El laboratorio nos ayuda a conocer el agente etiolgico.El
laboratorio nos ayuda a conocer el agente etiolgico. Las
enfermedades por bacterias son frecuentes por lo tanto sus estudios
son los ms usados.Las enfermedades por bacterias son frecuentes por
lo tanto sus estudios son los ms usados. Metodologa de la toma de
la muestra.Metodologa de la toma de la muestra. Se usa desde la
tincin hasta la genotipificacin.Se usa desde la tincin hasta la
genotipificacin. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin,
Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el
diagnstico de enfermedades infecciosas
Diapositiva 3
La ms utilizada es la tincin de GramLa ms utilizada es la
tincin de Gram Ziehl- Neelsen y Kinyoun (carbol fucsina)Ziehl-
Neelsen y Kinyoun (carbol fucsina) Carbol glicerol, permanganato de
potasio se necesita microscopio de luz ultravioleta.Carbol
glicerol, permanganato de potasio se necesita microscopio de luz
ultravioleta. Tinta china hongos (Cryptococcus neoformans)Tinta
china hongos (Cryptococcus neoformans) Hidrxido de potasio hongos
en uas y cabello.Hidrxido de potasio hongos en uas y cabello.
Blanco de Calcoflor polisacridos de la pared de hongos filamentosos
y levaduriformes.Blanco de Calcoflor polisacridos de la pared de
hongos filamentosos y levaduriformes. Kumate- Gtz, Infectologa
clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8
Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas
Diapositiva 4
Diapositiva 5
Histopatologa. Esfrula con endosporas. Tincin calcofluor. De:
Mercy Hosp Toledo OH/Brian J. Harrington Dermatofitos, tincin de
hidrxido de potasio Mycobacterias, Tincin de Ziehl- Neelsen
criptosporidiosis, Tincin de Kinyoun Kumate- Gtz, Infectologa
clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8
Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas
Diapositiva 6
Diapositiva 7
Fundamento InmunoensayoInmunoensayo Ag - AcAg - Ac Mtodos ms
usados ContrainmunoelectroforesisContrainmunoelectroforesis
InmunofluorescenciaInmunofluorescencia Prueba de aglutinacin con
ltexPrueba de aglutinacin con ltex CoaglutinacinCoaglutinacin
Ensayo inmunoenzimtico (ELISA)Ensayo inmunoenzimtico (ELISA)
Kumate-Gutirrez. El laboratorio en el diagnstico de enfermedades
infecciosas. Infectologa clnica 17 edicin, 2008.
Diapositiva 8
LCR, esputo, orina, suero, lquido sinovial Detecta nanogramos
Requiere cantidades pequeas del especmen clnico Capa delgada de gel
de agarosa 1%. Se realizan dos pozos paralelos a una distancia de
3-4mm. En un pozo se coloca la muestra y en otro el anticuerpo vs
el antgeno que se desea detectar. Se pasa una corriente a travs del
gel. Voltaje constante por 30-60 min. Las cargas del Ag ctodo, el
Ac nodo. Si hay reaccin Ag-Ac: Se visualiza una banda de
precipitacin entre ambos pozos. Tcnica
Diapositiva 9
Kumate-Gutirrez. El laboratorio en el diagnstico de
enfermedades infecciosas. Infectologa clnica 17 edicin, 2008. Se
utilizan partculas de ltex cubiertas con Acs especficos. La muestra
se coloca en laminillas y se le agrega la suspensin de ltex. Se
realizan movimientos rotatorios por 3-10 minutos. Si hay reaccin
Ag- Ac, se observar aglutinacin macroscpica: prueba positiva.
COAGLUTINACIN. Se utiliza una sepa de S. aureus productor de
protena A (cepa Cowan) que son cubiertos por Acs especficos.
Tcnica
Diapositiva 10
Kumate-Gutirrez. El laboratorio en el diagnstico de
enfermedades infecciosas. Infectologa clnica 17 edicin, 2008.
