UNIVERSIDAD PRIVADA ANTONIO GUILLERMO URRELO
Facultad de Ciencias de la Salud
Dr. Wilman Manuel Ruiz Vigo
Carrera Profesional de Estomatología
EFICACIA INHIBITORIA ENTRE ACEITE ESENCIAL DE ROMERO AL 10% Y
GLUCONATO DE CLORHEXIDINA AL 0.12% EN COLONIAS DE
Porphyromonas Gingivalis DE LA CEPA ATCC 25175 IN VITRO.
Flor de María Sánchez Quintana (Coordinadora)
Marleny Saucedo Tirado
Leonardo Rodríguez
Martin Américo Pariona Vargas
Alison Arribasplata Narro
Jhoselyn Tatiana Fernández Chacón (alumna no matriculada)
Leonardo Sangay Cerquín
Briscy Roncal Ruiz
Asesores:
C.D Jorge Carrascal (marco teórico)
Ms. Esp. C.D. Sandra Rojas Padilla (proyecto de tesis)
Cajamarca – Perú
EFICACIA INHIBITORIA ENTRE ACEITE ESENCIAL DE ROMERO AL 10% Y
GLUCONATO DE CLORHEXIDINA AL 0.12% EN COLONIAS DE
Porphyromonas Gingivalis DE LA CEPA ATCC 25175
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1Enunciado del problema
1.1.1 Descripción del problema o datos del campo
El ser humano desde tiempos remotos ha usado a las plantas para
satisfacer sus necesidades y una de ellas es su salud. Mediante el
ensayo error, a través del tiempo llego a determinar las propiedades
curativas de algunas plantas. Estos conocimientos fueron trasmitidos
a través del tiempo y espacio a las generaciones actuales. La
medicina tradicional peruana, herencia de tiempos precolombinos,
sigue siendo la primera instancia de consulta y tratamiento en gran
parte de nuestro país. En ella las plantas medicinales ocupan un rol
muy importante, con una variada flora de aproximadamente 80,000
especies.1
Las plantas medicinales son usadas en la odontología de dos
maneras: una mediante la información que la medicina tradicional
provee y otra bajo la forma científica mediante preparados tales
como pasta dental, pasta tópica, enjuagues bucales, colutorios, etc.
para el tratamiento de gingivitis, aftas, odontalgias, procesos
inflamatorios; como fungicidas y antibacterianos.2
La planta Rosmarinus officinalis L. conocida usualmente como
romero, es conocida dese la antigüedad por sus usos medicinales,
estudios recientes le dan propiedades antimicrobianas y
antioxidantes.3
El Gluconato de Clorhexidina es indicado como parte del tratamiento
periodontal en enjuagues orales y también puede ser usado como
irrigadores a nivel infragingival. El Gluconato de Clorhexidina es uno
de los antimicrobianos más seguros que se conocen, ya que la
producción de resistencia en los microorganismos bucales no es
muy significativa.
El microorganismo anaerobio al cual se expondrá los enjuagues será
la Porphyromona Gingivalis (ATCC 33277). Anaerobio obligado
hallado frecuentemente en bolsillos periodontales profundos y placa
subgingival.4
En base a que se sabe que la clorhexidina es una
sustancia antiséptica de acción bactericida y fungicida. Pertenece al
grupo de las biguanidas y se utiliza ampliamente en odontología en
concentraciones de 0,2%, 0,12% y 0,10 % en presentaciones para el
uso como colutorio o enjuague bucal. y se ha demostrado que
generan resultados positivos, esta investigación propone evaluar
cuál de estas dos es más efectiva en colonias de Porphyromonas
Gingivalis
Por tal razón en el año 2015, se desarrollará una investigación en la
la Universidad Privada Antonio Guillermo Urrelo (UPAGU), ubicada
en el distrito de Cajamarca, en el noreste del Perú, con el fin de
verificar si la eficacia del aceite esencial de Romero comparando con
la clorhexidina y si esta es es la esperada, para lo cual se usará el
método científico.
