Salmonella Salmonella spp. spp.
Carrera de Especialización en Bacteriología Clínica UNNE. Junio 12-13
Salmonella Salmonella spp. spp.
Características microbiológicasCaracterísticas microbiológicas
María Rosa Viñas
Enterobacterias
INEI-ANLIS “C.G.Malbrán”
Familia Enterobacteriaceae
Escherichia
Shigella
Salmonella
Edwarsiella
Citrobacter
� Nomenclatura y Taxonomía, ordenamiento en conjuntos y subconjuntos
que resultan del estudio de caracteres morfológicos, bioquímicos, antigénicos y
genéticos comparados con las propiedades de la cepa tipo
14 Géneros
( de relevancia)
Citrobacter
Klebsiella
Enterobacter
Serratia
Hafnia
Proteus
Morganella
Providencia
Yersinia
Erwinia
�� La salmonelosis es La salmonelosis es considerada enfermedad considerada enfermedad zoonóticazoonótica, ,
en el ciclo de infección interviene tanto el hombre como animales en el ciclo de infección interviene tanto el hombre como animales domésticos y salvajes.domésticos y salvajes.
�� Salmonella con variaciones en Salmonella con variaciones en serovariedadesserovariedades influenciada por influenciada por factores: clima, densidad poblacional, prácticas factores: clima, densidad poblacional, prácticas agroganaderasagroganaderas, técnicas , técnicas de elaboración de los alimentos y hábitos de consumo. de elaboración de los alimentos y hábitos de consumo.
�� La tasa de incidencia de la infección es mayor en los lactantes y niños La tasa de incidencia de la infección es mayor en los lactantes y niños de corta edad . de corta edad .
�� EpidemiológimenteEpidemiológimente el 60 % el 60 % -- 80% de los casos son esporádicos , y 80% de los casos son esporádicos , y asociados a grandes brotes comunitarios asociados a grandes brotes comunitarios por consumo de alimentos por consumo de alimentos principalmente principalmente de origen animal. de origen animal.
�� Las infecciones hospitalarias (IH) son causa frecuente de Las infecciones hospitalarias (IH) son causa frecuente de morbimortalidadmorbimortalidad entre pacientes hospitalizadosentre pacientes hospitalizados. .
�� Como parte de la Como parte de la vigilancia desde el laboratoriovigilancia desde el laboratorio, se analiza los datos , se analiza los datos del LRN en cuanto la prevalencia de Salmonella spp. que es importante del LRN en cuanto la prevalencia de Salmonella spp. que es importante para para el monitoreo de la zoonosisel monitoreo de la zoonosis
*Red Nacional de Diarreas y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria:
48 referentes jurisdiccionales de diarreas y 17 de alimentos.
Se remiten para caracterización un porcentaje de aisl. humanos de Shigella spp. (20%), Campylobacter spp. , Salmonella spp. (20%) y todos los aislamientos de brotes.
En la Vigilancia basada en Laboratorio,
las Redes vinculadas a diarreas y ETA son:
*Red para la Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos (WHONET- ARG):90 laboratorios distribuidos por todo el país, realizan pruebas de sensibilidad antimicrobiana a bacterias de origen clínico.
- Campylobacter spp. se realiza vigilancia activa por el método de dilución en agar de los 5 primeros aislamientos de cada mes que los laboratorios envían al LRN.
- Salmonella sp. y Shigella spp. con fenotipos poco habituales que se estudian para establecer los mecanismos de resistencia.
SS. ser. Enteritidis, . ser. Enteritidis, SS. ser. . ser. TyphimuriumTyphimurium, , SS. ser. Newport . ser. Newport
y y SS. ser. . ser. InfantisInfantis en Argentinaen Argentina (1986(1986--20201212) LRN) LRN
300
400
500
600
Nº d
e a
isla
mie
nto
s
* En el período 07-12 S. Typhimurium fue la serovariedad que se aisló
con mayor frecuencia en humanos, duplicando a S. Enteritidis.
0
100
200
Nº d
e a
isla
mie
nto
s
Años
S.Enteritidis S. Typhimurium S. Infantis S. Newport
TAXONOMIA DEL GENERO TAXONOMIA DEL GENERO
SalmonellaSalmonella
Salmonella enterica que se divide en 6 subespecies:
Salmonella enterica subespecie enterica (I)
Salmonella enterica subespecie salamae (II)
El Género Salmonella comprende 2 especies:
Salmonella enterica subespecie salamae (II)
Salmonella enterica subespecie arizonae (IIIa)
Salmonella enterica subespecie diarizonae (IIIb)
Salmonella enterica subespecie houtenae (IV)
Salmonella enterica subespecie indica (VI)
Salmonella bongori (V)
� Las subespecies de Salmonella enterica y especie de S. bongori se
subdividen en más de 2400 serovariedades:
asociaciones de factores antigénicos somáticos O y flagelares H.
� Las serovariedades de Salmonella enterica subespecie enterica
(99,5%) se designan con un nombre, relacionado con el lugar
geográfico donde se aisló la 1ra cepa de la nueva serovariedad
(se escribe con letras romanas, no en itálica y la primer letra con(se escribe con letras romanas, no en itálica y la primer letra con
mayúscula. Ej. Salmonella ser. Typhimurium ó Salmonella
Typhimurium; Salmonella ser. Orán).
� Las serovariedades de las otras subespecies de:
Salmonella enterica y las de Salmonella bongori (muy escasas en
patología humana y veterinaria) se designan con su fórmula antigénica.
Ej. Salmonella IV 50 : b : - ;Salmonella IV 44 : a : -.
� Los miembros del género Salmonella se pueden clasificar en
tres grupos:
� Los que no tienen preferencia por algún huésped, por lo que
infectan tanto al hombre como los animales. Ej: mayoría de las
serovariedades asociadas a salmonelosis.
� Los que infectan sólo al hombre, ej: Salmonella Typhi,
Salmonella Paratyphi A y Salmonella Paratyphi C.
� Los que están adaptados a un huésped animal.
Ej: Salmonella Gallinarum, a las aves ( tifus aviar); Salmonella
Abortusovis a los ovinos, S. Abortusequi a los equinos, etc
Salmonelosis: Manifestaciones ClínicasSalmonelosis: Manifestaciones Clínicas
La enfermedad en el hombreLa enfermedad en el hombre
GastroenteritisGastroenteritis
Septicemia, localizaciones Septicemia, localizaciones extraintestinalesextraintestinales (orina, bilis, (orina, bilis, abcesosabcesos) y fiebre ) y fiebre
entérica ( sangre), en pacientes entérica ( sangre), en pacientes inmunocomprometidosinmunocomprometidos..
Dosis infectiva: a partir de Dosis infectiva: a partir de 10103 3 microorganismosmicroorganismos
Período de incubación: Período de incubación: 6 a 72 hs6 a 72 hs, la gastroenteritis persiste de 24 a 72 hs., la gastroenteritis persiste de 24 a 72 hs.
