Gua de Laboratorio Prctico en Parasitologa Bioanlisis Clnico Internado Rotatorio UNAN-Len
2014
Lester Ivn Gutirrez Prez Tutora: Lic. Aleyda Tllez
28/09/2014
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Tabla de contenido
1) Microscopio ptico ..................................................................................................................2
2) Partes del Microscopio .............................................................................................................2
3) Funcionamiento del Microscopio ............................................................................................3
4) Calibracin y Medicin de longitudes .....................................................................................3
5) Preservacin y Fijacin de muestras fecales...........................................................................5
a) PVA (Polivinil Alcohol) ........................................................................................................5
b) Formalina al 10% .................................................................................................................5
c) Solucin MIF (Mertiolate-Iodo-Formaldehdo) .................................................................6
6) Examen General de Heces .......................................................................................................6
a) Examen macroscpico ..........................................................................................................6
b) Examen Qumico ..................................................................................................................8
c) Examen Microscpico. .........................................................................................................9
7) Mtodos de Concentracin ....................................................................................................10
a) Mtodos de Flotacin .........................................................................................................10
b) Mtodos de Sedimentacin ................................................................................................11
c) Mtodo de concentracin Kato-Katz ................................................................................12
8) Diagnstico de Protozoarios Intestinales. .............................................................................13
a) Giardia lamblia ....................................................................................................................14
b) Entamoeba histolytica-dispar ..............................................................................................15
c) Entamoeba coli ....................................................................................................................15
d) Blastocystis hominis ............................................................................................................16
e) Iodamoeba butschlii ............................................................................................................16
f) Balantidum coli ...................................................................................................................17
9) Diagnstico de Helmintos Intestinales ..................................................................................17
a) Enterobius vermicularis ......................................................................................................18
b) Ascaris lumbricoides ...........................................................................................................19
c) Trichuris trichuria ...............................................................................................................19
d) Uncinarias ...........................................................................................................................20
e) Taenia solium ......................................................................................................................21
f) Hyminolepis nana ................................................................................................................21
g) Hyminolepis diminuta .........................................................................................................22
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1) Microscopio ptico
El microscopio es un instrumento que nos permite observar objetos que son demasiado
pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el
microscopio ptico. Se trata de un instrumento que contiene dos o ms lentes que permiten
obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.
2) Partes del Microscopio
Ocular: Lente situado cerca del ojo del
observador. Capta y ampla la imagen
formada en los objetivos.
Objetivo: Lente situado en el revlver.
Ampla la imagen, es un elemento vital que
permite ver a travs de los oculares.
Condensado: Encargado de concentrar
rayos luminosos sobre la preparacin
Diafragma: Regula la cantidad de luz que
llega al condensador.
Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el
condensador.
Cabezal: Cmara que porta el ocular y los
objetivos.
Revlver: Sistema que porta los objetivos
de diferentes aumentos, es rotatorio y se
alinea con el ocular.
Tornillos macro y micromtrico: Son
tornillos de enfoque, mueven la platina o el
tubo hacia arriba y hacia abajo. El
macromtrico permite desplazamientos
amplios y el micromtrico desplazamiento
muy corto, para el enfoque ms preciso.
Platina: Es una plataforma horizontal con
un orificio central, sobre el que se coloca la
preparacin, permite el paso de los rayos
procedentes de la fuente de iluminacin.
Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo,
la platina y los tornillos de enfoque
asociados al tubo o a la platina.
Base o pie: Es la parte inferior del
microscopio que permite que ste se
mantenga de pie.
Imagen N 1. Partes del microscopio ptico
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3) Funcionamiento del Microscopio
El enfoque de la imagen en el microscopio se realiza separando el objeto a estudiar de los
objetivos. Mediante los tornillos macro y micromtrico, se puede subir y bajar la platina
para buscar el foco. La operacin de enfoque requiere seguir unos determinados pasos para
realizarla con seguridad. El procedimiento correcto es el siguiente:
Mirando por fuera del microscopio se lleva el objetivo junto a la preparacin
Luego por el ocular se va separando lentamente hasta obtener la imagen.
Si se busca el enfoque acercando el objetivo a la preparacin se corre el riego de
producir fracturas (en la preparacin o, en lo que es mucho peor, en la lente frontal del
objetivo) si nos pasamos del plano de foco.
Sistema de Iluminacin: Ubicado en la base de
los microscopios. En los microscopios de
investigacin la fuente de iluminacin conlleva un
complejo sistema de filtros y lentes. Un sistema de
este tipo se reproduce en la Imagen N2 en la cual
la luz procedente de una bombilla (1) pasa a travs
de un sistema de filtros (2) que concentran la luz
en un haz de rayos paralelos. Un filtro anti-
calorfico (3) evita que el calor se propague a
travs del microscopio. La correcta coloracin se
consigue por unos filtros cromticos (4).
Finalmente mediante un espejo (5) se conduce a los
rayos en la direccin correcta. La intensidad del haz luminoso se regula mediante un
diafragma de tipo iris (6), llamada diafragma de campo luminoso.
