Objetivo
Conocer las principales características biológicas de los gérmenes anaerobios
esporulados y no esporulados, su capacidad para producir infecciones, las posibilidades
diagnósticas y las medidas profilácticas
Anaerobios No Esporulados Características generales
Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno
Anaerobios estrictos: requieren un 0% de oxígeno para crecer
Anaerobios aerotolerantes: sobreviven hasta con 0,5% de oxígeno
Son exigentes para crecer, necesitan vitaminas y cofactores.
Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.
Producen infecciones oportunistas, generalmente endógenas.
Las infecciones generalmente son mixtas con bacterias aerobias.
Incluyen a varios géneros de cocos y bacilos, grampositivos y gramnegativos.
• Efecto tóxico directo
• Formación de anión peróxido y superóxido
• Oxidación de enzimas esenciales que contengan grupos SH-
• Inhibición del metabolismo de flavoproteínas y NADH oxidasa
• Imposibilidad para alcanzar potenciales redox bajos
• Déficit o ausencia de catalasa y/o superóxido dismutasa (presente en
aerotolerantes)
Bacterias Anaerobias Efecto tóxico del oxígeno
Adherencia a las células Polisacárido capsular Endotoxina Hialuronidasa, colagenasa, fibrinolisina,
neuraminidasa Exotoxinas
Factores de virulencia de bacterias anaerobias
Flora Normal AnaerobiaFlora Normal Anaerobia
• Piel: la flora normal se limita a los folículos pilosos.
• Boca y faringe: flora muy abundante. Las encías son un nicho muy importante. Se asocian con infecciones a nivel de cabeza y cuello.
• Intestinos: hay 1.000 veces más anaerobios que aerobios. Degradan sales biliares, sintetizan vitaminas y se oponen a la colonización por otras bacterias. Se relacionan con infecciones abdominales.
• Vagina: Predominan los Lactobacillus en condiciones normales. Alteraciones hormonales y tratamientos con antibióticos alteran la flora con sobrecrecimiento de otras bacterias (vaginosis). Se asocian con aborto séptico.
Flora normal anaerobia
Cavidad oral y TRS:
Bacilos gram-negativos: Porphyromonas Prevotella, Fusobaterium nucleatum – Cocos gram-positivos Actinomyces
100:1 (ANA/AER)
Piel:
Propionibacterium acnes
Peptostreptococcus
Tracto genital femenino:
Bacilos gram-negativos: Porphyromonas Prevotella bivia-disiens Cocos gram-positivos Lactobacillus - Clostridium
Colon
Bacilos gram-negativos: Bacteroides grupo fragilis– Cocos gram-positivos - Clostridium, Eubacterium, Bifidobacterium
1000:1 (ANA/AER)
Género Peptostreptococcus
P. anaerobiusP. magnusP. micros
P. asaccharolyticus
Cocos Grampositivos Anaerobios
Género ActinomycesA. israeliiA. odontolyticusA. viscosus
Género EubacteriumE. lentumE. aerofaciens
Género LactobacillusL. casseiL. bulgaricusL. yoghurtii
Bacilos Grampositivos Anaerobios
Género PropionibacteriumP. acnesP. propionicumP. granulosumP. avidum
Género BifidobacteriumB. dansium
Género MobiluncusM. curtisiiM. mullieris
Bacilos Grampositivos Anaerobios
Género BacteroidesB. fragilisB. thetaiotaomicron
Género PorphyromonasP. gingivalisP. endodontalis
Género PrevotellaP. melaninogenicaP. bivia
Género FusobacteriumF. nucleatumF. necrophorum
Bacilos Gramnegativos Anaerobios
Características de las infecciones por Anaerobios
ENDOGENAS
•Polimicrobianas
•Relacionadas a mucosas
• Sinérgicas
Infecciones por anaerobios:
Odontógenas – Cabeza y cuello
Abdominales
Piel y partes blandas
Ginecológicas: vaginosis, abscesos vaginales, aborto séptico, etc
SNC: abscesos cerebrales, empiema subdural
Oseas
Infección por anaerobios: Factores predisponentes
Factores predisponentes: Enfermedades vasculares
Shock
Traumatismos
Cirugías
Cuerpos extraños
Enfermedades malignas
Edema
Infecciones previas
Infecciones por anaerobios Infecciones por anaerobios CaracterísticasCaracterísticas
• Olor pútrido de las secreciones purulentas• Proximidad a mucosas• Gas en el sitio de la infección• Necrosis tisular o gangrena• Tratamiento previo con aminoglucósidos (inactivos frente a anaerobios)• Infección secundaria a mordeduras animales o humanas• Paciente portadora de Dispositivo Intrauterino• Maniobras comprometedoras (cirugía abdominal o aborto provocado)• Evolución lenta de la enfermedad• Coloración negra de la herida • Gránulos de azufre (actinomycosis)• No desarrollo en aerobiosis de los microorganismos observados en el Gram.