Identificacin de complejos Ag-Ac mediante el empleo de enzimas.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Sobre una fase slida
(nitrocelulosa, poliestireno, perlas de plstico o microtubos) son
fijados los anticuerpos. Se agrega la muestra pretratada y se
incuba. Se agrega un segundo anticuerpo con una enzima (peroxidasa)
dirgido vs el antgeno, se incuba y se lava otra vez. Se agrega el
sustrato de la enzima y se produce un cambio de color macroscpico o
puede medirse con espectrofotmetro. Principios bsicos
Diapositiva 11
Kumate-Gutirrez. El laboratorio en el diagnstico de
enfermedades infecciosas. Infectologa clnica 17 edicin, 2008.
Diapositiva 12
La inmunofluorescencia es una tcnica de inmunomarcacin que hace
uso de anticuerpos unidos qumicamente a una sustancia fluorescente
para demostrar la presencia de una determinada molcula, en un
microorganismo o tejido. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma
edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el
diagnstico de enfermedades infecciosas, Kumate- Gtz, Infectologa
clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8
Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas,
www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf
Diapositiva 13
El anticuerpo marcado se hace reaccionar contra un preparado
biolgico Exposicin de la muestra a una fuente de luz de onda corta
(ultravioleta o azul) seleccionada. La luz emitida puede ser
cuantificada con facilidad por microscopia de fluorescencia en
preparados histolgicos Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma
edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el
diagnstico de enfermedades infecciosas.
www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Unin Molcula
fluorescente a un anticuerpo. Isotiocianato de fluorescena. REACCIN
DE POSITIVA: Acoplamiento de Ag-Ac produciendo una
fluorescencia.
Diapositiva 14
UTILIDADES: CLNICA: ETS, influenza, dengue, etc.
INVESTIGACINCLNICA: INVESTIGACIN VENTAJAS VENTAJAS - Se pueden
obtener resultados rpidos. -No es necesario realizar cultivos. -Se
puede identificar microorganismos especficos en un grupo mixto.
-Determina la identidad de un organismo muerto. VENTAJAS VENTAJAS -
Se pueden obtener resultados rpidos. -No es necesario realizar
cultivos. -Se puede identificar microorganismos especficos en un
grupo mixto. -Determina la identidad de un organismo muerto.
DESVENTAJAS DESVENTAJAS - Costos en reactivo y equipo -Debe ser
realizado por personal muy especializado. DESVENTAJAS DESVENTAJAS -
Costos en reactivo y equipo -Debe ser realizado por personal muy
especializado. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez
Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de
enfermedades infecciosas, Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma
edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el
diagnstico de enfermedades infecciosas,
www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf puede ser
utilizada en cortes de tejidos, lneas celulares cultivadas, clulas
individuales y secreciones con la finalidad de analizar la
presencia y distribucin de protenas, glcidos y molculas sobre el
tejido.
Diapositiva 15
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA: Esta se vale de un Ac primario
marcado con un fluorocromo( flurescena), que reacciona con el
antgeno dentro de la muestra. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma
edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el
diagnstico de enfermedades infecciosas El anticuerpo reconoce la
molcula diana y se une a ella directamente. Ventajas: Es rpida.
Poca sensibilidad. El anticuerpo reconoce la molcula diana y se une
a ella directamente. Ventajas: Es rpida. Poca sensibilidad.
Diapositiva 16
Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores,
Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de
enfermedades infecciosas
Diapositiva 17
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: Hace uso de dos anticuerpos; el
anticuerpo primario es el que reconoce y se une a al molcula diana,
mientras que el secundario que es el que se encuentra marcado con
el fluorforo, reconoce al primario y se une a l.
Diapositiva 18
Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores,
Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de
enfermedades infecciosas
Diapositiva 19
Diapositiva 20
Es un examen de laboratorio solicitado con mucha frecuencia al
que el clnico se enfrenta desde la valoracin de un sujeto hasta el
seguimiento de enfermedades hematolgicas y no hematolgicas
Hemograma o citometra hemtica (CH). Serie roja Serie blanca Serie
tromboctica Estudio de tres lneas celulares Fisiolgicos. Edad,
embarazo, actividad fsica, clima y localizacin geogrfica.
Patolgicos. Procesos inflamatorios, metablicos, neoplsicos,
infecciosos. Valores alterados RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G.
INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS.
FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.
Diapositiva 21
Depender de factores como: edad, peso, hbito tabquico, etc.
