3M™ FOOD SAFETY™
3M™ Petrifilm™ MétodosMicrobiológicos
3
METODO TRADICIONAL
Cuenta estándar en placa
Número más probable
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1. Pesar medio de cultivo en polvo
Método tradicional o convencional de análisis
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2. Agregar agua, disolver y hervir
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3. Esterilizar en autoclave
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4. Atemperar el medio a 40-45°C
5. Preparar la muestra a analizar
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6. Adicionar el medio a la muestra
La muestra debe estar previamente colocada en una caja de Petri.
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7. Incubar a tiempo y temperatura según la prueba
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8. Hacer recuentos y calcular resultado.
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Medios de Cultivo
Preparación
• Errores en su preparación :
- Sobrecalentamiento, que trae como consecuencia:
- hidrólisis del agar
- caramelización de carbohidratos
- alteración de pH
- alteración de inhibidores
- precipitación de componentes
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TIEMPO
CONTAR
INCUBAR
INOCULAR
PREPARAR
MUESTRAS
PREPARAR
MEDIOS
LIMPIAR
MATERIALES
40%
60%
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METODO TRADICIONAL VS PETRIFILMTM
CONTAR
INCUBAR
INOCULAR
PREPARAR
MUESTRAS
PREPARAR
MEDIOS DE CULTIVO
LAVAR Y ESTERILIZAR
MATERIAL
40%
60%
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Inoculación Incubación Lectura
Análisis Microbiológicos en 3 pasos...
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Certificado de Calidad 3MPetrifilmMEDIO Placas Petrifilm
TM E. coli /Coliformes (6404/ 6414)
CERTIFICADO DE REGISTRO BSI NUMERO FM 14552 (de acuerdo con ISO 9002 / EN 29002:
BS 5750 : Parte 2 : 1987)
FECHA DE EXPIRACION / NUMERO DE LOTE Expiración y numero de lote indicado en cada paquete. El numero de lote esta indicado en cada placa
FORMULACION Nutrientes de bilis y rojo violeta. Gel soluble en agua fría,
indicador de tetrazolium, indicador bromo-cloro-indolil-beta-D-glucurónido.
METODO DE PREPARACION Nutrientes y geles recubiertos sobre films. Para usarlas
hidratar con 1 ml de muestra acuosa ó dilución de la
muestra. Ver información contenida en el paquete para instrucciones detalladas.
CHEQUEO DE CONTAMINACION Minimo 85 placas probadas por lote
Incubadas a 32°C por 24 horas Plan Columbia de muestreo secuencial
CHEQUEO DE EFICACIA Los organismos de prueba incluyen, entre otros:
Organsimo Resultado Lote aceptable
Escherichia coli ATCC 51813
Enterobacte amnigenus ATCC 51816
Enterococcus faecalis ATCC 14506
Colonias azules con gas
Colonias rojas con gas
No crecimiento
Recuentos no menores a 3
desviaciones estándar por debajo de
la cuenta con agar VRB
POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILM
TM
Ventajas:
• No se somete la muestra a "shock térmico"
Beneficios:
• Reducción en la variación de resultados
• Cuentas bacterianas mas confiables.
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POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILM
TM
Contrucción en película Laminada
Ventajas:
• Compactas
• Apilables
• Materiales ligeros y seguros
Beneficios:
• Requieren menor espacio en incubación y almacenaje.
• Fácilmente transportables para muestreos en planta.
• Menor volumen de desperdicio y costos de tratamiento.
• Mejor manejo de inventarios
• Mayor espacio disponible en el autoclave
POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILMTM
Presencia de Indicadores Químicos
Ventajas:
• Colonias coloreadas
• Indicador beta-glucuronidasa
• Indicador fosfatos
Beneficios:
• Fácil de leer colonias puntiformes.
• Diferenciación entre
colonias/partículas.
• Identificación de E. coli.
• Distinción de mohos/ levaduras.
POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILMTM
Contrucción en película Laminada
Ventajas:
• Capacidad para ver producción de gas.
Beneficios:
• Mayor predicción del valor
de coliformes, E. coli y
acidolácticas.