Infecciones por anaerobios Son polimicrobianas y endógenas, por lo tanto su
etiología puede ser predecible de acuerdo a la localización.
El hallazgo de un patógeno determinado permite sospechar cual es el foco de infección
Las características de la muestra nos permiten sospecharlos.
Tratamiento basado en: debridamiento, drenaje y ATB
Infecciones por anaerobios Infecciones por anaerobios PrevenciónPrevención
• Uso racional de los antimicrobianos
• Tratamiento de las enfermedades de base
• Minimizar el uso de técnicas invasivas
• Disminuir el tiempo de internación
•Tratar rápidamente las heridas profundas, especialmente
las punzantes o secundarias a mordeduras humanas y de
animales
Muestras NO aptas para cultivo anaerobios
Heces o materiales que estén contaminados con contenido intestinal (excepción C. difficile)
Exudados vaginales o cervicales Orinas tomadas por micción espontánea o
sonda Esputos, secreciones nasofaringeas o
materiales tomados por broncoscopía sin protección.
Muestras aptas para cultivo anaerobios
Líquidos normalmente estériles: LCR, pleural, peritoneal, etc.
Muestras tomadas por punción a través de piel sana (Heridas, hematomas, colecciones, punción suprapúbica, etc.)
Muestras de endometrio, pulmón, etc., tomadas por biopsia o cepillos recubiertos.
Biopsias (de sitios sin flora habitual)
Transporte y conservación de muestras
Las muestras líquidas, purulentas y de volumen considerable pueden transportarse en tubos estériles.
Las colecciones claras o de volúmenes reducidos pueden inyectarse en frasquitos con tapón de goma y atmósfera inerte, sin introducir aire.
No es conveniente el sistema de transporte de muestras en jeringas, porque permite la difusión del oxígeno al interior de la muestra.
Los raspados, hisopados y piezas de tejido pequeñas pueden colocarse en tubos que contengan medio de Stuart, Cary-Blair, pre-reducido.
Las piezas de tejido con un volumen mayor a 1 cm3, pueden transportarse en recipientes estériles, sin conservantes.
Transporte de MuestrasTransporte de Muestras
• Frascos para hemocultivos
anaeróbicos
• Jeringa y aguja con tapón de goma
(No se aconseja por cuestiones de
bioseguridad)
• Frascos con medios prerreducidos
Tiempo de transporte sugerido según: volumen, Tiempo de transporte sugerido según: volumen, método de conservación y tipo de muestramétodo de conservación y tipo de muestra
MuestraTiempos hasta la
siembra
Aspirados< 1 ml
1-2 ml
> 2 ml
Tejidos y biopsias- +) en recipiente estéril sin anaerobiosis- +) en bolsa anaeróbica
10 minutos
30 minutos
2 – 3 horas
30 minutos
2- 3 horas
Conclusiones Obtener las muestras en forma adecuada Protegerlas de los efectos deletéreos del
oxígeno Mantenerlas a temperatura ambiente Las mejores muestras son las obtenidas de
cavidades cerradas a través de tejidos no contaminados
Bacterias anaerobias: Bacterias anaerobias: Diagnóstico microbiológicoDiagnóstico microbiológico
e identificacióne identificación
Cultivo de anaerobios: Muestra
Características macroscópicas: aspecto, olor, fluorescencia, etc
Observación microscópica:
flora polimicrobiana, leucocitos, orienta terapia empírica, etc.