Sistemas de Lentes: Son objetivos diseados para ampliar la imagen de los objetos
situados en la platina del microscopio. La imagen real (e invertida) que forman se ampla
con el sistema ptico del ocular. Normalmente se usa una combinacin de cuatro (x4, x10,
x25, x50) o cinco objetivos (x 2,5, x5, x10, x25, x50). Para que no se produzca el
desplazamiento de los objetos fuera del campo de observacin al girar la platina del
microscopio, es necesario que el eje de giro coincida con el eje ptico del objetivo. Para
conseguirlo cada objetivo est montado sobre unas piezas excntricas de manera que estos
pueden ser desplazados al girar unos anillos o unos tornillos de centrado situado en sus
monturas externas
4) Calibracin y Medicin de longitudes
Una vez familiarizado con la estructura y funcionamiento del microscopio compuesto, hay
que considerar aquellos accesorios que conducen a una excelente prctica microscpica y
que facilitan el trabajo, hacindolo ms rpido y efectivo o ampliando las capacidades del
instrumento. Dentro de las posibilidades se puede medir y cuantificar. Consiste en la
micrometra aproximada de los especmenes observados al microscopio.
Imagen N2. Sistema de Iluminacin
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Para cuantificar longitudes, cantidades (nmero de clulas, ncleos, partculas), se emplean
oculares de medicin con retculos (retculo ocular micromtrico) en combinacin con
micrmetros especializados, patrones calibrados, cmaras de conteo y el vernier.
Pasos a seguir para calibrar el retculo ocular
a) Ver a travs del ocular y enfocar la imagen del micrmetro objeto usando la
combinacin de lente objetivo 10x.
b) Sobreponer el retculo ocular y el micrmetro objeto, haciendo coincidir uno de sus
extremos de cada uno.
c) La medicin deber ser consistente, desde el extremo en que coinciden ambas retculas
hasta otra subdivisin coincidente
d) La calibracin retculo ocular puede ser determinado dividiendo la longitud conocida del
micrmetro objeto (Lp) entre el nmero de divisiones coincidente del retculo ocular (#dO).
Este clculo da por resultado el valor real de la longitud de cada subdivisin del retculo
ocular (VR):
Ejemplo: Calibracin del Retculo Ocular a la amplificacin de cuatrocientos aumentos
(400X). Para una configuracin dada de lentes en un microscopio ptico (ocular de 10X y
objetivo de 40X), se determina la longitud por valor de divisin de un ocular micromtrico.
Dos (2) subdivisiones de la retcula ocular (#dO = 2 subdivisiones) coinciden con la
distancia conocida de 0,3 mm con respecto al micrmetro objeto (LP = 0,3 mm). La
longitud por unidad de divisin (VRSub) puede ser calculada de la siguiente manera
Esto significa que cada subdivisin nominal del Retculo Ocular vale 0,15 mm vista con un
lente objetivo de 40X. Nota: Para convertir el valor de milmetros (mm) a micrmetros
(m) se multiplica por 1000= seran 150 um
= VR(sub) (mm/Subdivisin) LP (mm)
#dO (divisiones)
= VR 0,15 mm LP = 3mm
#dO= 2 subdivisin
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Una vez determinado el factor de calibracin podemos medir longitudes en nuestra
muestra. Para ello:
a) Retirar el micrmetro y enfocar el objeto a medir.
b) Contar el nmero de intervalos del retculo que corresponden al tramo que se desea
medir.
c) Multiplicar el nmero de intervalos por el valor de calibracin.
L = # de subdivisiones x VRsub
El resultado es la longitud absoluta del tramo medido, en mm (micrmetros)
5) Preservacin y Fijacin de muestras fecales
La edad de la muestra, influye directamente en el descubrimiento principalmente de
protozoarios; si no es posible observar las muestras dentro del tiempo lmite, es necesario
preservarlas y refrigerarlas a 3-5C en envases bien cerrados para prevenir la desecacin.
Tres de los conservadores ms utilizados son: PVA, Formalina y MIF. De estos PVA, es el
nico fijador que se emplea para preparar frotis teidos permanentes y es fcil de preparar.
Los otros fijadores mencionados permiten el examen de la muestra slo en frotis hmedos.
a) PVA (Polivinil Alcohol)
Es altamente recomendado como un medio preservativo de trofozotos y quistes de
protozoarios, tambin se emplea para mandar muestras por correo al laboratorio. PVA, es
una combinacin de fijador modificado de Shaudinn y resina; deber ser usado en una
proporcin de tres pares de PVA y una parte de la materia fecal. Este fijador permanece
estable por largos perodos, meses o aos, cuando es guardado en frascos bien sellados a
temperatura ambiente.
Frmula
PVA. Elvanol 71-24 10 g
Alcohol etlico 95% 62.5 ml
Cloruro de Mercurio saturado acuoso 125 ml
cido Actico Glacial 10 ml
Glicerina 3 ml
b) Formalina al 10%
Con este Fijador los quiste de protozoarios, huevos, helmintos y larvas, son bien
preservados por largo perodo. Se recomienda calentar la formalina a 60C al usarse para
huevos de helmintos, para prevenir el posterior desarrollo de stos al estado infectivo. La
formalina deber ser usada en la proporcin 3:1 y mezclada completamente.
Frmula
Formaldehdo 100 ml
Solucin Salina al 0.85% 900 ml
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c) Solucin MIF (Mertiolate-Iodo-Formaldehdo)
Con este Conservador, todos los elementos parasitarios microscpicos se conservan bien,
en estado natural y se tien convenientemente para reconocerlos con seguridad, durante una
preparacin hmeda. El material, se conserva bien en un frasco bien cerrado, durante un
ao o ms.