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Placas Petrifilm en General
Tecnología
• Film
• Adhesivos
• Capas
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3MTM PetrifilmTM
Estructura de una Placa Petrifilm
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PETRIFILM RAPIDA MOHOS Y LEVADURAS
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PLACA RÁPIDA DE AEROBIOS
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Un tinte indicador de color rojo y azul colorea las
colonias. Contar todas las colonias indiferentemente de
su tamaño o intensidad de color
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PLACA PETRIFILM ACIDO LACTICAS
3M ™ Placa Petrifilm diseñada para recuperar cuantitativa de bacterias ácido lácticas (LAB organismos) de descomposición (Streptococcus, Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus y Lactobacillus) en un incubador aeróbico equivalente a la recuperación en agar MRS
30. All Rights Reserved.15 December 2016© 3M 3M Confidential.
Petrifilm LAB Traditional AgarMRSAPT
Petrifilm AC Procedures
bioMerieux Tempo Neogen Soleris(BioLumix)
Competitive Dry Film Products
TTR
(negative result)2 days 2-3(5*) days 2-3 days 40-48 hours
2 days
(<100 cfu)
None
TTR
(early alert + result)TBD N/A N/A N/A
30-35 hours
(<100 cfu)
Differentiate homo-
/heterofermentersYes No Yes No No
Consumables -PF Plate-Agar Plate
-Gas Pak
-PF PAC-2X MRS+/-CPR Diluent
-Gas Pak*
-Tempo Reagents
-Tempo Card
-Soleris Direct Vials
-Soleris Lactic Media
-Tryptone Broth
-Kovac’s reagent
Pain Points for Customers-Incubator Space
-Media Prep/Qualify
-Gas Paks
-Diluent Ordering/Prep
-Interpretation
-Gas Paks*
-Cost-Qualitative result
-Cost
Estimated
Market ShareN/A 94.5% 2.5% 2.0% 1.0%
Petrifilm BAL - competencia
AOAC PTM and OMAAOAC PTM and OMA ISO 16140
3M está en búsqueda de aprobaciones de métodos reconocidas globalmente.
Aprobaciones del Método
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Técnicas y Fundamentos para
el monitoreo rápido de
Ambientes
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• Monitoreo de Aire
- Impactación
- Exposición
• Método de contacto directo
- Placas Petrifilm
- Placas Rodac
• Método de Arrastre
- Esponjado
- Enjuague
- Hisopado
3MTM PetrifilmTM
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3M™ Quick SwabHisopo autocontenido listo para
usar.
Inocula 1.0 mL de muestra, elimina
el uso de pipetas.
Hisopo de 5 pulgadas de largopermite llegar a puntos de díficil
acceso.
Caldo de letheen ayuda a
neutralizar el sanitizante residual.
Puede ser usado en superficies
secas o húmedas
Método de Arrastre
Hisopado
3M Health Care AcademySM
3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos
2015
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Tecnología Central
Amplificación
IsotérmicaDetección por
Bioluminiscencia+
Una innovadora combinación de tecnologías que proporcionan mejoras
en velocidad, precisión, facilidad de uso costo-efectivo.
Una innovadora combinación de tecnologías que proporcionan mejoras
en velocidad, precisión, facilidad de uso costo-efectivo.
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¿Cómo funciona?Amplificación Isotérmica de ADN
•Múltiples iniciadores reconocen diferentes regiones del genoma
•Una ADN polimerasa con desplazamiento de cadena
•Amplificación eficiente, rápida y continua del ADN objetivo
Detección por Bioluminiscencia
•Generación exponencial de pirofosfato como subproducto de la
amplificación de ADN
•Conversión de Pirofosfato en Adenosine Tri Phosphate (ATP)
•Luciferasa termoestable que utiliza ATP para generar luz
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¿Cómo funciona la prueba?
