Generalidades de microbiología 1
MICROBIOLOGÍA
MAG. FREDDY ORIHUELA VILLAR
Generalidades de microbiología 2
MICROBIOLOGÍA
Estudio de microorganismos:Estudio de microorganismos: Visibles a través del microscopio Tamaño en µm (10-6 m)
Generalidades de microbiología 3
MICROBIOLOGÍA
Bacterias BACTERIOLOGÍA Hongos MICOLOGÍA Virus VIROLOGÍA Parasitos PARASITOLOGÍA
CLASES DE MICROORGANISMOSCLASES DE MICROORGANISMOS
Generalidades de microbiología 4
MICROORGANISMOS
Ejemplos de patologías
• BACTERIAInfecciones urinarias, Diarrea Tuberculosis, Difteria, Tetanos
• HONGOS Micosis, Tinea
• VIRUS HIV, Hepatitis C,B, Rubeola
• PARASITOSToxoplasmosis, Malaria, Tenia (gusanos en cinta)
Generalidades de microbiología 5
MICROORGANISMOS
Hongos :Hongos :
Hongos micelialesHongos miceliales (dermatofitos, hongos filamentosos)Ej : Penicillium, Aspergillus
LevadurasLevadurasEj: levaduras para fermentación (Saccharomyces), polvo de hornearEj.: Candida, CryptococcusTamaño: 10 µm
Generalidades de microbiología 6
• • Virus:Virus:- Tamaño < 0.1 µm- Tamaño < 0.1 µm
- DNA o RNA- DNA o RNA
- Sin enzimas: necesitan las del huésped (Ojo: - Sin enzimas: necesitan las del huésped (Ojo: retrotranscriptasa) retrotranscriptasa)
- Reproductción por replicación- Reproductción por replicación
• • Bacterias:Bacterias:- Tamaño: 1 µm- Tamaño: 1 µm
- DNA y RNA- DNA y RNA
- Enzimas: biosíntesis- Enzimas: biosíntesis
- Reproducción por fisión- Reproducción por fisión
MICROORGANISMOS
Generalidades de microbiología 7
1.2 – ESTUDIO DE BACTERIAS
Generalidades de microbiología 8
DONDE?
En humanos :En humanos : En el ambiente :En el ambiente :
Flora NormalFlora Normal
= Flora Comensal= Flora Comensal
SaprófitosSaprófitos
Generalidades de microbiología 9
Donde ?
Suelo Aire Agua Alimentos
En el medio ambiente:En el medio ambiente:
Generalidades de microbiología 10
DONDE ?
SISI Boca Orejas Tracto respiratorio Tracto intestinal Tracto genital Piel....
NONO
Sangre Líquido cefaloraquídeo
(LCR) Orina
EN PERSONAS SANASEN PERSONAS SANAS
Flora Normal:Flora Normal:
Contacto con ambiente
Siempre esteril :Siempre esteril :
Cavidades cerradas
Generalidades de microbiología 11
PATOGENIA
Patógenos estrictos:Patógenos estrictos: Multiplicacion y diseminación dentro del organismo Resistencia al sistema inmune Secreción de enzimas: lesiones en tejidos del
huésped Secreción ocasional de toxinas
En pacientes infectados:En pacientes infectados:
Generalidades de microbiología 12
PATOGENIA
La bacteria no abandona el sitio de infección. Es su La bacteria no abandona el sitio de infección. Es su toxina la que se disemina en el organismo y causa la toxina la que se disemina en el organismo y causa la enfermedadenfermedad
Ej.: - Clostridium tetani (tetanos)- Corynebacterium diphteriae (difteria)
Intoxicación alimentaria:Intoxicación alimentaria:- Staphylococcus aureus- Clostridium botulinum
Botulismo: ingestión de alimentos en los que C. botulinum ha desarrollado su toxina (no eliminatada en el tracto digestivo)
paralisis después de ataque neuromuscular
Bacterias toxigénicasBacterias toxigénicas
Generalidades de microbiología 13
Patógenos oportunistas:Patógenos oportunistas: Qué bacteriasQué bacterias?
Bacterias Saprófitas o de flora normal
Generalmente no patógenos
Cuándo? – Immunodepresión del huésped– Rotura de la barrera natural
Ej : E. coli, presente en flora normal y potencial causante de infecciones urinarias, septicemia…
PATOGENIA
Generalidades de microbiología 14
PATOGENIA: EJEMPLOS
Estreptococos, Enterococos
Neisseria Corynebacteria Anaerobios...
– Enterobacteriaceae Enterococos Levaduras Anaerobios...
Streptococcus A, Neumococos Corynebacterium diptheriae Staphylococcus aureus Haemophilus influenzae
Salmonella, Shigella E. coli, Yersinia, Campylobacter Vibrio cholerae Toxina : Clostridium, S. aureus
CAVIDAD OROFARÍNGEA:CAVIDAD OROFARÍNGEA:
TRACTO DIGESTIVO:TRACTO DIGESTIVO:
BACTERIASBACTERIAS PATOGENAS PATOGENAS FLORA NORMAL FLORA NORMAL
Generalidades de microbiología 15
– Staphylococcus epidermidis– Corynebacteria– Propionibacterium acnes...
– Lactobacillus– Anaerobios– Flora cutánea...– (Mycoplasma)
– Staphylococcus aureus– Streptococcus A– Pasteurella– Bacillus...
– Gonococos– Streptococcus B– Gardnerella vaginalis– Treponema pallidum– Haemophilus, Chlamydia...
