Universidad Nacional Autónoma de México FES Iztacala “evaluación de degradación celular en...
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Universidad Nacional Autónoma de México
FES Iztacala
“evaluación de degradación celular en Raphanus sativus L. causada por riego de aguas residuales industriales de una planta tratadora de Tlalnepantla Edo.Mex.”
INTEGRANTES :Martínez Nolasco Hazete Moreno Patlán Mario IvanOrtega Salinas Jessica CitlalliReyes Medina Carlos Ulises
AGUA RESIDUAL
Color, Olor.
Lodos arenas y gravas
Composición químicas
Composición físicas
sales minerales, compuestos cormo sulfatos, carbonatos, que pueden sufrir algunas fenómenos de óxido-reducción.
Agua residual
Agua (99%) Sólidos (0.1%)
Orgánicos Inorgánicos
Residuos, Minerales Pesados
Sales
Metales
Proteínas (65%)
Carbohidratos (25%)
Lípidos (10%)
El 63% del agua proviene de ríos, arroyos y lagos, el resto de aguas subterráneas.
Estadísticas
al 2009 el 76.7% le correspondía al agrícola.
La superficie sembrada varía entre 20 y 23 millones de hectáreas anualmente.
Aguas de riego representa 6.5 millones de hectáreas
85 Distritos de Riego
Muerte celular programada
Mecanismo por el cual se regula una serie de procesos fisiológicos
• lento proceso de senescencia,• pérdida de la clorofila,(color pardo en hojas)• marchitez• abscisión de la hoja.
A nivel celular • El rol de las vacuolas en la digestión progresiva de orgánelos. •Los cloroplastos desaparecen primero, luego las mitocondrias y finalmente el núcleo .por carencia de nutrientes• asociada a la autofagia en cultivos celulares
ANTECEDENTES
Ramírez Pisco 2006.BIOSÓLIDOS PROCEDENTES DELTRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES PARA USO AGRÍCOLA Y SUEFECTO SOBRE EL CULTIVO DE RABANO ROJO (Raphanus sativus L.).
Berrueta M.D2011
MUERTE CELULAR INDUCIDA POR CONDICIONES AMBIENTALES ADVERSAS EN Calibrachoa parviflora
ESTUDIO DE LA POLIMERIZACIÓN DE FENOLES UTILIZANDO PEROXIDASAS PRESENTES EN RÁBANO COMÚN (Raphanus sativus var sativus), CON APLICACIÓN EN LA BIORREMEDIACIÓN DE AGUAS RESIDUALES DE UNA EMPRESA TEXTILERA
Rafael Vargas 2011
En México es un país que abastece sus cultivos con aguas residuales de sus zonas urbanas. los compuestos presentes en aguas residuales y las consecuencias de sus usos en la agricultura es un tema de actualidad en varios países de la región hispanoamericana. Debido al uso de estas aguas dando siesgos no solamente a la planta si no también a la población que consume estos productos se pretende determinar si las afectaciones que ocasionan son o no admisibles el rábano es una especie idónea para este tipo de evaluación están, el de ser una planta de rápido crecimiento(cinco semanas) y presentar un contacto directo entre el sustrato y la parte comestible.
justificación
Objetivo GeneralEvaluar el efecto del riego con aguas residuales sobre plantas de en Raphanus sativus L condiciones de invernadero.
Objetivos Específicos+Obtener los valores de área foliar y necrosis utilizando el software imagej®.+Determinar el contenido de clorofila a , clorofila b y carotenoides.+medir la presencia de metales pesados por espectrofotomefria atómica+ evaluación de degradación de ADN por técnica cometa
germinaciónParte de la variabilidad de resultados se relaciona con las
condiciones ambientales a las que se somete la semilla para promover la germinación, en especial con el nivel de sombra.
bajo condiciones óptimas, conforme aumenta el tiempo de almacenamiento, la viabilidad de la semilla desciende
paulatinamente (Hartmann y Kester, 1998).
102 semilla
Agua potable Agua residual
10 ml diarios
perlita Tierra y composta algodón perlita
Tierra y composta
algodón
Cultivo de la planta
10 plantas
Agua potable 50% AP50% AR
Agua residual
grupos
Tipo de riego
8 onzas a cada planta cada tercer día
Técnicas
metales pesados
Cuantificación de azucares y almidon.