Gérmenes AnaerobiosGérmenes Anaerobios - - DiagnósticoDiagnóstico
Sospecha clínica
Toma de Muestra
Coloración de Gram
Siembra en Agar sangre con y sin ATB
Incubar 48 hs a 37ºC en anaerobiosis
Morfología colonial y Gram
Pruebas bioquímicas
Diagnóstico microbiológico:Cultivo
Utilizar medios frescos, recientemente preparados o pre-reducidos
Procesar rápidamente
Evaluar qué microorganismos buscamos para elegir el medio: suplementos específicos
Diagnóstico microbiológico:Medios
Medios sólidos NO selectivos: (Agar base enriquecido: Brucella, Columbia, Schaedler, etc) Agar Base + Vit K (1 mg/ml) + Hemina (5 mg/ml) +
sangre lacada al 5% (BHKA) Medios sólidos selectivos:
BHKA + KAN (30 a 50 µg/ml) BHKA + VAN (5 µg/ml)
Medios líquidos: Resguardo (“Backup”) Caldo BHI, tioglicolato suplementado con cisteína, Vit K y
hemina.
Cultivo de anaerobios: Atmósfera
Métodos para generar atmósfera anaerobia: Mezcla de gases: Se utiliza una mezcla compuesta por
5-10% H2, 5-10% CO2 y 80 a 90% de N2, Generadores comerciales: Hay diferentes sistemas
comerciales: Con catalizador (Gas Pack, BBL; Anaerobic Gas
generator, Oxoid): BH4Na y ácido cítrico y una tableta de HCO3Na para generar H2 y CO2
Sin catalizador: mezcla de reactivos que fijan el O2 y generan CO2.
** Activados con agua: Anaerocult, Merck; Britania. ** Activan al contacto con el aire: Anaerogen, Oxoid; Key
Scientific, Mitsubishi; Genbox, Biomerieux
Cultivo de anaerobios: Atmósfera
Sistemas de incubación:
a) Jarras anaerobias
b) Cámara anaerobia
c) Bolsas anaerobias
Cultivo de anaerobios: Incubación - Controles
Incubación: al menos 48 hs a 35-37ºC, hasta 5 a 7 días. Atmósfera anaerobia (< 1% O2)
Control de anaerobiosis Indicadores de Ox-Red: resarzurina, azul de
metileno Recuperación de anaerobios estrictos: F. nucleatum, BGN pigmentados, etc.
Identificación de Anaerobios: Limitaciones técnica
Bacterias fastidiosas Requerimientos culturales especiales
Atmosfera (<1% O2) Nutrientes Tiempo de desarrollo Metabolismo (algunos inactivos)
Descripción macroscópica
Coloración de Gram
Prueba de toleranciaal oxígeno (CA)(en agar chocolate en Lata con vela)
Procedimiento a seguir con cada colonia:
CULTIVO DE ANAEROBIOS: IdentificaciónCULTIVO DE ANAEROBIOS: Identificación
Colonia
1- Bacilos gram negativos: Discos potencia especial :Vc 5µg+ Cs 10µg + Ka 1000 µgIndolBilisNitratoEsculinaCatalasa
Gram
TablasEspecíficas
4- Cocos gram positivos:
SPS IndolNitrato Esculina
Catalasa Urea
3- Cocos gram negativos:
NitratoFluorescencia (UV)
2- Bacilos gram positivos:
No esporulados: CatalasaNitratoIndol
Esporulados:Glucosa CAMP reversa Gelatina UreaLipasa LecitinasaIndol
IDENTIFICACION IDENTIFICACION PRESUNTIVAPRESUNTIVA
IDENTIFICACION: CONCLUSIONESIDENTIFICACION: CONCLUSIONES
Buena observación micro y macroscópica Siempre hacer pruebas básicas de entrada Utilizar pruebas rápidas en spot o enzimas
preformadas (inóculo alto) Asegurarse buen desarrollo en pruebas de
crecimiento.