PIEL:PIEL:
CAVIDADES GENITALES:CAVIDADES GENITALES:
BACTERIAS PATOGENASBACTERIAS PATOGENASFLORA NORMAL FLORA NORMAL
PATOGENIA
Generalidades de microbiología 16
MORFOLOGÍA
COCOSCOCOS BACILOSBACILOS
COCO-BACILOS
Generalidades de microbiología 17
CARACTERÍSTICAS DE AGRUPAMIENTO
COCOSCOCOS
BACILOSBACILOS
diplococos cadenasgrupos
diplobacilos cocobacilos
Generalidades de microbiología 18
ESTRUCTURA
membrana citoplasmáticamembrana citoplasmática
Pared Pared celularcelular
citoplasmacitoplasma
DNADNA
ribosomasribosomas
capsula (facultativa)capsula (facultativa)
flagelosflagelos
(facultativos)(facultativos)
Generalidades de microbiología 19
MOVILIDAD
1-1- Sin flagelos:Sin flagelos:
Bacterias inmóviles
3-3- Muchos flagelos:Muchos flagelos:
bacterias móviles
Movimiento:
2-2- Un flagelo:Un flagelo:
bacterias móviles
Movimiento:
Generalidades de microbiología 20
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES
– – Requerimientos básicosRequerimientos básicosPara la síntesis de los distintos constituyentes de la bacteria C, N, O, H, sales minerales...
– – Requerimientos de azúcaresRequerimientos de azúcaresPara los requerimientos energéticos de la bacteria glucosa , lactosa
– – Requerimiento de factores de crecimientosRequerimiento de factores de crecimientosPara el desarrollo de las bacterias de difícil crecimiento vitaminas, aminoacidos...
Generalidades de microbiología 21
REQUERIMIENTOS RESPIRATORIOS
Oxígeno requeridoOxígeno requerido Aerobios
Menor cantidad de OMenor cantidad de O22 Microaerófilos
requeridarequerida
Sin oxígenoSin oxígeno Anaerobios
COCO22 requerido requerido Capnófilos
Generalidades de microbiología 22
MULTIPLICACION
Division cada Division cada 20 minutos20 minutos
Generalidades de microbiología 23
MULTIPLICACION
Velocidad de multiplicación depende de la temperatura:Velocidad de multiplicación depende de la temperatura:
Temperatura
37°C4°C 65°C
Velocidad
Generalidades de microbiología 24
1.3 – EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA CLÍNICA
Generalidades de microbiología 25
OBJETIVO
Encontrar el tratamiento adecuado para el Encontrar el tratamiento adecuado para el pacientepaciente
?
Generalidades de microbiología 26
¿Cómo?
Aislamiento de la bacteria responsable de la Aislamiento de la bacteria responsable de la infeccióninfección
Identificar esta bacteriaIdentificar esta bacteria
Probar la resistencia a los diferentes antibióticosProbar la resistencia a los diferentes antibióticos
Generalidades de microbiología 27
LOS DIFERENTES PASOS EN EL DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
Recolección de la muestra Recolección de la muestra
Examen microscópicoExamen microscópico
CultivoCultivo
IdentificaciónIdentificación
Tests de sensibilidad antibióticaTests de sensibilidad antibiótica
Generalidades de microbiología 28
RECOLECCION DE LA MUESTRA
Generalidades de microbiología 29
LCR= Líquido céfalo-raquídeo
RECOLECCIÓN DE MUESTRA
MUESTRA MODO DE RECOLECCIÓN
PATOLOGÍA
Orina Infecciones urinarias
Heces Diarrea
Intoxicación alimentaria
Genital Hisopado Vaginitis, cervicitis, prostatitis, uretritis,ETS…
Supuración Hisopado o jeringa Absceso, líquido peritoneal,
Infecciones de piel
Generalidades de microbiología 30
RECOLECCIÓN DE MUESTRA
Muestra polimicrobianas:Muestra polimicrobianas:
Muestras : cutaneascutaneasdigestivasdigestivasvaginal, uretralvaginal, uretralTracto respiratorio...Tracto respiratorio...
Observación de muchos tipos bacterianos
Muestras monomicrobianas:Muestras monomicrobianas:
Muestras : LCR, sangre, orinaLCR, sangre, orina
Observación de un único tipo bacterianoSólo patógeno
Flora normal + Patógeno
Generalidades de microbiología 31
RECOLECCIÓN DE MUESTRA
Condiciones de recolecciónCondiciones de recolección
Uso de material estéril Desinfección del sitio de recolección antes de la
toma de muestra(Ej: Limpiar localmente antes de recolectar la muestra de orina)
Generalidades de microbiología 32
Inocular la muestra inmediatamenteInocular la muestra inmediatamente
oo
Usar medio de transporteUsar medio de transporte
POR QUÉ?POR QUÉ?
Las bacterias son microorganismos vivientes! Es necesario:
1- Mantenerlos viables
2- Evitar su multiplicación
CUÁNDO?CUÁNDO? Los laboratorios que están lejos del sitio de recolección: recolección al pie de la cama del paciente
TRANSPORTE DE MUESTRASTRANSPORTE DE MUESTRAS
Generalidades de microbiología 33
TRANSPORTE DE MUESTRASTRANSPORTE DE MUESTRAS
Si la inoculación en el medio de cultivo no es inmediata, Si la inoculación en el medio de cultivo no es inmediata,
Almacenamiento de las muestras durante el transporteAlmacenamiento de las muestras durante el transporte::
4°C4°C 37°C y/o medio de 37°C y/o medio de transportetransporte
??
