ESTUDIO CITOQUÍMICOESTUDIO CITOQUÍMICODEDE
LIQUIDOS SEROSOSLIQUIDOS SEROSOS
Lic. Mercedes Catani Dra. Rosario San Martín
Dr. Isidoro Prudente Dra. Silvia Zunino Torres
Hospital de Clínicas.
Departamento de Laboratorio Clínico.
Repartición Hematología y Citología.
LÍQUIDO SEROSO:
Se denomina así al líquido que normalmente se encuentra en las cavidades serosas:
-Cavidad pleural: 10-20 ml
-Cavidad peritoneal: 50 ml
-Cavidad pericárdica: 100 ml
DERRAME SEROSO: DERRAME SEROSO:
Acumulación patológica de líquido en una cavidad serosa
Pleural (derrame pleural)Pericárdica (derrame pericárdico)Peritoneal (ascitis)
Capilar sistémico
serosa visceral
serosa parietal
Presión hidrostática
Presión coloidosmótica
Capilar pulmonar
c. linfático
MECANISMOS DE FORMACIÓN DE DERRAMES MECANISMOS DE FORMACIÓN DE DERRAMES SEROSOSSEROSOS
p. hidrostática
p. coloidosmótica
permeabilidad capilar
obstrucción del drenaje linfático
InsuficienciaCardíacaCongestiva
S.nefróticoCirrosis
InfeccionesE.. InflamatoriasNeoplasias
Neoplasias
Traumatismo
TRASUDADO
EXUDADO
Los derrames serosos pueden presentarse como complicación de distintas patologías.
Su estudio citoquímico y bacteriológico no sólo proporciona una orientación diagnóstica sino que en algunas situaciones determina conductas terapéuticas.
Examen macroscópicoExamen macroscópico
ASPECTO
Hemorrágico Punción traumática, derrames neoplásicos, traumatismos, TEP
Hemático o serohemático No tiene valor diagnóstico
Turbio Sobrenadante límpido: células
Sobrenadante turbio: bacterias
lípidos
Opalescente, lechoso Derrames quilosos y seudoquilosos.
Examen químicoExamen químico
1. Parámetros bioquímicos utilizados para diferenciar trasudados y exudados
2. Parámetros bioquímicos para determinar la etiología de un exudado
Criterios de LightCriterios de Light
Proteínas líquido pleural
Proteínas séricas
LDH liquído pleural
LDH sérica
LDH en líquido pleural 200 UI / L
> 0.5
> 0.6
> Se considera que el líquido es un exudado cuando cumple uno o más de estos criterios
60 mg / dl 60 mg / dlColesterol *
200 U / L 200 U / LLDH
30 g / L 30 g / LProteínas
ExudadoTrasudado
* Sólo en líquidos pleurales , en líquidos de ascitis se utiliza como criterio para diferenciar derrames neoplásicos de no neoplásicos
PARÁMETROS BIOQUÍMICOS UTILIZADOS PARA DIFERENCIAR TRASUDADOS de EXUDADOS
PLEURALES
PARAMETROS UTILIZADOS EN LIQUIDOS PARAMETROS UTILIZADOS EN LIQUIDOS DE ASCITISDE ASCITIS
Gradiente de Albúmina
Albúmina sérica – albúmina líquido :>= 1.1 g/l = HTTP< 1.1 g/l = no HTP
Etiología de un exudado Etiología de un exudado pleuralpleural
Parámetros bioquímicos Parámetros bioquímicos
GLUCOSApHTRIGLICÉRIDOSAMILASACREATININA
•DERRAMES PARANEUMÓNICOS COMPLICADOS
•BK
•ENF. REUMÁTICAS
•NEOPLASIAS
GLUCOSAGLUCOSA
Su concentración es similar a la plasmática en los trasudados y en la mayoría de los exudados
Valores 60 mg/dl pueden verse:
•DERRAMES PARANEUMÓNICOS COMPLICADOS
•BK
•Enf. Reumáticas
•Neoplasias
•Acidosis sistémica
pHpH Sólo tiene valor diagnóstico cuando se
determina en las mismas condiciones que el pH arterial
Valores 7.2 pueden observarse en:
TriglicéridosTriglicéridos Su determinación está indicada en líquidos de aspecto
opalescente o lechoso y en aquellos con sobrenadante turbio.
Permite diferenciar: - derrames quilosos (obstrucción del drenaje linfático con acumulación de linfa –neoplasias-) -seudoquilosos ( por acumulación de colesterol – BK, AR-).
