Informe Final del proyecto:
“Bases epidemiológicas para el control de Cephenemyia stimulator en corzos en España”.
Luis E. Fidalgo Álvarez
Profesor del Dpto. de Ciencias Clínicas Veterinarias Investigador Principal del Proyecto
Universidad de Santiago d Compostela Julio de 2013
Informe Final del proyecto:
“Bases epidemiológicas para el control de Cephenemyia stimulator en
corzos en España”. Luis Eusebio Fidalgo Álvarez(1). Ana Mª López Beceiro(1), Jesús Mª Pérez Jimenez(2) y Carlos Martinez Carrasco(3). (1)Departamento de Ciencias Clínicas Veterinarias de la Universidad de Santiago de Compostela. (2) Departamento de Biología Animal, Biología Vegetal y Ecología. Universidad de Jaén. (3) Departamento de Sanidad Animal de la Universidad de Murcia.
El presente proyecto se ha desarrollado en base al CONVENIO PARA ACTIVIDADES
DE ASISTENCIA TÉCNICA ENTRE LA UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE
COMPOSTELA Y LA FUNDACIÓN FEDENCA, firmado con fecha 1 de junio de
2012 y con duración de un año.
El equipo de investigadores que desarrolla el proyecto está integrado por personal de las
Universidades de Santiago de Compostela, Jaén y Murcia (Dr. Luis E. Fidalgo, Dra.
Ana López Beceiro, Dr. Jesús Mª Pérez Jiménez y Dr. Carlos Martínez Carrasco).
En dicho convenio se establece, entre otras, la obligación de redactar un “Informe final
del proyecto” al finalizar las actividades del mismo, motivo por el que se redacta el
presente informe.
RESUMEN
Realizamos un estudio de la prevalencia de Cephenemyia stimulator en corzos en casi
todo el territorio español con aprovechamiento cinegético de la especie, desde junio de
2012 a junio de 2013.
Todos los corzos analizados procedían de la caza legal en la modalidad de rececho
(mayoritariamente) y batida, así como algunos de Centros de Recuperación de Fauna
Silvestre. En total hemos examinado 303 animales de diferentes zonas, sin que se
contemplase el 100% del territorio nacional ni exista una proporción ajustada del
número de muestras con la densidad de población estimada de cada lugar, lo cual debe
tenerse en cuenta a la hora de interpretar los resultados.
Todos los individuos fueron examinados, después de la obtención del trofeo,
inspeccionando minuciosamente la tráquea, esófago, laringe, faringe y coanas, con el fin
de detectar la presencia de larvas de Cephenemyia (en los casos remitidos por
taxidermistas la exploración no pudo ser tan completa). Posteriormente se procedía a
disección y retirada de estructuras blandas de la cabeza, con lo que la inspección de la
presencia de larvas era mucho más minuciosa.
La prevalencia general del proceso, en los ejemplares analizados en el presente proyecto
es del 16,50% (50 de 303 ejemplares). Además, en nuestro caso, la mayoría de los
corzos con larvas de Cephenemyia procedían del noroeste peninsular (Galicia, Asturias
y León) donde 44 de los 200 ejemplares analizados estaban parasitados (22%). El resto
de los corzos analizados (103), procedentes fundamentalmente del resto de provincias
de Castilla-León y Castilla La Mancha, presentaban una incidencia del 5,83% (6 de
103). Es de destacar que uno de estos ejemplares con larvas procedía de la provincia de
Cáceres, zona con abundantes ungulados silvestres pero con una escasa población de
corzos; mientras otro era el único positivo de una zona tradicionalmente corcera como
es Soria.
A lo largo de esta primera aproximación al estudio del proceso en nuestro país, hemos
comprobando que el porcentaje de individuos portadores de larvas de Cephenemyia
stimulator es diferente en los distintos territorios, con una incidencia mayor en el
noroeste del país, existiendo zonas concretas en las que la incidencia es muy alta
mientras que otras zonas, incluso próximas a estas, no tienen ningún ejemplar positivo.
