada con espectroscopia de masas),

determinación de impurezas y ensayos de estabilidad.

Cromatografía de gases (CG): Se emplea en ensayos de contenido,

caracterización de impurezas (acoplada con espectroscopia de masas),

determinación de impurezas y determinación de impurezas orgánicas volátiles

(solventes residuales).

Espectrofotometría Ultravioleta-Visible (UV-VIS): Se utiliza en ensayos de

contenido, ensayos de disolución y determinación de impurezas.

Espectrofotometría en el infrarrojo (IR): Aplicación en ensayos de identificación.

Espectrofotometría de absorción/ de emisión atómica: Determinación de

contenido de metales (Na, Li, K) y determinación de impurezas metálicas (Fe, Al).

Polarimetría: Aplicación en: determinación de pureza óptica y determinación de

compuestosenantioméricos.

El Consejo Internacional para la Armonización de Requisitos Técnicos para

Productos Farmacéuticos (ICH por sus siglas en Ingles),reúne a las autoridades

reguladoras y a la industria farmacéutica para trabajar en procesos de convergencia

regulatoria y desarrollo de guías internacionales de referencia internacional sobre

los aspectos científicos y técnicos del registro de medicamentos. Este consejo tiene

como misión lograr una mayor armonización en todo el mundo para garantizar que

9

los medicamentos seguros, efectivos y de calidad se desarrollen y registren en

forma eficiente. (ICH, 2015).

10

I.2 VALIDACIÓN DE MÉTODOS DE ANÁLISIS.

I.2.1 Definición y Objetivos

La validación de un método de análisis puede definirse de diferentes formas:

Demostración, a través de estudios de laboratorio, que la capacidad del

método satisface los requisitos para las contribuciones analíticas deseadas.

Sistematización de un procedimiento analítico para documentar pruebas que

demuestren que el método de análisis cumple con un propósito.

Procedimiento mediante el cual se prueba la exactitud y confianza de un

método analítico y se demuestra que se puede aplicar en un laboratorio.

Los métodos de análisis utilizados en el control de calidad de productos

farmacéuticos deben haber sido validados previo a su uso en rutina. La validación

de un método de ensayo tiene como finalidad demostrar la idoneidad de dicho

método para llevar a cabo un análisis determinado (Vázquez, 2008; Cáñez y

Monserrat, 2015).

Mediante la validación de un método se establece si los parámetros de calidad

satisfacen los requisitos de una aplicación analítica concreta. Se requiere

experimentación y comparación con valores de referencia bien conocidos(Vázquez,

2008).

Los objetivos de una validación son (WHO, 2002):

Coherencia entre los resultados obtenidos y las necesidades.

Asegurar la calidad de la información obtenida.

Caracterizar los métodos y herramientas analíticas.

Facilitar las auditorías de calidad.

Fundamentar la transferencia, de métodos y herramientas, y la armonización

de los resultados entre los laboratorios.

11

I.2.2 Clasificación de métodos analíticos

Se clasifican de acuerdo a los siguientes criterios (Matallana, 2015):

1) En función de su estado regulatorio en:

a) Métodos farmacopéicos: Todos aquellos métodos que aparecen en

cualquier farmacopea (FEUM, USP, BP, Europea, etc.)

b) Métodos no farmacopéicos: Aquellos no compendiados en una

farmacopea.

2) En función de su aplicación en:

a) Métodos para producto a granel

b) Métodos para producto terminado

c) Métodos para materia prima

d) Métodos indicadores de estabilidad

3) En función de la naturaleza de la respuesta analítica en:

a) Métodos físico-químicos: Cuando la respuesta es de carácter físico

(absorción de luz, emisión de luz, voltaje, etc) o químico (consumo de

iones -OH, consumo de un acomplejante, etc)

b) Métodos biológicos: Cuando la respuesta es de carácter biológico

(crecimiento de un microorganismo, protección, muerte, etc)

4) En función de su propósito analítico en:

a) Métodos para cuantificar el analito (potencia).

b) Métodos para establecer la presencia del analito a un límite.

c) Métodos para identificar el analito.

5) En función de la naturaleza del sistema de medición se clasifican en:

12

a) Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta

analítica, permite medir una señal de ruido (cromatógrafo de líquidos,

cromatógrafo de gases, espectrofotómetros, etc).

b) Métodos en los cuales el instrumento de medición no permite medir

una señal de ruido (buretas, medidor de halos, potenciómetros, etc).

I.2.3Parámetros analíticos de calidad para la validación de métodos. (Eurachem, 2005; Sandoval et al, 2010; Farmacopea Argentina, 2012).

I.2.3.1 Exactitud

Refleja de forma evidente, el grado de concordancia entre un valor real (medido)

y un valor teórico (verdadero) y generalmente se sustenta a través del porcentaje de

recuperación.

I.2.3.2 Precisión

Es una medida de la dispersión de los datos en torno a un valor central o el grado

de concordancia entre mediciones replicadas de la misma cantidad, puede

expresarse como, desviación estándar, porcentajes del coeficiente de variación

(%CV) o la varianza. La precisión para métodos instrumentales debe ser menor o

igual al 2%. (Christian,2009)

El nivel de exigencia de los resultados dependerá del tipo de muestra y del método

utilizado. Según ICH Q2, (2005) tres niveles:

Repetibilidad

Precisión intermedia

Reproducibilidad

13

I.2.3.3 Linealidad

La linealidad es la capacidad, dentro de un intervalo dado, para proporcionar

resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito de la

muestra en estudio (CENAM-ema, 2008).