La enfermedad en los animalesLa enfermedad en los animales
Puede manifestarse clínicamente ó noPuede manifestarse clínicamente ó no
Forma Forma subclínicasubclínica: el animal puede tener una infección latente: patógeno : el animal puede tener una infección latente: patógeno en sus ganglios ó ser portador y eliminar en forma transitoria, intermitente en sus ganglios ó ser portador y eliminar en forma transitoria, intermitente o persistenteo persistenteEntidades clínicas en animales domésticos: debidas a Entidades clínicas en animales domésticos: debidas a serovserov. adaptadas a . adaptadas a especies, por ej. : especies, por ej. : SalmonellaSalmonella GallinarumGallinarum, , SalmonellaSalmonella AbortusequiAbortusequi
ESQUEMA DEL MECANISMO DE PATOGENESISESQUEMA DEL MECANISMO DE PATOGENESIS
� La capacidad de Salmonella de( “ruffling “ membrana, reorganización del citoesqueleto,
interferencia de señales de transducción, replicación intracelular ,apoptosis del macrófago,
respuesta inflamatoria y secreción de fluídos) a través de proteínas que forman parte del
sistema de secreción tipo III codificadas en una isla patogenicidad SPI-1e interaccionar y
entrar a la celula huésped
Factores de virulencia deFactores de virulencia de SalmonellaSalmonella
Sistema de Secreción de tipo IIISistema de Secreción de tipo III
-- El gen El gen invinv A se encuentra dentro de la isla de A se encuentra dentro de la isla de patogenicidadpatogenicidad 1 (SPI1 (SPI--1), 1),
segmento de 40 segmento de 40 kbkb presente en el cromosoma de Salmonella presente en el cromosoma de Salmonella sppspp., y ., y codifica para un factor de codifica para un factor de invasividadinvasividad ((SsIIISsIII))
Marlovits T.C., Kubori, T., Tejero, M.-L., Thomas, D .,
Unger V.M., and Galan, J.E. (2006). Assembly of the
inner Rod determines Needle Length in the Type III
Secretion Injectisome. Nature 441, 637-640.
ALIMENTOS p/ANIMALESCONTAMINADOS
Recontaminación
MamíferosAvesPeces
ANIMALES INFECTADOS
HOMBRE
HOMBREAGUA CONTAMINADA
Salmonella: Vías de transmisión
Recontaminación de constituyentesAlimenticios (harina de hueso)
Desechoscontaminados
Mataderoscontaminados
PecesReptilesInsectos
INFECTADOS AGUA CONTAMINADA
(RIO, RIEGO, ETC.)
VEGETALES
ALIMENTOS DE ORIGEN
ANIMAL Y VEGETAL
ALIMENTOS
MANUFACTURADOS
HOMBREHOMBRE
ANIMALES
� Epidemiológicamente las infecciones por Salmonella asociados a
brotes en hospitales, jardines maternales, geriátricos, restaurantes
principalmente de origen alimentario, puede ocurrir transmisión
persona a persona.
� El estudio epidemiológico de los brotes señalan que los alimentos
más frecuentemente involucrados son: más frecuentemente involucrados son:
carne y sus derivados, huevos y alimentos lácteos.
� Entre otros alimentos asociados a infección por Salmonella :
ensaladas crudas, frutas, mayonesa, fiambres, confituras (chocolate,
tortas), hierbas y especias, harina de hueso como alimento para
animales, aguas contaminadas,entre otras.
SalmonellaSalmonella spp. spp.
� Salmonella spp. es un patógeno de transmisión alimentaria
(PTA) ampliamente reconocido.
Incorporado su búsqueda, en el área Clínica como en
Bromatología y Veterinaria, el aislamiento e identificación.
� Es necesario fortalecer la vigilancia integrada de este PTA
desde el Laboratorio en las distintas áreas, en conjunto con los
componentes de Clínica y Epidemiología
“Reglas de Oro" de la OMS para la preparación higiénica “Reglas de Oro" de la OMS para la preparación higiénica
de los alimentosde los alimentos. .
* * La OMS estima que las enfermedades causadas por alimentos La OMS estima que las enfermedades causadas por alimentos
contaminados constituyen uno de los problemas sanitarios más contaminados constituyen uno de los problemas sanitarios más
difundidos en el mundo de hoy. difundidos en el mundo de hoy.
�� 11. Elegir los alimentos tratados con fines higiénicos. Elegir los alimentos tratados con fines higiénicos
�� 2. Cocinar bien los alimentos2. Cocinar bien los alimentos
�� 3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados�� 3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados
�� 4. Guardar cuidadosamente los alimentos cocinados4. Guardar cuidadosamente los alimentos cocinados
�� 5. Recalentar bien los alimentos cocinados5. Recalentar bien los alimentos cocinados
�� 6. 6. Evitar el contacto entre los alimentos crudos y los cocinadosEvitar el contacto entre los alimentos crudos y los cocinados
�� 7. Lavarse las manos a menudo7. Lavarse las manos a menudo
�� 8. Mantener escrupulosamente limpias todas las superficies de la cocina8. Mantener escrupulosamente limpias todas las superficies de la cocina
�� 9. Mantener los alimentos fuera del alcance de insectos, roedores y otros animales9. Mantener los alimentos fuera del alcance de insectos, roedores y otros animales
�� 10. 10. Utilizar agua pura.Utilizar agua pura.
AplicándoAplicándo reglas sencillas, reducirá considerablemente el riesgo de las enfermedades de reglas sencillas, reducirá considerablemente el riesgo de las enfermedades de
origen alimentario.origen alimentario.
Diagnóstico y caracterización de Diagnóstico y caracterización de
enteropatógenosenteropatógenos bacterianos desde el LRNbacterianos desde el LRN
Muestra (origen humano, alimento, animal) Tamizaje o “Screening”
Aislamiento
� Identificación
Diagnóstico preliminar
ServicioEnterobacterias
Vigilancia de Enteropatógenos asociados a ETAPrevención y control de brotes
� Tipificación fenotípica y genotípica(serotipificación, R a ATB,factores de virulencia)
� Subtipificación fenotípica y genotípica
Análisis y comunicación de resultados
Diagnóstico confirmado
Monitoreo,investigación de brotes
MATERIA FECAL (HISOPO)
Suspensión en solución fisiológica
Caldo de enriquecimiento (1) Aislamiento en medios selectivos y diferenciales (2)
18-24 hs, 37ºC
Aislamiento en medios selectivos y diferenciales (2)
Colonias típicas (3)
TSI LIA Estría
18-24 hs, 37ºC
1er. día
2do. día
3er. día
FIGURA 1.- FLUJOGRAMA DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE
SALMONELLA spp. A PARTIR HECES
Camino II Camino I
Lectura (4)Colonias típicas (3)
TSI LIA Estría
P. bioq. (5)
Serotip. O (6)
CaldoFlagelar
Lectura (4)
P. bioq. (5)
Serotip. O (6)
18-24 hs, 37ºC
Lectura Serotip. H
3er. día
4to. día
•1- Caldo selenito
•2- Agar MacConkey y agar SS, o agar Hektoen, o agar xilosa lisina desoxicolato, o agar verde brillante. .3- Se seleccionan de 2 a 3 colonias.
•4- Si TSI y LIA dan resultados compatibles con Salmonella, se siembran Pruebas bioquímicas complementarias (P.bioq.) y se realiza la serotipificación O (Serotip. O)•5- Pruebas bioquímicas complementarias: RM-VP, decarboxilasas, dulcita, malonato.
•6- Serotipificación. Si la serotipificación somática O de las colonias, la serotipificación flagelar H debe hacerse en una sola de ellas.
PCR Múltiple para Ag somáticos y flagelares
Características bioquímicas de Salmonella spp. para la
identificación
� Bacilos Gram negativos, no fermentadores de lactosa.
� Son móviles por medio de flagelos perítricos con excepción
de Salmonella Pullorum y Salmonella Gallinarum.
� Fermentan glucosa con producción de ácido y gas � Fermentan glucosa con producción de ácido y gas
(exc . S. Typhi). También fermentan L-arabinosa, maltosa, D-manitol,
D-manosa, L-ramnosa, D-sorbitol, trehalosa, D-xilosa y D-dulcita.
� Son oxidasa negativo, catalasa positivo, indol y Voges-
Proskauer (VP) negativo y Lisina decarboxilasa, Rojo de Metilo
(RM), citrato de Simmons positivo, urea negativo y producen SH2.
