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FLOURESCENCIA FOSFORECENCIA
La fluorescencia es la propiedad de una
sustancia para emitir luz cuando son expuestas a
radiaciones del tipo ultravioleta, rayos catdicos
o rayos X
El proceso de fluorescencia tarda slo unas
milsimas de segundo emitiendo luz.
En el proceso, una molcula absorbe un fotn de
alta energa, el cual es emitido como un fotn de
baja energa mayor longitud de onda!. La
diferencia de energa entre la absorcin y la
emisin, es disipada como calor vibraciones
moleculares!. "odo el proceso es muy cortomillonsimas de segundo! y este tiempo es la
principal diferencia con otro conocido fenmeno
luminoso,
#on materiales semiconductores $ue producen
luz visible como resultado de su activacin con
luz %&. El efecto cesa tan pronto como
desaparece la fuente de excitacin. Los
pigmentos fluorescentes a la luz del da son
blancos o de color claro mientras $ue cuandoest'n expuestos a radiacin %& irradian un
intenso color fluorescente
La (osforescencia es el fenmeno en el cual
ciertas sustancias tienen la propiedad de
absorber energa y almacenarla, para
emitirla posteriormente en forma de luz.
.%n material fosforescente puede durar
emitiendo luz durante varios minutos.
El mecanismo fsico $ue rige este
comportamiento es el mismo $ue para la
fluorescencia, no obstante la principal
diferencia con sta es $ue )ay un retraso
temporal entre la absorcin y la reemisinde los fotones de energa.
*ateriales semiconductores $ue convierten
la energa absorbida en luz emitida slo
detectable en la oscuridad, despus de $ue
la fuente de excitacin )a sido eliminada.
Esta emisin de luz puede durar desde
minutos )asta )oras. La fuente de excitacinm's efectiva es la radiacin %&.
ALGUNOS MATERIALES FLUORESCENTES
*inerales+ fluorita algunas variedades!, calcita algunas variedades!, uranio, etc
*ateriales de uso diario+ papel blanco, azulete, camisetas blancas, octavillas de
anuncios, etc.
*todos de clasificacin+ rayas en sobres, etc.
illetes de banco
*ateriales org'nicos+ )ongos en la piel, clorofila, fluoresceina, etc.
ebidas+ "nica $uinina!, etc.
ALGUNOS MATERIALES FOSFORESCENTES
*inerales+ calcita y aragonito algunas variedades!, etc.
-nstrumentos de sealizacin nocturna+ bandas, pintura, etc.
*ateriales de regalo+ pegatinas, estrellas, etc.
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ANLISIS DE PPTIDOS
RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR:
La /esonancia magntica nuclear /*0! constituye una tcnica de vital importancia en
la investigacin cientfica. La /*0 es, junto con la difraccin de rayos X, la 1nica
metodologa $ue puede usarse para determinar la estructura molecular de
macromolculas con alta resolucin. (rente a la difraccin de rayos X, no obstante, la
/*0 presenta varias ventajas+
2ermite determinar la estructura molecular en solucin.
La /*0 permite, adem's, estudiar de manera eficaz y sencilla las interacciones
entre biomolculas. "ambin es la 1nica metodologa $ue permite el estudio de la din'mica de
macromolculas con resolucin atmica en varias escalas de tiempos.
La produccin de cada protena es distinta, y cada una re$uiere la seleccin de los
distintos sistemas de expresin vectores! y de las distintas tcnicas de purificacin
intercambio inico, cromatografa de afinidad, etc.!
PREPARACIN DE MUESTRAS:
%na vez $ue se consigue la produccin y la purificacin de la muestra, es necesario
evaluar las condiciones en las cuales se llevar'n a cabo los experimentos
amortiguadores!. Es preciso seleccionar condiciones $ue preserven la estructura
correcta y la estabilidad de la muestra por el mayor tiempo posible y $ue permitan, al
mismo tiempo, obtener la mayor seal posible. 3lgunas protenas re$uieren elevadas
concentraciones de iones para mantenerse estables en altas concentraciones. #in
embargo, el uso de estas altas concentraciones de sal y amortiguadores con alta
conductividad degrada la relacin seal4ruido en la /*0.
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Estructura de las
prte!"as:
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9omo dijimos antes, no )ay conexin entre los distintos 33s+ 0o podemos determinar
cu'l es cual. 2ara poder determinar la estructura de una protena por /*0 necesitamos
saber la estructura primaria de la protena.
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#$ ANLISIS % SECUENCIACIN DE PPTIDOS MEDIANTEESPECTROMETR&A DE MASAS
#e utilizar' un espectrmetro de masas de 1ltima generacin cuadrupolo de trampa
inica!, cuyas principales caractersticas son las de poder realizar espectros de masas enun rango pe$ueo a muy alta resolucin modo :oomscan! y fragmentacin sucesiva de
especies inicas determinadas presentes en mezclas complejas modo *# n !. La sonda
electrospray )a sido modificada en nuestro laboratorio para permitir realizar
nanoelectrospray, $ue permite un an'lisis muy ex)austivo de cantidades muy pe$ueas
de muestra 7 ul! durante tiempos muy largos el flujo es de ;min!.
El procedimiento a seguir es el siguiente+
Escoger las fracciones de 82L9 $ue se $uieran analizar ?al contrario $ue para la
microsecuenciacin autom'tica, en este caso conviene escoger fracciones $ue sugieran
la presencia de especies m1ltiples, con objeto de obtener m's informacin de una misma
muestra@. #ecar totalmente las fracciones elegidas en la centrfuga de vaco.
/esuspender la fraccin $ue se vaya a analizar en A ul de medio *8( metanol>agua
Av! con
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isotpica del in seleccionado. -dentificar el primer pico de la serie el de menor masa!,
y tomar nota de su masa m!. 9alcular la diferencia de masa existente entre los picos de
la serie+ la inversa de este n1mero es la carga del in z!
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