I.2.3.4 Límite de detección

El límite de detección (LD) es la concentración mínima que puede detectarse de

un analito en la matriz de una muestra, aunque no necesariamente cuantificarse,

bajo condiciones analíticas específicas (Thompson et al., 2002; IUPAC, 2014).

Existen diversas aproximaciones para obtener este valor:

Inspección visual en métodos no instrumentales.

Cálculos estadísticos basados en la relación señal/ruido, aplicables a

métodos con línea de base.

Cálculos estadísticos basados en la desviación estándar de la respuesta

obtenida, ya sea de los valores obtenidos o bien de parámetros de la curva

de calibración o del blanco.

Este es un parámetro para métodos de análisis de trazas y puede ser

necesario en ensayos de uniformidad y de disolución.

I.2.3.5 Límite de cuantificación

El límite de cuantificación (LC) es el valor de concentración mínima que puede

obtenerse con una imprecisión aceptable (Thompson et al., 2002; CENAM-ema,

2008).

I.2.3.6 Robustez

Es la evaluación de la susceptibilidad del método de análisis a variaciones de las

condiciones analíticas, como variaciones en reactivos y variaciones instrumentales.

14

I. 3 DILTIAZEM

I.3.1 Definición

Diltiazem (DTZ) es un bloqueador de canales de calcio que presenta actividad

óptica y tiene estructura de benzodiazepina. El fármaco que se emplea en la

terapéutica es el dextro (+) - cis-diltiazem con configuración (2S, 3S)(Quagliaa et al.,

2005).

Actúa como relajante de los músculos del corazón y los vasos sanguíneos. Se

utiliza para tratar la hipertensión, la angina de pecho y ciertos trastornos del ritmo

cardíaco (fibrilación auricular y las arritmias supraventriculares). Otras indicaciones

clínicas están en expansióncomo lo es su uso en el tratamiento de afecciones

dolorosas de la región anorrectal, incluidas las fisuras anales y el dolor

poshemorroidectomía (Fernández et al., 2009; Bernal et al., 2010).

El Diltiazem puede causar toxicidad cardiovascular grave, incluida la hipotensión

y diversos grados de bloqueo de la conducción auriculoventricular, especialmente

en los entornos de intoxicación aguda, también puede ser responsable de varios

efectos secundarios dermatológicos que incluyen erupción eritematosa, dermatitis

exfoliativa, pustulosis exantemática generalizada aguda y dermatitis fotoalérgica.

(Vademécum, 2013).

I.3.2 Características Físico Químicas

Descripción: Polvo cristalino blanco e incoloro.

Nombre químico: 1,5-benzotiazepina-4(5H)-ona,3-(acetoxi)-5-[2-

(dimetilamino)-etil]-2,3-dihidro-2-(4-metoxifenil) clorhidrato.

15

Fórmula molecular: C22H26N2O4S.HCl

Peso molecular: Diltiazem clorhidrato 450,98.

Solubilidad: Soluble en agua, cloroformo, ácido fórmico y metanol,

moderadamente soluble en etanol deshidratado. Prácticamente insoluble en

éter y benceno.

Punto de Fusión: 207 – 210°C con descomposición.

Almacenamiento: Conservar en envases bien cerrados y protegidos de la

luz.

Estructura molecular: Figura 1

Figura 1. Estructura del Clorhidrato de Diltiazem Fuente:Vademécum 2013

I.3.3 Farmacocinética. (Vademécum, 2013)

Absorción: El Diltiazem presenta una buena absorción.

Biodisponibilidad: Presenta una biodisponibilidad de +/-40%, sufriendo

metabolismo del primer paso.

16

Unión a proteínas: Relativamente alta 70-80% de los cuales una 35-40% se une

con la albúmina.

Biotransformación hepática: Se realiza a través del citocromo P450, resultando

como los metabolitos activos: desacetildiazem y N-desmetildiazem.

Vida media: oral (tabletas): +/- 20-30 minutos inicial Intravenoso: +/-3.4 horas

Duración de la acción: 30 – 60 minutos (tabletas)

Concentración máxima: se logra de 2 a 3 horas después de la administración

(tabletas).

Efecto terapéutico máximo: Antihipertensivo: en 2 semanas.

Eliminación: Biliar y renal, del 2 al 4% se elimina tal cual (para tabletas).

I.3.4 Farmacodinamia(Vademécum 2013)

Se considera que en el mecanismo de acción ocurre una inhibición de la entrada

de calcio en áreas selectivas voltaje-sensibles denominadas “canales lentos” que se

encuentran a lo largo de la membrana celular; se reduce la concentración

intracelular de calcio en las células de la musculatura lisa cardíaca y vascular y

ocurre una dilatación tanto de las arterias coronarias y periféricas como de las

arteriolas lo que podría reducir el ritmo cardíaco, disminuyendo la contractibilidad del

miocardio; creando un efecto inotrópico negativo; y disminuyendo también la

conducción nodal auriculo-ventricular.