Frmula Solucin Madre MF Agua destilada 250 ml
Tintura de Mertiolate #90 Lilly (1:1000) 200 ml
Formaldehdo 25 ml
Glicerol 5 ml
Solucin de Lugol Yodo al 5% en yoduro de Potasio al 10% en Agua Destilada
6) Examen General de Heces
El examen general de heces forma parte de la rutina de pruebas que se solicitan a una
persona para conocer su estado general de salud o en casos particulares cuando se sospecha
de alguna patologa a nivel del sistema gastrointestinal bajo; en un simple examen de la
materia fecal se pueden reunir datos claves para realizar el diagnstico y seguimiento de
estas patologas. Sin embargo es necesario conocer algunas generalidades para comprender
sus ventajas y sus limitaciones.
Heces fecales: Se elimina en un individuo adulto sano un cantidad aproximada de 300 a
500 g. de materia fecal, esto depende mucho del tipo de alimentacin y de los hbitos
intestinales de cada persona. As un individuo que consuma mayor cantidad de fibra tendr
una eliminacin mucho mayor de heces fecales, al igual que una persona que consuma
muchos carbohidratos y protenas complejas evacuar menos cantidad y con menor
frecuencia.
En cuanto a la recoleccin de la materia fecal, esta se recolectar en recipientes limpios y
secos, no necesariamente estriles (las heces fecales son muestras polimicrobianas),
adquiridos usualmente para tal fin. En la caja recolectora a mxima capacidad se pueden
recoger 20g de heces, sin embargo, normalmente se recolecta entre 5 a 10g que resulta
suficiente para las pruebas de rutina de laboratorio.
El EGH, permite diagnosticar de entrada alteraciones fisiopatolgicas infecciosas o no del
sistema gastrointestinal bajo. Este consta de tres partes:
a) Examen macroscpico
Se analizan caractersticas fsicas de las muestras, comprende los parmetros:
Aspecto: Homogneo o Heterogneo (Normalmente la materia fecal es heterognea
puesto que est conformada por diferentes desechos alimenticios, una muestra muy
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heterognea puede sealar trnsito intestinal rpido, mientras que las heces ms
homogneas denotan trnsito intestinal lento generalmente)
Consistencia: Diarreica o lquida, blanda, pastosa y dura o formada. Est en
relacin directa a la cantidad de agua presente en la materia fecal, siendo que la
cantidad de agua la que otorga la fluidez de las heces, donde la muestra diarreica
tiene mayor cantidad de agua, mientras que las muestras duras tienen mucha menor
cantidad. Este parmetro tambin se relaciona con el trnsito intestinal, mientras
ms rpido el trnsito intestinal, menor agua es absorbida por el intestino grueso y
por lo tanto la consistencia de las heces es ms fluida.
Color: Color usual de las heces es el marrn, viene dado por las sales biliares
provenientes del metabolismo de la hemoglobina, en especial del pigmento
Estercobilina. Tambin est en relacin directa con el tipo de alimentacin, as los
lactantes que consumen mayor cantidad de lcteos tendrn unas heces ms amarillas
mientras que los individuos que consuman mayor cantidad de protenas de
carnes presentarn heces ms oscuras. La falta de coloracin de las heces se
denomina ACOLIA, y se denota con heces color grisceo o arcilloso, relacionada
con obstruccin a nivel de los conductos biliares o hepticos. Las heces negruzcas
llamadas MELENA, ocurren por la presencia de sangre digerida en la materia fecal
o de sustancias ricas en hierro que reaccionan con los diferentes componentes de los
jugos pancreticos. Otros colores pueden aparecer en el caso de ingestin de
alimentos coloreados (remolacha, morcillas, etc.) o de medicamentos. Tambin
pacientes hospitalizados que presenten diarreas si se observa un cambio llamativo
de color de las heces se debe estudiar para descartar infecciones por bacterias, como
por ejemplo en heces verdes o azuladas la presencia de bacterias del
gnero Pseudomonas
Olor: Viene dado por la formacin del indol producto de la degradacin del
aminocido triptfano, en la protelisis de los alimentos. Este parmetro se toma
poco en cuenta, sin embargo la aparicin de un olor marcadamente necrtico puede
indicar procesos malignos a nivel intestinal. Tambin en el caso de infecciones
intestinales las bacterias aumentan la protelisis y por ende el olor fecal se acenta.
Otros hallazgos: la presencia de moco visible, producido como mecanismo de
defensa del organismo frente a irritaciones de la mucosa, este se observa como una
capa gelatinosa, que se encuentra sobre o entre la muestra fecal, que al ser tocada
con el aplicador de madera durante el montaje presenta el fenmeno de filancia. Se
puede diferenciar dependiendo de la textura la procedencia del moco, el moco
observado fluido, brillante, que recubre la materia fecal dando un aspecto
espumoso, proviene del intestino delgado. El moco ms denso, opaco, formando
grumos entre la materia fecal, casi siempre rico en leucocitos, proviene del intestino
grueso. Este tipo de hallazgos permiten dar una presuncin del foco de la alteracin
del organismo.
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Presencia de sangre, la observacin de sangre, indica ruptura en la mucosa del
intestino grueso, puesto que si fuera del intestino delgado, la sangre cambiara de
color por accin de las enzimas pancreticas sobre el grupo hem dando una
coloracin negruzca (Melena).