Respecto al Indice de Condición Corporar (ICC) y desarrollo de la cuerna, no hemos
podido determinar diferencias entre los ejemplares parasitados y los libres de larvas.
El presente estudio recoge datos iniciales sobre la incidencia de Cephenemyia
stimulator en corzos españoles, pero debería completarse con un proyecto más amplio
en el que pudiéramos examinar un número igual al 5% de la tasa de aprovechamiento
cinegético anual y de forma proporcional a las densidades de población y
aprovechamiento cinegético de cada territorio. Se trataría de una segunda fase que, tal
como habíamos acordado verbalmente, deberíamos iniciar este año.
INTRODUCCION
Conviene recordar que se decidió realizar el presente estudio como consecuencia de la
creciente preocupación de los cazadores, FEDENCA y RFEC por los múltiples
interrogantes que han surgido sobre la presencia de corzos afectados por los gusanos de
la garganta (Cephenemyia stimulator) en España, la distribución territorial de la
enfermedad y sus efectos que estos gusanos pueden ocasionar en los corzos.
El estudio se plantea partiendo de la hipótesis de que un porcentaje desconocido de
corzos, posiblemente en la misma proporción de machos y hembras de diferentes
edades, están parasitados, pero que la distribución territorial de la enfermedad y la
incidencia en los distintos territorios es desconocida; incluso puede haber comarcas
libres del parásito. Asimismo, asumimos que, a pesar de las muchas opiniones al
respecto, no conocemos en realidad los efectos perjudiciales que ocasiona el parásito al
corzo.
Por todo ello, nuestro interés fundamental consiste en estudiar la distribución geográfica
del parasito en España y relacionar su presencia o ausencia con la condición corporal y
desarrollo del trofeo del corzo (como índice del perjuicio causado por el parásito).
En una segunda fase, basándonos en los datos obtenidos en este primer estudio,
podemos plantearnos un ensayo piloto de gran envergadura, en una zona controlada,
para aplicar medidas encaminadas a controlar la enfermedad, si fuese necesario, pero
evidentemente no es un aspecto a desarrollar en este momento, ni ha sido objetivo del
presente proyecto.
Durante el desarrollo del trabajo nos hemos centrado en establecer contactos y
estructurar el trabajo, contactando con posibles colaboradores en la recogida de
muestras y datos, de forma que nos permitiera acceder a un número suficientemente
amplio de muestras procedentes de todas las zonas de nuestro país con aprovechamiento
cinegético de corzo. Aunque el objetivo para este primer año era obtener 150 muestras,
el número de animales muestreados han sido en total 303, superando por tanto el
objetivo establecido, lo que además demuestra que hemos alcanzado totalmente y de
forma absolutamente exitosa el objetivo no explicito del proyecto, que consistía en la
organización de un grupo amplio de colaboradores externos que posibilitase un amplio
muestreo.
Debemos resaltar en este informe, antes de comenzar con datos concretos, que para
efectuar la recogida de muestras a nivel nacional, tal como hemos mencionado, ha sido
preciso la colaboración de un amplio número de personas: cazadores, gestores
cinegéticos, taxidermistas de la Asociación Nacional de Taxidermistas de España y
veterinarios de los Centros de Recuperación de Especies Silvestres; coordinados, en
todos los casos, por el equipo investigador que desarrolla el estudio.
De los corzos analizados tomamos los datos de fecha de captura, lugar de procedencia,
condición corporal (cuando ha sido posible) y desarrollo del trofeo, así como la
presencia o no de larvas en el ejemplar y el tipo de larvas.