Una dilatación periférica que produceeste fármaco, reduce la presión sistémica,

esto disminuye la tensión en la pared miocardio reduciendo a su vez el oxígeno

necesario en los tejidos del mismo. En la angina una relajación de las arterias

17

coronarias y una inhibición de los espasmos en la arteria coronaria mejorarán el flujo

sanguíneo y el suministro de oxígeno para el tejido miocárdico.

El efecto antihipertensivo se logra al reducirse la resistencia vascular periférica

total como resultado de una vasodilatación.

I.3.5 Farmacología y Uso

En un estudio realizado por Obata(2006), se examinó el efecto del diltiazem,

sobre la liberación de norepinefrina (NE) inducida por la despolarización de potasio

(K +) en el miocardio de rata utilizando una técnica de microdiálisis montada de

manera flexible. Los resultados sugierieron que el calcio (Ca2 +) puede jugar un

papel clave en la liberación de NE inducida por la despolarización de K + en el

miocardio.

La dosis inicial recomendada en humanos para el tratamiento como antianginoso

y como antihipertensivo es de 30 mg de tres a cuatro veces al día, debiendo

incrementarse la dosis gradualmente en intervalos de uno o dos días según sea

necesario. (Vademécum, 2013)

I.3.6 Métodos de extracción y análisis

Rahman, (2000), desarrolló un método espectrofotométrico para la determinación

del clorhidrato de diltiazem. El fármaco se hierve con metavanadato de sodio en

medio de ácido sulfúrico (11,0 M) durante 20 min y la absorbancia se mide a 750

nm.

18

Sanchez y Rocha (2011), Plantearon un método por microextracción líquida-

líquida sin segmentación de fase en un sistema de flujo multicommutado para la

determinación del Diltiazem. El procedimiento se basó en la formación de un par

iónico entre el fármaco y el colorante azul de bromotimol a pH 3,5. La detección se

realizó sin separación de fases en un tubo de vidrio acoplado a un

espectrofotómetro de fibra óptica.

Adibkia et al, (2014), propusieron una nueva técnica optimizada Liquisolid que es

un nuevo enfoque para formular formas de dosificación de liberación sostenida.

Parece que la solubilidad de un ingrediente activo en el disolvente juega un papel

importante en el perfil de liberación del fármaco. El objetivo que tuvo ese estudio fue

investigar el efecto del tipo de disolvente sobre el perfil de liberación de clorhidrato

de diltiazem a partir de compactos liquisólidos.

19

CAPÍTULO II. MARCO METODOLÓGICO

El tipo de Investigación es experimental, de laboratorio, correlacional. Se seguirá

un método empírico experimental.

II.1 Población, muestra y criterios establecidos

La población estará constituida por tres lotes de las tabletas de Diltiazem

clorhidrato, producidas y comercializadas por una multinacional radicado en

Ecuador. La muestra utilizada es finita y está en función de los requerimientos de las

técnicas de análisis empleadas, con repeticiones en cada caso.

Criterio de inclusión: tabletas que no estén caducadas, que pertenezcan al

mismo laboratorio y a los lotes seleccionados.

Criterios de exclusión: tabletas caducadas, de lotes diferentes a los utilizados y

de otro laboratorio.

Variable dependiente: Validación del método

Variables independientes: Linealidad, Precisión, Robustez, Repetibilidad y

Exactitud.

Variable interviniente: Equipo empleado; Analista

20

Tabla I. Operacionalización de las Variables

VARIABLE DEFINICIÓN INDICADOR UNIDAD

VALIDACIÓN

(Dependiente) Demostración, a través de

estudios de laboratorio, que

la capacidad del método

satisface los requisitos para

las contribuciones analíticas

deseadas

Se puede determinar

por medio de ensayos

químicos, con

repetibilidad y

reproducibilidad.

%

Linealidad

(Independiente) Capacidad, dentro de un intervalo dado, para proporcionar resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito de la muestra en estudio

Corresponde a la ecuación de la recta.

SD

Precisión (Independiente)

Es una medida de la dispersión de los datos en torno a un valor central o el grado de concordancia entre mediciones replicadas de la misma cantidad,

Puede expresarse como, desviación estándar, porcentajes del coeficiente de variación o la varianza.

%, CV, SD

Robustez

(Independiente)

Es la evaluación de la susceptibilidad del método de análisis a variaciones de las condiciones analíticas, como variaciones en reactivos y variaciones instrumentales

En tal caso, se utiliza para métodos para

HPLC %

Exactitud

(Independiente)

Refleja de forma evidente, el grado de concordancia entre un valor real (medido) y un valor teórico (verdadero)

Es el porcentaje de los resultados obtenidos con el de referencia

aceptado.

%

II.2. Parámetros físico-químicos

Las tabletas de Clorhidrato de Diltiazem 60 mg, fueron adquiridas en el mercado

farmacéutico ecuatoriano, en las farmacias y droguerías de la ciudad de Guayaquil.

Se realizaron los estudios a 150 tabletas de 3 lotes de un solo laboratorio, todos

dentro del periodo de vida útil y se codificaron por marca con letras mayúsculas de

la A hasta la C.

21

Todos los ensayos fueron realizados siguiendo los métodos descritos en la USP-

38/NF33 (2015), previa validación de algunos parámetros. Las comparaciones se

realizaron frente a un estándar de Diltiazem Clorhidrato.