Orina, hecesOrina, heces Muestras genitales, LCR, sangre, pusMuestras genitales, LCR, sangre, pus
Sin multiplicación Sin multiplicación bacterianabacteriana
Posibilidad de Posibilidad de bacterias lábilesbacterias lábiles
Posibilidad de Posibilidad de bacterias bacterias anaerobias anaerobias
El medio de transporte previene la desecación de las muestrasEl medio de transporte previene la desecación de las muestras
Generalidades de microbiología 34
EXAMEN MICROSCÓPICO
Generalidades de microbiología 35
EXAMEN MICROSCÓPICO
Presencia y conteo de bacterias Morfología y caracteristicas de agrupamiento Movilidad Citología: observación de células
Ej.: Leucocitos (signo de infección)
1 – Examen directo1 – Examen directo Primer paso
1 gota entre porta y cubreobjeto : Lente de x 40, (seco)
INTERES:INTERES:
Generalidades de microbiología 36
Gram + Violeta
Gram - Rosa
2 – Tinción de GRAM2 – Tinción de GRAM
Es la tinción más comúnmente usada en bacteriologíaEs la tinción más comúnmente usada en bacteriología
Usada para clasificar bacteriasUsada para clasificar bacterias
EXAMEN MICROSCÓPICO
Generalidades de microbiología 37
Tinción de Gram: PrincipioTinción de Gram: PrincipioBasado en la diferencia de permeabilidad de la pared celular bacterianaBasado en la diferencia de permeabilidad de la pared celular bacteriana
1 – Violeta de Genciana o Cristal - Violeta1 – Violeta de Genciana o Cristal - VioletaAtraviesa la pared celular y colorea toda la bacteria
2 – Solución iodada o Lugol2 – Solución iodada o LugolFavorece la fijación del colorante
3 – Decoloración con alcohol acetona3 – Decoloración con alcohol acetonaBacterias Gram (-) pierden su color
Bacterias Gram (+) permanecen violetas
4 - Fucsina o safranina4 - Fucsina o safraninaColoracion de bacterias Gram (-) en rosado
Re
EXAMEN MICROSCÓPICO
Objetivo x 100 con aceite de inmersión
Generalidades de microbiología 38
3 – Otras tinciones:3 – Otras tinciones:
Coloración con azul de metilenoColoración con azul de metileno
Para visualizar bacterias intraleucocitarias
Ej : gonococos GiemsaGiemsa
Para parásitos sanguíneos o intracelulares Ziehl - NeelsenZiehl - Neelsen
for Mycobacteria Naranja de acridinaNaranja de acridina
Fluorescencia para muestras con bajo recuento bacteriano
EXAMEN MICROSCÓPICO
Generalidades de microbiología 39
CULTIVO
Generalidades de microbiología 40
CULTIVO
Agar Nutritivos Atmósfera correcta Temperatura correcta
Para obtener un crecimiento bacteriano, es Para obtener un crecimiento bacteriano, es necesario:necesario:
Cumplir con los requerimientos bacterianos en Cumplir con los requerimientos bacterianos en lo que se refiere alo que se refiere a::
Generalidades de microbiología 41
CULTIVO
Elección del medio de cultivo correcto:Elección del medio de cultivo correcto: Depende de la bacteria que será buscada depende de la muestra
?
Medio Selectivo?Medio enriquecido?
Medio básico?Medio
Cromogénico?
Generalidades de microbiología 42
CULTIVO
• • Diferentes tipos de medios de cultivoDiferentes tipos de medios de cultivo
• • Medio básicoMedio básico: nutrientes mínimos
• • Medio enriquecidoMedio enriquecido: medio básico+ factores de crecimiento (Ejemplo: sangre)
• • Medio Medio selectivoselectivo: Adición de antibióticos u otros
• • Medios cromogénicosMedios cromogénicos: Adición de sustratos cromogénicos que conducen a la aparición de
colonias coloreadasLos medios pueden ser selectivos y enriquecidos, o selectivos y cromogénicos…
Generalidades de microbiología 43
• • Crecimiento en medio sólidoCrecimiento en medio sólido::
En una placaEn una placa
Las bacterias inoculadas en una superficie de agar nutritivo se multiplicarán y formarán una agrupación visible al ojo desnudo:
coloniacolonia = 1 millón de bacterias
= 20 generaciones
PARA AISLAMIENTO
CULTIVO
Generalidades de microbiología 44
CULTIVO
Ej.: Caldo cerebro corazón, caldo tripticasa soya...
• • Crecimiento en medio líquido:Crecimiento en medio líquido:
CaldoCaldo Las bacterias son colocadas en un caldo nutritivo donde se
multiplicarán, y se observará un enturbiamiento en el medio (visible al ojo desnudo). Los caldos de cultivo no permiten diferenciar un crecimiento
polimicrobiano de uno monomicrobiano.
PARA ENRIQUECIMIENTO
Generalidades de microbiología 45
CULTIVO: Ejemplos
Orina :Orina :
Heces :Heces :
Muestra Muestra genital :genital :
CPS ID 3 Agar Sangre
CampyloselYersinia CINBCPHektoen
Mac ConkeySangre ANCChocolate
Selenito
Candida ID 2
Generalidades de microbiología 46
•• Elección de la temperatura adecuada:Elección de la temperatura adecuada:
- Bacteria : 37°C
- Hongos : 30°C
30°C 37°C
¿Incubador?
CULTIVO
Generalidades de microbiología 47
Diferentes tipos de respiración Diferentes tipos de respiración
1 2 3 4
CULTIVO
Generalidades de microbiología 48
1 – Aerobios estrictos1 – Aerobios estrictos
Requiere la presencia de Oxígeno
Su energía es obtenida a través de una metabolismo oxidativo: respiración
Ej: Pseudomonas, Micobacterias
2 – Anaerobios facultativos2 – Anaerobios facultativos
Desarrolla con o sin oxígeno pero la mayor parte de la energía producida proviene de la fermentación
Ej: Enterobacteriaceae
CULTIVO
Generalidades de microbiología 49
3 – Anaerobios estrictos3 – Anaerobios estrictosSólo pueden desarrollar en ausencia de Oxígeno, ya que es tóxico para este tipo de bacterias. Toda la energía producida proviene de la fermentación (metabolismo fermentativo)
Ej.: Fusobacterium, Eubacterium
4 – Bacterias microaerófilas4 – Bacterias microaerófilasPrefieren una atmósfera con cantidad reducida de O2
Ej.: Campylobacter, Mycoplasma
5 – Bacterias Capnófilas5 – Bacterias CapnófilasAlgunas bacterias prefieren atmósferas enriquecidas en CO2, es esencial para otros.