ONPG -Producción de SH2 +Fermentación de glucosa *** +/con gasFermentación de dulcita *** +
Pruebas bioquímicas de Pruebas bioquímicas de Salmonella Salmonella entericaenterica
subespsubesp. . entericaenterica (I)(I) (a partir de Medios selectivos y diferenciales : (a partir de Medios selectivos y diferenciales :
agar XLD, agar SS, colonias típicas en TSA, agar XLD, agar SS, colonias típicas en TSA, TSI :K/A c /SHTSI :K/A c /SH22 e LIA: K/K)e LIA: K/K)
Pruebas bioquímicas Salmonella enterica subesp. enterica (I)
Fermentación de lactosa *** -
Fermentación de dulcita *** +Fermentación de adonita *** -Decarboxilación de lisina ** +Decarboxilación de ornitina ** +Hidrólisis de arginina ** +Hidrólisis de urea ** -Producción de indol -Hidrólisis de gelatina **** -Reacción de rojo de metilo * +Reacción de Voges Proskauer * -Citrato de Simmons ** +Utilización de malonato * -*Lectura a los 2 días; ** Lectura hasta los 4 días; *** Lectura hasta los 7 días; **** Lectura hasta los30 días
Pruebas
bioquímicas
S.
enterica
subesp.
Enterica
(I)
S.
enterica
subesp.
salamae
(II)
S.
enterica
subesp.
arizonae
(IIIa)
S. enterica
subesp.
diarizonae
(IIIb)
S.
enterica
subesp.
houtenae
(IV)
S.
enterica
subesp.
indica
(VI)
S.
bongori
(V)
Dulcita + + - - - d +
ONPG - - + + - d +
Malonato - + + + - - -
Propiedades bioquímicas diferenciales de Propiedades bioquímicas diferenciales de las subespecies de las subespecies de Salmonella Salmonella sppspp..
Malonato - + + + - - -
Gelatina - + + + + + -
Sorbita + + + + + - +
KCN - - - - + - +
L(+) tartrato + - - - - - -
Mucato + + + - (70%) - + +
Salicina - - - - + - -
Lactosa - - - (75%) + (75%) - d -
Habitat de
las cepas
Animales
de sangre
caliente
Animales de sangre fría y medio ambiente
+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos; d: diferentes
reacciones
Caracteres bioquímicos diferenciales entre
S. Typhi, S. Paratyphi A y Salmonella spp.
P. bioquimicas S. Typhi S. ParatyphiA
Salmonellaspp.
SH2 (TSI) Trazas - +
Lisina decarboxilasa + - +Lisina decarboxilasa + - +
Ornitinadecarboxilasa
- + +
Arginina dehidrolasa - - +
Gas de glucosa - + +
Citrato Simmons - - +
+ 90% ó más de los resultados positivos;- 90% ó más de los resultados negativos
Caracteres bioquímicos diferenciales entre
Salmonella enterica subesp. enterica (I) y
Proteus mirabilis (TSI: K/A con SH2; LIA:desaminado)
Pruebas bioquímicas Salmonella enterica subesp.enterica (I)
Proteus mirabilis
SH (TSI) + +SH2 (TSI) + +Hidrolisis de urea - +Fenilalanina deaminasa - +Lisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + +Lactosa - -Dulcita + -ONPG - -+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos
Caracteres bioquímicos diferenciales entre
Salmonella enterica subesp. enterica (I) y
Citrobacter freundii (TSI: A/A con SH2; LIA: K/A)
Pruebas bioquímicas Salmonella enterica subesp.enterica (I)
Citrobacter freundii
SH2 (TSI) + +
Hidrólisis de urea - D
Pruebas bioquímicas Salmonella enterica subesp.enterica (I)
Citrobacter freundii
SH2 (TSI) + +
Hidrólisis de urea - DHidrólisis de urea - DLisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + dLactosa - dSacarosa - dDulcita + dMalonato - dONPG - ++ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos; d: diferentesreacciones
Hidrólisis de urea - DLisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + dLactosa - dSacarosa - dDulcita + dMalonato - dONPG - ++ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos; d: diferentesreacciones
Caracteres bioquímicos diferenciales entre
Salmonella enterica subesp. IIIa y IIIb y
Citrobacter freundii (TSI c/SH2 y ONPG +)
Pruebas bioquímicas Salmonella subesp. entericaIIIa y IIIb
Citrobacter freundii
Lisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + - (con excepciones)Ornitina decarboxilasa + - (con excepciones)Glicerol - +Malonato + -Hidrólisis de gelatina + (lenta) -+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos
Caracteres bioquímicos diferenciales entre
Salmonella enterica subesp. enterica (I),
Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +
P. bioquímicas S. enterica subesp.enterica (I)
E. tarda E. coli SH2 +
Indol - + +Citrato Simmons + - -Citrato Simmons + - -Lisina decarbox. + + +Arginina dehidrol. + - -/+Manita + - +Dulcita + - +/-Ramnosa + - +Xilosa + - +ONPG - - +
+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos
ANTIGENOS DEL GENERO ANTIGENOS DEL GENERO SalmonellaSalmonella� El estudio de la estructura antigénica del género Salmonella
permite tipificar las bacterias que lo componen en serovariedades
� Desde epidemiología permite determinar la prevalencia de
una serovariedad en distintas zonas geográficas.
Es de utilidad en el estudio de brotes
* La serotipificación completa se basa en la determinación de los
antígenos somáticos O, los antígenos flagelares H y el antígeno
capsular Vi (si está presente).
“Esquema de Kauffmann-White – Le Minor ” (Popoff, M.Y., 8ª Ed, WHO
Centre for Referente and Research on Salmonella, Instituto Pasteur, París, Francia, 2001).
Localización de los antígenos de Localización de los antígenos de Salmonella Salmonella sppspp..
PilusPilus
CitoplasmaCitoplasma
CápsulaCápsulaAg ViAg Vi
Pared celularPared celularMembrana Membrana plasmáticaplasmática
ADNADNRibosomasRibosomas
Flagelo Flagelo bacterianobacterianoAg Ag flagelarflagelar HH
Ag Ag somáticosomático OO
1 - Antisueros polivalentes somáticos: OS-A y OS-B
2.-Para revertir una cepa de la forma rugosa a lisa, se realizan subcultivos en agar sangre o Mueller Hinton.
3.- Ver Consideraciones a tener en cuenta en "Serotipificación somática"
4.-Antisueros polivalentes
Flujograma de Serotipificacion de SSalmonella spp.Aislamiento con identificación bioquímicas de Salmonella spp.
Serotipificación somática Estría en TSA Serotipificación flagelar(aglutinación en lámina) (aglutinación en tubo)
Aglutinación con solución fisiológica Caldo flagelar
Negativa Positiva Aglutinación c/ antisuerospoliv. flagelares H (4)
4.-Antisueros polivalentes flagelares: HS-1; HS-A; HS-B; HS-C
5.-Ver Consideraciones a tener en cuenta en "Serotipificación flagelar”.
6. Si la serovariedad de Salmonella es difásica y sólo expresa una fase, realizar "Método de inversión de fases"
Aglutinación c/ Cepa Rugosa (2)antisueros poliv. Negativa (5) Positiva
somáticos (1)
Aglutinación c/ antisueros Negativa (3) Positiva de fases H / factores H (6)
Aglutinación c/ antisueros Formula antigénica H
de grupo O
Positiva
Aglutinación c/ antisuerosde factores O
Formula antigénica O
Inversión de Fase (Si es necesario)
Formula Antigénica
Esquema de White-Kauffmann-Le MinorRESULTADO FINAL
I.I.-- Antígeno somático OAntígeno somático OEXPRESIÓN DEL ANTIGENO OEXPRESIÓN DEL ANTIGENO O
La estructura somática se denomina con la letra O seguida La estructura somática se denomina con la letra O seguida de de : : “dos puntos” y luego de números arábigos separados “dos puntos” y luego de números arábigos separados por comaspor comasPor ejemplo:Por ejemplo:
S. S. TyphimuriumTyphimurium O:O:11,4,[5],12,4,[5],12S. S. EnteritidisEnteritidis O:O:11,9,12,9,12S. S. EnteritidisEnteritidis O:O:11,9,12,9,12
Los Los símbolos para los factores somáticos determinados por conversión símbolos para los factores somáticos determinados por conversión fágicafágicaestán subrayados (por ej. están subrayados (por ej. 11,9,12),9,12)[ ] = los factores O entre corchetes, no subrayados, pueden estar presentes o [ ] = los factores O entre corchetes, no subrayados, pueden estar presentes o ausentes sin relación con la conversión ausentes sin relación con la conversión fágicafágica. Por ej. factor [5] del grupo O:4 . Por ej. factor [5] del grupo O:4 (B).(B).
