INFORME FINAL
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD VASCULAR DE DIFERENTESPRODUCTOS OBTENIDOS A PARTIR DE Lourtegia
stoechadifolia, Espeletia schultzii Y Stevia lucida.
Investigadores
Estela Guerrero De León, aJuan A. Morán, bJosé Luis LópezPérez,
cOralia Suarez, `Eily Mondolis
a Facultad de Medicina, Universidad de Panamá, bFacultad de Farmacia, Universidadde Salamanca, España, `Facultad de Farmacia, Universidad de Panamá
PanamáEnero dei 2007 al Julio del 2008
INTRODUCCIÓN
Introducción
A. Fuente de Productos Naturales
Durante millares de años la práctica médica se ha visto ligada a los productos
naturales (PNs) a través del uso medicinas tradicionales. Aunque la mayoría eran
obtenidas de plantas medicinales, esta no es la única fuente de PNs, ya que (os
animales y los microorganismos, también son una rica fuente de PNs con efectos
terapéuticos. La OMS define como plantas medicinales, cualquier especie vegetal
que contiene sustancias que pueden ser empleadas para propósitos terapéuticos o
cuyos principios activos pueden servir de precursores para la síntesis de nuevos
fármacos (OMS, 1979).
De acuerdo con esto, las plantas medicinales nos sirven como fuentes de PNs
que tengan actividad terapéutica y así usarlos como materia prima para la
fabricación de medicamentos, o como modelo estructural químico para la síntesis
de medicamentos semisintéticos y sintéticos.
Cabe señalar que hasta ahora no se ha explotado por completo esta fuente
natural de posibles medicamentos, ya que se estima que menos del 1 %, de las
más de 90 mil especies de plantas de los bosques de América Latina, han sido
investigadas químicamente. Se señala que se encuentra entre 215 y 500 mil el
número total de especies de plantas superiores en todo el mundo; de ellas sólo el
6% aproximadamente han sido estudiadas preliminarmente para conocer sus
actividades biológicas y el 15 % evaluadas fitoquímicamente. Sumado a esto, han
sido identificados 122 compuestos químicos a partir de 94 especies que son
empleados como medicamentos, de ellas el 80 % con usos etnobotánicos idénticos
o relacionados con el uso conocido de esos principios activos (Duke et al., 2008).
Introducción
En esta constante búsqueda de sustancias con actividades terapéuticas se han
establecido etapas para el desarrollo de nuevos medicamentos, tales como:
• Eta a de Descubrimiento o de Investigaciones exploratorias: Es el
descubrimiento de nuevas moléculas con posibles actividades biológicas. Esto se
puede desarrollar mediante estudios pre-dirigidos, los cuales se basan en el
conocimiento de la medicina tradicional para el tratamiento de una enfermedad
(etnobotánica); o por estudios sistemáticos los cuales se realizan a partir de la
recolección sistemática de muestras naturales procedentes de un área de
biodiversidad determinada y el empleo de las mismas en ensayos terapéuticos
(bioprospección) (Marovac, 2001; Emelio et al., 1998; Malpica et al., 2005).
• Estudios pre.clínicos: Estudios y pruebas en el laboratorio a animales y
modelos fisiológicos, "in vivo" o "in vitro", para la evaluación o determinación de
posibles efectos biológico.
• Estudios Clínicos: Estudios y pruebas en seres humanos para la búsqueda de
seguridad y efectividad de la nueva sustancia evaluada. Estos estudios se dan en
persona sanas primeramente, seguido de estudios a pacientes, posteriormente a la
población en general y por ultimo se dan estudios de calidad de vida y
farmacoeconomía. Esto lleva muchas veces a una aprobación comercial regulada
para seguir evaluando posibles efectos adversos e interacciones medicamentosas,
todo siempre en el rango de conservar la seguridad y efectividad del producto
medicamentoso.
• Solicitud de Medicamento Nuevo: solicitud para comerciar un nuevo fármaco
para uso humano (Marovac, 2001; Emelio et al., 1998).
Introducción
Resaltando la etapa de investigación exploratoria en la cual se desarrollan
estudios pre-dirigidos o etnobotánicos y estudios sistemáticos o bioprospección,
para poder obtener y desarrollar PNs, dentro de la etnobotánica se habla
Proyectos Etnobotánicos Interdisciplinarios que consta de varios pasos a seguir
entre los cuales tos más relevantes son:
1. Documentación del conocimiento tradicional de las plantas: Registros de usos
tradionales de las plantas medicinales dentro de un contexto cultural.
2. Determinaciones cuantitativas: Se efectúan aplicando técnicas cuantitativas
para el análisis de tos datos etnobotánicos con el fin de determinar el nivel de
significancia de una especie o comunidad vegetal para un grupo humano.
3. Evaluación fitoquímica, farmacológica y toxicológica: Se seleccionan aquellas
plantas medicinales de mayor importancia cultural para el grupo humano
estudiado. De los cuates se obtienen extractos y posteriormente PNs a los cuales
se les determinan sus composiciones químicas, se les estima su potencial
toxicológico y su actividad farmacológica, si es de acuerdo a los usos atribuidos o
al descubrimiento de nuevas propiedades terapéuticas (Bermúdez eta!., 2005).
En los estudios sistemáticos o de bioprospección, la bioprospección vegetal,
específicamente, se realiza mediante la recolección sistemática de todo el
material vegetal, seguido de la extracción, fraccionamiento y obtención de las
sustancias químicas, tamizando de manera funcional los extractos para usos
terapéuticos (gracias a bioensayos o ensayos químicos). Estos estudios de
bioprospección se están apoyando en la utilización de Softwares y bibliotecas
químicas y moleculares, que ayuden a la valorización de los recursos naturales. La
elucidación o caracterización química de principios activos completa la fase de
descubrimiento (Malpica eta!., 2005).
Introducción
B. Uso de Productos naturales
Inicialmente los estudios clínicos, farmacológicos y químicos de estos PNs,
eran la base para la obtención de fármacos. Tal es el caso del ácido
acetilsalicítico, digitoxina, morfina, quinina y pilocarpina, todos ellos fármacos de
origen natural.
Durante esta primera época, et descubrimiento de la penicilina por Fleming,
revolucionó el desarrollo de nuevas moléculas de origen natural. De hecho, la
obtención de fármacos antimicrobianos como estreptomicina, cloranfenicol,
ctortetraciclina, la cefatosporina C, la eritromicina y vancomicina, a partir de esta
investigación antibiótica, son ejemplos de lo prolifero que resultó esta actividad.