Las larvas recogidas en corzos de toda España, después de ser debidamente etiquetadas
de forma individual, son analizadas para su identificación morfológica y se han dado los
primeros pasos para aplicar las técnicas de PCR, con el fin de comprobar si el proceso
está ocasionado siempre por Cephenemyia stimulator y solo por este parásito o si por el
contrario existen otros géneros y especies implicados en el proceso. En este sentido
existen datos procedentes de estudios realizados sobre otros Oestridos en ciervo, gamo,
alce, etc., en los que diferentes investigadores han identificado más de una especie
parasitando al mismo animal, incluso especies de Oestridos que no son parásitos
habituales de la especie en cuestión, pero que de forma más o menos “accidental”
parasitan al ungulado. En este sentido podemos citar los estudios realizados en ciervos y
gamos en diferentes países, entre ellos en España, en los que se evidencia la presencia
de más de un especie de Oestridos parasitando al mismo animal o el caso descrito en un
corzo en la proximidades de Helsinki (Finlandia) parasitado por Cephenemyia ulrichii,
teóricamente parasito del Alce, a pesar de que el corzo ha sido considerado hospedador
específico de Cephenemyia stimulator.
Durante este año de estudio, aunque hemos superado ampliamente la cifra de 150 casos
propuesta para el periodo, el número de ejemplares estudiados resulta claramente
insuficiente para poder formular conclusiones definitivas y, además, la distribución
territorial del origen de las muestras no guarda, en este momento, la proporción
adecuada respecto los índices de población corcera en los diferentes territorios, tal como
habíamos previsto al plantear el proyecto, por lo que el estudio actual se le consideraba
sólo como una primera fase de un proyecto mucho mas amplio.
RESULTADOS
Los resultados obtenidos en este proyecto se presentan de forma resumida y ordenada
en la siguiente tabla 1 e imagen 1:
Tabla 1.- Nº de casos estudiados en las diferentes provincias, con el número y porcentaje de corzos afectados por Cephenemyia stimulator.
La prevalencia general del proceso, en los ejemplares analizados hasta la fecha es del
16,50% (50 de 303 casos). Además, en nuestro caso, la gran mayoría de los corzos con
larvas de Cephenemyia procedían del noroeste peninsular (Galicia, Asturias y León)
donde 44 de los 200 ejemplares estudiados estaban parasitados (22%). El resto de los
corzos analizados (103), procedentes fundamentalmente del resto de provincias de
Castilla-León y Castilla La Mancha, presentaban una incidencia del 5,83% (6 de 103).
Es de destacar que un ejemplar con larvas de este último grupo procedía de la provincia
de Cáceres, zona con abundantes ungulados silvestres pero con una escasa población de
corzos, mientras que otro fue cazado en Soria, donde la densidad de corzo es abundante;
otros dos proceden de una zona más recientemente colonizada por los corzos
(Guadalajara). Todo esto nos hace pensar que si bien es cierto que los corzos enfermos
PROVINCIA Total casos Positivos %Afectados Asturias 8 2 25 Ávila 1 0 0 Burgos 22 0 0 Cáceres 1 1 100 Ciudad Real 1 0 0 Gerona 1 1 100 Guadalajara 22 2 9,09 La Coruña 50 0 0 León 61 16 26,23 Lérida 3 0 0 Lugo 60 26 43,38 Madrid 1 0 0 Orense 12 0 0 Palencia 1 1 100 Pontevedra 8 0 0 Segovia 15 0 0 Sevilla 1 0 0 Soria 29 1 3,45 Zamora 4 0 0 Zaragoza 2 0 0
se localizan preferentemente en el noroeste peninsular y más concretamente en las
provincias de Lugo, Asturias y León, no debemos desestimar la posible presencia de
Cephenemyia stimulator en otros lugares.
Figura 1.- Representación gráfica del origen de las muestras y de los casos positivos.
Mayor tamaño de símbolo en zonas con mayor porcentaje de muestras.
En cualquier caso, los datos del presente trabajo deben interpretarse teniendo en cuenta
que la toma de muestras no guarda relación exacta con las densidades de población de
las diferentes provincias ni con el aprovechamiento cinegético, resultando por otra parte
escaso este número de muestras para las características de un estudio epidemiológico
como este. A pesar de la advertencia anterior, en nuestra opinión, los datos indican
claramente la tendencia de la distribución del proceso en España, no son en absoluto
datos definitivos de un estudio epidemiológico robusto pero si marcan claramente la
distribución del proceso en el territorio nacional.