Leucocitosis > 12 000 y Leucopenia < 4 000 L Etiologa Errores
bajo citometra de flujo: fragilidad leucocitaria (frmacos
inmunosupresores o citotxicos), formacin de agregados. Leucocitos
totales4000 12 000 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN
DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE
HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Clula(%)Lmites
absolutos Leucocitos totales Neutrfilos Eosinfilos Basfilos
Monocitos Linfocito 40 -85 0 -7 0 -3 1 -13 12 - 46 4 000 12 000 L 1
500 7 000
Leucocitos Leucocitosis > 12 000/ L RUZ ARGELLES G RUIZ
REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS.
FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas
de leucocitosis Infecciones agudas Intoxicaciones Hemorragia aguda
Hemlisis Padecimientos mielo o linfoproliferativos Necrosis tisular
Condiciones fisiolgicos Localizadas: Neumonas, meningitis,
abscesos, amigdalitis, apendicitis. Generalizadas: Fiebre reumtica
aguda, septicemia, clera, endocarditis infecciosa. Metablicas:
uremia, etc. Otras: veneno de arcnidos,etc Leucemias crnicas,
policitemia vera IAM, quemaduras Ejercicio, trabajo de parto,
menstruacin. Causas de leucopenia Infecciones agudas Frmacos
Radiacin Otros Bacterianas: Septicemia, TB miliar, tifoidea,
brucelosis, rickettsias (tifo). Paludismo Virales: Mononucleosis
infecciosa, hepatitis, influenza, parotiditis. Sulfonamidas,
analgsicos, mielosupresores. LES, AR, Insuficiencia renal, shock
anafilctico. Leucocitos Leucopenia > 4 000/ L
Diapositiva 23
Neutropenia: < 1 500 L Neutrofilia > 7 000 L. Relacionada
a incremento de bandas Bandemia: > 800 L Causas iguales a las
sealadas para leucocitosis. Leucoblastosis. Leucocitosis + Bandas
Leucoeritroblastosis: Leucistosis + Bandas + Blastos SR. Neutrfilos
1 500 7 000 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA
CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3
e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas de leucoblastosis
/leucoeritroblastosis Infecciosas Quemaduras Eclampsia
Envenenamientos Hemlisis aguda Hemorragia aguda Ca metastsico a MO
Endocarditis infecciosa Neumona Leptospirosis Causas de neutropenia
InfecciosasBacterianas: Septicemia, TB miliar, tifoidea,
brucelosis, rickettsias (tifo). Paludismo Virales: Mononucleosis
infecciosa, hepatitis, influenza, parotiditis. Sulfonamidas,
analgsicos, mielosupresores. Causas de neutrofilia
InfecciosasLocalizadas: Neumonas, meningitis, abscesos,
amigdalitis, apendicitis. Generalizadas: Fiebre reumtica aguda,
septicemia, clera, endocarditis infecciosa.
Diapositiva 24
Lo ms comn es encontrar Eosinofilia: >0.5 x 10^9/L
Eosinopenia, trmino poco usado porque se acepta que no haya
eosinfilos en una cuenta normal de leucocitos. Eosinfilos
Diapositiva 25
Basofilia Basfilos < 10 20 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G.
INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS.
FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas
de basofilia Infecciosas Otras Rara (varicela, sarampin) Leucemia
mieloide crnica, policitemia vera, metaplasia mieloide, Hodgkin,
anemia hemoltica, sinusitis crnica, esplenectoma, etc.
Diapositiva 26
Monocitosis >500 - 800 / L Monocitos 100 - 800 / L RUZ
ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA.
NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL
PANAMERICANA, 2004. Causas de monocitosis Infecciosas Otras TB,
paludismo, endocarditis infecciosa, brucelosis, tripanosomiasis,
rickettsiasis Virales: VVZ, CMV Leucemias, Hodgkin, linfomas,
recuperacin de dao medular por radiaciones o medicamentos,kala
azar, CUCI.
Diapositiva 27
Linfopenia < 1 500 / L Linfocitosis > 4 000 / L
Linfocitos 1 000 4 200 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G.
INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS.
FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas
de linfocitosis Infecciosas Otras Virales: Varicela, tos ferina,
mononucleosis infecciosa, hepatitis, parotiditis, rubela, CMV.