1.1.2 Fundamentación del problema o información documental
El “romero” es un arbusto perenne aromático, perteneciente a la
familia Labiatae, caracterizada por tener aproximadamente 1.5
metros de altura, los tallos jóvenes que se vuelven leñosos al
madurar, presenta pequeñas flores agrupadas en densas ramas
terminales.5
Tiene propiedades analgésicas, espasmolítico, antiinflamatorio,
antifúngico y posible propiedad antineoplásica.6, 7 El “romero” es
una especie vegetal común en la península Ibérica y, en general,
en toda la cuenca mediterránea.8
Llega al Perú en el siglo XVI. En el Perú crece en la costa, sierra y
la selva hasta los 3500 msnm.9 Las enfermedades periodontales
representan infecciones mixtas de los tejidos periodontales,
causadas principalmente por bacterias anaerobias gramnegativas10
La profundización del surco gingival que se produce durante estas
infecciones coincide con una proliferación bacteriana importante,
desafiando al sistema inmunitario, generando una respuesta local y
una respuesta sistémica del huésped.11 En investigaciones in vitro
con aceite esencial de Rosmarinus officinalis (romero) ha
demostrado tener actividad antibacteriana frente a bacterias de la
cavidad oral como: Porphyromonas Gingivalis, Actinobacillus
actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum, Streptococcus
mutans, y Streptococcus sobrinus.12
También el extracto de R.officinalis a demostrado actividad
antibacteriana contra S. mutans, S. aureus, S. casei13 y en
Streptococcus mitis estándar de ATCC 98811, Streptococcus
sanguinis ATCC 10556, Streptococcus mutans ATCC 25175,
Estreptococcus sobrinus ATCC 27609 y Lactobacillus casei14 El
presente estudio tiene como objetivo determinar el efecto
antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Rosmarinus
officinalis (Romero) sobre flora bacterias de bolsa periodontal.
1.2 Formulación del problema de investigación
¿Entre el aceite esencial de Romero al 10% y el Gluconato de
clorhexidina al 0.12% cual tendrá mayor eficacia inhibitoria en las
colonias de Porphyromonas Gingivalis de la sepa ATCC 25175 in
vitro?
1.3 Justificación del problema de investigación
1.3.1 Justificación teórica
Es importante realizar esta investigación, pues existen muy
pocas investigaciones en las que se proponga una relación
entre las variables de estudio; además esta investigación en
un futuro usando los resultados que obtendremos, servirá
como referencia para realizar más investigaciones del tema y
lograr nuevos conocimientos.
1.3.2 Justificación Básica
En la presente investigación se buscara reforzar los escasos
conocimientos los cuales nos permitirán orientar a futuras
investigaciones.
1.3.3 Justificación aplicada
La importancia de esta investigación será en beneficio de los
profesionales de la salud con el uso de una nueva alternativa
de conocimiento y beneficio para el tratamiento de pacientes
las cuales sean portadoras de las Porphyromonas
Gingivalis.
1.3.4 Justificación tecnológica
Mediante el uso del aceite esencial de Rosmarinus officinalis
(romero) se va diseñar un tratamiento alternativo para
controlar la eficacia inhibitoria de la Porphyromonas Gingivalis
de la sepa ATCC 37277. Que hasta el momento se controla
con Gluconato de Clorhexidina al 0.12%. La investigación
tendrá un valor agregado aplicado a la carrera de
estomatología.
1.4 Objetivos
1.4.1 Objetivos General
Evaluar la eficacia en la actividad antibacteriana del extracto
de aceite esencial de Rosmarinus officinalis (romero) y
Gluconato de Clorhexidina al 10 % en cultivos de colonias
de Porphyromonas Gingivalis de la sepa ATCC 37277.