Uno de los retos posteriores a esta primera era de investigación de PNs, fue la
implementación de tamizado basado en el mecanismo de acción, empleando
ensayos biodirigidos. A través de la continua mejora de los formatos de
investigación y producción, así como ta ganancia en tecnología robótica y de la
gerencia de datos, la investigación basada en el mecanismo de acción, se convirtió
en el principal apoyo de la investigación de alto rendimiento. Algunos de los
primeros compuestos identificados a principio de los años 70, donde ya se
empleaba esta nueva tendencia de investigación, incluyeron el ácido clavulánico y
la mevastatina, un fármaco inhibidos del HMG-CoA reductasa. De la Mevastatina se
obtiene la cabeza de serie para el desarrollo de un grupo de fármacos hoy
ampliamente empleados, las estatinas.
El uso de compuestos naturales, principalmente aquellos derivados de
plantas, para controlar enfermedades es una vieja práctica realizada a través de
tos siglos y que ha conducido al descubrimiento de más de ta mitad de todos tos
productos farmacéuticos modernos (Cuadro N°1) (Soejarto et al., 1989).
Introducción
Cuadro N°1. Fármacos derivados de PNs introducidas en Estados Unidos yEuropa entre 2001 y 2005.
Año Nombre Genérico Producto Natural Indicación
001 Caspofungin (Cancidasl) Pneumocandin B Antifúngico
2001 Pimecrolimus (Elidell) Ascomycin Dermatitis atópica
2001 Telithromycin (Ketekl) Erythromycin Antibacterial
2002 Amrubicin hydrochloride (Calsedl) Doxorubicin Anticancer
2002 Biapenem (Omegacin1) Thienamycin Antibacterial
2002 Ertapenem (InvanzTM) Thienamycin Antibacterial
2002 Fulvestrant (Faslodexl) Estradiol Anticáncer
2002 Galantamine (Reminyt1) Galantamine Alzheimer
2002 Micafungin (Funguard1) FR901379 Antifúngico
2002 Nitisinone (Orfadin1) Leptospermone Antitirosinaemia
2003 Daptomycin (CubicinTM) Daptomycin Antibacterial
2003 Miglustat (Zavescal) 1-deoxynojirimycin Enf. de Gaucher
2003 Mycophenolate sodium (Myfortic1) Mycophenolic acid Inmunosupresion
2003 Pitavastatin (LivaLol) Mevastatin Dislipidemia
2003 Rosuvastatin (Crestor1) Mevastatin Disiipidemia
2004 Everotimus (CerticanTM) 5irolimus Inmunosupresion
2004 Talaporfin sodium (Laserphyrinl) Chlorophyll and L- Anticáncer
aspartic acid
2005 Doripenem (Finibaxl) Carbapenem Antibacterial
2005 Extenatide (Byettal) Incretin Antidibático
2005 Paciitaxel nanoparticles (Abraxanel) Taxol Anticáncer
2005 Pramtintide acetate (Symlinl Amylin Antidibático
2005 Tigecycline (Tigacil1) Tetracycline Antibacterial
2005 Zicontide (PrialtTM) MVIIA Manejo del dolor
Tomado sin autorización de Kin S. Lam (2007) Trends in Microbiology 15(6)
Introducción
C. Enfermedades Cardiovasculares
Las enfermedades cardiovascutares (ECV), hoy por hoy, son la principal causa
de muertes a nivel mundial, posee el más alto índice de mortalidad (OMS, 2005) y
se estima que en el futuro, en una proyección para el 2030 seguirá estando entre
las principales causas de muertes, así lo reportan estudios financiados por la OMS
( Mathers et al., 2006).
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Figura N°1. Mortalidad mundial prevista por distintas causas, todas las edades.Tomado de la OMS, 2005.
En Panamá, también se ven reflejados los estragos de las ECV, ya que para el
2004, se encontró entre las principales causas de muertes, en las llamadas
"Enfermedades del Sistema Circulatorio- (119x100, 000 hab.)(OPS, 2007).
D. Productos naturales en la farmacología cardiovascular
Debido a la gran morbi-mortalidad que producen las ECV, estas se han
convertido en una de las principales razones para la búsqueda de posibles
fármacos que contribuyan a la terapia de las ECV. Algunos autores señalan que las
Introducción
principales contribuciones de las fuentes naturales están en el campo
cardiovascular (Gilani, 1998).
El inicio de la investigación de PNs empleados para el tratamiento de
afecciones cardiovasculares muy probablemente fue trazado por el
reconocimiento de las acciones cardiotónicas de los extractos de dos plantas:
Digitalis purpurea y Digitalis !anota (Ehrh.), que fueron aplicadas mucho antes de
que sus componentes activos fueran aislados y caracterizados estructuralmente.
Las publicaciones en el campo de la investigación cardiovascular abrieron así un
capítulo importante en la farmacología; y de tal suerte que los glucósidos
extensamente usados son las sustancias inotrópicas más potentes reconocidas.
Otro ejemplo de la obtención de PNs con utilidad en el tratamiento de patologías
cardiovasculares lo define claramente la reserpina. La reserpina es un alcaloide
extraído de la raíz de Rauwolfia serpentina (Benth). El descubrimiento de la
reserpina llevó a la obtención del primer agente tranquilizante terapéutico y uno
de los antihipertensivos de mayor utilidad en su época (Vakil, 1949).
En adición a los glucósidos cardiacos y la reserpina, un número de alcaloides
naturales son empleados corno fármacos en el control de varias condiciones
cardiovasculares. Por ejemplo, la quinidina, aislada de la corteza del árbol de
quina, es una droga antiarrítmica importante (Julian, 1976). Ajmatina y el
ajmalcina son también drogas antiarrítmicas aisladas de Rauwolfia serpentina y
que presentaron gran utilidad. Ergotamina, un alcaloide del cornezuelo de
centeno obtenido del hongo que infecta al centeno, es un vasoconstrictor cerebral
importante que es utilizado terapéuticamente para tratar dolores de cabeza tipo
migraña (Silberstein, 1997) (5ilberstein et al., 2003). La atropina, un alcaloide
Introducción
obtenido de la Atropa belladona L, es empleado para contrarrestar las acciones
bradicardizantes debido a su capacidad para bloquear los receptores muscarínicos.
En la historia del desarrollo de agentes con actividad cardiovascular también
aparece Forskolin, un compuesto aislado del Coleus forskohlii ( Willd.) Briq, una
especie utilizada en los desórdenes cardiacos.
