LeucosisLeucosis Bovina: No todo estBovina: No todo estáá perdidoperdido
APROCAL 23 / 09 /2010 Rafaela
Laboratorio de Virus AdventiciosInstituto de VirologiaINTA [email protected]
Virus de la Virus de la LeucosisLeucosis Bovina=InfecciBovina=Infeccióón Persistenten Persistente
Retroviridae Linfocitos BProvirus
1. Respuesta serológica Persistente
2. Recuento de blancos normal (70%) o elevado
3. Carga proviralvariable (1-50%)
4. Linfosarcoma(≤10%)
Glóbulos blancos, plaquetas (teñidas de violeta), un linfocito T (teñido de verde) y monocitos (teñidos de dorado) vistos a través de un microscopio electrónico.© 2000 Dennis Kunkel, Ph. D.
ELISA P24 – INSTITUTO DE VIROLOGIA-INTA N=30, todos controlan iatrogenia
FUNCIONAN LAS ESTRATEGIAS ACTUALES ?
(AGUJA/JERINGA/GUANTE/etc)
Diagnóstico 2010 (%)
94 95 94 100 92 91 100 99 100 100 94 93 95 96 96 100 86 85 94 99 95 97 95 67 94 93 100 99 100 94
1.Conocer la progresión desde el nacimiento
2. Evaluar fuentes de infección natural y puntos de control
Que hay que hacer ?: Que hay que hacer ?: Cortar el ciclo epidemiológico de transmisión
Conocer la progresión desde el nacimiento
Terneras nacidas durante 2 meses de madres infectadas
Seguimiento hasta 36 meses
2006-2009
Calostrado-Leche en balde-60 días estaca15-18m=IA, 27-30m: 1ºlactancia
85,8% 90,7%
63,7%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Total Vacas Vaquillonas
rp24
-EL
ISA
po
siti
ve a
nim
als
(%)
n = 802 n = 656 n = 146
PeripartoPeriparto y primer ay primer aññoo
10,2%
0
20
40
60
80
100
1 semana 3 meses
An
imal
es in
fect
ado
s (%
)
11,5%
7/61
11,1%
6 meses
11,1%
9 meses
11,3%
12 meses
6/53
Nuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas Infecciones
7 0 0 0
Inmunidad calostral (%)
Ac Virus 87 73 19 0
Ac p24 88 58 23 0
nacim 3meses 6 meses 9meses
Correlación título/duración, Spaerman p= -0.77, p= -0.61
Consumo Consumo Consumo Consumo
Calostro + lecheCalostro + lecheCalostro + lecheCalostro + leche
Segundo aSegundo aññoo
17%
0
20
40
60
80
100
15 meses 18 meses
An
imal
es in
fect
ado
s (%
)
15.09%.19.23%
21 meses
21,5%
24 meses
IAIAIAIA
Nuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas Infecciones
2 1 2 2
Tercer aTercer aññoo
40%
0
20
40
60
80
100
27 meses 30 meses
An
imal
es in
fect
ado
s (%
)
24%.
61.76%
36 meses
335 (28% BLV)47Preñadas
EdadEdadEdadEdad 27272727 30303030 36363636
Tambo 3 15 (65% BLV) 31
NUEVAS
INFECCIONES1 5 7
� 11% nacen infectados
� Durante 12 meses no hay progresión de la infección (11%)
� A los 24 meses la infección se duplica (21%)
� La entrada al tambo es un punto crítico en la progresión de la infección (60%)
2- Evaluar fuentes de infección natural y puntos de control
� CARGA PROVIRAL : CANTIDAD DE PROVIRUS EN CELULAS DE SANGRE CIRCULANTE (CC + / CC -)
PCR tiempo real
A M IB
IIII
BBBB
MMMM
AAAA
INDETECTABLEINDETECTABLEINDETECTABLEINDETECTABLE
BAJABAJABAJABAJA
MEDIAMEDIAMEDIAMEDIA
ALTAALTAALTAALTA
>36>36>36>36
30303030----36363636
26262626----30303030
>26>26>26>26
---- 0.05%0.05%0.05%0.05%
0.050.050.050.05----1111----%%%%
1111----5%5%5%5%
+ 5% + 5% + 5% + 5%
CARGA PROVIRAL SANGRE
2018.418.7I
202120.8B
2034.231.2M
4026.329.1A
VAQUILLONAS (n=10)VACAS (n=38)TOTAL (%)PVL
correlacion recuento de blancos/carga proviral
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
700000
800000
900000
1000000
1100000
1200000
1300000
1400000
0 2500 5000 7500 10000 12500 15000 17500 20000 22500 25000 27500 30000 32500 35000 37500
blancos/ul sangre
cop
ias
pro
viru
s/u
gD
NA
22/48 ≤ 5% cc infectadas19/48 ≤ 1% cc infectadas (39,5%)
11200 LP 3ºq
1% cc infectadas
5% cc infectadas
25% cc infectadas
CARGA PROVIRAL CALOSTRO
342526I
667574B
000M
000A
VAQUILLONAS (n=10)VACAS (n=38)TOTALPVL
50% calostros = nPCR +
Cual es la razón de la progresión rápida ??