Debemos mencionar asimismo, que hemos recogido algunas informaciones no
comprobadas científicamente pero rigurosas y en nuestra opinión totalmente veraces (en
la intención del informador) en las que algunos cazadores nos informan de
observaciones de “gusanos” en los corzos -posiblemente Cephenemyia stimulator-
desde hace casi 10 años en la Sierra de Guadalupe, Puerto de San Vicente en Cáceres,
asociando estos gusanos a un descenso de la poco numerosa población corcera de esa
zona. También en los límites de Asturias y Lugo, algunos cazadores veteranos nos dicen
que han visto estos gusanos, en su opinión “lo mismo que en las ovejas” desde hace
años sin darles ninguna importancia y sin que en su opinión perjudicasen mucho a los
animales. Insisto, son informaciones que no es posible contrastar en este momento, pero
que he preferido mencionar en el informe.
ÍNDICE DE CONDICIÓN CORPORAL
Respecto al estado corporal, sólo se ha podido valorar en el grupo de corzos que hemos
muestreado personalmente y los procedentes de Centros de Recuperación o de
cazadores previamente entrenados para este tipo de valoración, pero no en el grupo de
casos muestreados por taxidermistas. Por tanto, este dato se ha obtenido sólo en 76
ejemplares, 29 portadores de larvas y 47 libres del parásito, no observando diferencias
entre ambos grupos.
El Índice de Condición Corporal (ICC) de la gran mayoría de los corzos examinados, en
ambos grupos, era el normal para la especie, teniendo en cuenta la edad, sexo y
momento del año, con un valor en trono a 3 en la escala habitual sobre 5.
Es cierto que algunos ejemplares, tanto de los parasitados como de los no parasitados
presentaban Índice de Condición Corporal inferior a la normal, pero sin que se pueda
establecer una relación con la presencia o no de Cephenemyia. En estos casos, un
examen más profundo del animal permitía identificar otras lesiones y/o enfermedades,
tanto en los parasitados como en los no parasitados por larvas de Cephenemyia, que
justificaban sin lugar a dudas la alteración del estado corporal (intensas parasitosis
pulmonares, fracturas de mandíbula, lesiones traumáticas (algunas compatibles con
mordeduras), fracturas, desgarros, en ocasiones infectadas y supurando, etc.
ANÁLISIS GENÉTICOS DE LARVAS DE Cephenemyia stimulator OBTENIDAS
DE CORZOS.
En este apartado del proyecto planteamos el objetivo de caracterizar la estructura
genética de las infrapoblaciones de Cephenemyia stimulator parásitas del corzo en la
Península Ibérica, con la intención de avanzar en el conocimiento de la epidemiología
de estas parasitosis, así como explorar el papel de las reinfestaciones.
En esta fase preliminar del trabajo hemos procesado larvas de Galicia y de Cataluña,
todas ellas extraídas mediante necropsia de corzo (Capreolus capreolus).
Para realizar este análisis, las larvas, una vez extraídas se mantienen fijadas en etanol
(90% o absoluto) a 4ºC hasta su análisis. Mediante disección de las larvas, se extrajo
una pequeña porción de tejido muscular de la región anterior de las mismas. Para la
extracción del ADN se empleó la técnica de HotSHOT (Truett et al., 2000
BioTechniques, 29: 52–54).
Mediante PCR se amplificó un fragmento de 0,7 Kb de la citocromo oxidasa I (COI)
(Otranto et al., 2005. Medical and Veterinary Entomology, 19: 96-100; Otranto y
Stevens, 2006 CABI Publishing, Wallingford: 51-66), siguiendo la metodología descrita
por Moreno et al. (2012) (Citado como: Moreno V, et al. (2012). Caracterización
molecular de los dípteros productores de oestrosis en bóvidos domésticos y silvestres.
En: Proyectos de Investigación 2009-10. E. Castro Galiano (Ed). Universidad de Jaén,
Jaén. Páginas: 49-67).
.
Tabla 1. Primers diseñados para amplificar el gen de la COI, utilizado en este estudio.