Presencia de Restos alimenticios: corresponden a fragmentos generalmente de
fibras de celulosa indigeribles u otras sustancias. Se informan ausentes o
presentes, desatacndose el hecho si son abundantes, lo que indica trnsito
intestinal rpido siendo denominado Lientera, signo de algunas infecciones
intestinales
b) Examen Qumico
Generalmente forma parte del estudio especial de heces, puesto que algunos de sus
parmetros necesitan una dieta previa para evitar interferencias
pH: normalmente es ligeramente cido (6,5 6,9 aprox.) viene dado por la
degradacin de las protenas, interpretndose su disminucin como un aumento en
la degradacin de estas tpico de las infecciones bacterianas, o su alcalinizacin
como producto de la inhibicin de la flora bacteriana secundaria a tratamientos
antibiticos, lo que predispone al desarrollo de levaduras (se usan tiras reactivas
para determinar pH)
Azcares reductores, esta prueba revela la presencia de azcares del tipo glucosa
que son capaces de reducirse en presencia de xido cprico. Normalmente las heces
son azcares reductoras negativas. Esta prueba es especialmente til en infantes
menores de 2 aos con cuadros diarreicos, permitiendo establecer el diagnstico
de sndrome de intolerancia a la lactosa con la positividad de la prueba. Presenta
poca o nula utilidad en la mayora de los casos de adultos. Sin embargo, se han
estudiado casos de intolerancia a la lactosa en pacientes ancianos, lo que ameritara
la aplicacin de esta prueba. Se usan tiras indicadoras, o mtodos basados en el
mtodo tradicional de Benedict.
Sangre oculta: Se basa en revelar la presencia de tetrapirroles del tipo de los grupo
hem en la materia fecal, se denomina sangre oculta puesto que la sangre si proviene
del sistema digestivo alto (Boca, esfago, estmago e intestino delgado) pasa por
una serie de cambios qumicos y de pH inducidos por las diferentes sustancias que
fisiolgicamente actan a esos niveles, cambiando su coloracin a negro, si esta no
es muy abundante el color negro se diluye en la materia fecal marrn y no se
verifica macroscpicamente. Los mtodos que se utilizan se basan en la
identificacin del grupo Hem, Bencidina y Piramidn, entrando en desuso por el
riesgo cancergeno de estas sustancias, hoy se utilizan mtodos simplificados con
menor contacto del analista. El paciente debe guardar al menos 48 horas sin
consumir carnes, alimentos o medicamentos ricos en hierro, cobalto, o sustancias
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coloreadas. La prueba se informa negativo o positiva por cruces dependiendo del
tipo de prueba.
c) Examen Microscpico.
El montaje del examen directo se debe realizar siempre con solucin salina al 0,85% y
lugol u otro colorante supravital de la siguiente manera:
La solucin salina permitir la observacin de las formas parasitarias vivas en movimiento,
mientras que el lugol permitir precisar estructuras internas (ncleos, organelas, etc.)
Estructuras Observadas:
El examen general de heces como todo montaje hmedo se observa a 10x y 40x. Nunca con
objetivo de inmersin
Hemates: Su presencia es normal hasta 3 clulas por campo (400X)
Leucocitos: Normal hasta 4 clulas por campo (400X)
Flora bacteriana: Se informa Normal o disminuida, no tiene relevancia clnica el
informar flora aumentada, puesto no existe parmetro de comparacin. Si se
observa una flora bacteriana sobreabundante se deber casi siempre a que la muestra
tiene mucho tiempo de haber sido recolectada por lo que los resultados
obtenidos podran no ser los ms confiables
Levaduras: su presencia no tiene relevancia clnica mientras hasta 8 cel. xc (400X),
se pueden informar de la siguiente forma:
0 8 por campo > se informa: Levaduras escasas
9 18 por campo > se informa: Levaduras moderadas
19 o ms por campo > se informa: Levaduras abundantes
Si se observan artrosporas o blastosporas (levaduras gemantes), pseudohifas o
pseudomicelios, se informarn por campo, es relevante siempre que se observan, pues esto
refiere colonizacin e infeccin mictica.
Formas parasitarias
Se informaran primero el estadio y luego el nombre cientfico correctamente escrito, no es
necesario la cuantificacin por campo microscpico. Excepto en Blastocystis spp que de
acuerdo a los criterios de patogenicidad se informar por rango cuantitativo en: ms o
menos de 5 clulas por campo (400X).
Cualquier otro hallazgo que el analista considere necesario se informar en el espacio de
observaciones al final de la hoja de anlisis. El examen general de heces tiene una gran
utilidad en el diagnstico de enfermedades intestinales, sin embargo, tiene una sensibilidad
limitada de alrededor de 57%, por lo que un resultado no se puede informar como negativo,
si no se diagnostican formas parasitarias. Se reporta No se observ Parsitos (NSOP)
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7) Mtodos de Concentracin
Cuando un examen directo de heces resulta negativo, se puede recurrir a mtodos de
concentracin, que aumentan la probabilidad de un diagnstico positivo. La
concentracin de una muestra puede ser por Mtodos de Flotacin o Sedimentacin.
a) Mtodos de Flotacin
i) Mtodo con Sulfato de Zinc 1.18
Principio: Se basa en la utilizacin de un lquido de ms alta densidad que los elementos
buscados. Por tal, los elementos menos densos flotarn en la superficie.
Ventajas: Los elementos de Diagnsticos se recobran libres de detritus, lo cual facilita y
acelera el tiempo de examinar la lmina; las larvas de Strongyloides stercolaris es
ocasiones tambin se recobran del sobrenadante.