Estructura antigénica O + Estructura antigénica HEstructura antigénica O + Estructura antigénica H
Fórmula antigénica Fórmula antigénica (Esquema de (Esquema de KauffmannKauffmann--White) White)
Unas pocas serovariedades de Salmonella spp. poseen una sola fase
flagelar, esos aislamientos se denominan monofásicosEjemplo: Salmonella Enteritidis ( 9,12:g,m:- )
Salmonella Typhi ( 9,12 [Vi]:d:- )
II.II.-- ANTÍGENO FLAGELAR HANTÍGENO FLAGELAR HEXPRESIÓN DEL ANTÍGENO H EXPRESIÓN DEL ANTÍGENO H
La gran mayoría de las serovariedades tienen dos especificidades o dos fases en su antígeno flagelar o sea son aislamientos difásicos. En el Esquema de White- Kauffmann – Le Minor , ambas fases separadas por :
“dos puntos”Ejemplo: Salmonella Typhimurium ( 4,5,12:i:1, 2)
Estructura antigénica O + Estructura antigénica H
Fórmula antigénica (Esquema de Kauffmann-White)
Ejemplo: Salmonella Typhimurium ( 4,5,12:i:1, 2) Salmonella Newport ( 6,8:e,h:1,2 )
1.- La fase 1 (identificada en los ej. por las fases: i ó e,h se denominan con letras separadas por comas) 2.- La fase 2 (identificada en los ej. por las fases: 1,2 se denominan con números arábigos o letras separados por comas ).
[ ] = Cuando los factores H están entre corchetes se encuentran excepcionalmente en cepas salvajes.
VARIACION DE FASEVARIACION DE FASE
Es la variación reversible de los antígenos H.
Ocurre en el género Salmonella (Fase 1 y Fase 2)
VARIACIONES FLAGELARESVARIACIONES FLAGELARES
Ocurre en el género Salmonella (Fase 1 y Fase 2)
La gran mayoría de las serovariedades son difásicas:
pueden expresar alternativamente antígenos
flagelares de dos especificidades.
FlujogramaFlujograma de Inversión de Fasede Inversión de FaseSerotipificaciónSerotipificación somática O (O: 4,5,12)somática O (O: 4,5,12)
Si la población expresa flagelos de fase 1 (H:i)
Si la población está balanceada Fase 1 (H:i) y Fase 2 (H:1,2)
Serotipificación flagelar H
Si la población expresa flagelos de fase 2 (H:1,2)
Fórmula antigénica: O:4,5,12 H:i:1,2 (Esquema de Kauffmann-White- Le Minor )
Salmonella Typhimurium
Inversión de fase con antisuero H:i
Se inmoviliza la Fase 1 y se expresa fase 2
Inversión de fase con antisuero H:1,2
Se inmoviliza la Fase 2 y se expresa fase 1
Método de Inversión en Placa de Método de Inversión en Placa de AgarAgar Movilidad (Movilidad (SwarmSwarm AgarAgar))
Siembra del inóculo
Recolección del desarrollo
Agar movilidad (Swarm Agar) + 2 gotas de Antisuero para Inversión de Fase
Método de Inversión en Método de Inversión en Tubo Tubo de de CraigieCraigie
Siembra del Inóculo
Recolección del desarrollo
Agar movilidad Craigie + 2 gotas de Antisuero
para Inversión de Fase
Antisueros Antisueros para el diagnóstico de Enterobacterias para el diagnóstico de Enterobacterias distribuídosdistribuídos por la ANLIS a las Redes de Diarreas por la ANLIS a las Redes de Diarreas
BacterianasBacterianas
Salmonella
Antisueros Somáticos Antisueros Flagelares
Polivalentes Factores Polivalentes Factores Inversión de fase
OSA-OSB O4,5-O9-O7 HSA-HSB-HSC-HS1 Hm-Hi-Hr-H2-H5 Hi-Hr-H1
� Carga de los aislamientos de Salmonella en Red Whonet a nivel� Carga de los aislamientos de Salmonella en Red Whonet a nivelde grupo según el esquema de KAUFFMANN-WHITE-LE MINOR (códigos asignados ) y serotipificación completa:
grb: Salmonella Grupo B (O:4). Ej: S. Typhimurium (sam)
gc1: Salmonella Grupo C1 (O:7). Ej: S. Infantis (inf)
gc3: Salmonella Grupo C3 (O:8). Ej: S. Newport (sne)
gd1: Salmonella Grupo D1 (O:9) Ej: S. Enteritidis (sen)
Polivalente Factor Inversión de fase (si corresponde)
(-)
(-)
OSA (+) O4,5 (+) Compatible con S. Typhimurium,
evaluar antígenos flagelares Grupo O4
O9 (+) Compatible con S. Enteritidis,
evaluar antígenos flagelares Grupo O9
OSB (+) O7 (+) Compatible con S. Infantis,
evaluar antígenos flagelares Grupo O7
(-)
O8 (+) Compatible con S. Newport,
evaluar antígenos flagelares Grupo O8
FLUJOGRAMA DE ANTISUEROS
Aglutinación antígenos somáticos
Aglutinación antígenos flagelaresAntisueros polivalentes = HSA, HSB, HSC, HS1.
Antisueros factores = H:i, H:h, H:m, H:r, H:2, H:5
PCR m: B���� O:4C1���� O:7C2���� O:8D���� O:9E���� O:3,10
HSA (+) H:i (+) repetir esquema ag.
flagelares inversión de fase con
antisueros de inversión H:i
HSB (+) H:h (+) repetir esquema ag.
flagelares inversión de fase con
antisueros de inversión
H:e,h
H:m (+)
HSC (+) H:r (+) repetir esquema ag.
flagelares inversión de fase con
antisueros de inversión H:r
repetir esquema ag.
flagelares inversión de fase con
antisueros de inversión H:1
repetir esquema ag.