El descubrimiento de los efectos farmacológicos de los componentes del veneno
de la víbora (Bothrops jararaca (Wied-Neuwied)) condujo, en última instancia, al
descubrimiento del papel que desempeña la enzima convertidora de angiotensina
(ECA) en el desarrollo de la hipertensión arterial (Ferreira SH. 1965). Como una
consecuencia directa de esta observación, fue descubierto el teprotide, un
inhibidor específico de la ECA y de donde se desarrolló un sistema modelo para la
interacción de pequeños péptidos con la ECA (Ondetti et al., 1971). En última
instancia, el captopril fue diseñado como un inhibidor específico de la ECA,
empleado por vía oral para el control de la hipertensión. El éxito y la utilidad del
captopril condujeron al diseño y a las síntesis de otros inhibidores de la ECA, tales
como enalapril. De esta forma nace la era de nuevos compuestos cardiovasculares
denominados inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (IECAs).
Algunos de los PNs más interesantes en el campo de la farmacología cardiovascular
son los fármacos hipolipemiantes. Los más interesantes desde el punto de vista
terapéutico son las estatinas que, como ya hemos mencionado, son un grupo de
agentes que reducen los niveles plasmáticos de colesterol por inhibir la actividad
de la HMG-CoA reductasa, una enzima que limita la biosíntesis del colesterol. El
primer agente inhibidor de la HMG-CoA reductasa fue aislado a partir de
Penicillium sp. Compactin, hoy conocido como Mevastatina, primero fue divulgado
Introducción
como agente antifúngico, pero al dilucidarse el mecanismo de acción constituyó la
base para la búsqueda de otros inhibidores de la HMG-CoA reductasa. Como era de
esperar, estos hallazgos iníciales condujeron al descubrimiento del lovastatina, un
metabolito secundario del hongo Aspergillus terreus. Lovastatina fue investigado
clínicamente, encontrándose que era un hipolipemiante eficaz y que además
producía un mínimo de efectos adversos. Aunque la lovastatina fue introducido al
mercado en 1989, muchos estudios fueron realizados para preparar análogos
mejorados, lo que condujo al desarrollo de otras estatinas como la simvastatina
(1991), privastatina (1991) y fluvastatina (1993).
Es de esta forma particular como los productos de origen natural escriben gran
parte de la historia del tratamiento de enfermedades cardiovasculares. A pesar
que en los últimos años se ha potenciado la investigación de productos de síntesis,
cada vez es mayor el número de investigadores que apuestan por la búsqueda de
moléculas activas a partir de PNs, por considerar que son estos la mayor fuente de
nuevos compuestos.
JUSTIFICACIONES DEL ESTUDIO
Justificación
A nivel mundial se ve una alta incidencia de las enfermedades cardiovasculares lo
que motiva a muchos investigadores a centrar su atención en la búsqueda de
nuevas sustancias que ayuden a disminuir la morbi-mortalidad de estas
enfermedades.
Como es bien sabido desde la antigüedad el hombre ha utilizado las plantas como
alivio de múltiples padecimientos entre los cuales se encuentran las enfermedades
cardiovasculares. Este uso de plantas medicinales ha dado pie a la búsqueda y
comprobación de las funciones atribuidas a las mismas a través de lo que hoy
llamamos Proyectos Etnobotánicos Interdisciplinarios. Aunado a esto, hoy en día,
en la búsqueda de plantas que nos provean nuevos PNs, los cuales puedan
presentar propiedades biológicas, se ha estado llevando a cabo gracias a la
bioprospección, la cual permite que plantas a las cuales no se le conoce uso
alguno, sean estudiadas para así poder determinar si posee alguna propiedad
medicinal.
Esto abre una puerta al conocimiento de nuevos productos naturales con
propiedades biológicas diversas, entre las cuales se encuentran aquellas a nivel
cardiovascular.
1. En la búsqueda de nuevos productos naturales que sean la base a la posible
generación de fármacos útiles para el alivio y disminución de estas enfermedades
se están estudiando recientemente los diterpenos kauranos, pimaranos y labdanos.
Estos han mostrado actividad hipotensoras, vasorelajadoras por múltiples
mecanismos dependientes e independientes de endotelio; al igual que respuestas
inotrópicas positivas.
12
Justificación..a^fuf.(iti<ii.:vvwnw.;ivtii<'^. ^^:?•:+!C[c.sii'.iK•ii 'iev.R'^4':S4::M.M:Cwx+iiCC45i.MV.zaT..x.C:..:^.ni. ^.u.CC ^^n^K.i.....suen^+rnC.4.i finbn:•v..cTn.:.Y.f..i.....T.oT^^wn:c.^i(•A'^if..;•N:.x•T:v^
2. Entre tos productos naturales con efectos a nivel cardiovascular se deben
mencionar a los flavonoides pues poseen una actividad an tiagregante plaquetaria,
reducen los niveles plasmáticos de lipoproteínas de baja densidad (LDL), al igual
que tienen la capacidad de modular el tono vascular con propiedades
vasoretajadoras dependientes e independientes de endotelio.
3. Es importante señalar que el obje tivo de los estudios que se realizan es la
búsqueda de nuevas sustancias no conocidas que puedan presentar propiedades a
nivel cardiovascular. Esto nos lleva a ir mas allá de los efectos fisiológicos de las
sustancias, llegando hasta sus diversas estructuras químicas en las cuales se
pudieran hacer posibles relaciones estructura-actividad; obteniendo así en un
futuro no solo un fármaco sino una familia de fármacos con múltiples cambios
químicos que se pudieren realizar de acuerdo a la estructura químicas y a la
actividad fisiológicas de las sustancias.
13
OBJETIVOS
Objetivos
Objetivos Generales
• Evaluar (a actividad vascular de diferentes productos obtenidos a partir de
Pinus caribaea, Lourteigia stoechadifolia, Espeletia schultzii,
Myrsine coriacea, Stevia lucida, Badilloa venezuelensis y Ageratina
stevioides.
Objetivos Específicos
• Determinar las acciones vasculares de los diterpenoides labdanos: ULA-04,
ULA-05, y ULA-07, obtenidos a partir de Pinus caribaea; de los diterpenoides
labdanos ULA-08 y ULA-09, obtenidos de Lourteigia stoechadifolia.
n Determinar las acciones vasculares del diterpenoide isopimarano ULA-06,
obtenido a partir de Pinus caribaea.
n Determinar las acciones vasculares de los diterpenoides kauranos: ULA-13 y
ULA-14, obtenidos a partir de Espeletia schultzii.
• Determinar las acciones vasculares de la bencenoquinona ULA-1 5 obtenida a
partir de Myrsine coriacea.
• Determinar el efecto vascular de los sesquiterpenos longipinenos ULA-16 y
ULA-17, obtenidos de Stevia lucida.
• Describir las acciones vasculares de tos flavonoides ULA-10 Y ULA-11,
obtenidos de Lourteigia stoechadifofia; del flavonoides ULA-19, obtenido de
BadiUoa venezuelensis; y del flavonoides ULA-21, obtenido de Ageratina
stevioides.
