EFICACIA DE EFICACIA DE PROCEDIMIENTOS DE PROCEDIMIENTOS DE
MUESTREO EN MUESTREO EN SUPERFICIES DE ACERO SUPERFICIES DE ACERO
INOXIDABLE INOXIDABLE INOXIDABLE INOXIDABLE CONTAMINADAS CON CONTAMINADAS CON
ListeriaListeria monocytogenesmonocytogenesDiego GómezAgustín AriñoJ.J. CarramiñanaCarmina RotaJavier Yangüela
� Estrategia de muestreo ambiental → Determinación
presencia de microorganismos patógenos en ambiente
� ICMSF (1988):
� Muestrear los equipos
� Tomar muestras de alimento durante el procesado
� Determinar la carga microbiana de los alimentos una� Determinar la carga microbiana de los alimentos una
vez que ya se han procesado
� Tomar muestras del ambiente
� Características de un método de muestreo: eficaz,
simple, rápido, económico, sensible y no presentar riesgo
para el operador
OBJETIVOS
• Puesta a punto y aplicación de técnicas demuestreo ambientales para el controlmicrobiológico de Listeria monocytogenes
OBJETIVOS
• Puesta a punto y aplicación de técnicas demuestreo ambientales para el controlmicrobiológico de Listeria monocytogenesmicrobiológico de Listeria monocytogenes
• Elección del procedimiento que se muestremás eficaz
microbiológico de Listeria monocytogenes
• Elección del procedimiento que se muestremás eficaz
Material y métodos
• Listeria monocytogenes 935 -ATCC 13932- serovar 4b (humana)• Listeria monocytogenes 437/07 serovar 1/2b (cárnica)
Suspensión Bacteriana
Ajuste
105 UFC/100 cm2
Cultivo puro de L. monocytogenes
(BHI)
Ajuste transmitancia a
61% (1,9x108
UFC/ml)
1,26 ml
15 g carne picada de cerdo
135 ml agua peptona 0,1%
TOTAL
151,26 ml
1,6x106 UFC/ml
0,1 ml 100 cm2
Contaminación de las superficies
25 min a Tª ambiente
• Extender con asa Drigalski de vidrio
estéril
• Secado de la superficie (10-15 min)
Esponja
Toalla prehumedecida
Hisopo de algodón
Bolitas de estropajo de acero inoxidable
Métodos de toma de muestras
Minirrodillo de nailon (MRN)
Sistema Petrifilm
Placas RODAC de agar PALCAM y ALOA
� Inóculo 0,15 ml/150 cm 2 (≈103 L.m.)
�500 g/10 s (ISO 18593)
� 104 y 105 L.m./150 cm2 NO RECUENTO
Placas RODAC de agar PALCAM y de agar ALOA
105 L.m./150 cm2 104 L.m./150 cm2105 L.m./150 cm2 104 L.m./150 cm2
Stomacher → en bolsa de Stomacher, 5 minutos
HOMOGENEIZACIÓN
SIEMBRA EN PLACA Y RECUENTOS
Medios de cultivo:
Agar PCA: 1 ml homogeneización en masa (control)
Agar PALCAM: 0,25 ml con asa de Drigalski estéril
Agar ALOA: 0,25 ml con asa de Drigalski estéril
Resultados y discusión
Listeria monocytogenes 935
� Cada uno de los procedimientos ensayados se sometió a 5réplicas
� Los resultados se expresan como Porcentajes deRecuperación de los recuentos obtenidos en las 5repeticiones (PR)
Procedimiento PRMRN 7,8
Esponja 6,1RODAC ALOA 2,6
Hisopo algodón 1,4RODAC PALCAM 1,4Bolita estropajo 1,0
Petrifilm 0,4Toalla prehumedecida 0,3
p < 0,001
Listeria monocytogenes 437/07
Procedimiento PRRODAC ALOA 4,2RODAC ALOA 4,2
RODAC PALCAM 3,9Petrifilm 2,1
MRN 1,5Esponja 1,2
Bolita estropajo 0,4Hisopo algodón 0,2
Toalla prehumedecida 0,1
p < 0,001
Procedimiento PRMRN 4,7
Esponja 3,7RODAC ALOA 3,4
RODAC PALCAM 2,7Petrifilm 1,3
Hisopo algodón 0,8Bolita estropajo 0,7
Toalla prehumedecida 0,2
2 cepas Listeria monocytogenes
p < 0,01
Toalla prehumedecida 0,2
PCA 24h PCA 48hPALCAM
24hPALCAM
48hALOA 24h ALOA 48h
MEDIA 1,8 1,8 1,9 2,0 2,3 2,4
No diferencias significativas entre agar PALCAM y AL OA
No diferencias significativas entre tiempo de incub ación 24 ó 48 horas
� Resultados convenientes con cualquier agar tras 24 h incubación
7 métodos L. monocytogenes 935
vs7 métodos L.
monocytogenes437/07
ANOVA 2
vías
Cepa
Método82% de variación
EsponjaHisopo algodónToalla prehumedecida
vs MRN
MRN (4,7%)
ESPONJA (3,7%)
Conclusiones
El nuevo sistema de toma de muestras en superficie de
acero inoxidable “ MINIRRODILLO DE NAILON ” , utilizado poracero inoxidable , utilizado por
primera vez en este estudio, ha demostrado ser el que
recupera mayor cantidad de Listeria monocytogenes
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