II.2.1 Peso Promedio

Tomar 10 tabletas, pesarlas, y anotar los datos, hacer un promedio de las 10, se

realizó la prueba por triplicado. Se empleó una balanza analítica Mettler Toledo.

II.2.2 Forma y Dimensiones

La forma se determinó visualmente y se midió con vernier el ancho y largo de 10

tabletas y se anotaron los resultados para calcular el valor promedio, se realizó por

triplicado por cada lote.

22

II.2.3 Fuerza de ruptura

La fuerza de ruptura y el grado de compactación de las tabletas también llamada

dureza, se lo determino con 20 tabletas, colocándolas en un durómetro DR

SCHELEUNIGER, 6 D, Código DUR – 0710, que tiene dos superficies separadas,

que al encenderla, se origina un desplazamiento directo a la tableta hasta que se

produce la ruptura de las mismas, en esta equipo los resultados se reportan en KgF.

La prueba se realizó por cada lote en estudio por triplicado.

23

II.2.4 Friabilidad

Controlar la resistencias de los comprimidos al desgaste por rodadura, friccion o

caída asi como la resistencia a los esfuerzos mecánicos a los que son sometidos en

los procesos de envasado, grageado y transporte, se pesa alrededor de 6 g de

muestra, pesando previamente, colocar las tabletas en el tambor giratorio

(friabulómetro marca VANKEL, Código: RFQFR-251), durante unos 5 minutos,

pasado el tiempo tomar las tabletas y proceder a pesarlas nuevamente, con esto se

verificara si en este proceso, tableta sufrió algún cambio, con respecto a su peso.

Se realiza esta prueba por triplicado por cada lote.

II.2.5 Desintegración

Se empleó un equipo de desintegración VANKEL, Código VK -7. Se tomaron 6

tabletas para su respectiva desintegración, se colocó cada tableta en cada tubo de

24

la canastilla del desintegrador para que se sumerja en agua a 37°C, que se

mantiene con el calefactor prendido, propio de la máquina, añadir un disco a cada

tubo de canastilla, se sostiene la canastilla con la varilla del soporte del equipo,

anotar el tiempo inicial, observar constantemente la desintegración de la tableta, una

vez que se desintegro, anotar el tiempo final, y restar el final con el inicial. Se realizó

la prueba por triplicado en cada uno de los lotes en estudio.

II.2.6 Valoración del Principio Activo

Pesar 100 mg que contenga aproximadamente 25 mg de Diltiazem y transferir a un

matraz volumétrico de 100 mL con unos 70 mL de agua, disolver la muestra

agitando y enrasar con agua, pipetear 1 mL a un matraz de 50 mL y enrasar a

volumen final con agua. La valoración siguió una técnica espectrofotométrica, en la

cual aplicamos la fórmula para obtener el porcentaje de concentración. Esta

metodología la aplico tanto para estándar secundario como para el primario (USP),

ya que existirá una comparación de sus porcentajes, para poder decir que el

25

estándar secundario es óptimo para siguientes análisis. El equipo a utilizar es un

PerkimElmers, a una longitud de onda de 237 nm, y su blanco es agua.

II.2.7 Uniformidad de contenido

Pesar 100 mg que contenga aproximadamente 25 mg de Diltiazem y transferir

a un matraz volumétrico de 100 mL con unos 70 mL de agua, disolver la muestra

agitando y enrasar con agua, pipetear 1 mL a un matraz de 50 mL y enrasar a

volumen final con agua. La valoración siguió una técnica espectrofotométrica, en la

cual aplicamos la fórmula para obtener el porcentaje de concentración. El equipo a

utilizar es un PerkimElmers, a una longitud de onda de 237 nm, y su blanco es agua.

Este análisis repetimos 10 veces, por 3 lotes.

II.2.8 Disolución

Llevar 6 tabletas en los vasos de disolución a 900 mL de Agua como medio,

con el aparato 2 a 75 rpm durante 30 minutos, pasado el tiempo, filtrar y tomar una

26

alícuota de 1 mL a 10 mL con agua, leerlo a 237 nm, el blanco es agua. Este

análisis se lo repite por 3 lotes.

II.3 Validación del método de análisis para valorar Diltiazem, en

Diltiazem 60 mg tabletas, por espectrofotometría.

Esta validación será aplicable al Método analítico por espectrofotometría para la

identificación y cuantificación de Diltiazem en Diltiazem 60 mg.

II.3.1 Equipos

EQUIPO MARCA CÓDIGO CALIBRACIÓN CALIFICACIÓN

BALANZA

ANALITICA

METTLER

TOLEDO

RFQBA-

269268

Fecha de

Calibración:

Oct

2017

Próxima

Calibración:

Abril

2018

Calificación

Desempeño/

Calificación

Operacional

Fecha de

realización:

Oct 2017.

II.3.2 Materiales y Reactivos

Matraces volumétricos de 50 mL, 100 mL Agua Pipeta Volumétrica de 1 mL

MATERIAL MEDIDA TOLERANCIA LOTE DESVIACIÓN

STANDAR

CAPACIDAD

DE

VOLUMEN

Matraz

Volumétrico

100 mL ± 0,100 mL 01,15 0,012 mL 100,008 mL

Matraz

Volumétrico

50 mL ± 0,060 mL 05,13 0,013 mL 49,984 mL

Pipeta

Volumétrica

1 mL ± 0,008 mL 05,13 0,002 mL 0,997 mL

27

II.3.3 Materias primas utilizadas en la validación del método.