Otros agentes: TB, brucelosis, sfilies, toxoplasmosis. Leucemia
linftica, tirotoxicosis, linfomas.
Diapositiva 28
Diapositiva 29
{ Es el proceso de crecimiento de m.o. mediante la toma de
bacterias de un sitio de infeccin por mtodo de recoleccin de
muestra y crecimiento en un medio ambiente artificial. Facilitar el
aislamiento y crecimiento. Determinar cuales de las bacterias que
se desarrollan es ms probable que sean la causa de infeccin
Desarrollo suficiente para su identificacin y caracterizacin
Diapositiva 30
Debe ser de material del sitio real de infeccin, con el mnimo
de contaminacin Establecer los momentos ptimos para la toma de
muestras Cantidad de muestra suficiente Utilizacin adecuada de
dispositivos de recuperacin envases para muestras y medio de
cultivo
Diapositiva 31
< INICIO DE ANTIBIOTICOS 2-3 MUESTRAS (85-90%) BACTEREMIAS
Vol. Requerido: Adultos 5-10 ml. Nios 1-2 ml. RN mantener la
proporcin 1:10 MUESTRA Enriquecidos y suplementados junto con un
anticoagulante (polianetol de sodio) CULTIVO
Diapositiva 32
CULTIVO DE LQUIDO CEFALORRAQUDEO Paciente en decbito lateral o
sentado, con flexin de la cabeza y los muslos A nivel de L4-L5 3-5
ml., fraccionado en varis tubos Citoqumico y citolgico Aglutinacin
con latex Cultivo
Diapositiva 33
UROCULTIVO Muestra de chorro medio, sonda transuretral, puncin
suprapbica y con bolsa colectora Realizar aseo amplio con agua y
jabn la zona periuretral La muestra debe ser procesada en 30
minutos 24-48 hr.
Diapositiva 34
CULTIVO DE EXUDADO FARINGEO CON SIGNIFICADO CLNICO S.
PyogenesHaemophilus influenzae Corynebacterium diphtheriae S.
Pneumoniae N. MeningitidisM. Catarrhalis N. gonorrhoeaeS.
agalactiae Muestra tomada con hisopos estriles e inocularse en
medios de transporte semislidos (Stuart) Muestra tomada con hisopos
estriles e inocularse en medios de transporte semislidos
(Stuart)
Diapositiva 35
MEDIO STUART DE TRANSPORTE Cloruro de sodio3 g. Cloruro de
potasio0.2 g. Fosfato disdico1.25 g. Trioglicato de sodio1 g.
Cloruro de calcio10 g. Agar4 g. Agua destilada1 L Mantener la
muestra tan prxima a su estado original como sea posible, con
deterior mnimo, y minimizando el riesgo que afrontan quienes
transportan la muestra, mediante el uso de recipientes
hermticamente cerrados.
Diapositiva 36
Esterilizacin de los medios Condiciones ptimas de incubacin
Evaluacin de la morfologa de la colonia Coloracin de Gram y
subcultivos
Diapositiva 37
Diapositiva 38
De acuerdo con su funcin y uso. Hay 3 categoras generales de
medios: MEDIOS NO SELECTIVOS: Crecimiento con gran variedad de
m.o., en corto tiempo Agar sangre, Agar chocolate, Agar
Mller-Hinton MEDIOS SELECTIVOS: Contienen substancias que buscan
inh. la mayora de los m.o. Agar sal-manitol, Agar MacConkey, Agar
sabouraud MEDIOS DIFERENCIALES: Agar sangre (efecto hemoltico),Agar
salmanitol, Agar MacConkey (fermentacin lactosa), Agar TSI
(Produccin c. Sulfdrico), MIO
Diapositiva 39
MEDIOCOMPONENTESOBJETIVO PRINCIPAL Agar chocolate Base de
peptona, enriquecida con una solucin de Hb al 2% Cultivos de
especies de Haemophilus y especies patgenas de Neisseria Agar
MacConkey Gram (+) son inhibidos por el cristal violeta y sales
biliares. Rojo neutro como indicador Bacilos entricos gram (-)
fermentadores y no fermentadores Agar sangre Infusin de carne y
corazn con 5% de sangre de carnero Requerimientos especiales,
reacciones hemolticas Agar XLD El desoxicolato de sodio inh. Los