Cuantificación de clorofila
Técnica cometa
Determinación de necrosis
METALES PESADOS
- son tóxicos
-alteran el metabolismo y pueden provocar hasta su muerte.
- Metales como el cromo y el zinc sonutilizados por los organismos en cantidades pequeñas,se les conoce como oligoelementos
-pueden ingresar a los organismos a través de la cadena alimenticia , en la cual se pueden concentrar a medida que ésta avanza.
Metales pesados
- tienen capacidad paraintercambiar cationes del suelo por el contenido de losresiduos que son aplicados.
-Junto con la materiaorgánica controlan la toxicidad de los materialespesados en las plantas.
-Estos elementos son estables yse constituyen como nutrientes para las plantas (Na+, K+, Mg++ y Ca++)
Técnica de absorción atómica
La extracción de metales consiste en separarlos metales mediante un solvente patron
La cantidad extraída representa la concentraciónen el equilibrio obtenido en el contacto de lasfases involucradas
VARIACIÓN DE AZÚCARES SOLUBLES Y ALMIDÓN EN HOJAS La síntesis neta de azúcar y la capacidad de exportación aumentan durante el desarrollo de la hoja,
las hojas presentan diferencias en el metabolismo de estos dos azúcares de transporte durante el desarrollo de las hojas
La cuantificación del almidón puede proveer una medida exacta de la fluctuación en las reservas almacenadas
Debido a la función preponderante de los carbohidratos no estructurales en el crecimiento
almidon
se cuantificaran por el método colorimétrico de Nelson-Somogyi
se obtendra por diferencia de los valores de los azúcares solubles totales menos los reductores direc-tos.
Las muestras se filtraran y el extracto alcohólico se utiliza para su cuantificación el residuo se emplea para medir almidón por el método de la diastasa
Técnicas para semillas en germinación
Azucares y almidon
Los azúcares reductores directos
azúcares no reductores
La muerte celular programada pueden afectar las reacciones fotoquímicas de la fotosíntesis, alterando la síntesis de los pigmentos fotosintéticos como clorofila a.
CUANTIFICAIÓN DE CLOROFILA
MUERTE CELULAR
NECROSIS:Proceso
“caótico” de destrucción
celular traumática,
seguida por la liberación de componentes intracelulares
APOPTOSIS:
proceso de destrucción
celular regulado
MUERTE CELULAR PROGRAMADA (APOPTOSIS)
forma de muerte celular
caracterizada por distintos cambios morfológicos en la
célula
condensación de la cromatina
fragmentación nuclear
pliegues en la membrana
plasmática
contracción celular
ENSAYO COMETA
Detectar el daño in vitro o in vivo causado al ADN en
células individuales
migración del ADN por rupturas
simples en la hebra del ADN
Células sometidas a una electroforesis.
Los fragmentos de ADN migran fuera del núcleo celular y forman
una cola
ENSAYO COMETA
Consiste en los siguientes pasos
obtener las células
fijarlas con agarosa en un portaobjetos
Someterlas a una
solución de lisis (Triton X-100,
2.5 M NaCl) con la finalidad de
romper su membrana
celulardesenrollar el ADN en una
solución amortiguadora (NaOH 0.3M)
realizar la electroforesis
la determinación
del daño
Longitud del halo
clasificación del grado de daño en el
ADN.
Muerte accidental, pasiva e indiscriminada causada por agentes externos, debido a la acumulación de moléculas fitotóxicas ; de moléculas especificas después de un evento traumático y es irreversible. (H2O2) .
la necrosis
afecta
se traduce como un aumento en la
senescencia de las plantas ya que las
EROS son las principales oxidantes de proteínas, ácidos nucleicos, lípidos y otras biomoléculas como la clorofila .
el uso de aguas negras puede provocar estrés oxidativo mediante las especies reactivas de
oxígeno (EROS),
Se caracteriza por la perdida progresiva de la integridad de la membrana que resulta en la liberación de los componentes celulares .
Técnica
La proporción entre el áera total de las hojas y de tejido
necrosado se determinara con el procesamiento y análisis de
imágenes con el programa Imagej.
(10mL de glicerol, 10mL de fenol, 10mL de acido láctico y 10mg de azul tripano al 5% disueltos en 10 mL de agua
destilada) según el método de Keogh
El grado de necrosis sera evaluado en las hojas enteras,
las cuales se teñiran con solución de azul tripano .