OVIS-UEA7 OVIS-UEA10
5´-TACAGTTGGAATAGACGTTGATAC-3´ 5´-TCCAATGCACTAATCTGCCATATTA-3´
688 pb
Los diferentes amplificados fueron clonados en el vector plasmídico pGEMT-easy
(Promega®) y finalmente fueron secuenciados varios clones positivos de cada una de
ellos en el Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (Madrid).
En la siguiente figura podemos ver gráficamente el resultado del análisis (Figura 2)
Figura 2. Resultados de la electroforesis mostrando la obtención de varias bandas para cada muestra. El pocillo de la izquierda contiene un marcador de peso molecular,
mientras que el de la derecha es un control negativo.
En general, los “primers” han funcionado bien, obteniendo la banda de 700 pb esperada
en la mayoría de las muestras, aunque como en otras especies de oéstridos se han
obtenido además varias bandas, lo que pone de manifiesto que existe una alta
heteroplasmia para este marcador mitocondrial, debida fundamentalmente a inserciones
y deleciones de tamaño muy variable, como se pone de manifiesto por la amplificación
de bandas de menor tamaño en este caso son debidas a deleciones (Figura 2).
Las secuencias obtenidas fueron comparadas con las disponibles en el GenBank y se
observa que estas presentan un alto porcentaje de identidad con las de Cephenemyia
stimulator, aunque la continuación del trabajo precisa apli
La continuación de este trabajo pasa por caracterizar la COI del resto de material
obtenido, así como el desarrollo y aplicación de nuevos marcadores moleculares, como
microsatélites e ITSs.
DESARROLLO EL TROFEO
El desarrollo del trofeo fue valorado en todos los corzos machos adultos considerados
en el presente estudio con el fin de comparar la cuerna de los parasitados y de los no
parasitados, bajo la hipótesis de que generar una nueva cuerna cada año supone un
importante esfuerzo metabólico que un organismo enfermo no puede asumir con el
mismo resultado que uno sano, y que, por tanto la diferencia entre el desarrollo de la
cuerna en los corzo sanos y los parasitados puede servirnos como índice general del
grado de perjuicio que las larvas ocasiona a su hospedador.
Antes de continuar debemos dejar bien claro que el desarrollo de la cuerna está
influenciado por múltiples factores (edad, alimentación, estado de salud, estrés, etc.)
entre los que parece cobrar especial importancia la edad, por lo que el llegar a
comprobar diferencias entre los grupos, si estas no son muy marcadas, debería requerir
el análisis detallado y profundo de una población suficientemente amplia y lo más
homogénea posible, para poder responsabilizar a un factor concreto de esa diferencia.
Larvas Media Desviación típ. Error típ. de la
media
No 21,3514 3,62701 ,29814 Longitud Cuerna Izda.
Si 20,7939 2,82049 ,40293
No 21,2255 2,98760 ,24558 Longitud Cuerna Drcha.
Si 20,9143 2,39296 ,34185
No 21,2885 3,14084 ,25818 Altura Medida Cuerna
Si 20,8541 2,46840 ,35263
No 5,8979 2,68517 ,22147 Luchadera Izda.
Si 5,1245 2,21242 ,31606
No 5,5073 2,80361 ,23124 Luchadera Drcha.
Si 5,1694 1,88040 ,26863
No 3,6156 1,82968 ,15091 Contra Izda.
Si 3,2918 1,69655 ,24236
No 3,6782 2,29195 ,18904 Contra Drcha.
Si 3,2857 1,76009 ,25144
No 61,4066 12,21527 1,01442 Suma dimensiones
Cuerna Si 58,5796 9,47833 1,35405
Tabla 2. Estadísticos de las medidas estudiadas en la cuerna de corzos portadores de larvas Cephenemyia stimulator y corzos sin larvas.