MATERIAS PRIMAS NÚMERO DE CONTROL FECHA EXPIRACIÓN

DILTIAZEM USP J1M121 VIGENTE

DILTIAZEM 0040073 MAR/19

II.3.4 Requisitos previos para la validación. Características de

validación.

II.3.4.1 Antes de iniciar el estudio de validación, verificar que las calibraciones y

mantenimientos preventivos de todos los equipos que se van a utilizar se

encuentren vigentes.

II.3.4.2 Verificar que el estándar USP DILTIAZEM tenga vigente la fecha de

caducidad.

II.3.4.3 Verificar que el estándar secundarioDILTIAZEMa emplear haya sido

debidamente valorado contra el estándar USP.

II.3.4.4 Verificar que todos los métodos estén documentados.

II.3.4.5 Realizar la preparación de las muestras y el estándar siguiendo los pasos

detallados en la metodología analítica para DILTIAZEM en DILTIAZEM 60

mg Tabletas.

II.3.5 PARÁMETROS DE VALIDACIÓN: CONCEPTOS.

1. Linealidad. 1.1 Que la curva de calibración obedezca a la ecuación de una recta (Abs= mC+b) 2. Intervalo de trabajo. 2.1 60 mg.

3. Precisión. 3.1 Desviación Estándar por Reproducibilidad.

3.2 Desviación Estándar por Repetibilidad.

4. Exactitud.

28

5. Límite de Cuantificación. 6. Límite de Detección.

Linealidad.- Define la capacidad de un método para dar resultados proporcionales

a la concentración del analito. Responde a la ecuación de una recta. Enla

comprobacióndelalinealidad seprocedióarealizarunacurvade

calibracióndeáreavsconcentracióndelestándar.

. Para definir la linealidad del métodosedeterminaron loscoeficientes de

correlación r (>0,99); coeficiente de determinación r2

(>0,99), factor de respuesta

f cuyo coeficiente de variación (Cvf) debe ser < 5%; significación estadística de la

varianza de la pendiente a través de t studentdonde el valor

detexperimentaldebesermayorque ttabuladaytestdeproporcionalidadparael intercepto

donde texperimentaldebe ser menor que ttabulada.

Intervalo de trabajo.- Será por concentración de 90%- 110% para Diltiazem 60 mg

tabletas.

Precisión.- Es el grado de semejanza entre resultados analíticos independientes,

obtenidos bajo condiciones específicas y del mismo lote de material homogéneo. La

precisión se evaluó en términos derepetibilidad y precisión intermedia.

Precisión intermedia.-

Seefectuóconunsoloniveldeconcentracióndelamuestraequivalenteal

100%,porquintuplicado,pordiferentesanalistas,díasdiferentes.Serealizó

unapruebadeFischerparadeterminarsiexistíandiferenciassignificativas entre la

precisión alcanzada por losanalistas y un test de student para

determinarsiexistendiferencias significativasentrelasmediasalcanzadaspor

losanalistas.

29

Como criterio se exige que el coeficiente de variación (Cv)sea≤2%.

Repetibilidad.- Determina cómo se repiten los resultados dentro de la aplicación

para la cual ha sido diseñado el método en un mismo intervalo determinado de

tiempo. El coeficiente de variación debe ser menor del 2%.

Reproducibilidad.- Determina con facilidad con que se puede reproducir un

resultado aplicando adecuadamente un método entre distintos intervalos

determinados de tiempo.

Para estos parámetros se realizaron los ensayos en 5 días con intervalos de 48

horas cada análisis. Se realizaron 5 repeticiones entre las horas del día.

Exactitud.- Es el grado de concordancia entre el resultado de un ensayo y el valor

de referencia aceptado. También se conoce como sesgo.

Para el análisis de este parámetro se utilizó un diseño similar alde linealidad

peroempleando3nivelesdeconcentraciones(bajo,medioyalto),cadauno portriplicado

ysedesarrolló elmétodo propuesto.

Se determinó el porcentaje de recobro R y el coeficiente de variación.

Concentración medida

%Recobro =------------------------------------ x 100

Concentración añadida

Seanalizóestadísticamentelarelaciónentrelasconcentracionesmedidasy

30

añadidas, a través de una curva de recuperación.

Paraqueelmétodoseaexacto,nodebenexistirdiferenciassignificativasentre

elvalordelrecobradomedioyel100%yelcoeficientedevariacióndebeser ≤2%.

Límite de detección (LOD).- Es la mínima cantidad de analito en una muestra que

puede detectarse.

Límite de cuantificación (LOC).- Es la mínima cantidad de analito en una muestra

que puede determinar con precisión y exactitud.

Preparación de los estándares secundarios de la curva.

La curva de calibración se realizará con el Estándar secundario el cual se elaboró

a tres concentraciones diferentes, de la siguiente forma:

Concentración 1: 0.004 mg/mL

Pesar exactamente 20 mg de Diltiazem transferir a un matraz de 100 mL, disolver

y llevar a volumen con Agua, de esta solución se pipetea 1 mL y se lleva a volumen

a un matraz volumétrico de 50 mL con agua.