ATP
Luciferinluciferasa
Bioluminiscencia
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Componentes del Sistema 3M™ de Detección Molecular
Incluido con el modelo MDS100
Equipo
Calentador interno del equipo
Cable USB y cable de alimentación
Hoja de seguridad/Guía de instalación
Software
Kit básico de accesorios *
* Contenido del Kit Básico de Accesorios
Bandeja de carga rápida
Bloque de enfriamiento y bandeja para bloque de enfriamiento
Herramienta para abrir/cerrar – tubos de Lisis y Reactivos
Gradilla vacía para tubos de lisis y Reactivos
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3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos
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3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos
3M Innovación – Tubos de Reactivos de Colores
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3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos
Salmonella: Verde
Listeria: Azul
Listeria monocytogenes: Amarillo
E. coli O157 (incluye H7): Rojo
Cronobacter: Rosa
Control de Matriz: Incoloro
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Día 1
Día 2
Enriquecimiento de la muestra
Hidratación del Pellet de Reactivos: Transferir 20 uL de muestralisada a los tubos de reactivo
Amplificación y Detección: Colocar lostubos en el instrumento. Presionar “Inicio”
Amplificación en 75 min. Resultados con código de color en tiempo-real
1
2
3
Configuración del Protocolo de Ensayo: Dividido en 3 partes
Assay
set up
Lisis: Transferir 20 uL de muestra al tubo de lisis.Calentar 100°C-15 min. Enfriar 5-10 min. a temperature ambiente
Ensayo Completo
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Sistema para
Monitoreo
Rápido
de Higiene
3MTM Clean TraceTM
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En que se basa?
• En la medición indirecta de materia orgánica a partir de la detección de ATP
• Que es el ATP: adenosina trifosfato o ATP, constituye la fuente principal de energía utilizable por las células para realizar sus actividades
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Luciferin/Luciferasa (L/L)
En las células, el ATP pierde uno o más fosfatos para liberar energía.
Luciferasa de las luciérnagas utiliza esta energía para producir LUZ.
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Relación simple
Aumento de microorganismos o restos de alimentos
Aumento de los niveles de ATP
Aumento de las Unidades Relativas de Luz (URL)
NUESTRO NUEVO LUMINÓMETRO
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Se estima que el 70% de la contaminación de los alimentos
se produce por una mala higienización de las superficies
asociadas a su producción y expendio.
3M MLS II – Sistema de Bioluminiscencia Microbiana para bebidas UHT
Principio del Test
ATP está presente en todas las celulas vivas y por eso puede ser usado como un marcador de contaminación biológica.
ATP - Tecnología de Bioluminiscencia
Adenosina
TRI-fosfato
oxígeno
Adenosina
MONO-fosfato
Para la medida de Bacterias y otros Microbios en la Leche usando ATP, hay un
problema…
Las vacas son seres vivos y sus fluidos corporales (como la LECHE) tienen ATP
Como medimos solo el ATP de los microbios y no el ATP de las vacas?
Respuesta: Nos deshacemos del ATP de la Vaca usando otra enzima llamada ATPasa…dejando ATP
microbiano para reaccionar con la Luciferasa
Diferentes fuentes de ATP
� Kit de ensayo: ATPasa, Extractante, Complejo LL1
� Kit de Limpieza
� Kit de Mantenimiento
� Kit de Control
� Micro pozos
El ensayo UHT
ATPase ATPase
Extractant Extractant
LLLL
A
AA
AAA
A
A
AA
A
A
A
Muestra
Limpia
Muestra
Contaminada
El ensayo UHT
• Cargue 50 microlitros de muestradentro de los micro-pozos
• El instrumento:1) Adicionará ATPasa para remover el ATP
de las Vacas (No puede romper las paredes celulares de losmicroorganismos)
2) Incubará 15 minutos para dar tiempo a la ATPasa para trabajar
3) Adicionará el Extractantante para abrirlos microbios, liberando su ATP
4) Adicionará Luciferase/Luciferin (LL1) para reaccionar con el ATP microbiano.
5) Medirá la luz de la reacción LL1-ATP
30 RLU
Pasa
9735 RLU
NO PASA
3M MLS II – Sistema de Bioluminiscencia Microbiana para bebidas UHT
Respuesta 48 – 72 horasvs. 10 dias para analisis de esterilidad commercial.
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Preguntas ???
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