Pruebas complementarias en el diagnóstico de las leucemias mieloides agudas
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Amphia Hospital, Breda
: Hospitales Universitarios
: Hospitales de medicina especializada:
Holanda
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Citometría de flujo
Hemocitometría
Citología de médula ósea
Laboratorio de análisis clinico
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Morfología/histologia Citogenética
Citometría de flujo Análisis Molecular
El diagnóstico de LAM
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
La citología de la médula ósea
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Esquema de la hematopoyesis
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Lugares con hematopoyesis en el esqueleto
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Aspiración de médula ósea
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
• 1 ml -3 ml en una jeringa
• Hacer extensiones directamente
• Preservar la muestra en EDTA � hacer extensiones en una hora
• Coagulación rápida � leucemia aguda promielocítica?
• “Dry tap” � mielofibrosis?
Aspiración de médula ósea
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Preparar los frotis de la médula ósea
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
� Plankje met preparaten
Tinción de Perl’sTición May Grünwald Giemsa
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
El estroma Hematopoyesis
GrasaCongreso Nacio
nal Laboratorio Clínico 2018
• Eritroblastos 13-38
• Mieloblastos 1-5
• Promielocitos 0-3
• Mielocitos 3-12
• Metamielocitos 4-6
• Granulocitos neutrófilos bandas 10-15
• Granulocitos neutrófilos 10-25
• Granulocitos eosinófilos 0-4
• Granulocitos basófilos 0-1
• Monocitos 0-3
• Linfocitos 6-20
• Células plasmáticas 0-2
• Predominio mieloide sobre eritroide (M/E) 3-7
Valor normal del medulograma (%)*
* B Bain et al. Bone marrow pathology (4th edition). Wiley Blackwell
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Directrices para el recuento celular
- sangre periférica : 200 células
- médula ósea: 500 células, usando al menos 2 frotis
- estimar la cantidad de megacariocitos en 5 campos a 10x10
- evaluar la displasia en la médula ósea:
- 200 células de la granulopoyesis (neutrófilos, eos, basos)
- 200 células de la eritropoyesis
- 30 megacariocitos
- síndrome mielodisplásico: > 10 % displasia
� WHO 2008/2016Congreso Nacio
nal Laboratorio Clínico 2018
eritroblasto
basófilo
linfocito
monocito
neutrófilo
eosinófilo
celula madre
mieloblasto
Esquema de la hematopoiesis
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
eritroblasto
basófilo
linfocito
monocito
neutrófilo
eosinófilo
celula madre
mieloblasto
Efecto de LAM al hematopoiesis
X
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
mieloblasto
Efecto de LAM al hematopoiesis
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
médula ósea normal médula ósea con LAM
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Tratamiento de LAM con citostáticos
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Leucemia refractaria (día 17 después tratamiento)
tratamiento eficiente leucemia refractaria Congreso Nacio
nal Laboratorio Clínico 2018
La histología de
la medula ósea
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Las herramientas…..
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Una biopsia de médula ósea.
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Una selección de las varias tinciónes histoquimicas
y inmunoquimicas para la médula ósea.
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Médula ósea normal Médula ósea de LAM
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Inmunofenotipo con
citometría de flujo
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Esquema de las células hematopoyéticas con expresión
de moleculas extracelular e intracelular específicas
para las diferentes etapas de maduración.
Marcador especifíco
Marcador de maduración
Marcador inmaduro
Marcador pan leucocitarioCongreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Marcador especifíco
Marcador de maduración
Marcador inmaduro
Marcador pan leucocitario
Anticuerpo fluorescente contra
el marcador de maduración
Anticuerpo fluorescente contra
el marcador inmaduro
Detección inmunofenotípica de moleculas extracelular y
intracelular especificas para las diferentes etapas de
maduración.
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Espresión de los varios antígenos de membrana y los antígenos intracelulares durante las etapas de la maduración mieloida
(TdT)
MPO
MPO
MPO MPO MPO
MPO
mieloidoprogenitor
HLA-DRCD34CD117(CD13)(CD33)(CD7)
mielo-monocitoido
progenitor
HLA-DRCD34CD117CD13CD33CD65)(CD11c)(CD15)
monoblasto
HLA-DRCD13CD33CD65CD11cCD14CD36
mieloblasto
(HLA-DR)CD13CD33CD65CD15
proeritroblasto
CD36H antigeno
(GpA)
inmaduromegakarioblasto
HLA-DRCD34CD33
(CD36)(CD41/CD61)
(CD42)
megakarioblasto
CD36CD41/CD61
CD42(CD9)
megakariocito
CD36CD41/CD61
CD42CD9
trombocitos
CD36CD41/CD61CD42CD9
eritroblasto
CD36H antigeno
GpA
eritrocitos
H antigenoGpA
promielocito
CD13CD33CD65(CD15)
mielocito
CD13CD33CD65CD15CD66b
granulocito
CD13CD65CD15CD66bCD16
promonocito
HLA-DRCD13CD33CD65CD11cCD14CD36
monocito
HLA-DRCD13CD33CD65CD11cCD14CD36
macrófago
HLA-DR(CD13)(CD33)CD11c(CD14)(CD36)(CD1)CD68RFD9
MPOCyCD68
MPO
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
El sistema de citometría de flujo
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Médula ósea normal
Scatergrama de dispersión lateral con CD45: el mapa general de la médula ósea
Intensidad del marcador CD45
Dis
pe
rsió
n la
tera
l (S
SC
)
CD45: antígeno universal para células hematológicas
mielopoyesis
monocitos
linfocitos
lugar de los mieloblastos
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Aplicaciones de la citometría de flujo
• El diagnóstico de LAM
• Enfermedad mínima residual (EMR)
• Cuantificación de células madre (CD34+)
• PronósticoCongreso Nacio
nal Laboratorio Clínico 2018
La citogenética
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
El cariotipo humano
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Esquema de lesiones cromosómicas más frecuentes.