m.o. gram (+); rojo fenol indicador Especies de Salmonella y
Shigella, de otros bacilos entrico gram (-) (amarillo) Agar
salmanitol Base de peptona, manitol y rojo fenol indicador, sal al
7.5% Selectivo para estafilococos Agar SS Base de peptona con
lactosa, rojo neutro indicador Salmonella y Shigella
Diapositiva 40
S. aureus S. epidermidis S. haemolyticus S. saprophyticus
Especies de Micrococcus MEDIOS DE CULTIVOS DE ELECCIN.- Agar sangre
o Agar chocolate Cultico selectivo: Agar manitol (halo amarillo)
Incubacin a 35 C x 24-48 hr. COLONIAS S AUREUS: Medianas-grandes,
elevadas, traslucidas; con pigmento amarillo, la mayora
betahemolticas
Diapositiva 41
S. Betahemoltico (pyogenes) S. Pneumoniae S. Viridans
Enterococos ( faecalis y fecium MEDIOS DE CULTIVO.- Agar sangre de
oveja al 5% y agar chocolate Betahemolisis, es mejor en condiciones
anaerbicas Perodo de incubacin 48 hr ASPECTO COLONIAS.- Translucida
a opacas; planas, brillantes, ancho estrecho de betahemlisis
Diapositiva 42
Moraxella catarrhalis N. gonorrhoeae N meningitides MEDIO DE
ELECCIN Agar sangre de carnero al 5% Agar chocolate Medios
selectivos: Thayer Martin (agar chocolate + suplemento y
antimicrobianos colistina, nistatina y vancomicina) Incubacin a
35-37 C x 72 horas En una atmosfera hmeda enriquecida en CO2
ASPECTO DE LAS COLONIAS MC: Grande, no pigmentada o gris, opaca,
lisa; consistencia friable NG: Pequeas, blanco-grisaceas, convexas,
translcidas, brillantes.
Diapositiva 43
BACILOS GRAMPOSITIVOS Corynebaterium: Amycolatum Auris
diphteriae Listeria monocytogenes MEDIOS DE CULTIVO Agar sangre de
carnero al 5% Agar chocolate NO agar MacConkey Incubacin a 35C en
48 hr.-3 das Color negro gris
Diapositiva 44
Burkholderia pseudomallei Burkholderia cepacia Pseudomona
aeruginosa P. alcaligenes P. fluorescens P. luteola MEDIOS DE
CULTIVO Agar sangre de oveja al 5% Agar chocolate Agar MacConkey,
caldos de los sistemas de hemocultivo Incubacin a 35 C en CO2 o
aire atmosfrico x 24-48 horas >siembra COLONIAS.- Esparcidas,
planas y con bordes dentados, brillo metlico, colonias
betahemolticas, pigmentacin verde azulada
Diapositiva 45
Brucella abortus Brcella meltensis B. canis B. suis Bacilos
cortos o cocobacilos gramnegativos, inmviles y aerobios; requieren
CO2 MEDIOS DE CULTIVO Sistemas comerciales para hemocultivo
(BACTEC, lisis- centrifugacin) Incubacin prolongada x 30 das
Atmosfera humidificada con CO2 al 5-10% ASPECTO COLONIAS.- Pequeas,
convexas, lisas, traslcidas no hemolticas, amarillo plido
Diapositiva 46
M. tuberculosis M. Bovis BCG M. Bovis M. africanus M. No
tuberculosas Complejo M. avium M. Simiae M. Celatum M. fortuitum
Bacilos inmviles muy delgados cido-alcohol resistentes MEDIO DE
CULTIVO.- Se requiere la combinacin de medios de cultivo slidos
lquidos SOLIDOS: Lowenstein-Jensen. 35 C en la obscuridad con una
atmosfera con 5-10% de CO2 y humedad elevada x 3-6 semanas Agar
chocolate LQUIDOS: BACTEC. Atmosfera 5-10% de CO2 x 1 das
Diapositiva 47
Diapositiva 48
Diapositiva 49
Costoso Mucho tiempo No siempre se pueden aislar los
microorganismos Genotipo Dx microoganismos de difcil cultivo
Mycobacterias y Legionella ID secuencias de DNA
Diapositiva 50
Anlisis de DAN o RNA Deteccin de segmentos dentro de otros no
especficos Enzimas de restriccin DNA varios millones fragmentos RNA
1/1000 Electroforesis en gel Hibridacin con sonda para ID mol.