Concentración 2: 0.005 mg/mL

Pesar exactamente 25 mg de Diltiazem transferir a un matraz de 100 mL, disolver

y llevar a volumen con Agua, de esta solución se pipetea 1 mL y se lleva a volumen

a un matraz volumétrico de 50 mL con agua.

31

Concentración 3: 0.006 mg/mL

Pesar exactamente 30 mg de Diltiazem transfiera a un matraz de 100 mL

disuelva y lleve a volumen con Agua, de esta solución pipetee 1 mL y lleve a

volumen a un matraz volumétrico de 50 mL con agua.

Longitud de Onda: 237 nm

Se realizaron 3 curvas de calibración, de las cuales cada una tenía 3

concentraciones. Las curvas de calibración se realizaron en 3 días consecutivos

cada una. Al final, cuando se obtuvieron los resultados de la curva de calibración, se

seleccionó una de las tres curvas, la que tuviera un r2(Coeficiente de correlación),

más cercano a 1. En el caso de este método analítico se procedió a realizar tanto la

curva de calibración con estándar USP como secundario.

II.3.6 Valoración del Diltiazem.

Diltiazem 60 mg Tabletas.

Se pesaron 100 mg que contenían aproximadamente 25 mg de Diltiazem y se

transfirieron a un matraz volumétrico de 100 mL con unos 70 mL de agua, se

disolvió la muestra agitando y se enrasó con agua, se pipeteó 1 mL a un matraz de

50 mL y se enrasó a volumen final con agua.

32

CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

III.1 Características físico químicas

Tabletas del Laboratorio Innovador.- Tabletas blancas, biconvexas en un lado

de la cara tiene el nombre de la empresa y en la otra, presenta una ranura.

En la tabla II se presentan los resultados que se obtuvieron del ensayo peso

promedio, diámetro y espesor de las tabletas del producto innovador, cumpliendo

con las especificaciones de la farmacopea.

Tabla II. Datos de peso promedio, diámetro y espesor de los lotes del

producto Diltiazem 60 mg, innovador

Entre los pesos promedios, encontramos una similitud entre sus pesos prácticos,

aunque el USP me indique que el intervalo es ≤ 5%, cuando se obtiene datos a

partir de análisis realizados se puede disminuir ese rango de aceptación a un 3%, y

de esta manera disminuir el margen de error. Para ninguna de las tres variables

estudiadas se encontraron diferencias significativas entre los lotes estudiados

(anexo 1).

Producto

Peso de las Tabletas

(mg) ± ESM

Diámetro de las

Tabletas mm

Espesor de las Tabletas mm

Lote A 239,67 ± 2,13 8,14 ± 0,01 3,75 ± 0,01

Lote B 239,09 ±1,14 8,14 ± 0,01 3,75 ± 0,01

Lote C 239,07 ± 2,40 8,14 ± 0,01 3,75 ± 0,00

33

En la tabla IIIse presentan los resultados obtenidos del ensayo de la dureza de

las tabletas de los diferentes lotes; en los 3 casos el ensayo respondió de manera

satisfactoria con valores entre 10 - 20 kgFque cumplen con lo establecido en por los

controles internos para que de la mejor manera se optimice el proceso de

manufactura, ya que la USP no indica un rango de aceptación, más bien,

recomienda utilizar un método de análisis. Por lo tanto el estudio demostró que no

hubo diferencias significativas entre los diferentes lotes (anexo 2).

Tabla III. Datos de Fuerza de Ruptura de las tabletas de Diltiazem.

Producto DurezakgF

Lote A 11,25 ± 0,38

Lote B 10,93 ± 0,55

Lote C 11,0 ± 0,53

De la misma manera, para el estudio de ruptura en las tabletas, la USP

recomienda un tipo de análisis pero no un rango de aceptación. Los resultados

obtenidos del ensayo de friabilidad de las tabletas, se presentan en la tabla IV.

Tabla IV. Datos de Friabilidad de los lotes de Diltiazem.

Producto Friabilidad %

Lote A 0,23 ± 0,00

Lote B 0,29 ± 0,00

Lote C 0,17 ± 0,00

34

Todos los lotes cumplieron con lo establecido en la Farmacopea No mayor 1%.

No encontrándose para ellos diferencias de significación.

Para el tiempo de desintegración, los resultados se presentan en la tabla V. La

farmacopea plantea que el tiempo de desintegración no debe superar los 30 min,

por lo que los resultados obtenidos se encuentran dentro del rango planteado y

estadísticamente no se presentan diferencias significativas para p<0,05 (anexo 3).

Tabla V. Datos de Desintegración de Ditliazem 60 mg.

Producto Desintegración %

Lote A 3,83 ± 0,75

Lote B 4,66 ± 0,51

Lote C 3,66 ± 0,51

Como se observa, los tiempos de desintegración para las tabletas fueron bajos.

En el análisis físico-químico realizado a los tres lotes de las tabletas de el

Diltiazem innovador, se observó que todos los parámetros cumplían con lo

establecido en la Farmacopea y que no existían diferencias significativas para

p<0,05 entre los lotes estudiados, para ninguno de los parámetros analizados.

En el análisis de uniformidad de contenido, encontramos un coeficiente de

variación por debajo del 2%. Como lo explicala tabla VI.