Desventajas: Se debe ajustar correctamente la densidad (1.18 o 1.20), ya que una densidad
de la solucin puede encoje y deforma estructuras de inters. Adems, no recobra huevos
pesados como los tremtodos o cstodos.
Materiales: Solucin se SO4Zn (D=1.18), Gradillas, Tubos, Centrfuga, Portaobjetos,
Cubreobjetos, Solucin de Lugol, Embudos, Agua destilada, Aplicadores, Asa de 5 mm y
mechero
Preparacin del SO4Zn (D=1.18)
Pesar 330 gr de SO4Zn
Colocar en Erlen Meyer y agregar 700 mL de agua destilada
Calentar para facilitar la disolucin
Cuando se ha diluido completamente agregar 250 ml de agua destilada y mezclar
Medir densidad. Si la densidad es baja, se debe agregar SO4Zn; si la densidad es
alta, se agrega agua destilada
Procedimiento
Rotular muestras y tubos de ensayos
Lavar las muestras con agua y preparar suspensin con la misma
Filtrar la suspensin con gasa en 4 dobleces a un tubo de ensayo
Agregar ms agua y mezclar muy bien
Centrifugar a 2,500 rpm durante 1 min, Descartar sobrenadante
Agregar SO4Zn (D=1.18) al sedimento y agitar fuertemente
Centrifugar a 2,500 rpm durante 1 min
Recoger muestra del sobrenadante y realizar preparaciones hmedas
Observar al microscopio
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ii) Mtodo de Willis
Principio: Consiste en preparar la materia fecal con solucin saturada de Cloruro de Sodio.
Los huevos y quistes de peso especfico menor a la solucin de cloruro de sodio tienden a
flotar.
Ventajas: Se usa para la bsqueda e identificacin de formas parasitarias como quistes,
huevos y helmintos. Se evala una gran porcin de la muestra tiene sensibilidad alta y es
fcil, rpida y econmica. Este mtodo es de alta sensibilidad en el diagnstico de huevos
livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana, y quistes.
Desventajas: No indicado en la bsqueda de huevos pesados, trofozotos y Larvas
Materiales: Vaso de precipitados, Embudo, Gasa, Porta objetos, Cubre objetos, Abate
lenguas, Sol. Saturada de NaCl y Sol. De yodo lugol
Procedimiento:
1.- Tomar aprox. 1 gr de heces fecales con un abate lenguas
2.- En vaso de precipitados poner 10ml de solucin saturada de cloruro de sodio, echarle el
gramo de heces fecales y disolver.
3.- En el embudo con la gasa ya puesta en forma de cono, se filtra la mezcla a forma que
caiga en el tubo de ensaye llenando completamente el tubo.
4.- Coloque un porta objetos con cuidado sobre le tubo, de manera que el lquido haga
contacto con el cubre objeto
5.- Dejar reposar de 5 a 10 minutos
6.- Los quiste o huevos flotaran y quedara adheridos a la cara del porta objetos que est en
contacto con la mezcla
7.- Retirar cuidadosamente el porta objetos para evitar perdida de material, colocar una gota
de yodo lugol y ponerle el cubre objetos.
8.- Examinar la muestra al microscopio con objetivo 40x, buscando quistes o huevecillos de
parsitos.
b) Mtodos de Sedimentacin
i) Mtodo de Ritchie
Principio: Se basa en la concentracin de los quistes y huevos por sedimentacin mediante
la centrifugacin, se necesitaran de algunas sustancias como: ter, formaldehido, y sol
salina; que respectivamente nos ayudaran a limpiar y concentrar los parsitos en las heces.
Ventajas: No deforma a los parsitos, y permite el transporte y almacenamiento de la
materia fecal procesada antes de ser examinada, resulta ms conveniente en casos de
tratamiento o bsqueda mayor de las estructuras parasitarias.
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Desventajas: Alto costo en los materiales y sustancia, no se recomienda como prueba de
campo, no identifica trofozotos ni larvas.
Materiales: Centrifuga, Tubos de ensaye cnicos, Sol. Salina isotnica, gasa cortada en
cuadros, Sol de formaldehido al 10%, embudos de polietileno, ter, vasos de precipitados
de 50 ml, aplicadores de madera, solucin yodo-lugol, pipetas Pasteur con bulbo,
portaobjetos, cubreobjetos, microscopio.
Procedimiento:
Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en
el vaso de precipitados, se aaden 10 ml de solucin salina y se homogeniza.
Se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo recogiendo el
filtrado en el tubo cnico.
Se centrifuga la suspensin durante 2 min. a 2000 rpm
Se decanta el sobrenadante y se re-suspende el sedimento con la solucin salina,
centrifugando, decantando y re-suspendiendo 2 veces ms
Al ltimo sedimento se agregan 5 ml. de sol de formaldehido al 10%, se mezcla y se
deja reposar durante 10 min.
Se aaden despus 0.5 ml. de ter, se tapan los tubos y se agitan energticamente
durante 30 seg.
Se centrifuga durante 2 min. a 2000 r.p.m.
Despus de centrifugar se observan 4:
ter (superficial)
Tapn de restos fecales
Formaldehido
Sedimento (fondo del tubo), contiene los elementos parasitarios.
Se decanta el sobrenadante.
Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del
sedimento y se coloca en el portaobjetos.
Se aade una gota de lugol y se le coloca el cubreobjetos.