Ej.: Neisseria gonorrhoeae
CULTIVO
Generalidades de microbiología 50
• • Elegir la atmósfera adecuadaElegir la atmósfera adecuada::
- Aerobios
- Aero-anaerobios
- Bacterias µ-aerófilos
- Anaerobios
- Bacterias capnófilas
generador de
microaer
generador de anaer
sin generador
generador de CO2
Jarra
CULTIVO
Generalidades de microbiología 51
CULTIVO
1
2
3
4
Tiempo
Recuento bacteriano
• • Fases de crecimiento Fases de crecimiento BacterianoBacteriano
24Hrs 48Hrs
Generalidades de microbiología 52
CULTIVO
• • Fases del crecimiento bacterianoFases del crecimiento bacteriano::
1. 1. Fase de latencia:Fase de latencia: Metabolismo reducido: adaptación de la población bacteriana a las
nuevas condiciones de cultivo.
2 –2 – Fase de crecimiento exponencial Fase de crecimiento exponencialCrecimiento extremadamente activo.
3 –3 – Crecimiento negativo y fase estacionaria Crecimiento negativo y fase estacionariaComienzo de acumulación de productos tóxicos, disminución de los nutrientes disponibles.
4 –4 – Fase de Declinación Fase de Declinación
Autolisis bacteriana
Generalidades de microbiología 53
IDENTIFICACION
Generalidades de microbiología 54
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
RequerimientosRequerimientos : Obtener un cultivo puro (si la muestra : Obtener un cultivo puro (si la muestra es polimicrobiana)es polimicrobiana)
Primer paso : AISLAMIENTO Primer paso : AISLAMIENTO
Inoculación del germen en un agar nutritivo
1 bacteria 1 colonia
Generalidades de microbiología 55
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
AislamientoAislamiento1
4
3
2
Generalidades de microbiología 56
AislamientoAislamiento 1
4
3
2
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Generalidades de microbiología 57
• • Segundo paso: IDENTIFICACIONSegundo paso: IDENTIFICACIONLas bacterias se clasificacan de acuerdo con:
FamiliaFamilia GéneroGénero Especies Especies
Ejemplo: MicrococcaceaeStaphylococcusaureusEjemplo: EnterobacteriaceaeEscherichiacoli
E. coli
S. aureus
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Generalidades de microbiología 58
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Examen microscópico:Examen microscópico: Cocos o bacilos Características de agrupamiento Gram + o Gram -
Observacion de colonias en las placas:Observacion de colonias en las placas: Tamaño, color, aspecto, olor (!) Hemólisis en agar sangre
(Streptococci... )
Generalidades de microbiología 59
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
-Hemolisis :-Hemolisis : hemólisis parcial(halo verdoso alrededor de la
colonia)Ej. : Pneumococci
-Hemolisis :Hemolisis : hemólisis total (halo transparente alrededor
de la colonia)Ej. : Streptococci grupo A, B ...
-Hemolisis Hemolisis : no hemolisisEj. : Enterococcus faecalis,
faecium
HEMOLISISHEMOLISIS
Generalidades de microbiología 60
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
• • Tests de Tests de Orientacion:Orientacion:
Detección de enzimas respiratoriasDetección de enzimas respiratorias
– CatalasaCatalasa : : Destrucción de peróxido de hidrógeno 2 H2O2 2 H2O + O2
catalasa
– OxidasaOxidasa : : TMPD oxidized TMPD incoloro oxidasa rosa-violeta
(TMPD = N Tetra metil - para - fenilen - diamina)
Generalidades de microbiología 61
Resultados de tests de Orientacion:Resultados de tests de Orientacion: Morfología Gram Catalasa, oxidasawidefinirán la familia o el género, y nos permite elegir la tira de identificación correcta
Ejemplos :Ejemplos : Cocos, Gram +, Catalasa + Staphylococci Cocos, Gram +, Catalasa - Streptococci Bacilos, Gram -, Oxidasa - Enterobacteriaceae
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Generalidades de microbiología 62
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Estudio de características bioquímicas:Estudio de características bioquímicas:
Estudio del metabolismo bacteriano (enzimas...)
Ejemplo :Ejemplo :
Enzima Cambio de Color
pH
TEST (+)
Sin enzima TEST (-)
Glucosa
Fermentacion de glucosa
Producción de ácido
Generalidades de microbiología 63
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Metabolismo de glúcidos Oxidación o fermentación de azúcares:glucosa, lactosa, sacarosa, arabinosa...
Metabolismo de proteínas Proteínas: gelatina, leche, sangre...proteasas, ureasa, desaminasas, decarboxilasas
Metabolismo de lípidoslipasa, lecitinasa...
PRUEBAS BIOQUÍMICASPRUEBAS BIOQUÍMICAS
Generalidades de microbiología 64
AplicacionesAplicaciones
Medios de identificación en tubos
Tiras de identificación
Ej : Galería API, ID 32, tarjetas VITEK 1 / 2
26
27
30
29
28
1 2
5 4
3
16
17
20
19
18
21
22
25
24
23
11
12
15
14
13
6 7
10
9 8
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Generalidades de microbiología 65
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
• Estudio de características antigénicasReacción inmonológica: antígeno - anticuerpo: antígeno - anticuerpoAc fijos a partículas de látexAglutinación en presencia del antígeno correspondiente (bacteria...)
- usando colonias aisladas - o usando directamente las muestras.