35

Tabla VI. Resultados de la uniformidad de contenido.

RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza DESVEST CV

LOTE A 10 998,81 99,881 0,43952111 0,66296388 0,66375375

LOTE B 10 1002,34 100,234 0,34904889 0,5908036 0,58942434

LOTE C 10 1000,03 100,003 0,17211222 0,4148641 0,41485166

PROM. TOTAL 100,039333

La uniformidad de contenido se la realiza para controlar las variaciones de

contenido del principio activo, En todos los lotes los porcentajes de principio activo

cumplieron con lo establecido en la farmacopea y estuvieron entre 98,91 y 101,25

%.

En la disolución, el coeficiente de variación obtenido también se encuentra en el

rango de aceptación (tabla VII). Declarando que las tabletas cumplen las

especificaciones en el tiempo determinado a un rpm establecido,

LOTE A LOTE B LOTE C

100,34 100,25 99,18

99,82 100,19 99,68

100,8 100,86 100,02

100,71 101,25 100,66

99,81 99,4 100,52

99 100,22 100,18

99,29 100,06 100,04

100,25 100,71 99,83

98,91 100,01 99,93

99,88 99,39 99,99

36

Tabla VII. Resultados de la disolución.

Análisis de varianza de un factor

RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza DESVEST CV

LOTE A 6 601,47 100,245 0,40115 0,63336403 0,63181608

LOTE B 6 601,7 100,283333 0,33518667 0,57895308 0,57731735

LOTE C 6 601,09 100,181667 0,36925667 0,60766493 0,60656301

PROM. TOTAL 100,236667

LOTE A LOTE B LOTE C

100,56 100,89 99,65

99,67 100,67 99,38

100,87 100,56 100,76

100,94 99,67 100,87

99,45 99,46 100,45

99,98 100,45 99,98

Se observó que a los 30 minutos en todos los lotes se disolvía entre el 99,67

al 100,89%.

III.2 Validación del método analítico

III.2.1 Linealidad

Para definir la linealidad se determinaron los coeficientes de correlación y el

coeficiente de variación que debe ser inferior al 5%. El ensayo que se realizó,

mostró que la linealidad alcanzó un coeficiente de variación de 0,990, por encima

del rango de especificación, que es >0,980, con una ecuación de la recta y= 42,533x

+ 0,0195 (tabla VIII, figura 2).

37

Tabla VIII (A). Estudio de linealidad de las tabletas de diltiazem 60 mg

Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza DESVEST %CV

ENE/02/18 5 1,2349 0,24698 7E-09 8,3666E-05 0,033875619

ENE/04/18 5 1,2349 0,24698 1,7E-08 0,000130384 0,052791339

ENE/05/18 5 1,2341 0,24682 1,2E-08 0,000109545 0,044382348

ENE/08/18 5 1,2353 0,24706 7,3E-08 0,000270185 0,109360124

ENE/10/18 5 1,2356 0,24712 5,7E-08 0,000238747 0,096611657

PROM. TOTAL 0,246992

38

TABLA VIII (B). ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las variaciones

Suma de cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de los

cuadrados F Probabilidad Valor crítico

para F

Entre grupos 2,544E-07 4 6,36E-08 1,91566265 0,147132091 2,866081402

Dentro de los grupos 6,64E-07 20 3,32E-08

Total 9,184E-07 24

Sr 0,00018221 %CVr 0,073771082

SL2 6,08E-09

SR 0,00019819 %CVR 0,080242205

Figura 2. Gráfica de linealidad de las tabletas de Diltiazem 60 mg.

En el análisis estadístico de la varianza, demostró que la texperimental es mayor que

la ttabulada 2,86 > 1,96. De acuerdo de los parámetros de desviación estándar para

Repetibilidad y reproducibilidad, sería no más del 2%, del cual su SR en porcentaje

es 0,08% y su Sr es 0,073%, lo cual indica que en 5 días alternos, 5 veces al día, el

método analítico que ha sido desarrollado, se puede ejecutar sin complicación

alguna.

Los resultados obtenidos por los tres días consecutivos para la curva de

calibración en este caso del estándar secundario, se reflejan en la figura 3 A, B, C

y = 42,533x + 0,0195R² = 0,99

0,1500

0,1800

0,2100

0,2400

0,2700

0,3000

0,0000 0,0010 0,0020 0,0030 0,0040 0,0050 0,0060 0,0070

39

en el que por medio de herramientas estadísticas se pudo reflejar el coeficiente de

variación antes mencionado.

A B

C

Figura 3. Curvas de calibración de linealidad y exactitud.

(A), (B), (C) Curva de calibración de la linealidad del método analítico por

espectrofotometría (UV).

40

III.2.2 Precisión intermedia

Como consecuencia del cotejo de las varianzas en los días en el análisis de cada

analista y entre las analistas en el propio día se consiguió, para ambos casos, que la

F experimental es menor que la F tabulada para un grado de significación del 95 %

y 14 grados de libertad, lo que aprueba a decir que no existen diferencias

significativas entre las dispersiones. El coeficiente de variación total calculado fue de

0,14 %, inferior al 2 % establecido como límite de este ensayo (tabla IX).

Tabla IX. Datos de Precisión intermedia

III.2.3Repetibilidad entre concentraciones.

