7/25/2019 Biotecnología de proteínas recombinantes
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Prof. Carlos Scotto Espinoza
Ronald Aquino Ortega
UNIVERS IDAD NAC IONAL AGRAR IA LA MOL INA
ESCUELA DE POSGRADOMAESTRÍA EN ACUIC ULTURA
Crso !" #iot"cnolo$%a Aplica!a a la Acicltra
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INTRODUCCI&N•A través del empleo de las “ómicas” en laactividad acuícola, es posible impactar en lamodifcación y mejoramiento genético para:•
Desarrollo de cepas resistentes a enermedades!•"ejoramiento en la tasa de crecimiento!•#onversión alimenticia!•#ontrol $ormonal de ciclos reproductivos!•%dentifcación y tratamiento de enermedades!
•Desarrollo de vacunas!•Desarrollo sostenible!
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#IOTECNOLOGÍA DEPROTEÍNAS RECOM#INANTES
•&sta implicada en el aislamiento, produccióny mejoramiento de las propiedades
biológicas de proteínas específcas a partirde diversas uentes naturales tales comoplantas, animales o microorganismos, parasu posterior aplicación en diversos procesos!
•
'n sistema de e(presión est) conormadopor•'n organismo $ospedero•*ector de e(presión
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+&&##%-. D&
+%+/&"AD&&012&+%-
.
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VENTA'AS ( DESVENTA'AS DELEVADURAS )OSPEDERAS
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PRODUCCI&N DE TRIPSIN&GENORECOM#INANTE DE CAMAR&N #LANCO DEL
PACÍ*ICO Litopenaeus vannamei
•3bjetivo•3btener una uente pura y $omogénea de tripsinógenoo tripsina para el estudio de sus propiedades y supotencial aplicación en la acuicultura!
•41or 5ué6•1or su importancia en los procesos digestivos delcamarón!
•
1or el gran interés sobre la mayor producción delcultivo!•1or el elevado costo de las dietas!•1or la necesidad de contar con tripsinas puras sin tenerelementos tra7a!
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•1roblemas:•Actividad proteolítica contra proteínas endógenas!•%nestabilidad proteica por autodigestión de latripsina!
•&strategia de dise8o:•+e basa en la síntesis de su precursor naturalinactivo!
•&l vector de e(presión elegido debe contar con
promotores regulables, con la fnalidad de inducirla producción de la en7ima!•Debe secretarse al medio!•*ector elegido: Pichia pastoris
PRODUCCI&N DE TRIPSIN&GENORECOM#INANTE DE CAMAR&N #LANCO DEL
PACÍ*ICO Litopenaeus vannamei
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•"&/3D339A•+e utili7ó cD.A para tripsinógeno de L.vannamei
•+e clona y usiona con la secuencia se8al del
actor ; de Saccharomyces cerevisiae. &stausión se inserta en el vector de e(presiónp1%#< del sistema de e(presión de P. pastoris=1romotor A30>? p1%#</g
•#epa de P. pastoris: 9+>>@!•"étodo de transormación: /écnica deeseroplastos!
•#omprobación de las células transormadas:
•9enotipicamente: 1or 1#2!•enotipicamente: #recimiento en metanol!
PRODUCCI&N DE TRIPSIN&GENORECOM#INANTE DE CAMAR&N #LANCO DEL
PACÍ*ICO Litopenaeus vannamei
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DIAGRAM
AGENERALDE UN
VECTORDEE+PRESI
&N ENPichia pastoris
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•as cepas recombinantes se cultivaron en medio mínimo,con metanol al B!C@!
El"ctrofor"sis SDS,PAGE -D
An)lisis proteico del medio de cultivo!
Carril 1 y 4: Marcador de peso molecular.
Carril 2: Extracto proteico de glándulas digestivas de L. vannamei .Carril 3: Proteínas recominantes por una cepa recominante !"11#
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Anlisis !" /"st"rn #lot!"sp0s !" 12 3oras !" in!cci4n con 5"tanol
Carril 1 y $: Marcador de peso molecular
Carril 3 y #: Controles negativos
Carril 2: Extracto proteico de glándulas digestivas de L. vannamei .
Carril 4: Medio de cultivo de ce as de tri sin% eno cultivadas en condiciones de inducci%n
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GRACIAS.
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