Valores entre 50-110 mg/dl : estudio de quilomicrones
quiloso seudoquiloso
TG 110 mg/dl 50 mg/dl
Líquido de AscitisLíquido de AscitisParámetros BioquímicosParámetros Bioquímicos
Gradiente de Albúmina
Albúmina sérica – albúmina líquido :>= 1.1 g/l = HTTP< 1.1 g/l = no HTP
AmilasaAmilasa
Valores de amilasa mayores al límite superior normal en suero pueden verse en derrames causados por:
•Pancreatitis
•Rotura esofágica
•Neoplasias
Urea y creatininaUrea y creatinina
Su determinación está indicada ante la sospecha de presencia de orina en la cavidad serosa (estallido vesical, posoperatorio de cirugía abdominal).
Se encuentran valores aumentados de urea y creatinina en el líquido seroso y valores normales de creatinina en sangre.
Citología de líquidos decavidades serosas
Citología de líquidos decavidades serosas
Normalmente procedentes de:
• revestimiento seroso : célula mesotelial • sistema monocítico / macrofágico
• capilares subserosos
Célula mesotelialCélula mesotelial
NORMAL
• Redondeada• 18 a 40 u (25 u)• Núcleo central ovoide• 2 a 3 nucléolos• Citoplasma denso adelgazado en periferia• Aisladas o en grupos de menos de 12 células
(ventana)
Célula mesotelialCélula mesotelialREACTIVA• Mayor basofilia citoplásmica• Bordes bien delimitados• Discreto grado de anisocariosis
Célula mesotelialCélula mesotelial
INVOLUTIVA• Derrames crónicos• Degeneración vacuolar
MacrófagoMacrófago• 45 % células normales en peritoneo. (CD68+)• 15 – 100 u (30 u)• Núcleo excéntrico arriñonado• Citop. claro,finamente vacuolado (encaje)• Material fagocitado• Formas multinucleadas
y gigantes sólo en
serositis reumática
Células procedentes deCélulas procedentes decapilares subserososcapilares subserosos
• Glóbulos rojos. Punción (1 ul/mm3) Hemorragia.• PMN. % variable. Inflamación. Infarto.• Linfocitos. Procesos benignos: Formas T NA. viral, TBC, neoplasias• Eosinófilos. (10%) Infección viral, parasitaria, mesenquimopatías, TEP, Ntx, Htx.
Cuadros citológicos patológicosCuadros citológicos patológicos
Células en proporciones variables dependiendo de la causa, duración y complicaciones del derrame.
• Inflamación . Inespecífica . Específica• TBC• TEP• Cirrosis hepática• Derrames neoplásicos
InflamaciónInflamación• Inespecífica. -células mesoteliales y PMN
- IC - NA - sobreinfección PMN +50%: - pleura: empiema - ascitis: PBE : recuento en cámara de Neubauer PMN > 250/ mm3 - DPCA: GB > 100/ mm3 50% PMN
InflamaciónInflamación
- AR - macrófagos
- m. gigantes multinucleados
- material necrótico granular• Específica. eosinófilo.
- LES - cél.LE 30% pleuritis lúpica.
- cél. mesoteliales y eosinófilos
TBCTBC• En pleura - infiltrado linfocitario crónico sin
reacción mesotelial.• En peritoneo - infiltrado linfocitario crónico con
reacción mesotelial y macrofágica.
TEPTEP
Necrosis hemorrágica subpleural con reacción
inflamatoria perilesional.
• Citología pleomórfica : - fondo hemorrágico.
- reacción mesotelial a/v con
alt. citomorfológicas.
- macrófagos con gránulos
de hemosiderina.
- PMN y linfocitos.
Cirrosis hepáticaCirrosis hepática
Celularidad pleomórfica: células mesoteliales, macrófagos, linfocitos, y PMN.
Puede observarse hepatocitos como células epiteliales poliédricas con núcleo central y disposición acinar (no debe confundirse con metástasis)
Derrame neoplásicoDerrame neoplásico
• Mayor frecuencia corresponde a adenocarcinomas
de pulmón, mama, ovario.• Tendencia a formar grupos celulares cohesivos,
tridimensionales o seudoacinos, cuyas células
presentan variadas atipías citomorfológicas.• El mesotelioma ( neoplasia de la serosa ) es muy
poco frecuente.
MARCADORES MARCADORES TUMORALESTUMORALES
MARCADORES MARCADORES TUMORALESTUMORALES
• Sustancia producida por la célula neoplásica que refleja su crecimiento y/o actividad, y permite conocer la presencia, evolución o respuesta terapéutica de un tumor maligno.
• Incluye: 1)productos detectables in situ en el tumor o sus metástasis y 2) productos liberados a la sangre y detectables en suero.