inters
Diapositiva 51
ID gen especifico del microorganismo Segmentos cortos
Iniciadores para amplificacin PCR Hibridacin de segmentos
complementarios Segmentos largos Sondas
Diapositiva 52
ADN o ARN Muestras clnicas o Cultivos In situ en cls. En
laminillas en el microscopio Comn fijados en formalina y embebidos
en parafina
Diapositiva 53
Southern blot Ed southern aos 70 Analisis fragmentos de DNA
generados por enzimas de restriccin EnzimaOrganismoSitio de rotura
5 3 Bam HIBacillus amyloliquefaciens H G * GATCC Eco RIE. Coli RY
13G * AATTC HaeIIIH aegyptusGG * CC Hind IIIH. Influenzae RdA *
AGCTT Hpa IH. ParainfluenzaeGTT * AAC Pst IProvidencia
stuartiiCTGCA * G Sma ISerratia marcescensCCC * GGG Sal
IStrptomices albus GG * TCGAC
Diapositiva 54
Enzima de restriccin Separacin por electroforesis Gel de
agarosaDesnaturalizacin Filtro nitrocelulosa (transparencia y
capilaridad) Incubacin del filtro Hibridacin Exposicin a rayos X o
a pelcula sensible a la luz
Diapositiva 55
AplicacinOrganismo Deteccin directa de muestras
clnicasChlamydia trachomatis Streptococcus del grupo A
Papilomavirus Neisseria gonorrhoeae Confirmacin de
cultivosCoccidioides immitis Haemophilus influenzae Histoplasma
capsulatum Mycobacterium tuberculosis complex Listeria
monocitogenes
Diapositiva 56
Determinar tamao y abundancia de mRNA derivado de un
determinado gen No enzimas de restriccin Longitud por exones
Diapositiva 57
PCR Alternativa a la clonacin Miles de millones de copias en
pocas horas Iniciadores especficos de genes cuya secuencia es
conocida Alta sensibilidad Reaccin cruzada 1 trepano-inmediato CMV
23S E. Coli Inhibidores de la polimerasa
Diapositiva 58
PCR Amplificacin enzimtica de un fragmento de DNA diana
Desnaturalizacin con calor Cebadores cadenas complementarias DNA
polimerasa 2 nuevas cadenas Repetidos ciclos
Diapositiva 59
Desnaturalizacin de las cadenas de ADN Hibridacin de los
iniciadores Extensin de la secuencia amplificada Termociclado r
PCR-RT PCR - multiplexLCR (Ligasa Chain Reaction) Hibridacin con
sondas especificas Amplificacin de las sondas Ligamiento Producir
cadenas duplicadas
Diapositiva 60
Cantidad de DNA concreta existente en una muestra Se duplica x
cada ciclo Seguimiento fases iniciales Umbral arbitrario PCR tiempo
real
Diapositiva 61
Enzimtica Radioactiva Quimioluminiscente Fluorescente
Cualitativa Cuantitativa Multiplicacin de la seal Reaccin Secuencia
blanco Sondas Seal
Diapositiva 62
OrganismoNombre de la prueba MtodoLimite de deteccin Aplicacin
HIV 1AmplicorPCR20 organismo/RXN Pacientes no tratados y
baciloscopia + C. TrachomatisAmplicorPCR10-20 cuerpos
elementales/RXN Confirmacin y monitoreo EnterovirusAmplicorPCRNo
reportadoConfirmacin y monitoreo VHCQuantiplexDNA ramificado200,000
-120x10 6 copias/ml Cuantificacin durante terapia VHBQuantiplexDNA
ramificado.7x10 6- 5000x10 6 copias/ml Confirmacin y monitoreo N.
gonorrhoeaeLCXLCRNo reportadoConfirmacin y monitoreo