flagelares inversión de fase con
antisueros de inversión H:1 H:2 (+) HS1 (+)
H:5 (+)
Antisueros factores = H:i, H:h, H:m, H:r, H:2, H:5
Antisueros para Inversión de fase: H:i, H:e,h, H:r , H:1
PCR m flagelares : H:iH:rH:l,vH:e,hH:z10H:bComplejo G:
PrimeraPrimera parte: parte: ImplementaciónImplementación
PCR PCR grupogrupo “O“O”” ( CDC( CDC-- InstInst Salud Carlos III )Salud Carlos III )
**TesteoTesteo de los de los gruposgrupos: : dirigidadirigida a los genes a los genes wzxwzx encontradaencontrada
en en todostodos los genes O de los genes O de laslas SalmonellasSalmonellas testeadastesteadas, ,
se se diferenciandiferencian entre entre ellasellas porpor algunosalgunos pares de pares de nucleótidosnucleótidos
���������� BB�������� O:4O:4 (F(F--wzxBwzxB, R, R--wzxBwzxB))
�� C1C1�������� O:7O:7 (F(F--wzxC1, RwzxC1, R--wzxC1)wzxC1)
�� C2C2�������� O:8O:8 (F(F--wzxC2, RwzxC2, R--wzxC2)wzxC2)
�� DD�������� O:9O:9 (F(F--tyvDtyvD, R, R--tyvDtyvD))
�� EE�������� O:3,10O:3,10 (F(F--wzxE1, RwzxE1, R--wzxE1)wzxE1)
Primer parte: PCR Primer parte: PCR parapara
antígenosantígenos somáticossomáticos�� Se divide en dos:Se divide en dos:
1.1. PCR “Multiplex” PCR “Multiplex”
gruposgrupos: O:4; O:9; O:8 : O:4; O:9; O:8 Paso 1 94ºC 2min
Paso 2 95ºC 1min
Ciclado de la reacción
gruposgrupos: O:4; O:9; O:8 : O:4; O:9; O:8
y O:3,10y O:3,10
2.2. ““SingleplexSingleplex” ” grupogrupo
O:7O:7
Paso 2 95ºC 1minPaso 3 58ºC 1min 30 ciclosPaso 4 72ºC 2minPaso 5 72ºC 7min
Paso 6 4ºC ---
CT(-)
SelecciónSelección de de controlescontroles
�� SeSe seleccionaronseleccionaron dede cadacada grupogrupo 33 aa 44 controlescontroles positivospositivos yy
22 controlescontroles negativosnegativos,, pertenecientespertenecientes alal EQASEQAS yy dede lala coleccióncolección dedecultivocultivo deldel ServicioServicio dede ETBETB..
CONTROLES PCR Salmonella 1er parte:
Rótulo Aislamiento
GRUPO (B) O:4
CT3 STM
S. Typhimurium EQAS 2014
CT9 SDER S. Derby 3.2 EQAS 2002
CT1SAGN S.Agona 291/14
CT13SSAN
GRUPO €O:3,10
CT20 SANA S. Anatum 332/14
CT19 SWEST S. Westhampton 521/14
CT21 SGIV S. Give Who 5.1 EQAS 2004
CT10 SE S. Enteritidis EQAS 2014CT13SSAN
D S. Sandiego 1261/14
GRUPO (C1) O:7
CT15 SINF S. Infantis EQAS 2001
CT16 SMBAN
S. Mbandaka Who 5,7 EQAS 2004
CT7 SBRAND
S. Braenderup CDC H9812
CT5 SOHI S. Ohio EQAS 2014
GRUPO (C2) O:8
CT12 SNEW S. Newport EQAS 2001
CT4 SHAD S. Hadar EQAS 2014
CT6 SKEN S. Kentucky EQAS 2014
CT17 SCOR
S. Corvalis Who 5.6 EQAS 2004
Grupo (D) 0:9
CT11 SPAN S. Panama EQAS 2003
CT14 SDUB S.Dublin EQAS 2001
CT2 SGALL S. Gallinarum 421/14
CT -
CT18 SCER S. Cerro Who4.5 EQAS 2003
CT8 SWORT S. Worthington 867/14
SegundaSegunda Parte: Parte: ImplementaciónImplementación PCR PCR
fasefase flagelarflagelar II
DirigidosDirigidos a los genes a los genes flifliCC queque codificancodifican laslas flagelinasflagelinasde la de la fasefase I. I.
�� Primers ReversePrimers Reverse: r, I, : r, I, lvlv, G, z10, , G, z10, SdfSdf, eh, b y d., eh, b y d.
�� Primers ForwardPrimers Forward: P60, G, : P60, G, SdfSdf y d.y d.
�� Primers Primers SdfSdf: : específicosespecíficos de de SS. . EnteritidisEnteritidis
�� H:iH:i�� H:iH:i
�� H:rH:r
�� H:l,vH:l,v
�� H:e,hH:e,h
�� H:z10H:z10
�� H:bH:b
�� ComplejoComplejo GG: f, g, m, p, s, t, q, u, m, t (no g), z51, z62, : f, g, m, p, s, t, q, u, m, t (no g), z51, z62, z63 y z85.z63 y z85.
Ensayos de PCR estandarizados para Salmonella spp. aplicado en muestras
Nombre de la
TécnicaBlanco Método Tipo de muestra Requerimientos.
Tiempo de
procesamiento
Especificidad/
Sensibilidad
PCR
invA ( factor de
invasividad a nivel
cromosomal).
PCR simple
Prueba de tamizaje
con CIA para aplicar
en muestras de
alimentos
Muestras de
alimento y
aislamiento?
Detección en
muestras de
alimentos, previo
enriquecimiento en
APT, luego de 18 h de
incubación a 37°C
E: 100%
Recientemente se
observó que
algunas cepas de
la serovariedad
Saintpaul no
poseen el gen Salmonella spp. cromosomal).
(Malorny et al,2003)
poseen el gen
invA) (Malorny y
col., 2004)
S: 1 UFC / 25 g,
103 UFC en tubo
de reacción
PCR Real Time
para Salmonella
spp.ttr (metabolismo
respiratorio)
( Malorny et al, 2004)
PCR Real Time
Prueba de tamizaje
Muestras de
alimento
Detección en
muestras de
alimentos, previo
enriquecimiento en
APT, luego de 18 h de
incubación a 37°C
E: 100%
� PCR permite un diagnóstico presuntivo rápido, específico y confiable ,compatible con las necesidades diagnósticas, a confirmar con el aislamiento del microorganismo .
� Ensayo de PCR que incluye un IAC para detectar fallas en amplificación.( Malorny, 2003) . Trabajo colaborativo de
Aplicación de PCR “screening “ o tamizaje en muestras
amplificación.( Malorny, 2003) . Trabajo colaborativo de Enterobacterias- INEI “C.G.Malbrán”- Dirección de Higiene y Seguridad Alimentaria del Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires
� Herramienta alternativa útil para descarte de las muestras negativas a nivel de la industria alimentaria y monitoreo de muestras .
� En desarrollo� Implementación de una PCR para serotipificación de Salmonella (Herrera L; JCM 2004,Research M, 2007, Inst Salud Carlos III );
incluyendo las serovariedades más frecuentes: * PCR para antígenos somáticos (O) y flagelares (1ra y 2da fase):
STM, SE, SN, SINF, STM, SE, SN, SINF, STM, SE, SN, SINF, STM, SE, SN, SINF, SSSS. . . . AgonaAgonaAgonaAgona, , , , S S S S Mbandaka, Mbandaka, Mbandaka, Mbandaka, SSSS Montevideo, Montevideo, Montevideo, Montevideo, SSSS AnatumAnatumAnatumAnatum, , , , SSSS Derby, Derby, Derby, Derby, S S S S OranienburgOranienburgOranienburgOranienburg y otrasy otrasy otrasy otras
� Se utilizará como técnica alternativa, y validada como
“screening” de serotipificación en LRN y a transferir a
laboratorios de la RND
� Desde LRN , secuenciación genómica , en aislamientos
de brotes y/ó cepas emergentes con nuevas características
de virulencia y/ó resistencia.
Figura - Diarreas bacterianas, agentes identificados
por semana epidemiológica 2014. N=6200. Argentina.
VigilanciaVigilancia enen ArgentinaArgentina
Fuente: SIVILA.
Figura 6 a.- Casos positivos para distintos
géneros bacterianos según serotipos y serogrupos,
notificados en el agrupado. Total país. SE 1 a 53 de 2014.
SIVILA
Se notificaron al LRN 2009 al 2014:
* Aislamientos esporádicos de casos humanos, de alimento, alimento paraanimales, animal y ambiental.