Ventaja: rapidez (reacción inmediata)
latex con Acs
AGLUTINACION
bacteria
Generalidades de microbiología 66
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
• Identificación en medios cromogénicos:
Identificación directa de bacterias en la placa: colonias coloreadas
Para muestras comunes Para baterias frecuentemente
encontradas
Ej.: CPS ID 3 Urina (E.coli, Proteus, Strepto. D)
Interés:Interés: ahorro de tiempo y dinero ahorro de tiempo y dinero
Generalidades de microbiología 67
• Identificacion usando biología molecular:
Identificacion de bacterias por fragmentos de DNA específicos
– usando colonias– o directamente usando la muestra
Ej : Gen ProbeEj : Gen Probe Mycobacteria, Gonococci, Chlamydia...
InteresInteres : Especificidad, ahorro de tiempo : Especificidad, ahorro de tiempo
IDENTIFICACION DE BACTERIAS
Generalidades de microbiología 68
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD
Generalidades de microbiología 69
Objetivo:Objetivo:
Encontrar un tratamiento efectivo para el paciente
RecuperaciónRecuperaciónrápidarápida
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Generalidades de microbiología 70
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
1. Estudio « 1. Estudio « In vitro In vitro » de la actividad antibiótica sobre una » de la actividad antibiótica sobre una bacteria aisladabacteria aislada
Se realiza sólo sobre patógenos (no, sobre flora normal)
2. Interpretación « 2. Interpretación « In vivo » In vivo » de la actividad antibiótica:de la actividad antibiótica:
Riesgo potencial del éxito o falla del tratamientoRiesgo potencial del éxito o falla del tratamiento
Generalidades de microbiología 71
ANTIBIOTICOS ANTIBIOTICOS agentes agentes
antibacterianosantibacterianos
1928: Descubrimiento de la penicilina por 1928: Descubrimiento de la penicilina por Sir A.FlemingSir A.Fleming
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Generalidades de microbiología 72
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
• • Origen:Origen: - biologico: desarrolladas por microorganismos:
hongos, bacterias
- Químico: producidos por síntesis
• • Acción:Acción: variable dependiendo de la familia de ATB
- inhibición de la síntesis de la pared bacteriana
- alteración de la membrana citoplasmática
- acción sobre la síntesis proteica
- inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos
ANTIBIOTICOSANTIBIOTICOS
Generalidades de microbiología 73
Los resultados que se informan a los Los resultados que se informan a los médicos se clasifican como: médicos se clasifican como:
S Sensible
R Resistante
I Intermedio
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Generalidades de microbiología 74
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Bacteria Sensible: Bacteria Sensible: SS Bacterias que no crecen en presencia del ATB El tratamiento con ese ATB resultará exitosoexitoso
Bacteria Resistente: Bacteria Resistente: RR Bacterias que crecen en presencia del ATB El tratamiento con ese ATB resultará en fallafalla
Intermedio: Intermedio: II Resultado Intermedio Éxito del tratamiento in vivo variable
RESULTADOSRESULTADOS
Generalidades de microbiología 75
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Resistencia bacterianaResistencia bacteriana• • Natural:Natural:
Resistencia siempre encontrada en la msima especie bacteriana:
Mecanismo conocido
Ej.: Proteus mirabilis resistente a Tetraciclina
• • Adquirida:Adquirida: Resistencia adquirida por una mutacion genética, traspaso desde otra
bacteria, adquisición de plásmidos, etc
Mecanismo presente sólo en algunas cepas de dicha especie.
Debido a la posible presencia de resistencias adquiridas, los tests de sensibilidad deben ser realizados para cada
bacteria identificada
Generalidades de microbiología 76
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
• • Estudio de la CIM:Estudio de la CIM:
CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIACONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA
La menor concentración de ATB capaz de inhibir el desarrollo visible de la cepa estudiada.
Método de dilución en medio líquidoMétodo de dilución en medio líquido
0 0,5 1 2 4 8
Concentración antibiótica (µg/ml)
MIC = 1µg/ml
Ej :
Generalidades de microbiología 77
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Difusión en Agar (discos) Galerías ATB Tarjetas de sensibilidad Vitek
Diferentes técnicasDiferentes técnicas
Generalidades de microbiología 78
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
• • Técnica de difusión en aTécnica de difusión en agargarUso de un disco de papel de filtro impregnado en el antibiótico que se desea estudiar
Inocular total la superficie del ágar con una suspensión antibiótica.
Colocar los discos sobre la superficie de la placa.
Los ATBs difundirán en el ágar.
Después de una incubación por 20 hs., la zona de inhibición de crecimiento aparecerá alrededor del disco. El tamaño de la zona es proporcional al valor de CIM.
Generalidades de microbiología 79
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
• Media de los diámetros de inhibición para cada antibiótico
• Este diámetro se corresponde con el valor de la CIM
• El diametro define el informe como S, R, I dependiendo de los diámetros oficiales dados por comites de expertos
A
F
E
D
C
B
GH
Generalidades de microbiología 80
Para poder ser confiable, el método debe estar Para poder ser confiable, el método debe estar estandarizadoestandarizado
ESTANDARIZACION DE:ESTANDARIZACION DE:
- inóculo:inóculo: cantidad de bacterias
- Agar Mueller-HintonMueller-Hinton: composición del medio
- Espesor del agar: difusión del ATB
- Carga antibiótica del disco del disco
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Generalidades de microbiología 81
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
•• Galerias Galerias ATB:ATB:
Cada ATB (A, B, C, D…) es evaluados en 2 concentraciones diferentes (c y C)
cc CC
DD
CC
BB
AA
00 Control de crecimiento
SS
RR
II
SS
= Sin crecimiento bacteriano
= Crecimiento bacteriano
Generalidades de microbiología 82
Concentraciones críticasConcentraciones críticas
Para cada antibiótico, los comités internacionales de sensibilidad antibiótica fijan un rango crítico para saber si el ATB será efectivo in vivo o no ( a las dosis terapéuticas)
C : Concentración crítica MáximaC : Concentración crítica Máxima
c : concentración crítica Mínimac : concentración crítica Mínima
Concentraciones fijadasde acuerdo con la farmacocinética:- unión a proteínas,
- penetración a varios sitios de acción,
- absorcion, metabolismo, y excreción
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Generalidades de microbiología 83
•• Cepa sensibleCepa sensible: MIC < c: MIC < cEl antibiotico testeado es activo sobre esa bacteria
•• Cepa con sensibilidad Cepa con sensibilidad Intermedia: c < MIC < CIntermedia: c < MIC < CLas bacterias no serían afectadas por tratamientos en dosis habituales, pero pueden verse afectadas por altas dosis intravenosas o tratamientos locales.