• Dilucidar sitas acciones de los productos con mayor efecto vasodilatador, son
dependientes de la función endotetial.
• Describir los posibles mecanismos de acción implicados en las acciones de tos
productos que posean actividad vasodilatadora significativa.
METODOLOGÍA
Metodología
1. ESTUDIOS EXPERIMENTALES
1.1 ANIMALES
Para la realización de este estudio se emplearon ratas Sprague-Dawley machos
(250-300 g), provenientes del. Bioterio de la Facultad de Medicina Veterinaria de la
Universidad de Panamá. Cada protocolo experimental requería la utilización de un
mínimo de 6 animales.
Los animales se alimentaron con una dieta estándar (Massury 7, Canadá) y se
mantuvieron en jaulas con seis animales en cada una, teniendo todas acceso libre
a la comida y bebida. Las ratas permanecieron bajo ciclos de 12 horas de luz y 12
horas de oscuridad, con control de temperatura a 22 + 1°C.
Todos los procedimientos experimentales descritos en esta investigación se
realizaron siguiendo las instrucciones del Manual "Guide for the Care and Use of
Laboratory Animas" del Institute of Laboratory Animal Resources (ILAR) of the
Natianal Research Cauncil.
1.2 MATERIALES
• Equipo de cirugía
• Micropipetas Labnet®
o Balanza analítica OHAUS® modelo AP 2105
0 Balanza para animales
• Baños de Órganos LEfICA® modelo LE 13206
• Ganchos de acero inoxidable (Tissue Holder LETICA®)
+ Sistemas de registro:17
Metodología
Transductores de fuerza (isométricos) TRi 201 LETCA®
Amplificador LETICA® modelo AMP 01612
Polígrafo 2006 con preamplificadores 150 506 LETICA®
1.3 REACTIVOS
Todos los reactivos fueron suministrados por (a Casa Fabricante SIGMA®
• Acetilcolina
• Fenilefrina
• Noradrenalina
• Dimetilsulfóxido
• L-Name
• Azul de metileno
• Indometacina
• Solución de Krebs: Esta solución esta compuesta por: NaCl 118 mM, KCl 4.7
mM, CaCl 2 2.5 mM, KH 2PO4 1.2 mM, NaHCO 3 25 mM, MgSO4 1.2 y Glucosa 11
mM.
• Oxigenación: Carbógeno (95% Oz y 5% CO 2 ), suministrado por la Compañía
Aceti-Oxígeno.
1.4 MUESTRAS
Las muestras objeto de este estudio consisten en compuestos purificados
obtenidos de plantas, procedentes de la región de los Andes venezolanos, las
cuales fueron proporcionadas por el Departamento de Química de la Facultad de
Ciencias de la Universidad de Los Andes-Mérida, Venezuela.
18
Metodología
Los compuestos evaluados fueron los siguientes:
• Diterpenos Labdanos: ULA-4, ULA-5 y ULA-7, obtenidos de Pinus caribaea;
ULA-8 y ULA-9, obtenidos de Lourteigia stoechcdifolia.
• Diterpenos Kauranos: ULA-13 y ULA-14, obtenidos de Espeletia schultzii.
• Diterpeno Isopimarano: ULA-6, obtenido de Pinus caribaea.
• Flavonoides: ULA-1a y ULA-11, obtenidos de Lourteigia stoechadifolia;
ULA-19, obtenido de Badilloa venezuelensis; y ULA-21, obtenido de
Ageratina stevioides.
• Benzoquinona: ULA-15, obtenida de Myrsine coriace.
• Sesquiterpenos Longipinenos: ULA-16 y ULA-17, obtenidos de Stevia lucida.
2. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES
2.1 Obtención de la muestra biológica
Siete días antes de cada experimento, los animales a emplear se sometieron a
las especificaciones de acondicionamiento descritas con anterioridad.
Se anestesiaron ligeramente las ratas y fueron sacrificados por exanguinación
carotídea, seguidamente se extrajo la aorta torácica descendente la cual se
colocó en un plato petri con solución Krebs. Esta solución se mantenía
constantemente carbogenada, con la doble finalidad de mantener a la aorta
oxigenada y conservar un pH de 7.4.
Con cuidado se eliminó el tejido conectivo y graso que rodeaba la aorta para
luego cortarla en segmentos de 4 mm. A través de la luz de cada segmento de
aorta se hacían pasar dos ganchos de acero inoxidable (Tissue Holder Letica®), uno
de los cuales se fijaba al fondo del baño de órganos y el otro se conectaba al19
Metodología
transductor isométrico TRl 201 Letica®, que a su vez se conectaba a un
amplificador ISO 501 y a un polígrafo Letica® para registrar la tensión del
segmento. Los anillos de aorta se colocaron en baños de órganos (Letica ® modelo
LE 13206) que contenían 15 mL de solución Krebs, la cual se mantenía a una
temperatura constante de 37 ± 0.5 °C con burbujeo continuo de carbógeno
durante todo el período de experimentación. Cada anillo montado fue ajustado a
una tensión de 2 g; luego se dejaron estabilizar 60 minutos, renovando la solución
de Krebs cada 15 minutos y reajustando la tensión a 2g cuando era necesario.
2.2 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio intacto,
de los diferentes PNs en presencia de contracción inducida por Fenilefrina
(FE).
Dada la importancia del endotelio en la regulación del tono vascular, al inicio
de cada evaluación se comprobó la presencia de endotelio. Para esto se añadía
una dosis submáxima de acetilcolina (ACh) (1 x 10'4 M) en presencia de una meseta
de contracción máxima inducida con fenilefrina (FE) (3 x 10 ,6 M). Se consideró que
el endotelio se encontraba intacto cuando se alcanzaba un porcentaje de
relajación igual o mayor al 60%.
Tras un período de estabilización de 60 minutos, se generó una contracción
máxima con FE (3 x 10 -6 M). En presencia de su efecto máximo observado, como
una meseta estable de contracción, se añadieron concentraciones acumulativas
crecientes del compuesto a evaluar: 1x10' 6 M, 1x10E5 M y 1x10 4 M, esperando 15
minutos entre cada administración para ir observando su efecto. Debido a que el
dimetilsulfóxido (DMSO) fue empleado como agente disolvente de los compuestos
20
Metodología
a ensayar, se considero pertinente realizar curvas dosis respuesta de este agente
como patrón de referencia para descartar interferencias del mismo sobre los
efectos observados. Cabe destacar que cada anillo fue expuesto a un solo
producto objeto de evaluación.