• Brotes: 16 de Salmonella Typhimurium (STM)
9 de Salmonella Enteritidis (SE)
2 de Salmonella Chester
1 de Salmonella Heidelberg (intrahosp)
1 de Salmonella Typhimurium (intrahosp)
� De los brotes estudiados, se aisló Salmonella spp. de los
pacientes y del alimento elaborados: pacientes y del alimento elaborados: salame, canelones de verdura y carne,
milanesa de pollo, pernil de vaca y en domicilios familiares tiramisú, torta, vitel
toné, ensalada rusa, mouse.
� 2011 Estudio prospectivo para detección temprana de brotes en
colaboración con la Univ Harvard, USA en 6 provincias de la región
centro-sur con el software SaTScan- plataforma WHONET.
Se registró un aumento en el n de brotes
microorganismo derivado (RND)
Total (n)
Shigella 60 15S. flexneri 1 (2), S. flexneri 2 (2), S. flexneri 3 (4), S. flexneri AA479 (3). 23 S. flexneri 2 19 (1 E. coli ), 3 no viables
Serotipificación obtenida (n) No Serotipificado / Incorrecta serotipificación
Tabla. Análisis de los aislamientos recibidos en el LRN en 2014 del LCSP de Chaco
Análisis de la vigilancia desde el LRN de los aislamientos de Salmonella y Shigella del LCSP del Chaco en el marco de la RND
S. flexneri 3 (4), S. flexneri AA479 (3). S. sonnei (4)
Salmonella 22 12 S. Typhimurium (1), S. Enteritidis (8), S. Newport (3)
8 Salmonella spp.1 1 (S . Braenderup), 1 no viable
Salmonella spp.1: S. Javiana, S. Derby, S. Newport, S. Panama, S. Ohio, S. Arechavaleta.
S. flexneri2 : S. flexneri AA479 (15); S. flexneri Y (3), S. flexneri X (1), S. flexneri 1 (3), S. flexneri 3 (1).
Ejemplos de aplicación de Ejemplos de aplicación de
Epidemiología MolecularEpidemiología Molecular
en vigilancia de ETAen vigilancia de ETAen vigilancia de ETAen vigilancia de ETA
Aplicación de PFGE en el marco Aplicación de PFGE en el marco
de la Red de la Red PulseNetPulseNet Internacional Internacional St St St
St: cepa estándard
BROTES de BROTES de Salmonella Salmonella EnteritidisEnteritidis en en Argentina Argentina
Número de Provincia Localidad Sitio de Origen Patrón Fagotipo
Aislamiento Aislamiento Nacional
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1 .5%) (H>0 .0% S>0 .0%) [0.0%-100.0%]PFGE-Xba I
100
95
90
PFGE-XbaI
SE645/05
SE767/04
SE1702/04
SE1703/04
SE1704/04
SE1705/04
SE1706/04
SE1707/04
SE1850/04
SE1851/04
SE1852/04
SE1853/04
Mendoza
Buenos Aires
Tierra del Fue.
Tierra del Fue.
Tierra del Fue.
Tierra del Fue.
Tierra del Fue.
Tierra del Fue.
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Mendoza
La Plata
Ushuaia
Ushuaia
Ushuaia
Ushuaia
Ushuaia
Ushuaia
San Miguel de Tucu.
San Miguel de Tucu.
San Miguel de Tucu.
San Miguel de Tucu.
Stool
Sandwich
Pasta
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Mayonnaise
Mayonnaise
Stool
Stool
Human
Food
Food
Human
Human
Human
Human
Human
Food
Food
Human
Human
ARJEGX01.0013
ARJEGX01.0010
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
SE type 21
SE type 21
SE type 21
SE type 21
SE type 21
SE type 21
SE type 4
SE type 4
SE type 4
SE type 4
Brote 1
Brote 2
SE1853/04
SE1876/04
SE1877/04
SE1878/04
SE1881/04
SE532/05
SE617/06
SE1224/05
SE1225/05
SE762/04
SE1075/06
SE1874/04
SE1875/04
SE144/73
SEAlbis/72
SE168/04
SE2092/07
SE1064/07
SE1023/90
Tucumán
Buenos Aires
Mendoza
Mendoza
Mendoza
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Cordoba
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Neuquen
Cordoba
Buenos Aires
San Miguel de Tucu.
Buenos Aires
Mendoza
Mendoza
Mendoza
Bahía Blanca
Capital Federal
San Justo
San Justo
Balcarce
Cordoba
Buenos Aires
Buenos Aires
Capital Federal
Capital Federal
Neuquen
Cordoba
Capital Federal
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Blood
Blood
Egg
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Human
Human
Human
Human
Food
Human
Human
Human
Human
Food
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0001
ARJEGX01.0014
ARJEGX01.0014
ARJEGX01.0005
ARJEGX01.0005
ARJEGX01.0012
ARJEGX01.0011
ARJEGX01.0011
ARJEGX01.0011
ARJEGX01.0003
ARJEGX01.0003
ARJEGX01.0009
ARJEGX01.0023
ARJEGX01.0024
ARJEGX01.0002
SE type 4
SE type 4
SE type 4
SE type 4
SE type 4
SE type 4
SE type 4
Brote 3
Brote 4
BROTES Salmonella Typhimurium
Brote A
10
0
95
9085
80
STM1205/05
STM1865/05
STM1676/05
STM1734/05
STM1735/05
STM1736/05
STM1737/05
STM1738/05
STM1739/05
STM1740/05
STM1741/05
STM121/06
STM3069/98
STM2216/98
Rio Negro
Tucumán
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
Buenos Aires
Buenos Aires
Mendoza
Viedma
San Miguel de Tucum.
25 de Mayo
25 de Mayo
25 de Mayo
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
25 de Mayo
Gran Buenos Aires
La Plata
Mendoza
Materia Fecal
Materia Fecal
Queso de cerdo
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Queso de cerdo
Queso de cerdo
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Humano
Humano
Alimento
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Alimento
Alimento
Humano
Humano
Humano
Nº de Aislamiento
Provincia Localidad Sitio de Aislamiento
Origen
Brote A
10
0
95
9085
80
STM1205/05
STM1865/05
STM1676/05
STM1734/05
STM1735/05
STM1736/05
STM1737/05
STM1738/05
STM1739/05
STM1740/05
STM1741/05
STM121/06
STM3069/98
STM2216/98
Rio Negro
Tucumán
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
Buenos Aires
Buenos Aires
Mendoza
Viedma
San Miguel de Tucum.
25 de Mayo
25 de Mayo
25 de Mayo
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
25 de Mayo
Gran Buenos Aires
La Plata
Mendoza
Materia Fecal
Materia Fecal
Queso de cerdo
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Queso de cerdo
Queso de cerdo
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Humano
Humano
Alimento
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Alimento
Alimento
Humano
Humano
Humano
Nº de Aislamiento
Provincia Localidad Sitio de Aislamiento
Origen
10
0
95
9085
80
STM1205/05
STM1865/05
STM1676/05
STM1734/05
STM1735/05
STM1736/05
STM1737/05
STM1738/05
STM1739/05
STM1740/05
STM1741/05
STM121/06
STM3069/98
STM2216/98
Rio Negro
Tucumán
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
La Pampa
Buenos Aires
Buenos Aires
Mendoza
Viedma
San Miguel de Tucum.