Rango de riesgo
•• Cepa reCepa resistente: MIC > Csistente: MIC > CLa bacteria resiste a las más altas concentraciones de ATB. El antibiótico no será activo in vivo.
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Generalidades de microbiología 84
•• Métodos automatizadosMétodos automatizados::Estudio del crecimiento bacteriano en un medio líquido o semisólido en presencia de una o varias concentraciones de antibiótico
-- ATB ExpressionATB Expression
- mini API- mini API
- VITEK 1 and VITEK 2- VITEK 1 and VITEK 2
2627
3029
28
1 2
5 4
3
1617
2019
18
2122
2524
23
1112
1514
13
6 7
10 9
8
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA
Generalidades de microbiología 85
1.1. MUESTRAMUESTRA2.2. EXAMEN MICROSCOPICOEXAMEN MICROSCOPICO
Examen Directo Gram
3.3. CULTIVOCULTIVO4.4. TESTS DE ORIENTACIONTESTS DE ORIENTACION
Catalasa Oxidasa
5.5. IDENTIFICACIONIDENTIFICACION Manual : GALERÍAS API Semi-automáticos: ATB Expression - mini API Automatización total: VITEK1 y VITEK2
6.6. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICAPRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA Difusión en agar (discos) Medio semisólido (galerías ATB) Medios líquidos (tarjetas VITEK1 Y VITEK2)
RESUMEN
Generalidades de microbiología 86
1.4 – Principales muestras
Generalidades de microbiología 87
Principales muestras en bacteriología
1 - Orina
2 - Materia fecal
3 - Muestras genitales
Seguimiento de acuerdo con las infecciones esperadas
Generalidades de microbiología 88
INFECCIÓN URINARIA
Generalidades de microbiología 89
INFECCIÓN URINARIA
Presencia de bacterias en orina (normalmente estéril)
Pathología = cistitis, pielonefritis ... Orina: es la muestra más frecuentemente
recibida en el lab de bacteriología 80% en mujeres
Generalidades de microbiología 90
INFECCIÓN URINARIA
Bacterias patógenas: Escherichia coli Proteus Enterococcus faecalis Klebsiella Pseudomonas otross ....
La distribución de las bacterias difiere entre pequeños laboratorios y laboratorios de hospitales.
– S. saprophyticus
– Streptococcus B
Generalidades de microbiología 91
Diagnóstico de laboratorio:Diagnóstico de laboratorio:
–– RecuentoRecuento::
Cantidad significativa de bacteriasCantidad significativa de bacterias: >105 bacterias / ml
–– Presencia de leucocitosPresencia de leucocitos: indican inflamación
–– Presencia de glóbulos rojosPresencia de glóbulos rojos: si hay lesión de la mucosa del tracto urinario
–– IdentificaciónIdentificación
–– Prueba de sensibilidad ATBPrueba de sensibilidad ATB
Con tratamiento antibiótico efectivo:Con tratamiento antibiótico efectivo:
esterilización de la orina en menos de 48 hsesterilización de la orina en menos de 48 hs
INFECCIÓN URINARIA
Generalidades de microbiología 92
INFECCIÓN URINARIA
Día 1Día 1 Día 3Día 3Día 2Día 2
Colonias
- Aspecto de la orina
- Cultivo
Inoculación:Inoculación:
1- Tiras de identification
2- Tests de sensibilidad
ResultadosResultados
- Examen microscópico
Identificación
Tests de sensibilidad
Cultivo estéril:
Resultado negativo
Generalidades de microbiología 93
DIARREA INFECCIOSA
Generalidades de microbiología 94
FLORA INTESTINAL NORMAL
Bacterias comensales
Flora residente:Flora residente: E.coli, otras Enterobacteriaceae Enterococci, Lactobacilli, levaduras, anaerobios...
Flora de tránsitoFlora de tránsito: provenientes de la comida Staphylococci, Bacillus, Pseudomonas ...
Generalidades de microbiología 95
DIARREA INFECCIOSA
Bacterias patógenas:Bacterias patógenas: Salmonella Shigella Campylobacter Escherichia Yersinia Vibrio ...
La diarrea no es siempre es causada por bacterias: virus y parásitos también son causas frecuentes
Generalidades de microbiología 96
Diagnóstico de laboratorio: Diagnóstico de laboratorio: –– Examen mExamen macroscópico:acroscópico:
- Consistencia y aspecto de las heces
–– Examen mExamen microscópico:icroscópico: - Detección de glóbulos rojos y leucocitos
- Detección de bacterias móviles (Campylobacter, Vibrio..)