Para determinar si las acciones vasculares producidas por los compuestos
ensayados se debían a cambios funcionales, y no por lesión celular, después de la
curva concentración-respuesta los anillos se lavaban y se dejaban estabilizar
durante 60 minutos. Una vez terminado este periodo se realizaba una nueva
contracción con FE (3 x 106M).
Las muestras con mayor efecto relajante fueron seleccionadas para ser
sometidas a otros procedimientos protocolares.
2.3 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio
denudado.
Con la finalidad de determinar si el efecto vasodilatador observado en el
experimento anterior, dependía de la presencia del endotelio vascular, se
procedió a remover el mismo haciendo pasar una aguja de acero inoxidable con la
superficie rugosa a través del lumen de la arteria. Se consideraba que la aorta
estaba desprovista de endotelio (endotelio denudado), cuando al agregar Ach
(1x10 -4 M), se evidenciaba un porcentaje menor o igual al 10% de relajación. Una
vez comprobada la ausencia de endotelio, se procedía a repetir el protocolo
experimental anterior (punto 2.2) con aquellos productos que reflejaron un efecto
vasodilatador mayor del 50%.
21
Metodología
De los resultados obtenidos en ambos casos (evaluación del efecto
vasodilatador dependiente o independiente del endotelio), se derivaban
procedimientos protocolares posteriores.
3. Expresión y análisis de los resultados
Los resultados son expresados como la media ti S.E.M. de un n=6
experimentos.
La respuesta relajante se presenta como el porcentaje de relajación relativo
al efecto contráctil inducido por FE (3 x 10-6 M).
El análisis estadístico fue realizado a través del "t" de student.
22
RESULTADOS
Resultados
1. BASES ESTRUCTURALES DE LOS PRODUCTOS EVALUADOS
Para la realización de este estudio se tomaron como referencia compuestos
pertenecientes a diferentes grupos químicos, obtenidos de diferentes plantas. Ya que
al estudiar agentes de diferentes familias puede proporcionarnos información básica
para el desarrollo de protocolos de descripción de mecanismos de acción.
Cuadro N°3. ESTRUCTURAS DE DITERPENOS KAURANOS
Código PM
Especie/Familia Estructura Nombre
Espeietia _ I-
ULA-13 Ac. ent-kaur-9,16-en-300 schuitrir
(Asteraceae)19-oico
4ca^
Espeletia =_ULA-14 288 schultzii H ent-kaur-16-en-19-oI
(Asteraceae)
CHdi
24
Código PMg/mol
ULA-04 290
Especie/Familia
Pinus caribaea(var hondurensis)
(Pinaceae)
Pinus caribaeaULA-05 304 (var hondurensis)
(Pinaceae)
Pinus caribaeaULA-07 290 (var hondurensis)
( Pinaceae)
Lourtegia
U LA-08 322 stoechadifolia(Astereaceae)
LourtegiaU! A-09 364 stoechadifolia
(Astereaceae)
Resultados
Cuadro N°4. ESTRUCTURAS DE DITERPENOS LABDANOS
Estructura Nombre
(+)-Óxido de Manoílo(3R,4aR,10aS,10bR)-dodecahydro-3,4a,7,7,10a-
pentamethyl-3-vi nyl-1 H-benzo[f]chromene
o ,o
(+)-2-Oxo-Óxido de Manolo(3R,4aR,10a5,10bR)-decahydro-3,4a,7,7,1Oa-
pentamethyl-3-vinyl-1 H-benzo[ flchromen-9(1 ObH) -one
(+)-ManoolLabda-8(1 7), 14-dien-1 3-ol.(R) -5- ( (4aS, 55)-decahydro-1,1 , 4a-tri methyt-6-methylenenaphthalen-5-yl)-3-methylpent-1-en-3-ol
1,18-dihidroxi-oxido demanolo
(3R,4aR,7R,1OR,10aS)-dodecahydro-7-
(hydroxyrnethyl)-3,4a, 7,1 Oa-tetramethyl-3 -vi nyl-1 H-benzo[fi chromen-10-ol
Acido 1-hidroxi-oxido demanoilo-18-carboxilato de
r1i o metiloMethyl2((3R,4aR,7S,1 OR,10aS) -
' i dodecahydro-10-hydroxy-^_^3 3,4a,7, 1 Oa-tetramethyl-3-
vinyl-1 H-benzo[fi]chromen-7-vllacetate
25
CódigoPM
g/mol
ULA-10 344
Especie/Familia
Lourtegiastoechadifolia(Astereaceae)
Estructura
H,CO^
OH
LourteigiaULA-11 358 stoechadifolia
(Astereaceae)
I I^
ULA-19 358HICO OLn,,
5-hydroxy-3,6,7-trimethoxy-2- (4-methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one
Badilloavenezuelensis(Asteraceae)
5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyt)-7-methoxy-4H-chromen-4-one
AgeratinaULA-21 284 stevioides
(Compositae)
Resultados
Cuadro N°5. ESTRUCTURAS DE FLAVONOIDES
Nombre
Eupatorina5,3' -dihidroxi-6,7,4' -
trimetoxyflavona5-hydroxy-2-(3-hyd roxy-4-methoxyphenyl)-6,7-dimethoxy-4H-chromen-4-one
5-hidroxi-6,7,3,4-tetrametoxif lavona
5 -hydroxy-6,7-dimethoxy-2 -(3,4-di methoxyphenyl) -4H -chromen-4-one
26
Resultados
Cuadro N°6. ESTRUCTURAS DE DITERPENO ISOPIMARANO, BENZOQUINONA Y
SESQUITERPENOS LONGIP1NENOS.
Código PM Especie/Familia Estructura Nombre
3-Hidroxiisopimara-8 (14 ),15-dieno.
Pinus caribaeai ^1
(1 R,7R)-1 ^Z,J,4,4a,4b,5,6,7,9,1
ULA-06 304 (var hondurensis)0,10a-dodecahydra-1-
(Pinaceae) (hydroxymethyl) -1,4a,7-trimethyl-7-
vinylphenanthren-2-olo
CHHomorapanona
ULA 15 350 Myrsine coriacea 2,5-dihydroxy-3-(Sw.) tridecylcyclohexa-2, 5-
MO (GH CH;
diene-1,4-dioneo
ULA-1 6 250 Stevia lucidaLongipin-2-en-7B-9a-
(Asteraceae)dihidroxi-1-ona
Stevia lucidaLongipinentrienona
ULA 17 246 (Asteraceae)Longipin-2-en-1,7,9-
trioxo
27
Resultados
2. ACTIVIDAD VASCULAR
2.1 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio intacto, de
los diferentes PNs en presencia de contracción inducida por Fenilefrina (FE).