Los coeficientes de variación por concentración estuvieron muy por debajo del

2% especificado, pudiendo decir que el método es repetible a concentraciones de

90 al 110 %. (tabla X)

41

Tabla X. Datos de repetibilidad entre concentraciones.

NIVEL DE CONCENTRACIÓN

ẋ% S2 DESV VC%

90% 90,1973 0,09174 0,3029 3,4E-05

100% 99,388 0,04168 0,2042 2,1E-05

110% 110,687 0,79609 0,8922 8,1E-05

III.2.4 Placebo

Se realiza el ensayo, en cinco días, cinco veces cada día, con la fórmula de la

tableta sin el principio activo, en tal caso, no existió ningún tipo de interferencia por

parte del placebo en ninguno de los cinco días, existió una repetibilidad y

reproducibilidad por debajo del 2% de especificación. (tabla XI).

Tabla XI. Datos de Placebo.

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las variaciones

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Promedio de los

cuadrados F Probabilidad Valor crítico

para F

Entre grupos 1,064E-07 4 2,66E-08 1,11764706 0,375984425 2,866081402 Dentro de los grupos 4,76E-07 20 2,38E-08

Total 5,824E-07 24

Sr 0,00015427 %CVr 0,636122737

SL2 5,6E-10

SR 0,00015608 %CVR 0,643563022

42

III.2.5 Resumen de los parámetros de validación determinados.

En la tabla la tabla XII, se resumen los parámetros de validación establecidos

para la técnica analítica por espectrofotometría UV para las tabletas del Diltiazem 60

mg.

TABLA XII. Parámetros de validación para Diltiazem.

Parámetros DILTIAZEM 60 mg Tabletas

%CV REPETIBILIDAD 0,073771082 %

%CV REPRODUCIBILIDAD

0,080242205 %

EXACTITUD 1,8%

INCERTIDUMBRE 0,00531%

LINEALIDAD 0,990

Los resultados obtenidos permiten demostrar que el método de cuantificación es

capaz de producir resultados confiables y reproducibles dentro de un intervalo

determinado, por lo tanto se considera validado.

43

IV. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

IV.1 Conclusiones

Los resultados obtenidos nos permiten arribar a las siguientes conclusiones:

Los parámetros físico químicos determinados para el Diltiazem 60 mg

innovador, cumplen con los estándares establecidos en la farmacopea, no se

observaron diferencias significativas entre los tres lotes estudiados,

comercializados en Ecuador.

Se validó un método espectrofotométrico para cuantificar al Diltiazem,

encontrándose que el método resultó lineal, exacto y reproducible.

El método realizado para Diltiazem 60 mg tabletas, cumple con las

condiciones para asegurar y demostrar de manera documentada que el

método es capaz de producir resultados confiables y reproducibles dentro de

un intervalo determinado, por lo tanto se considera validado.

44

IV.2 Recomendaciones

Realizar el estudio comparativo del medicamento genérico que se

comercializa en Ecuador, contra el innovador, para comprobar su

equivalencia.

45

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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ANEXO 1

Peso Promedio

Análisis de varianza de dos factores con una sola muestra por grupo

RESUMEN Cuenta Suma Promedio Varianza Fila 1 3 711,7 237,233333 6,09333333 Fila 2 3 715,3 238,433333 1,77333333 Fila 3 3 724,7 241,566667 3,10333333 Fila 4 3 724,3 241,433333 4,72333333 Fila 5 3 716 238,666667 3,16333333 Fila 6 3 716,9 238,966667 2,50333333 Fila 7 3 721,2 240,4 6,79 Fila 8 3 716,2 238,733333 0,90333333 Fila 9 3 715,2 238,4 3,61 Fila 10 3 716,8 238,933333 0,09333333

Columna 1 10 2396,7 239,67 5,05122222 Columna 2 10 2390,9 239,09 1,441 Columna 3 10 2390,7 239,07 6,42677778

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las variaciones

Suma de cuadrados

Grados de

libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad

Valor crítico para F

Filas 53,0803333 9 5,89781481 1,68000549 0,16670327 2,45628115 Columnas 2,32266667 2 1,16133333 0,33080835 0,72261864 3,55455715 Error 63,1906667 18 3,51059259

50

ANEXO 2

Dureza

Análisis de varianza de un factor

RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza

Columna 1 6 67,5 11,25 0,147 Columna 2 6 65,6 10,9333333 0,30666667 Columna 3 6 66 11 0,284

ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las

variaciones Suma de

cuadrados Grados de

libertad Promedio de los

cuadrados F Probabilidad Valor crítico

para F Entre grupos 0,33444444 2 0,16722222 0,6800723 0,52153194 3,68232034 Dentro de los

grupos 3,68833333 15 0,24588889

Total 4,02277778 17

51

ANEXO 3

Tiempo de desintegración

Análisis de varianza de un factor

RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza

Columna 1 6 23 3,83333333 0,56666667 Columna 2 6 28 4,66666667 0,26666667 Columna 3 6 22 3,66666667 0,26666667

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las variaciones

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Promedio de los cuadrados F

Probabilidad

Valor crítico para

F

Entre grupos 3,44444444 2 1,72222222 4,6969697

0,06606573

3,68232034

Dentro de los grupos 5,5 15 0,36666667

Total 8,94444444 17