En la tabla anterior (tabla 2), podemos ver los estadísticos del grupo estudiado
considerado en este apartado (no se consideran los ejemplares muestreados durante el
desarrollo de la cuerna, ni tampoco, como es lógico, las hembras)
Podemos comprobar que todos los valores medios de las medidas analizadas son
ligeramente mayores en los corzos libres de larvas que en los parasitados, aunque
también tenemos que insistir en que la mayoría de los ejemplares parasitados proceden
del noroeste, donde el desarrollo de la cuerna suele ser menor que en otras zonas
tradicionales de la caza del corzo como son Burgos y Soria.
En cualquier caso se hace necesario un análisis estadístico más profundo de los
resultados para saber si existen diferencias, respecto al desarrollo de la cuerna, entre los
corzos con larvas y los que no las tienen. Para ello aplicaremos la prueba estadística T
de igualdad de medias para muestras independientes. Los resultados de esta prueba se
anotan de forma ordenada en la tabla 3.
En primer lugar conviene destacar que la Prueba de Levene de igualdad de varianzas
establece que se deben asumir varianzas iguales para todos los parámetros analizados
excepto para los referidos a las dimensiones de la luchadera y contra (punta posterior)
derechas.
Según el resultado de la Prueba T para la Igualdad de Medias, en muestras
independientes, no existen diferencias estadísticamente significativas entre ambos
grupos (corzos con y sin larvas) en ninguno de los parámetros estudiados que reflejan el
desarrollo de la cuerna.
La representación gráfica en el plano X Y del valor medio del parámetro “Suma
Medidas Cuerna” en los 228 casos analizados (Figura 3) nos permite comprobar que los
ejemplares parasitados ocupan posiciones en la zona media y media inferior, con
algunos casos entre los valores más altos.
Por tanto, los resultados de la Prueba T para la Igualdad de Medias, visto gráficamente
para el parámetro “Suma Medidas Cuerna”, nos indica que no existen diferencias
estadísticas entre el desarrollo de la cuerna de los corzos con y sin larvas de
Cephenemyia stimulator.
Prueba de Levene Prueba T para Igualdad de Medias
(Muestras Independientes) F Sig. t gl Sig.
Longitud Cuerna Izda. Se asumen
varianzas iguales,124 ,725 ,982 195 ,327
Longitud Cuerna Drcha. Se asumen
varianzas iguales,904 ,343 ,662 195 ,509
Altura Medida Cuerna Se asumen
varianzas iguales,329 ,567 ,882 195 ,379
Luchadera Izda. Se asumen
varianzas iguales1,583 ,210 1,820 194 ,070
Luchadera Drcha. No asumen
varianzas iguales
13,449 ,000,953 123,243 ,342
Contra Izda. Se asumen
varianzas iguales1,089 ,298 1,092 194 ,276
Contra Drcha. No se asumen
varianzas iguales5,959 ,016 1,248 106,419 ,215
Suma dimensiones Cuerna Se asumen
varianzas iguales2,506 ,115 1,476 192 ,142
Tabla 3. Prueba de Levene y Prueba T para la Igualdad de Medias para muestras
independientes. Se estudian los parámetros considerados en el desarrollo de la cuerna y no se observan diferencias significativas en ningún caso.
Figura 3. Representación gráfica de “Suma Medidas Cuerna” en cm.
CONCLUSIONES
- La prevalencia de Cephenemyia stimulator en corzos españoles, según los datos del
presente proyecto, es del 16,50%.
- Los corzos enfermos se localizan, en la inmensa mayor parte de los casos, en el
noroeste peninsular; con casos aislados en otras poblaciones (Cáceres, Palencia, Soria,
Guadalajara o Gerona). Esto nos hace pensar en que podemos estar asistiendo a una
extensión territorial progresiva del proceso.
- No se observan diferencias en el Índice de Condición Corporal entre los corzos con
larvas de Cephenemyia stimulator y los libres del parásito.
- Tampoco hemos podido establecer diferencias entre las dimensiones de la cuerna en
corzos con y sin larvas de Cephenemyia stimulator, aunque, debido a que son muchos
los factores que influyen en el desarrollo de la cuerna, este apartado precisa un estudio
concreto más profundo y amplio.
En Lugo a 9 de julio de 2013.
Firmado Luis E. Fidalgo
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