A. DITERPENOS LABDANOS
En el Cuadro N° 1 y Figura N° 1 se pueden observar los efectos vasodilatadores
máximos obtenidos con la realización de curvas dosis-respuesta para los diferentes
productos de diterpenos labdanos ensayados. El efecto máximo vasodilatador se
observó con ULA-9 con 51.61 ± 7.62% , seguido de ULA-5 que tuvo un efecto
vasodilatador de 46.88 ± 2.78% El compuesto ULA-8 también produjo una
vasodilatación significativa frente al DM50, sin embargo, esta respuesta es
considerada discreta ya que fue inferior al 30%. Tal como se puede apreciar en la
Figura N° 4, el compuesto ULA-4 desarrolló una respuesta vasodilatadora significativa
con la concentración 1x10 -5 M, sin embargo, al igual que ULA-7, con la concentración
máxima evaluada no se observa un efecto vasodilatador.
Todos los efectos observados pueden ser atribuidos a mecanismos fisiológicos ya
que no presentaron efectos citotóxico al poder reproducirse la contracción en
presencia de FE, después de probados los productos.
28
IE -06 1E-OS 1E-04
Concentración (M)
Q 20u
40
1009E-i7
-20
80
s0
0
Resultados
Cuadro N° 1. Valores máximos de relajación (E ) y de concentración eficaz 50(CE50 ) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentesproductos de diterpenos labdanos r=p<0.05 frente a DM50. nd= no determinado.
Producto(%
CESO(% Relajación) (M)
DMSO 7. 69 ± 2.93 nd
ULA-4 6.12±5.24! nd
ULA-5 46.88±2.l8 r nd
ULA-7 5.33 ± 6.84 r nd
ULA-8 28.15 ± 6.00 r nd
ULA-9 51.61 ± 7.62 t 1.0910X10-4
Figura N° 1. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos diterpenoslabdanos en anillos de aortas de ratas SD precontraídos con fenilefrina 3 x 10 -6 M.r=p<0.05 frente a DM50.
29
Resultados
B. DITERPENOS KAURANOS
Las respuestas obtenidas con los productos diterpenos kauranos, se muestran en
el Cuadro N° 2 y la Figura N° 2 a traves de la representación de curvas
concentración-respuesta. El compuesto ULA-13 desarrolló un Emax de 79.27±7.41 % y
fue el único de los kauranos que mostró una actividad vasodilatadora significativa.
ULA-14 mostró un efecto no significativo de vasodilatación cuando la comparamos
con al curva concentración- respuesta del solvente.
También podemos decir que todos los efectos observados pueden ser atribuidos a
mecanismos fisiológicos, pues no presentaron efectos citotóxico al poder
reproducirse la contracción en presencia de FE, después de evaluados los productos.
Cuadro N° 2. Valores máximos de relajación (Emax) y de concentración eficaz 50(C E50) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentesproductos de diterpenos kauranos t=p<0.05 frente a DMSO. nd= no determinado.
Producto Emay CE (% Relajación) (M)
DMSO 7.69±2.93 nd
U1.A-13 79.27±7.41t 1.7482X10-5
U LA-14 26.36±7.89 fi nd
30
Resul tados
0
10
20
C 30
40
j; 50
aj 60
a^ 70
80
90
100
1 E-07 9 E-06 lE-05 IE-04
Concentración (M)
Figura N° 2. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos diterpenoskauranos en anillos de ao rtas de ratas SO precontraídos con fenilefrina 3 x 10 .6 M.T=p<0.05 frente a DM50.
Resultados
C. FLAVONOIDES
Los flavonoides presentan un gran efecto vasodilatador, ya que ULA-10, ULA-11 y
ULA-21 presentan relajaciones entre el 84-87%, y no se observa diferencia
significativa entre estas respuestas. El ULA-19 muestra una relajación del 72%, lo
que también es un efecto vasodilatador importante. Desde la primera dosis se
muestra una diferencia significativa entre el DMSO y los flavonoides, esta diferencia
sigue aumentando con las concentraciones subsiguientes.
Es importante mencionar que todos los flavonoides evaluados nos dieron efectos
de vasodilatación y no muestran efectos citotóxico. Una vez probados los productos
se pudo producir una contracción en presencia de FE.
Cuadro N° 3. Valores máximos de relajación (E ) y de concentración eficaz 50(CE50) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentesproductos de flavonoides t=p<0.05 frente a DMSO. nd= no determinado.
Producto Em" CESO(% Relajación) (M)
DMSO 7.69 ± 2.93 nd
ULA-1 0 85.59 ± 10.93 1 7.1478X10-6
ULA-11 8730 ± 741' 4.5174X10 6
ULA-19 72.41 ± 5.56' 1.3597X10-5
ULA-21 84.42 ± 7.80' 4.2270X106
32
O
10
20
30
40i •p
a 6flN
70
I E-06 1 E-05 1 E-04
Concentración (M)
1001 E-07
80
90
Resultados
Figura N° 3. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos flavonoides enanillos de aortas de ratas SD precontraídos con feniíefrina 3 x 10"
6 M. t=p<0.05 frente
a DMSO.
33
Resultados
D. DITERPENO ISOPIMARANO, SESQUITERPENOS LONGIPINENOS Y BENZOQUINONA
El diterpeno isopimarano ULA-6 en la segunda dosis muestra un efecto
vasoconstrictor y a lo largo de toda su actividad no se alejó significativamente del
DMSO. La benzoquinona ULA-15 mostró una vasorelajación de 30.38±7.61%, y es
importante destacar que no mostró efecto citotóxico ya que se revirtió la contracción
frente a este efecto vasoretajador. Los sesquiterpenos longipinenos ULA-16 Y ULA-17
mostraron efectos similares de entre 38-42% de vasodilatación, los cuales no tienen
diferencias estadísticamente significativas. Al igual que el resto de los productos se
pudo observar la contracción al final en presencia de FE.
Cuadro N° 4. Valores máximos de relajación (E ) y de concentración eficaz 50(CE 5o) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentesproductos de diterpeno isopimarano, sesquiterpenos longipinenos y benzoquinonaf=p<0.05 frente a DMSO. nd= no determinado.
Producto Emax(% Relajación)
CEso(M)
DMSO 7.69 ± 2.93 nd
ULA- 6 9.36 ± 6 • 92 r nd
ULA-15 30.38 ± 7.61 nd
ULA-16 '12.07±7.28' nd
ULA-17 3859±748' nd
34
1E-06 1E-0S IE-04
Concentración (M}
r_
40
w
N60
100lE-O?
so
20
O
Resultados
Figura N° 4. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos, diterpenoisopimarano, sesquiterpenos longipinenos y benzoquinona, en anillos de aortas deratas SD precontraídos con fenitefrina 3 x 10 -6 M. t=p<0.05 frente a DMSO.