- Tinción de Gram: detección de un desbalance en la flora
DIARREA INFECCIOSA
Generalidades de microbiología 97
Día 1Día 1 Día 3Día 3Día 2Día 2
Colonias
- Examen microscópico
- Cultivo
Si hay scolonias Si hay scolonias sospechosas, inocular:sospechosas, inocular:
1- Tiras de ID
2- Tests de sensibilidad
ResultadosResultados
- Aspecto de la MF
Identificación
Tests de sensibilidad
Sin colonias Sin colonias sospechosassospechosas::
cultivo negativo
DIARREA INFECCIOSA
Generalidades de microbiología 98
INFECCIONES GENITALES
Generalidades de microbiología 99
INFECCIONES GENITALES
Flora normal:Flora normal: Lactobacilli, Staphylococci, Corynebacteria,
Anaerobios...
Flora patógena:Flora patógena: Bacteria : N. gonorrhoeae, Treponema pallidum
(syphilis), Mycoplasma, Chlamydiae, Candida albicans ...
Virus : Herpes genital Parásitos : Trichomonas vaginalis
Muy patógenos en embarazadas:Muy patógenos en embarazadas: Listeria, Streptococcus B
Generalidades de microbiología 100
•• En mujeres:En mujeres:- vaginitis, uretritis, cervicitis, salpingitis ..
- lesiones : chancro, úlceras
•• En hombresEn hombres::- sindrome uretrogenital
- Lesiones de piel y mucosas
- Prostatitis
- Portador asintomático
PATOLOGÍAS:PATOLOGÍAS:
INFECCIONES GENITALES
Generalidades de microbiología 101
Diagnóstico de laboratorio:Diagnóstico de laboratorio:
–– Examen macroscópicoExamen macroscópico- Aspecto de la muestra
–– Examen microscópico:Examen microscópico: - Detección de GR, leucocitos y células epiteliales
- Detección de microorganismos móviles (Trichomonas)
- Detección de bacterias intracelulares (Gonococci)
- Tinción de Gram: detección de un desbalance en la flora
- Cantidad de bacilos de Doderlein (Lactobacilli)
INFECCIONES GENITALES
Generalidades de microbiología 102
Día 1Día 1 Día 3Día 3Día 2Día 2
Colonias
- Examen microscópico
- Cultivo
ResultadosResultados
Identificación
Tests de sensibilidad
INFECCIONES GENITALES
Si hay scolonias Si hay scolonias sospechosas, inocular:sospechosas, inocular:
1- Tiras de ID
2- Tests de sensibilidad
Sin colonias Sin colonias sospechosassospechosas::
cultivo negativo
Generalidades de microbiología 103
Infecciones adquiridas en el hospital 48hs después de Infecciones adquiridas en el hospital 48hs después de la admisión:la admisión:infecciones urinarias, neumonía, infecciones después de una cirugía...
Microorganismos resistentes al medio y a los ATBs Microorganismos resistentes al medio y a los ATBs comúnmente usadoscomúnmente usados
Los más frecuentes:Los más frecuentes:E. coli, S.aureus, Enterococos, Pseudomonas aeruginosa, Serratia, Klebsiella, Acinetobacter, Enterobacter, Candida...
multirresistentes
El personal del hospital juega un rol El personal del hospital juega un rol muy importante en la diseminación de la muy importante en la diseminación de la epidemiaepidemia
INFECCIONES HOSPITALARIAS
Generalidades de microbiología 104
1.5 – PRINCIPALES FAMILIAS DE BACTERIAS
Generalidades de microbiología 105
Clasificación simplificada
COCOSCOCOS
BACILOSBACILOS
GRAM -GRAM -GRAM +GRAM +
- - StaphylococciStaphylococci
- Streptococci- Streptococci
- Neisseria- Neisseria
- - ListeriaListeria
- Corynebacteria- Corynebacteria
- - EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae
- No - No EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae
- Haemophilus- Haemophilus
- Campylobacter- Campylobacter
Generalidades de microbiología 106
ESTAFILOCOCOS
Cocos Gram + en grupos, Catalasa +Cocos Gram + en grupos, Catalasa + 20% de las bacterias aisladas en la rutina20% de las bacterias aisladas en la rutina Principales especies:Principales especies:
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus
Patogenicidad:Patogenicidad: Supuraciones, infecciones urinarias, septicemia, neumonía, endocarditis, meningitis Intoxicaxión por alimentos
Muestras:Muestras: pus, orina, hisopado faríngeos, MF, LCR, sangre
Medios de cultivo:Medios de cultivo: No-selectivos: Agar sangre Selectivos: Agar manitol salado
Generalidades de microbiología 107
•• Cocos Gram + en cadenas, Catalasa -Cocos Gram + en cadenas, Catalasa -
•• 9% de las bacterias aisladas en rutina9% de las bacterias aisladas en rutina
•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::- Streptococcus pyogenes (A) - Streptococcus pyogenes (A) :: angina
- Streptococcus agalactiae (B) :- Streptococcus agalactiae (B) : meningitis de los RN
- Enterococcus faecalis, facium (D) :- Enterococcus faecalis, facium (D) : infecciones urinarias
- Streptococcus pneumoniae :- Streptococcus pneumoniae : otitis, neumonía meningitis
- Streptococci spp:- Streptococci spp: endocarditis
•• MuestrasMuestras::- orina, faríngeos, esputo, muestras genitales, LCR, sangre
•• Medio de cultivoMedio de cultivo:: - No-selectivos: agar sangre
- Selectivos: Columbia CNAAtmósfera de CO2 o ANA
ESTREPTOCOCOS
Generalidades de microbiología 108
•• Bacilos Bacilos Gram -, Oxidasa -Gram -, Oxidasa -
•• 60% de los aislamientos de rutina60% de los aislamientos de rutina
•• Saprófitos o bacterias comensales Saprófitos o bacterias comensales (tracto digestivo...)