1- latencia y reactivación periparto
2-transmisión por leche vía ascendente
3- transmisión por contacto
Puntos de control tempranoPuntos de control tempranoPuntos de control tempranoPuntos de control temprano
� Al nacimiento
� Al año
Generar un rodeo de baja carga Generar un rodeo de baja carga Generar un rodeo de baja carga Generar un rodeo de baja carga proviralproviralproviralproviral
1.1.1.1. SegregaciSegregaciSegregaciSegregacióóóón selectivan selectivan selectivan selectiva
2.2.2.2. Vacuna atenuadaVacuna atenuadaVacuna atenuadaVacuna atenuada: fase experimental: fase experimental: fase experimental: fase experimental
LTRLTR
GAGPOL
ENV
TAXREX
R3G4
PARTICULA VIRAL
GENES ESTRUCTURALES
GENES REGULATORIOS
PROVIRUS
Gillet et al, 2007, Retrovirology 4:18
Vacuna atenuada : ??????
BLV
Plasmido
LTR
LTR
gag
polenv
tax/rex
ampR Ori
84760
� Infeccioso en
bovinos y ovinos
� Produce enfermedad
en ovinos
Willems et al, (1992) Virology 189: 775-777Willems et al (1993) Journal of Virology 67: 4078-4085.
CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO
1- clonado provirus salvaje
LTR LTRGAGPOL
ENVTAX
REXR3
G4R3
CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO2- modificación provirus salvaje
Pro
vira
l loa
d
***
0
20
40
60
80
100
BLV DX
pBLV DX es infeccioso pero replica con menor eficiencia en ovinos
Willems et al, 1994 PNAS
pBLV DX no es patogenico en ovinos
Florins et al, 2007, J. Virol.
LTR LTRGAGPOL
ENVTAX
REX
env
BLV 6073 reduce replicacion viral in vitro
Willems et al, 1995, Journal of Virology
R3G4
CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO3- modificación provirus salvaje
LTR LTRGAGPOL
ENVTAXREX pBLVDX
LTR LTRGAGPOL
ENVTAXREX
R3G4
LTR LTRGAGPOL
ENVTAXREX
pBLV6073
pBLV6073DX
CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO4- doble mutante
Variante vacunal
LTR
LTR
gag
pol
env
tax/rex
pSP64
ampR Ori
6073
R3/
G4
8476
6997
6614
(650bp)(450bp)
0(3000bp)
HindIII
HindIII
SP6
- pBLV6073DX es infeccioso en bovinos (3/3)
-Baja carga proviral (indetectable 3/3)
-Respuesta inmune persistente
-No se transmite a centinelas en contacto
Ensayo#1Ensayo controlado a box (2009-INTA)
Autorizacion CONABIA y SENASAn=3 (doble mutante )+ cepa salvaje (3) +
centinelas (3)
pBLV6073DX es una potencial vacuna
- se transmite al ternero? -se transmite a centinelas por contacto?-Genera inmunidad calostral?-Cinètica de carga proviral y expresiòn viral -Protege frente al desafìo natural
Ensayo#2 Ensayo controlado a campo (2010-2011 INTA) Autorizacion CONABIA y SENASAn=10 (doble mutante) + salvaje (5) +centinelas (35) + infectados naturales (10)
pBLV6073DX es una potencial vacuna
SE BUSCAN VOLUNTARIOS
Ensayo#3 Ensayo controlado a campo en condiciones productivas(2012) Autorizacion CONABIA y SENASAn=10 (doble mutante) + + infectados naturales + centinelas
pBLV6073DX es una potencial vacuna
Gracias
Dra. M. J Dus Santos
Victoria Tomassini
Mariela Gammella
Cecilia Martinez
Luciana Caviglia
Romina Politzki
Dr Luc WillemsProyecto CONICET-FNRS DS932
Cintia Gonzalez
Dr Mario PoliProyecto MinCYT PAE
Geronimo Gutierrez
Dr. Luis CalvinhoProyecto INTA AESA 203992
Irene Alvarez
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