Resultados
2.2 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio denudado.
Los productos naturales que mostraron una actividad vasodilatadora de más dei
50%, se seleccionaron con el fin de evaluar si la actividad vasodilatadora depende
completa o parcialmente dei endotelio, o simplemente no depende del. endotelio. En
el Cuadro N° 5 y Figuras N° 5 y 6, se compararon las respuestas de los productos con
endotelio denudado frente a los efectos de vasorelajación que se presentaban en las
curvas dosis-respuesta con endotelio intacto.
Se puedo observar en el Cuadro N° 11, que no hay diferencia significativa en el
efecto vasodilatador de ULA-9 en presencia y ausencia de endotelio. Igual se observa
con ULA- 13 que a pesar de generar un mayor efecto en ausencia del endotelio, este
no es significativo. En la CE 50 se vio un aumento de 1.0910X10 -4 M a 7.2911X10 5 M,
para ULA-9; y de 1.7082X10 5 M a 2.8481X10" 5 M, para ULA-13. Cabe destacar todos
estos aumentos comparados al aumento del DMSO E- muestra que no es un aumento
significativo puesto que no depende de la actividad per se del producto sino debido
a factores externos. También en ULA-11 no se vio afectado su actividad en ausencia
del endotelio, aunque a diferencia de ULA-9 y ULA-13 se observa una disminución
discreta de 87.30% a 81.75%, en aorta con endotelio y aorta sin endotelio,
respectivamente.
36
a
10
2á
30
40
so
66
70
8D
06
140I C-07 1E-0 7-0 5 í E-04
Conce,it, ación (M)
1)a
Resultados
Cuadro N° 5. Valores máximos de relajación (Emax ) y de concentración eficaz 50(CESO ) en curvas de concentración respuesta en aortas con endotelio (E+) y sinendotelio (E-) de ratas SD, para diferentes productos naturales. '=p<0.05 frente aDMSO.
Producto Emax (E +) (M} Emax (E-) (M)
DMSO 7.69 ± 2. 93 nd 17.40 ±5.13 nd
ULA-9 51.61 ± 7 .62 ' 1.0910X10 -4 62. 14 ±9.641 7.2911 X10 -5
ULA-13 79.27±1.41 1 1. 7082X10 -5 84.84 +3. 6212 . 8 481X10-s
Figura N° 6. Curvas concentración-respuesta de ULA-9 en anillos de aortas conendotelio denudado de ratas SD precontraídos con fenilefrina 3 x 10 -6 M. t=p<0.05frente a DMSO E-, DMSO E+ y ULA-9 E+.
37
IE-€14
100
1€-07
90
00
7e
o
20
30
40
U`tp SQ
^ bil
9€-06 a €-p5
Cono* ntración(M)
Resultados
Figura N° 6. Cu rvas concen tración-respuesta de ULA-13 en anillos de aortas conendotelio denudado de ratas SD precontraídos con fenilefrina 3 x 10 -6 M. t=p<0.05frente a DMSO E-, DMSD E+ y ULA-13 E+.
Resultados
2.3 Evaluación del efecto "in vitro" de las muestras con efecto vasodilatador
independiente del endotelio, sobre la curva concentración respuesta a
Noradrenalina (NA).
Se tomaron aquellos productos que presentaban actividad vasodilatadora
independiente del endotelio como ULA-9 para evaluar si ejercía efecto sobre la
contracción inducida por NA, se realizaron curvas concentración-respuesta a este
agente en presencia de los productos. No se incluyo en este protocolo a ULA-13, ya
que el mismo se agotó por lo tanto no hubo producto para este protocolo.
ULA-9 no inhibió de manera significativa la curva concentración respuesta a NA
en anillos de aortas, pues en ambos se alcanzó un efecto de contracción de 98%. Se
puede observar en la Figura N° 7, que la curva control y la curva en presencia de
ULA-9 para NA es muy similar, lo cual nos indica que no hubo ningún tipo de
inhibición.
11$
I aa
90
so
Resultados
70'o
ü 6
o JV
40
30
20
10
4
lE-77 lE lo 9E-09 1 -O IE-07 1E-O 1E-05 1E-04
Concentracíón(M)
Figura N° 7. Curva concentración respuesta a NA en presencia de tos productos ULA-9en anillos de aortas de ratas 5D con endotelio.
40
DISCUSION
Discusión
Este estudio de diferentes PNs, obtenidos de diferentes plantas nos da una rica y
variada perspectiva de cómo productos con diferentes estructuras químicas
pueden presentar efectos biológicos similares. En este caso el efecto a evaluar fue
la capacidad vasodilatadora de los diferentes PNs en anillos de aortas obtenidas de
ratas SD. Siempre frente a una contracción producida por FE un agonista a,
selectivo. Es importante mencionar que los PNs en este estudio no han sido
evaluados dentro del área vascular anteriormente.
A. Diterpenos Labdanos
Es interesante ver que tos Diterpenos Labdanos presentan actividad
vasodilatadora como se ha evidenciado en otros estudios realizados por Pereira de
Oliveira et al, 2006 y Lahlou et al, 2007; aunque en estos estudios el parámetro
principal a evaluar fue el efecto hipotensor, se dejó muy claro que al parecer la
principal vía para producir este efecto fue a través de mecanismos vasculares.
Solo uno de los diterpenos labdanos analizados en este estudio dio una actividad
de vasodilatación independiente de endotelio de manera significativa, el ULA-9.
Pero es importante mencionar que el ULA-5 se le acerco mucho, aunque no llegó
al 50% de relajación. Cabe destacar que estos diterpenos labdanos no pertenecen
a la misma planta ni siquiera a la misma familia de plantas; lo cual motiva a
pensar que probablemente estos compuestos puedan tener una actividad de
vasodilatación independiente del endotelio dentro de sus características
generales, pues en tos estudios mencionados anteriormente los diterpenos
labdanos que tuvieron actividad hipotensora lo hicieron independiente del NO y
otros con una dependencia parcial del NO y PGl2, y su efecto se vio ligado al
42
Discusión
bloqueo de la entrada de Ca z+ a través de canales tipo t de Ca e . Claro esta que
tiene sus excepciones ya que no todos tos diterpenos labdanos evaluados dieron
este efecto vasodilatación, probablemente, pequeñas pero significativas
diferencias entre los sustituyentes en sus estructuras químicas sean la razón por la
cual no todos produzcan este efecto. Siguiendo esta línea podemos mencionar que
los diterpenos tabdanos ULA-5 y ULA-9, al igual que los diterpenos tabdanos
evaluados en estudios anteriores como Labd-8 (17)-en-15-oic asid (Labd-8) y
Iabdano 8 (17), 12E, 14-labdatrien-18-oic acid (labdane-302), presentan dentro
de sus estructuras un grupo carbonilo per se como sustituyente, o un grupo
carbonilo sustituido, llamado entonces grupo acilo en donde R pueda ser "OH ó -
OCH 3 (Figura N°18) dando lugar a un sustituyente carboxílico o ester,
respectivamente. Aunque no es posible hacer una relación estructura actividad ya
que la cantidad de estructuras a comparar son muy pocas, podemos señalar que
entre las estructuras que tenemos, este grupo carbonilo ya sea sustituido o no, es
un factor que distingue de manera muy general a aquellos diterpenos tabdanos
que han presentado efecto vasodilatación.