• Al 1º grupo dedicaremos nuestra atención.
INMUNOCITOQUIMICAINMUNOCITOQUIMICA
• .Definición: técnica que hace visible una reacción antígeno - anticuerpo en muestras citológicas.
• .Inmunohistoquímica (IHQ): si dicha reacción se realiza sobre tejidos.
• .Aporta mayor sensibilidad diagnóstica a los criterios exclusivamente morfológicos.
METODOLOGIAMETODOLOGIA
• Se utilizan Ac Monoclonales (Moabs): poseen alta homogeneidad de lugares específicos de unión con el antígeno.
• Los antígenos no deben ser destruidos ni enmascarados por los procedimientos técnicos.
• Fijador: debe estar en función de los grupos reactivos antigénicos que se pretende demostrar.
METODOLOGIAMETODOLOGIA
• Fijador: debe buscar un equilibrio entre la preservación de la morfología y la inmunoreactividad.
• Se clasifican: 1) actúan por precipitación 2) actúan estableciendo uniones cruzadas.
• Sistemas de revelado: hacen visible la reacción (IFD, IFI).
• Aplicable a PAAF, derrames, bloques celulares, improntas, etc.
PANELES DE PANELES DE ANTICUERPOSANTICUERPOS
• Los paneles de Moabs se realizan siguiendo 2 líneas: 1) por ANTIGENOS a estudiar
2) por TUMORES a detectar. • 1)Por Antígenos a detectar: • Ag Oncofetales : AFP, CEA.• Mucinas: MUC1, MUC2, MUC3A, (CA-125,
CA15-3, CA 27-29).• Citoqueratinas: 8, 18, 19, (CIFRA, TPS, TPA).• Enzimas e inhibidores: NSE, SCC.
Tumores a estudiarTumores a estudiar
CQ VM LCA HMB45
Carcinoma + - - -
Linfoma - + + -
Sarcoma - + + -
Melanoma - + + +
Adenocarcinoma vs Adenocarcinoma vs MesoteliomaMesotelioma
AdenoC Mesotel.
CEA + -
CQ B Peso + +
CQ A Peso - +
CD 15 + -
B 72.3 + -
Desmina - +
PROTOCOLO DE PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOSLIQUIDOS SEROSOS
PROTOCOLO DE PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOSLIQUIDOS SEROSOS
•Recepción de la muestraLos líquidos obtenidos por punción serán
remitidos rápidamente al laboratorio en 4 tubosa) tubo estéril para estudio bacteriológico.b) tubo seco sin anticoagulante para estudio
bioquímico.c) tubo con anticoagulante para estudio citológico.d) tubo en anaerobiosis para determinación de pH.
ProcesamientoProcesamiento
1) Macroscopía• color• aspecto• presencia o no de coágulo• presencia de restos tisulares
2) Centrifugación • convencional 2500 rpm 10’
ProcesamientoProcesamiento
3) Postcentrifugado• sobrenadante - color - aspecto
• sedimento - volumen - características -hemático - capa blanca celular
ProcesamientoProcesamiento
4) Estudio bioquímico del sobrenadante• glucosa• proteínas totales• colesterol• LDH• Tg (sobrenadante turbio)• otras determinaciones - amilasa, urea, iones, etc.
ProcesamientoProcesamiento
5) Citología• Frotis del sedimento resuspendido de centrifugación convencional.
• Citocentrifugación Se realiza de rutina excepto en líquidos muy
hemorrágicos o purulentos, o con una gran capa celular en el sedimento convencional.
Se resuspende el sedimento en 250ul de sobrenadante y se carga la cápsula.
Ventajas de la citocentrifugaciónVentajas de la citocentrifugación
• Mayor concentración celular.• Disposición celular en monocapa evitando el
solapamiento.• Conserva intacta la morfología celular. • Permite realización de técnicas inmunocito-
químicas.
• La citocentrifugación siempre debe ser realizada en forma paralela a la centrifugación convencional que aporta la noción cuantitativa de los elementos celulares.
• De una serie de citologías de líquidos serosos que fueron negativas para atipías citomorfológicas
mediante centrifugación convencional , 36 % resultaron positivos para citocentrifugación.
ProcesamientoProcesamiento
6 ) Secado de lo frotis al aire y tinción con
MGG.
Los tiempos de tinción son similares a los
empleados en extendidos hematológicos,
debiéndose acortar a la mitad la etapa de
Giemsa.
Confección del informeConfección del informe• Nombre del paciente• Procedencia• Datos filiatorios• Tipo de material• Estudio realizado - macroscopía - bioquímica - citología - en suma diagnóstico• Fecha• Firma responsable
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