Se observa la preparacin en el microscopio con los objetivos 10x y 40x.
c) Mtodo de concentracin Kato-Katz
Este mtodo ha sido ampliamente difundido por la OMS y la OPS y es actualmente
recomendado como el mtodo cualitativo y cuantitativo para las geohelminteasis humanas.
Principio: Utiliza altas concentraciones especficas de heces (42 o 50 gr) las cuales
mediantes el proceso de aclaramiento con glicerina conlleva una mejor visualizacin y
contabilidad de las carga parasitarias
Ventajas: Mayor sensibilidad por alta concentracin de heces, permite contabilizar las
formas parasitarias por gramos de heces, es un mtodo sencillo, preciso y de bajo costo.
Ideal en pruebas de campo.
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Desventajas: No indicado en muestras diarreicas, ni en la visualizacin de larvas, debido a
la clarificacin de la glicina.
Materiales: Lminas portaobjetos, papel absorbente, aplicador, papel de celofn
impregnado con glicerina y verde de malaquita, molde plstico con perforacin central,
malla metlica o nylon.
Procedimiento.
Transferir muestra fecal al papel absorbente.
Colocar la malla o nylon de 2x3 cm sobre la muestra y comprimirla para tamizar la
muestra.
Colocar el molde plstico sobre el portaobjetos y rellenar la perforacin con la
muestra tamizada; levantar el molde dejando el cilindro sobre la lmina.
Colocar la laminilla glicerinada con verde de malaquita sobre la muestra y con
ayuda de un tapn de jebe presionarla para extender la muestra.
Dejar para diafanizacin a temperatura ambiente por 30-45 minutos
Intensidad de la infeccin (hpg)
El resultado obtenido del recuento del kato-katz se multiplica por 24 y se obtiene el nmero
de huevos por gramos de heces (hpg). El comit de la OMS clasifica la intensidad de la
infeccin por helmintos segn los siguientes rangos:
Agente Leve Moderada Severa
A lumbricoides 1-4,999 5,000-49,999 >50,000
T. trichiura 1-999 1,000-9,999 >10,000
A duodenale
N americanus
1-1,999 2,000-3,999 >4,000
8) Diagnstico de Protozoarios Intestinales.
Los protozoarios son microorganismos unicelulares pertenecientes al Reino Protista,
subreino Protozoa. Se caracterizan por ser eucariotas, pueden reproducirse asexuada o
sexuadamente, tienen movilidad variable dependiendo de sus rganos de locomocin, la
mayora tienen nutricin de tipo hetertrofa (incapaces de transformar C inorgnico en C
orgnico). Pueden vivir libremente o actuar como parsitos. Pueden parasitar a distintos
animales y a la especie humana.
Su diagnstico puede llevarse a cabo por la observacin de los trofozotos o quistes, los
cuales pueden ser observados mediantes los mtodos hmedos o mediante tinciones como
azul de metileno, hematoxilina, etc.
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Los principales protozoarios pueden clasificarse segn su grado de patogenicidad de la
siguiente manera:
1. Patgenos primarios clsicos
1.1. Giardia lamblia
1.2. Entamoeba histolytica-dispar
1.3. Cryptosporidium parvum
1.4. Balantidium coli
2. Oportunistas emergentes
2.1. Cryptosporidium parvum
2.2. Isospora belli
2.3. Cyclospora cayetanensis
2.4. Microsporidios
3. De patogenicidad discutida comensales
3.1. Entamoeba coli
3.2. Endolimax nana
3.3. Iodamoeba butschlii
3.4. Blastocystis hominis
3.5. Chilomastix mesnilii
3.6. Pentatrichomonas hominis
a) Giardia lamblia
Trofozoto Quiste
Tamao: Aproximadamente 15 micras de
longitud y 8 micras de ancho
Ncleos: 2, con nuclolos centrales
Forma: Piriforme y una simetra bilateral.
Flagelos: 4 pares que emergen del axostilo.
Cuerpos parabasales: Presentes
Otras estructuras: El axostilo. Una
estructura con forma de disco bilobulado
denominados discos succionadores
Tamao: promedio de 10 micras.
Ncleo: 2-4
Forma: forma avalada con doble membrana
Flagelos: No presenta
Cuerpos parabasales: Presentes
Otras estructura: Axostilo en la parte
cntrica
15
b) Entamoeba histolytica-dispar
Trofozoto Quiste
Tamao: 20-40 micras de dimetro
Ncleos: 1
Forma: Irregular
Pseudpodos: 1, hialino, transparente
Citoplasma: Granuloso, con vacuolas
digestivas y eritrocitos u otros elementos
Movimiento: Unidireccional
Tamao: 10-18 micras
Ncleo: 1-4
Forma: Redondeado de cubierta gruesa
Pseudpodos: No presenta
Cuerpos cromatoidales: forma cilndricas
con extremos redondeados
Movimiento: Inmvil
c) Entamoeba coli
Trofozoto Quiste
Tamao: 20-30 micras de dimetro
Ncleo: 1, Cariosoma grande y excntrico
Forma: irregular.
Pseudpodos: romos y aparecen
simultneamente en varias partes
Citoplasma: endoplasma con grnulos
gruesos, vacuolas y bacterias. Sin GR
Movimiento: Lento, limitado, sin direccin
Tamao: 15-30 micras
Ncleo: ms de 4 (maduro)
Forma: Redondeado o ligero avoide
Pseudpodos: No presenta
Cuerpos cromatoidales: delgados en
forma de astillas.