C= /c=0
R
Grupo carbonilo Grupo acilo
R: OH Grupo Carboxílico
R: OCH3 Grupo Ester
Figura N°18. Grupo Carbonilo
Existen muchos mecanismos de acción que se podrían estar desarrollando en el
efecto vasodilatación del ULA-9, pero partiendo de[ hecho que presentó un efecto
vasodilatación independiente del endotelio, y que el efecto contracturante se dio
43
Discusión
por un agonista a, selectivo como lo es FE, se desarrollo el protocolo para
evidenciar si en su mecanismo de acción este implicado un efecto inhibidor a,. El
receptor at esta unido a la proteína Gq que activa a ta enzima fosfolipasa C (PLC),
la cual hidroliza al 4,5-bifosfato de fosfotidilinositol (PIP 2) en dos segundos
mensajeros que son el diacilglicerol (DAG) y el 1,4, 5-trifosfato de inositol (IP 3). El
DAG activa a la proteincinasa C mientras que el IP 3 genera la liberación de Ca2+
del retículo sarcoplasmico el cual se une en un complejo con la calmoludina, una
proteína fijadora de calcio. Este complejo regula las actividades de otras enzimas,
incluyendo Las proteincinasas dependientes de calcio. Esto produce la contracción
del muscuto liso vascular (Katzung, 1999). Si se bloquea a receptor ai, no se puede
producir una vasoconstricción, y por ende un posible antagonismo producirá una
vasodilatación frente al efecto de un agonista ai.
Dentro de los resultados obtenidos en nuestro estudio se pudo observar que ULA-9
no ejerció ningún efecto inhibidor sobre el receptor a, , la curva dosis-respuestas a
NA no se modificó en la CE 50 ni en el Emax. Esto indica que probablemente su
mecanismo de acción vaya por la línea de un bloqueo a la entrada de calcio, como
lo evidenciaron estudios anteriores. De esta manera se abre un marco para futuros
protocolos con la finalidad de dilucidar el posible mecanismo de acción implicado
en el efecto vasorelajante de ULA-9.
B. Diterpenos Kauranos
De entre los diterpenos Kauranos el ULA-13 es el único que presenta actividad de
vasodilatación significativa la cual es independiente del endotelio. Cónsono a
nuestro estudio fueron los obtenidos por Ambrossio et al, 2004 y Tirapelli et al,44
Discusión
2005, donde los diterpenos kauranos mostraron actividad de vasodilatación de
72.27+3.79% en aortas con endotelio y de 73.28+5.91% en endotelio denudado. En
Al igual estos estudios, nuestros estudios muestran el efecto vascular de los
agentes kauranos independiente de la función endotelial. Esta similitud de los
resultados nos lleva a deducir, que probablemente, dentro de las características
comunes de los diterpenos kauranos esta su capacidad vasodilatadora que es
independiente del endotelio.
El estudio por Ambrossio et al, 2004 evalúa el rol del grupo carboxílico en este
carbono 19 (C-19) del ácido ent-kaur-16-en-19-oico, en este estudio se observó
una disminución del efecto vasodilatación cuando el mismo se metiló pero no se
eliminó dicho efecto por completo. En nuestros resultados se observa que el ULA-
14, el cual mostró un efecto muy discreto, tiene en su C-19 un grupo alcohol y no
un grupo carboxílico. Pero el ULA-13 si muestra un efecto significativo de
vasodilatación independiente del endotelio y posee un grupo carboxílico en el C-
19; al igual que los diterpenos kauranos evaluados en tos estudios ya mencionados.
Esto da a lugar a suponer que el grupo carboxílico en el C-19 pueda tener alguna
relación con el efecto vasodilatación de los diterpenos Kauranos. Claro esta, no
podemos asegurar que exista una relación estructura-actividad entre este grupo
carboxílico en el C-19 y el efecto vasodilatación o de importancia cardiovascular,
pues no contamos con las suficientes estructuras de diferentes diterpenos
kauranos; pero si crea un marco para considerar esta hipótesis y en un futuro
evaluar este parámetro.
45
Discusión
C. Flavonoides
Los flavonoides evaluados en este estudio fueron cuatro: ULA-10, ULA-11, UL4-19
y ULA-21; de los cuales los cuatro presentaron una actividad de vasodilatación
muy significativa, aunque con diferencias, ya que ULA-11 fue la única en presentar
este efecto sin depender del endotelio. En los demás flavonoides su efecto
vasodilatación se vio disminuido de una manera muy significativa cuando el
endotetio fue denudado.
Estudios como los de Fitzpatrick et al.1993 y Perez-Vizcaino et al, 2002 evidencian
que ciertamente los flavonoides presentan efectos vasodilatador, aunque por su
versatilidad de ser dependientes e independientes del endotetio presentan
diferentes vías por los cuales pueden ejercen su mecanismo de acción. Y gracias a
esto es difícil hacer una relación estructura actividad en este estudio pues no
contamos con suficientes estructuras de flavonoides, además at compararla con
otros flavonoides estudiados como la quercetina y sus metabolitos podemos ver
que no hay casi diferencias entre una y otra, ya que presentan actividad de
vasodilatación dependiente e independiente de endotetio lo hace aun mas difícil
esta labor. Pero es un objeto de estudio muy interesante para estudios
posteriores.
D. Diterpeno Isopimarano, sesquiterpenos longipinenos y benzoquinonas.
Aunque el Diterpenos Pimarano, anteriormente muestran una buena actividad de
vasodilatación en el estudio de Tirapelti et al, 2008; en este estudio el diterpeno
isopimarano evaluado no dio una actividad de vasodilatacoón significativa. Como
46
Discusión
también los dos sesquiterpenos longipinenos y la benzoquinona no mostraron
actividad vasoditatadora significativa en este estudio.
47
BIBL1OGRAF1A
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