25 de Mayo
25 de Mayo
25 de Mayo
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
Santa Isabel
25 de Mayo
Gran Buenos Aires
La Plata
Mendoza
Materia Fecal
Materia Fecal
Queso de cerdo
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Queso de cerdo
Queso de cerdo
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Humano
Humano
Alimento
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Alimento
Alimento
Humano
Humano
Humano
Nº de Aislamiento
Provincia Localidad Sitio de Aislamiento
Origen
Brote en la
comunidad
STM2216/98
STM1018/05
STM10/06
STM149/06
STM1256/05
STM1592/05
STM1354/05
STM1612/05
STM278/02
STM1080/05
STM1319/04
STM607/06
STM608/06
STM609/06
STM610/06
STM611/06
STM612/06
STM613/06
Mendoza
Buenos Aires
Buenos Aires
La Pampa
Santa Fe
Corrientes
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Mendoza
Gran Buenos Aires
Azul
Santa Rosa
Rafaela
Corrientes
Azul
Azul
La Plata
Capital Federal
Azul
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Humano
Ambiental
Animal
Humano
Humano
Humano
Animal
Animal
Humano
Humano
Animal
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Brote B
STM2216/98
STM1018/05
STM10/06
STM149/06
STM1256/05
STM1592/05
STM1354/05
STM1612/05
STM278/02
STM1080/05
STM1319/04
STM607/06
STM608/06
STM609/06
STM610/06
STM611/06
STM612/06
STM613/06
Mendoza
Buenos Aires
Buenos Aires
La Pampa
Santa Fe
Corrientes
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Mendoza
Gran Buenos Aires
Azul
Santa Rosa
Rafaela
Corrientes
Azul
Azul
La Plata
Capital Federal
Azul
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Humano
Ambiental
Animal
Humano
Humano
Humano
Animal
Animal
Humano
Humano
Animal
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
STM2216/98
STM1018/05
STM10/06
STM149/06
STM1256/05
STM1592/05
STM1354/05
STM1612/05
STM278/02
STM1080/05
STM1319/04
STM607/06
STM608/06
STM609/06
STM610/06
STM611/06
STM612/06
STM613/06
Mendoza
Buenos Aires
Buenos Aires
La Pampa
Santa Fe
Corrientes
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Mendoza
Gran Buenos Aires
Azul
Santa Rosa
Rafaela
Corrientes
Azul
Azul
La Plata
Capital Federal
Azul
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Faimallá
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Materia Fecal
Humano
Ambiental
Animal
Humano
Humano
Humano
Animal
Animal
Humano
Humano
Animal
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Humano
Brote B
Brote
familiar
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1 .5%-1 .5 %) (H>0 .0% S>0.0% ) [0 .0%-100 .0 %]
PFGE-XbaI
100
PFGE -XbaI
STM1399/14
STM1409/14
STM1410/14
STM1411/14
STM1412/14
Rosario
Rosario
Rosario
Rosario
Rosario
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Human
Human
Human
Human
Human
2014-07 -19
2014-09 -21
2014-09 -26
2014-09 -26
2014-09 -29
A RJPXX01.0344
A RJPXX01.0344
A RJPXX01.0344
A RJPXX01.0344
A RJPXX01.0344
NºAislamiento Ciudad Origen F. aislamiento Patrón XbaI
Salmonella enterica ser. Typhimurium con el mismo perfil de resistencia, sospecha de brote intrahospitalariojulio- setiembre- octubre 2014
100% de similitud
STM1413/14
STM1414/14
STM1415/14
STM1416/14
Rosario
Rosario
Rosario
Rosario
Stool
Stool
Stool
Stool
Human
Human
Human
Human
2014-09 -29
2014-10 -06
2014-10 -06
2014-09 -26
A RJPXX01.0344
A RJPXX01.0344
A RJPXX01.0344
A RJPXX01.0344
� En el análisis con la enzima primaria XbaI se observó un único perfil genético y nuevo en la Base de Datos Nacional (BDN) de Salmonella spp
Figura 1. Dendograma de relación genética con la enzima primaria XbaI analizado con el coeficiente Dice de los 9 aislamientos S. Typhimuriumasociados a la sospecha de brote intrahospitalario de la ciudad de Rosario.
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-BlnI
100
PFGE-BlnI
STM1411/14
STM1412/14
STM1409/14
STM1410/14
STM1399/14
2014-09-26
2014-09-29
2014-09-21
2014-09-26
2014-07-19
ARJPXX01.0344
ARJPXX01.0344
ARJPXX01.0344
ARJPXX01.0344
ARJPXX01.0344
ARJPXA26.0020
ARJPXA26.0020
ARJPXA26.0021
ARJPXA26.0021
ARJPXA26.0022
Figura 2. Dendograma de relación genética con la enzima secundaria BlnI analizado con el coeficiente Dice de 5 de los 9 aislamientosS. Typhimurium asociados a la sospecha de brote intrahospitalario de la ciudad de Rosario.
93% de similitud
�� Las IH prolongan la estadía del paciente en el hospital, Las IH prolongan la estadía del paciente en el hospital, contribuyen al incremento de costos y a la contribuyen al incremento de costos y a la emergencia y emergencia y diseminación a la comunidad de resistencia a los diseminación a la comunidad de resistencia a los antimicrobianosantimicrobianos..
�� El hallazgo de El hallazgo de SalmonellaSalmonella spp. spp. si si persiste persiste indica indica la la importancia de sostener importancia de sostener las medidas de prevención y las medidas de prevención y importancia de sostener importancia de sostener las medidas de prevención y las medidas de prevención y control en el hospitalcontrol en el hospital..
�� PFGE PFGE permitió la confirmación de estos brotespermitió la confirmación de estos brotes, , evaluar evaluar la persistencia de subtipos genéticos la persistencia de subtipos genéticos para para tomar medidas de prevención y evaluar la diseminación tomar medidas de prevención y evaluar la diseminación de estas cepas en la de estas cepas en la comunidad.comunidad.
Estudio epidemiológico de la provincia de Estudio epidemiológico de la provincia de
Neuquén Neuquén Brote de Brote de S.S. Typhimurium Typhimurium
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-XbaI10
0PFGE-XbaI
STM293/13
STM294/13
STM295/13
STM296/13
STM297/13
STM298/13
STM299/13
STM300/13
STM301/13
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-15
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
Nº Aislamiento Procedencia Ciudad Origen Fecha Patrón PFGE XbaI
Brote de S. Typhimurium en Neuquén.Evento festivo en Marzo 2013 con Estudio de Epidemiología y alimento por Bromatología
STM301/13
STM302/13
STM411/13
STM412/13
STM431/13
STM432/13
STM46/13
STM320/13
STM321/13
STM322/13
Hosp Castro Rendon
Hosp Castro Rendon
Hospital Heller
Hospital Heller
Hospital Junín de los And.
Hospital Junín de los And.
Hospital Heller
Hospital Área Cipolletti
Hospital Zatti
Hospital Zatti
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Junin de los A.
Junin de los A.
Neuquén
Cipolletti
Viedma
Viedma
Human
Human
Food
Food
Human
Human
Human
Human
Human
Human
2013-03-15
2013-03-15
2013-03-22
2013-03-22
2013-03-25
2013-03-25
2013-01-11
2013-03-19
2013-03-19
2013-03-19
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
ARJPXX01.0065
Figura 1. Dendograma de relación genética analizado con el coeficiente de Dice y la enzima XbaI de aislamientos de Salmonella Typhimurium aisladas de un brote de la ciudad de Neuquén y otras esporádicas de la zona que presentaron igual perfil de resistencia. Patrón electroforético con una frecuencia del 9,5% en la BDN desde 2005, asociado a brotes en la Región (2007, 2009, 2010, 2011)
Aislamientos de S. Typhimurium procedentes del brote de Neuquén.� resistencia a cefalosporinas de tercera generación debida a la producción de AMPc
plasmídico.
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]PFGE-XbaI
100
95908580
PFGE-XbaI
ST1026/02
ST250/03
ST 1617/04
ST 805/02
Salta
Salta
Buenos Aires
Buenos Aires
Salmonella Typhi (Cluster 2004)
� Entre el 31 de julio y el 6 de agosto de 2004, 3 aisl. de S. Typhi de hemocultivos de
3 pacientes procedentes de la prov. de Buenos Aires.