Movimiento: Inmvil
16
d) Blastocystis hominis
Morfologa de Blastocystis hominis
Vacuolar Granular Qustica Ameboide
Forma tpica en los
medios de cultivo, su
tamao vara entre 2-
200 micras posee una
vacuola central
redondeada y ncleos
en la periferia
Casi similar a la
vacuolar, sin embargo
se observan diversos
grnulos de diferentes
formas en la vacuola
central y citoplasma
Presenta gruesa pared
de varias capas y,
ms pequeas que las
otras formas, carece
de vacuola central,
pero se observan
ncleos y mltiples
vacuolas
Es inmvil y
fuertemente
adhesiva.
Relacionada a
procesos
patolgicos
e) Iodamoeba butschlii
Trofozoto Quiste
Tamao: 8-20 micras de dimetro
Ncleo: Cariosoma central rodeado de
grnulos y con fibrillas hacia la membrana
Forma: irregular.
Pseudpodos: romos o formas de dedo y
aparecen lentamente
Citoplasma: endoplasma con vacuolas y
bacterias, gran vacuola de glucgeno
Movimiento: muy lento
Tamao: 5-14 micras
Ncleo: 1, con cariosoma excntrico y
grnulos forma de media luna
Forma: irregular
Pseudpodos: No presenta
Vacuola iodfila: Presente en el interior se
tie con Iodo y facilita su identificacin
Movimiento: Inmvil
17
f) Balantidum coli
Trofozoto Quiste
Tamao: 50-200 um de longitud, 40-50 um
ancho
Ncleo: Macroncleo (arrionado) Microncleo
(redondeado)
Forma: Ovalada y rodeada de cilios; se
observan dos orificio Citostoma (superior)
Citopigio (posterior)
Vacuolas: dos vacuolas contrctiles
Movimiento: Rpido debido a los cilios
Tamao: 40-60 micras
Ncleo: Resalta el macroncleo
Forma: Redondeado con doble
membraba
Cilios: No presenta
Movimiento: Inmvil
9) Diagnstico de Helmintos Intestinales
El trmino helminto (gusano), se usa sobre todo en parasitologa, para referirse a especies
animales de cuerpo largo o blando que infestan el organismo de otras especies. Los
helmintos son unos organismos pluricelulares complejos (no necesariamente
microscpicos, como la Taenia) que tienen forma alargada y simetra bilateral. Su tamao
es mucho mayor que el de los parsitos protozoarios y habitualmente son macroscpicos,
con un tamao que oscila de menos de 1 mm a l m o ms. La superficie externa de algunos
helmintos se recubre de una cutcula protectora acelular y que puede ser lisa o bien
presentar crestas, espinas o tubrculos. Los helmintos poseen con frecuencia unas
elaboradas estructuras de fijacin (p. ej., ganchos, ventosas, dientes o placas). Por regla
general, estas estructuras se localizan en la regin anterior y pueden resultar de utilidad
para clasificar e identificar a los distintos organismos. Los helmintos poseen unos sistemas
excretor y nervioso primitivos. Asimismo, algunos helmintos poseen un tubo digestivo,
aunque ninguno de ellos presenta un sistema circulatorio. Los helmintos se dividen en dos
tipos: Nematoda y Platyhelminthes.
18
Clasificacin de los Helmintos
a) Enterobius vermicularis
Es un pequeo parsito del hombre conocido
popularmente como oxiuros. Causa la enfermedad
intestinal conocida como oxiuriasis o enterobiasis.
El ciclo vital de Enterobius vermicularis est
restringido casi exclusivamente al humano. Este
parsito vive en promedio un par de das. El macho
mide 2-3 mm, la hembra es ms grande, llegando a
alcanzar los 15 mm
El diagnstico en el laboratorio de la presencia de oxiuros se efecta por la recuperacin de
los huevecillos (no embrionados, embrionados o larvados) de la piel anal y perianal
mediante el uso de la tcnica de la cinta adhesiva (Tcnica de Graham) a travs de la cual
se pueden observar al microscopio, los huevecillos que miden 50 um de longitud y 25 de
ancho, se observan con su forma caractersticas de D, blancos y transparentes, poseen
doble membrana, se puede observar la larva en su interior.
Al contrario de otros nemtodos intestinales, los huevecillos de los oxiuros no se
encuentran en las heces. En ocasiones sobre todo en mujeres pueden aparecer en los
sedimentos urinarios destacndose como un acierto casual.
Helmintos (gusanos)
Nemtodos (cilndricos)
E. vermiculares A. lumbricoides
T. trichuria Uncinarias
S. stercoralis
Platelmitos (aplanados)
Cstodos (Segmentados)
Taenia solium Taenia saginata
H. diminuta H. nana
Tremtodos (no segmentados)
Fasciola hepatica Schistosoma spp
P. westermani
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b) Ascaris lumbricoides
Es un parsito largo, cilndrico y de cutcula rosada. La boca posee 3 labios, uno dorsal y
dos latero-ventrales. El macho mide 15-30 cm de largo por 2-4 mm de dimetro y la
hembra mide 20-40 cm de largo y 3-6 mm de ancho. El extremo posterior de la hembra es
recto y el del macho es curvo.
