Diagnóstico en GenéticaDiagnóstico en Genética
¿Qué es lo que se puede diagnosticar?
• Mutaciones – Cromosómicas– Genéticas o puntuales– Dinámicas– Del ADN mitocondrial– Microdelecciones o duplicaciones en tándem
Orientación al diagnóstico de:• Cromosomopatías:
– Hipocrecimiento– Retardo del desarrollo /
RM– Dismorfias /
malformaciones
• Mutaciones puntuales:– Ej.: Acondroplasia
• Enfermedades mitocondriales:– Encefalomiopatías
mutación Gly380Arg en FGFR3 (4p16)
• Consecuencias de las mutaciones – A nivel molecular
• alteraciones de la expresión génica (ej. Enfermedad de Friedreich)
• alteraciones proteicas (ej. Anemia Falciforme)
– A nivel de fenotipos intermedios• alteraciones funcionales (ej. Sd. QT largo
congénito, Test del sudor para FQ) • alteraciones del metabolismo (ej. EIM) • alteraciones histológicas (ej. Miocardiopatías
Hipertróficas, Distrofias Musculares)
– A nivel clínico• Sds. clínicos característicos (ej. Sd. de Down)
Alelo normal Alelo Mutante
HbA HbS
Anemia Falciforme
TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS EN GENÉTICA
• Genética Clínica, Historia Familiar y Genealogía – Sindromes genéticos– Modo de herencia– “Sindrome completo” a nivel familiar.– Genética de Poblaciones (ej. FMF, Tay-Sachs, HbS)
• Exámenes complementarios habituales – Hemograma y
extendido de sangre periférica (Enfs. de atesoramiento)
– RX (displasias óseas) – Ecocardiograma y
ECG (Miocardiopatías, canalopatías)
– Estudios funcionales (Conducción nerviosa en neuropatías primarias)
• Citogenética – Técnica estándar.– Técnicas de bandeo – Bandeo de alta
resolución
• Técnicas bioquímicas y determinaciones cuantitativas – EIM (PQ cualitativas, cromatografías semicuantitativas,
dosificación de metabolitos, actividades enzimáticas).– dosificación de FP sérica materna (Defectos del tubo neural).– dosificación de Estriol y HCG en sangre materna (Sd. de Down).– Electroforesis de proteínas (HbS).
• Biología Molecular – detección directa de mutaciones
• necesidad de conocer secuencia del gen.• diversas mutaciones en distintas familias o poblaciones.• no existencia de correlaciones genotipo-fenotipo
– detección de marcadores ligados (diagnóstico indirecto)• posible error por recombinación
• Conjunción de técnicas – FISH
Electroforesis de Hb
Distrofias MuscularesDistrofias Musculares
• Diagnóstico a nivel:– histopatológico:
– proteico:
Resistencia Proteína C activada
• Factor V de Leiden• Bioquímica de la coagulación• Trombofilia
Detection of 3 bp deletions (CF DF508 and DI507) on a Spreadex EL 300 gel. Lanes: 1 - M3 Marker (Elchrom); 2 - CF patient heterozygous for the DI507 mutation (DI507/N); 3 - CF patient with no 3 bp deletion (N/N); 4 - CF patient heterozygous for DF508 mutation; 5 - CF patient homozygous for DF508 (DF508/DF508).
Receptor de Andrógenos
Diagnóstico molecular directo
(CTG)n3’ UTRGen DMPK
(CTG)n >1000, fenotipo congénito100< (CTG)n <1000, fenotipo clásico50< (CTG)n <100, fenotipo leve
Cromosoma 195’ 3’
Distrofia Miotónica tipo ICaracterización molecular
Distrofia Miotónica tipo IDiagnóstico molecular
Diagnóstico por Southern blot:Permite detectar grandes amplificacionesN- paciente no afectadoA- paciente afectado
PCR/ Southern blot:Permite detectar alelos con expansiones cortas
¿Cómo diagnosticar qué gen está mutado en una Distrofia Muscular?
Ligamiento al X5 Cm entre marcador y locus de la enfermedad
Diagnóstico molecular indirecto
Fluorescent in situ hybridization
FISH se usa actualmente ante la sospecha de varios síndromes de microdelección, incluyendo:
• 22q deletion syndrome • Williams syndrome• Prader-Willi syndrome • Angelman syndrome • Smith-Magenis syndrome • Miller-Dieker syndrome • Cri-du-chat syndrome • Wolf-Hirschhorn syndrome • Retinoblastoma • Kallmann
VARIOS TIPOS DE SITUACIONES DIAGNÓSTICAS
• Diagnóstico preimplantacional• Diagnóstico prenatal
– Ecografía – Técnicas genéticas– Amniocentesis– Biopsia de Vellosidades Coriales
• Screening poblacional – De Recién nacidos
• Hipotiroidismo congénito (TSH).• PKU.• Galactosemia.• EOJA
– De heterocigotos• Enfs. AR frecuentes en algunas poblaciones (ej.Tay Sachs en judíos, FQ en
poblaciones europeas).• Enfs. XR (mujeres posibles portadoras).• Enfs. AD en etapa presintomática (ej. EH, DM).
Screening de PKUScreening de PKU
• Diagnóstico nosológico de enfermedades monogénicas– Hemocromatosis hereditaria– LDLR – Hipercolesterolemia Familiar– Fibrosis Quística – Déficit de alfa 1 antitripsina– Sd. de X-frágil– Distrofias musculares– Hiperplasia suprarrenal congénita
• Diagnóstico de marcadores de susceptibilidad y pronóstico en enfermedades multifactoriales – LDLR– ApoE– MTHFR– Factor V de Leiden– Protrombina– ACE I/D– BRCA 1 y 2
Diagnóstico Genética Somática
Genética PredictivaGenética Predictiva
Ej.: Enfermedad de HuntingtonEj.: Enfermedad de Huntington
• Diagnóstico de paternidad
• Aplicaciones forenses
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