•• Principales génerosPrincipales géneros::- Escherichia coli , Klebsiella, Proteus, Providencia
- Citrobacter, Enterobacter, Serratia
- Salmonella, Shigella, Yersinia
• Patogenia: variada
• Muestra:- Todo tipo
• Medio de cultivo: - No-selectivo: Agar lactosa púrpura
- Selectivos : Mac Conkey, Drigalski
ENTEROBACTERIACEAE
Generalidades de microbiología 109
•• = No fermentadores de glucosa= No fermentadores de glucosa•• Bacilos Bacilos Gram - , Oxidase +/-Gram - , Oxidase +/-•• 6% de los aislamientos6% de los aislamientos•• Bacterias sBacterias saprofitas: aprofitas: patógenos oportunistas
•• Principales génerosPrincipales géneros::- Pseudomonas aeruginosa - Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter : Ox - - Aeromonas, Chryseobacterium, Pasteurella- Vibrio cholerae
•• Patogenia:Patogenia:- Infecciones urinarias, supuraciones, septicemia, meningitis...
•• MuestrasMuestras::- orina, genitales, pus, sangre, LCR
•• Medio de cultivoMedio de cultivo: : - No selectivos : Agar lactosa purpura- Selectivos : Mac Conkey, Drigalski
NO ENTEROBACTERIACEAE
Generalidades de microbiología 110
•• Bacilos Bacilos Gram -, Oxidase +Gram -, Oxidase +
•• Bacterias muy móvilesBacterias muy móviles
•• Fuente de contaminaciónFuente de contaminación: pájaros, pollo, cerdo: pájaros, pollo, cerdo Contaminación por ingestion de alimentos contaminados con
suelos Patógenos oportunistas
•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::- Helicobacter pylori :- Helicobacter pylori : úlcera gástrica
- Campylobacter coli, jejuni, fetus : - Campylobacter coli, jejuni, fetus :
Infecciones intestinales, septicemia...
•• MuestraMuestra::- heces, sangre
•• Medio de cultivoMedio de cultivo: : - No-selectivos : Agar sangre
- Selectivos : CampyloselAtmósfera microaerófila
CAMPYLOBACTER
Generalidades de microbiología 111
•• Bacilos Bacilos Gram +, en letras chinas, Catalasa +Gram +, en letras chinas, Catalasa +
•• Flora normal de piel y mucosasFlora normal de piel y mucosas
•• Gérmenes ambientalesGérmenes ambientales: : patógenos oportunistas
•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::- Corynebacterium diphtheriae (patógeno estricto): Difteria
- Corynebacterium urealyticum : infecciones urinarias
- Corynebacterium jeikeium : endocarditis, septicemia
•• Muestras:Muestras:- orina, hisopados faríngeos, pus, sangre
•• Medios de cMedios de cultivo: ultivo: - No-selectivos: agar sangre
- Selectivos: Columbia CNA
CORINEBACTERIAS
Generalidades de microbiología 112
•• Bacilos Bacilos Gram +, Catalasa +Gram +, Catalasa +
•• Bacterias ambientalesBacterias ambientales: : patógenos oportunistas
•• Principal especiePrincipal especie::- Listeria monocytogenes
•• Patogenia: Patogenia: - Intoxicacion alimentaria (leche, queso crudo, carne...)
- Meningitis, encefalitis, abortos, septicemia...
•• MuestrasMuestras::- Sangre, LCR, (muestras genitales)
•• Medios de cultivoMedios de cultivo: :
- No selectivos: agar sangre (-hemólisis)
- Selectivos: Columbia CNA
LISTERIA
Generalidades de microbiología 113
•• Diplococos Diplococos Gram -, Oxidasa +Gram -, Oxidasa +
•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::
- Neisserias comensales:- Neisserias comensales: tracto respiratorio
- Patógenos estrictos:- Patógenos estrictos: Neisseria gonorrhoeaeNeisseria gonorrhoeae (Gonococos) : infección genital
Neisseria menigitidisNeisseria menigitidis (Meningococos) : meningitis, septicemia
•• Muestras:Muestras:- genitales, LCR, sangre
•• Medios de cultivoMedios de cultivo: : bacterias fastidiosas
- No-selectivos: agar chocolate
- Selectivos: agar chocolate VCAT3 Atmósfera de CO2
NEISSERIA
Generalidades de microbiología 114
•• Cocobacilos Cocobacilos Gram -, Oxidasa +Gram -, Oxidasa +
•• Flora Flora Normal: comensales de rinofaríngeNormal: comensales de rinofarínge
•• Principales especiesPrincipales especies::- Haemophilus influenzae
- Haemophilus parainfluenzae
•• Patogenia: Patogenia: - Otitis, respiratorios, ocular, infecciones genitales,
meningitis, septicemia...
•• Muestras:Muestras:- faríngeos, esputo, muestras genitales, LCR, sangre
•• Medio de cultivoMedio de cultivo: : bacterias fastidiosas
- No-selectivos: agar chocolate
- Selectivos: agar chocolate Haemophilus
Atmósfera de CO2
HAEMOPHILUSEMOPHILUS
Generalidades de microbiología 115
ANAEROBIOSANAEROBIOS
•• Bacilos o cocos Bacilos o cocos Gram - ó Gram +, (algunos Gram - ó Gram +, (algunos esporulados)esporulados)
•• BBacterias ambientales o flora normalacterias ambientales o flora normal (bucal, (bucal,
vaginal, intestinal, cutánea)vaginal, intestinal, cutánea)
•• Principales génerosPrincipales géneros::- Clostridium
- Bacteroides
•• Patogenia:Patogenia: - Pus, peritonitis, neumonia, abscesos, infecciones genitales,
septicemia...
•• MuestrasMuestras::- pus, genitales, sangre...
•• Medios de cultivoMedios de cultivo: : - No-selectivos: Agar sangre, Schaedler
- Selectivos: Schaedler Neo-Vanco agar
Atmósfera anaeróbica
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