ST 805/02
ST 1389/04
ST 1390/04
ST1388/04
ST1713/04
ST 1309/04
ST659/01
ST 472/01
ST425/03
ST 1134/01
ST256/02
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Buenos Aires
Rio Negro
Misiones
Rio Negro
Jujuy
Cluster 2004
�La recepción en el LRN en un período tan breve de tiempo y procedentes de una misma zona resultó de interés y se estudió por PFGE
100
959085
8075
ST M1009/05
ST M2187/05
ST M141
ST M1256/05
ST M1778/05
ST M1779/05
ST M1780/05
ST M1781/05
ST M1782/05
ST M1783/05
ST M1784/05
ST M1785/05
.
.
.
.
Argentina
Argentina
Colombia
Argentina
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
2005
2005
1999
2005
2004
2004
2004
2004
2004
2004
2004
BDR(Pulsenet -América Latina y El Caribe)* Aplicación de PFGE en la identificación y monitoreo de diseminación de un clon patogénico * Aplicación de PFGE en la identificación y monitoreo de diseminación de un clon patogénico SS. . TyphimuriumTyphimurium multiresistentesmultiresistentes DT104 con el mismo perfil de resistencia AMP, C, TE, S and SXT de Costa Rica (2004-2005), Argentina (2005) y Colombia (1998-1999) de origen humano y animal
ST M1786/05
ST M1787/05
ST M1788/05
ST M1789/05
ST M1790/05
ST M1791/05
ST M121
ST M24
ST M271
ST M200
ST M1676/05
ST M1080/05
ST M1319/04
ST M1114/04
.
.
.
.
.
.
.
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Costa Rica
Colombia
Colombia
Colombia
Colombia
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
.
.
.
.
.
.
.
.
2005
2005
2005
2005
2005
2005
1999
1998
2005
2003
2005
2005
2004
2004
�PFGE - XbaI determinó un mismo patrón entre los aislamientos de S. Typhimurium de Costa Rica y Argentina con el mismo patrón de resistencia, y 93% de similaridad con los aislamientos de Colombia con un perfil de resistencia a Amp,Te,SXT
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-XbaI
100
95
90
85
PFGE-XbaI
ARG__SE1225/05
ARG__SE1915/98
ARG__1251/07
ARG__1255/07
ARG__1256/07
ARG__1259/07
ARG__1262/07
ARG__1267/07
ARG__1280/07
ARG__1302/07
ARG__SE1222/05
ARG__SE1673/04
ARG__SE1674/04
ARG__SE1770/05
ARG__SE1852/04
ARG__SE1853/04
Argentina
Argentina
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
San Justo
Buenos Aires
Itaugua
Itaugua
Itaugua
Itaugua
Itaugua
Itaugua
Itaugua
Itaugua
Paraná
San Miguel de T.
San Miguel de T.
Santa Fe
San Miguel de T.
San Miguel de T.
Blood
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
2007-10-07
2007-10-07
2007-10-08
2007-10-08
2007-10-08
2007-10-07
2007-10-08
2007-10-07
2005-02-17
.
ALJEGX01.0008
ALJEGX01.0008
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
Dendograma de aislamientos de S. Enteritidis asociadosa un brote alimentario en Paraguay en 2007.
Brote Paraguay
Aislamiento Pais Ciudad Serov. Origen Fecha aisl. Nº patrón AL
ARG__SE1853/04
ARG__SE1876/04
ARG__SE194/04
ARG__SE428/98
ARG__SE467/08
ARG__SE661/05
ARG__1304/07
ARG__SE645/05
ARG__SE672/06
ARG__SE1075/06
ARG__SE1874/04
ARG__SE1875/04
ARG__SE1981/05
ARG__SE217/05
ARG__SE1307/05
ARG__SE94/05
ARG__SE144/73
ARG__SEAlbis/72
ARG__SE168/04
ARG__SE2092/07
ARG__SE1385/88
ARG__SE1922/90
ARG__SE994/90
ARG__SE115/91
ARG__SE634/91
ARG__SE1638/90
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Paraguay
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
San Miguel de T.
Buenos Aires
Buenos Aires
Capital Federal
Santa Fe
Santa Rosa
Itaugua
Mendoza
Junín
Cordoba
Buenos Aires
Buenos Aires
Córdoba
Mendoza
Gran Buenos Air.
Capital Federal
Capital Federal
Capital Federal
Neuquen
La Plata
Capital Federal
La Plata
Santa Fe
Capital Federal
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Blood
Stool
Stool
Stool
Stool
Human
Human
Human
Human
Food
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
2008-03-12
2005-03-02
2007-10-07
2005-01-29
2005-04-04
2005-01-06
2007-11-20
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0001
ALJEGX01.0017
ALJEGX01.0003
ALJEGX01.0005
ALJEGX01.0004
ALJEGX01.0004
ALJEGX01.0004
ALJEGX01.0004
ALJEGX01.0004
ALJEGX01.0007
ALJEGX01.0006
ALJEGX01.0015
ALJEGX01.0015
ALJEGX01.0009
ALJEGX01.0010
ALJEGX01.0011
ALJEGX01.0011
ALJEGX01.0012
ALJEGX01.0013
ALJEGX01.0014
ALJEGX01.0016
Diapositiva 59
m2 Al comparar en la BDR , el patrón encontrado en Paraguay coincide con el patrón más frecuente de Argentinamrvinas, 13/02/2009
% de NS en Salmonella spp. Red WHONET-Arg Años 2010-11 (N=1.104)
60
80
100
%
2010
2011
Resistencia a antimicrobianos Resistencia a antimicrobianos –– Red WHONETRed WHONET--ARG ARG
(2010(2010--2011)2011)
0
20
40
AMP SXT NAL CIP CHL FOS CTX ESBL
Antibiótico
2011
Salmonella spp. (N=1104): se mantuvo sensible a la mayoría de los antimicrobianos, se observó un aumento en la R a ác. nalidíxico (NAL) respecto al período 2007-2008 (10.6% vs 3.8%) sin resistencia a CIP, lo que correspondería a un fenotipo de sensibilidad disminuida a fluorquinolonas.
* Fenotipos inusuales determinados en el LNR: 7 aislamientos de Salmonellaspp. con AmpC plasmídico tipo CIT y 1 Salmonella spp. con fenotipo debetalactamasa de espectro extendido CTX-M y PER.
• En caso de infecciones sistémicas se prueban las mismas drogas que • En caso de infecciones sistémicas se prueban las mismas drogas que un BGN de infección intrahospitalaria.
• Sólo se informa el antibiograma en aislamientos de Salmonella Typhi ó Paratyphi.• En los casos de infecciones causadas por Salmonella no Typhi sólo se informa si provienen de: Localizaciones Extraintestinales o Materia fecal (niños menores de 6 meses, gerontes, inmuno comprometidos y pacientes con prótesis).
- CEFPODOXIMA: marcador de R a cefalosporinas de 3era generación (C3G). Si da R se
deben probar discos de C3G, AMC y cefoxitina para confirmar BLEE ó AmpC plasmídica.Servicio ANTIMICROBIANOS
INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran
� La vigilancia a través de RND y PTA ( H y A) y Red para la Vigilancia
de la Resistencia a los Antimicrobianos (WHONET- ARG) integrados a un
sistema multidisciplinario, a los fines de un diagnóstico microbiológico
confiable, oportuno y reproducible para:
� el mejoramiento de la atención del paciente:
en la prevención de brotes e implementación de estrategias eficientes en la prevención de brotes e implementación de estrategias eficientes
de control.
� monitorear la emergencia de nuevas cepas con potencial patogénico y
epidémico, y resistentes; sumado a
*La incorporación de técnicas moleculares de diagnóstico y
subtipificación aportan sensibilidad y especificidad para la Vigilancia
de este patógeno