PROCEDIMIENTO LABORATORIAL PARA
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE HONGOS
M. Sc. Roberto Ventura FloresBiólogo – Microbiólogo
DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO Examen directo por microscopía, pruebas inmunológicas o
técnicas genéticas. Aislamiento del agente de diversos sitios anatómicos o fluidos
corporales. Respuesta de anticuerpos específicos contra el patógeno.
MUESTRAS MICOLOGICASMICOSIS SUPERFICIALES: Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton Pitiriasis versicolor: Malassezia 1 Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae. Tiña negra: Hortaea werneckii. 1
MICOSIS OPORTUNISTAS:*Candidiasis: C. albicans, 1,3,4,5,7,8,11
*Criptococosis: C. neoformans. 4,5,6,7,8,10
*Neumosistosis: P. jirovecii*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides*Aspergillus: A. fumigatus, A. niger, A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii Histoplasmosis: H. capsulatum Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS: Micetoma: Nocardia, Streptomyces, 4, 10
Esporotricosis: S. schenckii. 1, 4, 10 Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
1. Piel (escamas)2. Pelo3. Uña4. Exudado5. Esputo6. Lavado bronquiales7. LCR8. Orina9. Medula ósea10. Frag. de biopsia11.Sangre12. Heces
1, 2, 3
2
1*
1. 4, 5, 6
4, 5, 7, 10
4,5,6,7,9,10
4,5,6,7,8,10
4,5,6,10
5,6
4,5,6, 12
DIAGÓSTICO DIRECTO DE RASPADO DE PIEL
ARTROCONIDIASKOH
Se observa BLASTOCONIDIASCompatibles con Malassezia
Azul de Lactofenol
CULTIVO DE RASPADO DE PIEL
Sabouraud
Diagnostico:Dermatofito
30°CT°Ambiente
CULTIVO DE MUESTRAS DE PELO
Diagnostico:Dermatofito TrichosporumPiedraia ¿?
30°CT°Ambiente
Sabouraud
DIAGNOSTICO DIRECTO DE ONICOMICOSIS
ARTROCONIDIAS
KOH
CULTIVO DE MUESTRAS DE UÑA
Diagnostico: Dermatofito candidiasis
30°CT°Ambiente
Sabouraud
EXUDADO
MICOSIS SUPERFICIALES: Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton Pitiriasis versicolor: Malassezia Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae. Tiña negra: Hortaea werneckii
MICOSIS OPORTUNISTAS:*Candidiasis: C. albicans, etc.*Criptococosis: C. neoformans*Neumosistosis: P. jirovecii*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides*Aspergillus: A. fumigatus, A. niger, A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii Histoplasmosis: H. capsulatum Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS: Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc. Esporotricosis: S.schenckii Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
CULTIVO DE EXUDADOS
30°CT°Ambiente
Sabouraud
EXAMEN DIRECTO Y CULTIVO DE ORINA
30°CT°Ambiente
Sabouraud
CENTRIFUGADO
30°CT°Ambiente
Sabouraud
CULTIVO DE LCR
Detección de antígenos capsulares: Técnica: aglutinación de partículas de látex sensibilidad con anticuerpos monoclonales Específicos anti C. neoformans. Sensibilidad en LCR: > 95%
Sensibilidad cercana al 100%
OTROS: Histoplasmosis: H. capsulatum Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
CULTIVO DE BIOPSIAS
30°CT°Ambiente
Sabouraud
TECNICA DE MICROCULTIVO
30°/ Tiempo variable
Cultivo positivo:DERMATOFITO
Cultivo positivo:Sporothix sp.
Cultivo positivo:Aspergillus sp.
MICROCULTIVO: IDENTIFICACION DERMATOFITOS
Microsporum
Diferenciar microconidios de macroconidios
Trichophyton
Epidermophyton
MICROCULTIVO: IDENTIFICACION Sporotrix schennkii
simpoduloconidios
MICROCULTIVO: IDENTIFICACION Aspergillus
Aspergillus flavus Aspergillus fumigatus
vesicula
Aspergillus niger Aspergillus terreus
fiálides
conidióforo
Microconidios
SEROLOGIA
MICOSIS SUPERFICIALES: Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton Pitiriasis versicolor: Malassezia Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae. Tiña negra: Hortaea werneckii
MICOSIS OPORTUNISTAS:*Candidiasis: C. albicans, etc.*Criptococosis: C. neoformans*Neumosistosis: P. jirovecii*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides*Aspergillus: A. fumigatus, A. niger, A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii Histoplasmosis: H. capsulatum Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS: Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc. Esporotricosis: S.schenckii Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
(β -1,3 D-GLUCANOS
DETERMINACION DE β -1,3 D-GLUCANOS
PRODUCTOS LIBERADOS EN ALGUNAS INFECCIONES FUNGICAS:
CANDIDIASIS
NEUMOCISTOSIS
ASPERGILOSIS
SE REALIZA EN SUERO SANGUINEO POR METODO DE ELISA Y SU
POSITIVIDAD SÓLO ES SUGESTIVO DE INFECIÓN FUNGICA.
PRINCIPIO Y APLICACION
AGAR CROMOGENICO CANDIDA es un medio selectivo y de
diferenciación para el aislamiento de hongos. Con la inclusión de sustratos
cromógenos en el medio, las colonias de C. albicans, C. tropicalis y C. krusei
producen colores diferentes, lo que permite la detección directa de estas
especies de levaduras en la placa de aislamiento.
En el medio la glucosa es el carbohidrato fermentable aporta carbono y
energía. La Peptona aporta nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos
esenciales para el crecimiento. El Cloranfenicol es un antibiótico que ayuda
en el aislamiento de hongos patógenos de muestras clínicas altamente
contaminadas. La Mezcla de cromogenicos permite la identificación y la
diferenciación de las 3 especies de candidas.
Cultivo en medios cromogénicos
La región genómica más frecuentemente utilizada para detectar ADN
fúngico e identificar especies, es la que incluye el complejo ribosomal
(genes 18S, 5.8S y 28S). Estos genes contienen secuencias conservadas
comunes a todos los hongos y también, dominios variables y regiones
espaciadoras internas (ITS), altamente variables.
BIOLOGIA MOLECULAR:
PCR
PCR: Es una síntesis in
vitro, exponencialmente
progresiva, de una
secuencia (target) de ADN
Componentes: Oligonucleótidos (cebadores) Tampón (buffer) ADN polimerasa termoestable Desoxinucleótidos (dNTPs) Cloruro de Magnesio (Mgcl2) ADN molde
10
Segunda especialidad en Microbiología Clínica
GRACIAS
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