El huevo frtil (Figura 1, 2 y 3) es redondo u ovalado y mide entre 45-75 um de longitud
por 35-50 de dimetro. Tiene tres membranas: una proteica gruesa mamelonada, una
membrana hialina intermedia y una membrana lipoproteica interna que envuelve la clula
germinativa. El huevo infrtil (figura 4 y 5) tiene formas atpicas, mide 90 um de longitud y
50 de dimetro y a menudo la capa mamelonada es escasa o no existe decorticado (figura
6).
c) Trichuris trichuria
Son gusanos de color blanco con una parte anterior delgada que ocupa dos tercio de
longitud corporal (Figura 7). Su forma es semejante a un ltigo. Miden entre 2-5 cm de
largo. El extremo posterior de la hembra es recto mientras el del macho es curvo.
Los huevos tienen forma de barril (figura 8), miden ms o menos 25 um de ancho y 50 um
de largo; presentan membrana doble y tapones albuminoides en los extremos por donde
sale el embrin.
Figura 8. Huevo de T. trichuria Figura 7. Morfologa de T. trichuria
Figura 3 Figura 2 Figura 1
Figura 6 Figura 5 Figura 4
20
d) Uncinarias
Pertenecen a la familia Ancylostomatidae que se caracteriza por la presencia de rganos
cortantes. Las dos especies que parasitan el intestino delgado del hombre son: Ancylostoma
duodenale y Necator americanus, cuyos huevos excretados en la materia fecal son
morfolgicamente indistinguibles. Estos parsitos son bastante similares difiriendo
nicamente las estructuras de la boca y el tamao.
Necator americanus (figura 12) es un parsito nemtodo. Vive en el intestino delgado de
huspedes, como los humanos, cerdos, perros y gatos, produciendo la enfermedad llamada
necatoriasis. Este parsito posee dos placas cortantes dorsales y dos ventrales alrededor del
margen anterior de la cpsula bucal. Los machos tienen usualmente 7 a 9 mm de longitud.
La vida media promedio de estos parsitos oscila entre 3 y 5 aos. Pueden producir entre
5.000 a 10.000 huevos por da
Ancylostoma duodenale (Figura 13) al igual que el Necator americanus es un nematodo
causante de una de las parasitosis ms prevalentes en el mundo, en particular en pases en
desarrollo. Es un gusano redondo, no mayor a 2 cm de largo. Como el resto de los
nemtodos son organismos con sexos separados. La boca est provista de una cpsula con
cuatro ganchos o dientes cortantes con las que se adhiere a las vellosidades de la mucosa
del intestino
Los huevos (figura 9, 10 y 11) son de forma ovalada y levemente redondeados de los
extremos, miden 60-75 um por 36-40 um y tiene una cscara lisa y delgada, es incoloro.
Cuando los huevos son excretados generalmente se encuentran en las primeras fases de
divisin, por lo que se observa en estado de 4 a 8 clulas.
Figura 11 Figura 10 Figura 9
Figura 13 Figura 12
21
e) Taenia solium
Es un platelminto de la clase Cestoda, que vive en el intestino delgado de los seres
humanos, donde mide normalmente de 3 a 4 m. Es, junto con T. saginata, una de las
especies conocidas como lombriz solitaria
El adulto de la Taenia humana es un gusano plano en forma
de cinta dividido en segmentos o progltidos (Figura 14), de
color amarillo blanquecino; habita en el intestino delgado,
donde vive anclado a la pared mediante un esclex (cabeza)
piriforme con cuatro ventosas y un rstelo con una doble
corona de ganchos. Al rgano de fijacin le contina el
cuello, porcin germinal que da origen a un conjunto de
segmentos o progltides que forman el estrbilo o cadena estrobilar.
Cada progltide es una unidad de reproduccin auto-
fecundante e independiente, que produce huevos que
contienen embriones infectantes (figura 15); Los Huevos son
redondos u ovalados, miden entre 31-43 um de dimetro. En
su interior contiene el embrin hexacanto u oncosfera y con
una envoltura externa gruesa de aspecto radiado llamada
embrifero.
f) Hyminolepis nana
Es un cestodo que mide de 2-4 cm de largo y 1 cm de ancho; el estrbilo est compuesto
por aproximadamente 200 anillos; los poros genitales se localizan en el mismo lado del
estrbilo. El esclex tiene cuatro ventosas, rostelo retrctil con una corona de 30 ganchos
aproximadamente. En las progltides maduras se observan tres testculos dispuestos
transversalmente en lnea, entre ellos se localizan los ovarios y la glndula vitelina; en las
progltides maduras slo se visualiza el tero lleno de huevos.
Los huevos son redondos u ovalados miden 40-50 um de dimetro (figura 16). Posee una
membrana transparente externa y una interna que rodea un embrin hexacanto. La
membrana interna tiene a cada lado dos mamelones polares de donde salen unos filamentos
que se cruzan.
Figura 14. Progltide de T. solium
Figura 15. Huevo de Taenia spp
Figura 16. Huevo de Hyminolepis nana
22
g) Hyminolepis diminuta
Es un cestodo que mide de 10-60 cm de longitud, posee esclex pequeo de 0.25 mm, de
forma redondeada con cuatro ventosas y una invaginacin apical en la cual se encuentra el
rostelo sin gancho y rudimentario. Las progltides grvidas miden de 2-4 mm de largo y
0.75 mm de ancho. El tero es irregular, en forma de arco; gonoporo simple y lateral.
Los huevos son grandes, esfricos, de cscara gruesa, mide 70 um de longitud y 85 um de
dimetro (figura 17). La oncosfera est rodeada por una membrana que est
consideradamente separada de la membrana externa. No presenta filamentos polares.
Figura 17. Huevo de Hyminolepis nana