Características generales
Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno
Resisten hasta 120ºC, la desecación y cambios de pH
Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.
Se los encuentra ampliamente distribuidos en el agua, el suelo y
las plantas
Producen infecciones oportunistas.
Su acción se manifiesta por la producción de potentes exotoxinas.
Incluyen al género Clostridium con varias especies.
Las infecciones son muy típicas y el diagnóstico generalmente es
clínico.
Anaerobios Esporulados
Clasificación
Neurotóxicos
Clostridium tetani
Clostridium botulinum
Histotóxicos
Clostridium perfringens
Clostridium septicum
Enterotóxicos
Clostridium difficile
Clostridium perfringens
Clostridium tetani
Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.
Las esporas ingresan a través de heridas.
Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.
La forma vegetativa produce una exotoxina (tetanoespasmina).
La toxina difunde por vía neural hasta las neuronas motoras.
En SNC bloquea la liberación de glicina y GABA. A nivel periférico
inhibe la liberación de acetilcolinesterasa dando como resultado la
estimulación incontrolada de los músculos esqueléticos.
El paciente muere por parálisis de los músculos respiratorios.
Clostridium tetani - Prevención
Se previene vacunando con el toxoide tetánico (Vacuna DPT o
antitetánica sola).
Se aplica a los 2, 4 y 6 meses. Primer refuerzo a los 18 meses y
segundo refuerzo al ingreso escolar. Cada 10 años deben
aplicarse refuerzos. La embarazada debe vacunarse al 5to y 7mo
mes de embarazo.
Deben lavarse perfectamente las heridas profundas,
principalmente las producidas por material herrumbrado y las
contaminadas con tierra o materia fecal.
En caso de heridas puede emplearse profilácticamente la
antitoxina, la cual se administra en forma conjunta con la vacuna.
Clostridium botulinum
Se encuentran en la tierra y sedimentos acuáticos
La fuente más común de intoxicación es la ingestión de
conservas o fiambres caseros.
Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina en
el alimento y la forma vegetativa produce una exotoxina.
La toxina ingresa por vía digestiva y difunde por vía humoral hasta
las neuronas motoras.
La toxina bloquea la liberación de acetilcolina dando como
resultado una parálisis fláccida de los músculos esqueléticos.
El paciente muere por parálisis de los músculos respiratorios.
Clostridium botulinum - Prevención
Deben cumplirse estrictamente las normas de
seguridad en la manipulación de los alimentos
en la industria alimentaria.
Debe educarse a la población general respecto
de los procedimientos seguros de envasado de los
alimentos.
En caso de dudar del origen de los alimentos,
deben calentarse 10 minutos a 100ºC para destruir
la toxina.
No debe administrarse miel a lactantes menores de
1 año de edad (Botulismo del lactante).
No existe vacuna de aplicación universal.
Aplicaciones de la
Toxina botulínica tipo A: BotoxIndicaciones terapeúticas
Espasticidad asociada con accidente cerebro vascular.
Tratamiento en pacientes con parálisis cerebral Distonía cervical (tortícolis) en adultos Blefarospasmo y espasmo hemifacial Corrección del estrabismo Tratamiento focalizado de la hiperhidrosis axilar.
Aplicaciones de la
Toxina botulínica tipo A: BotoxIndicación cosmética
Corrección estética facial para remoción de arrugas glabelares.
Clostridium perfringens
Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.
La bacteria ingresa a través de heridas en forma endógena o
exógena.
Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.
La forma vegetativa produce varias exotoxinas
Las toxinas difunden por contigüidad produciendo necrosis tisular y
abundante cantidad de gas.
La infección se manifiesta como gangrena gaseosa cuando afecta al
tejido subcutáneo o como mionecrosis cuando afecta al tejido
muscular
Con frecuencia debe amputarse el miembro afectado.
Top Related