Deleción Duplicación Inversión
Inserción Translocación
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Cariotipo clásico con translocación entre las cromosomas 8 y 21. (t 8:21)
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Hibridación in situ fluorescente (FISH) de translocación entre cromosoma 8 y 21 ( t8:21)
cromosoma 8 intacto
cromosomas 8 y 21 con intercambio de partes
cromosoma 21 intacto
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Supervivencia de LAM con una alteración cromosómica que muestra el valor de la citogenética para el pronóstico
NEJM 2016; 374:2209-2221.
Años
Pro
ba
bilid
ad
de
so
bre
viv
en
cia
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Analisis molecular
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Secuenciación masiva de nueva generación (NGS)
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Las mutaciones más comunes en LAM
Blood 2016;12: 686-698.
Función del geno:
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
El efecto del tipo de mutación a la superviviencia en LAM
Blood 2016;12: 686-698.
So
bre
viv
ien
cia
sin
recaíd
a
años
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
NGS y citometría de flujo (MFC) son complementarios en la detección de enfermedad mínima residual (EMR)
Meses
Po
rce
nta
ge
de
re
ca
ída
NEJM 2018, M Jongen
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Significado del análisis molecular para el tratamiento
� Ayuda en la clasificación de LAM
� Mejora el valor del pronóstico de LAM
� Detección de EMR con alta sensibilidad
� Predicción de LAM algunos años antes del
diagnóstico
� Desarollo de medicamentos nuevos que se basen
en las lesiones moleculares de LAM
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Congr
eso N
acion
al La
bora
torio
Clínico
2018
: mieloblasto : promielocito : neutrófilo
El efecto del tratamiento con un inductor de diferenciación en LAM
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Tratamiento de LAM con inhibidor de IDH induce maduración de los blastos leucémicos.
diagnóstico día 17 de terapia día 24 de terapia
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
El futuro del diagnóstico de LAM (1)
� La citología y la histología mantendrán su
importancia para el diagnóstico inicial.
� La morfología de los blastos leucémicos no importa
mucho para la terapia. (excepto: LAP)
� La clasificación de LAM se basará especialmente en
la citogenética, el análisis molecular y posiblemente
terapias anteriores del paciente.
� La combinación de citometria de flujo y NGS
permite la detección de EMR con alta sensibilidad.Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
El futuro del diagnóstico de LAM (2)
� El análisis molecular dará la posibilidad de prever los
sujetos con alto riesgo de LAM, tanto en pacientes
con una enfermedad hematológica (PV, TE etc.)
como en personas saludables.
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Gracias por su atención.Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Congr
eso N
acion
al La
bora
torio
Clínico
2018
Congr
eso N
acion
al La
bora
torio
Clínico
2018
Antígenos importantes para el diagnóstico de LAM
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Médula ósea normal Médula ósea con LAM
“El triángulo de las Bermudas”: lugar de los mieloblastos
Intensidad del marcador CD45
Dis
pe
rsió
n la
tera
l (S
SC
)
CD45: antígeno universal para células hematológicas Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Secuenciación masiva de nueva generación (NGS)
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Secuenciación de próxima generación del ADN de un
paciente con LAM con una mutación en el gen IDH2
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Punción seca� un frotis de una biopsia
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Esquema de la hematopoyesis
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Lesiones genéticas y cromosómicas en LAM
Blood 2016; 127: 29 - 41.
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Blood 2016; 127: 29 - 41.
Las lesiones genéticas y cromosómicas en LAM*
± 50 % de pacientes con LAM no tienen alteraciones cromosómicas
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Blood 2016; 127: 29 - 41.
Las lesions genéticas y cromosómicas en LAM
± 50 % de pacientes con LAM no tienen alteraciones cromosómicas
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Los procedimientos mas importantes en citología de médula ósea
� - Preparar los frotis
� - La tinción
� - Cómo hacer una fórmula de médula ósea
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
2018
Top Related