1.4.2 Objetivos Específicos
- Evaluar eficacia inhibitoria mediante el diámetro del halo de
inhibición con aceite esencial de Rosmarinus officinalis
(romero) en concentración de 10 % en colonias de
Porphyromonas Gingivalis de la cepa ATCC 25175, in vitro.
- Evaluar eficacia inhibitoria mediante el diámetro del halo de
inhibición con Gluconato de clorhexidina al 0,12% en colonias
de Porphyromonas Gingivalis de la cepa ATCC 25175, in
vitro.
- Comparar la actividad antibacteriana de las dos sustancias
de experimentación, mediante la medida del diámetro de los
halos de inhibición generados por el aceite esencial de
Rosmarinus officinalis (romero) y Gluconato de clorhexidina al
0,12% sobre colonias de Porphyromonas gingivalis de la cepa
ATCC 25175.
2. MARCO CONCEPTUAL
2.1 Esquemas que sustentan el esquema conceptual
A nivel internacional y a nivel regional no existen antecedentes sobre
el tema a llevar.
A nivel nacional encontramos antecedentes de una tesis de la
Universidad Nacional De San Marcos para obtener el título de
cirujano dentista en el año 2013 Lima – Perú, nos dice que existe
actividad antibacteriana in vitro del extracto etanólico de Rosmarinus
officinalis (romero) sobre cultivos de bacterias anaerobias frecuentes
en pacientes con bolsa periodontal. A comparación de nuestro
proyecto de tesis sobre la variable aceite escencial de romero
(Rosmarinus officinalis), se tiene en cuenta como una variable de la
tesis referida al extracto etanólico de Rosmarinus officinalis (romero).
Teixeira L. (2012). Determinó la acción antimicrobiana in vivo del
extracto de R.officinalis Linn, en bacterias orales presentes en la
biopelícula. Realizó un estudio con 11 voluntarios, quienes realizaron
un enjuague bucal con las siguientes soluciones:
placebo;clorhexidina al 0,12 (control positivo) y extracto de R.
officinalis Linn, en 3 fases de 14 días cada uno. El índice de higiene
oral simplificado se utilizó para determinar la acción de las
soluciones en la biopelícula. Después del uso de clorhexidina, el 64
% de los voluntarios presento buena higiene y menos del 36 %
limpieza regular, con una media de 1,16. Después de usar extracto
de R. officinalis el 54 % presento buena higiene y 45 % limpieza
regular, con una media de 1,3.19.
Genena A. y Col. (2008). Evaluaron la actividad antioxidante,
antibacteriana y
anti fúngica del extracto de R. officinalis. Se usó una técnica para la
obtención del extracto llamada: Extracción con fluidos supercríticos
(SFE), técnica eficaz para la separación de compuestos activos de
las hierbas. El extracto de R. officinalis mostro mayor actividad
antibacteriana contra las bacterias Gram-positivas (Staphylococcus
aureus ATCC 25923 y Bacillus cereus ATCC 11778) el extracto se
hizo más eficiente con el paso tiempo de extracción (MIC 0.25 y
0.125 mg/ml espectivamente). También mostró un efecto contra las
bacterias Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 25922 y
Pseudomonas aeruginosaATCC 27853) con un MIC ≥ 1.0 mg/ml. El
extracto obtenido en los primeros 60 minutos no presentó actividad
antifúngica suficiente para inhibir el crecimiento de C. albicans (MIC
> 2.0 mg/ml), pero el obtenido con un período de extracción
creciente este llegó a presentar actividad (MIC= 0.5 mg/ml).30
Koo et al. (16) evaluaron la actividad antibacteriana in vitro del
extracto etanólico propóleo y de la Arnica montana sobre bacterias
orales (Streptococcus mutans,Actinomyces naeslundi,Actinomyces
viscosus,Porphyromonas gingivalis yTreponema denticola).
Muli y Maingi (11) evaluaron la actividad antimicrobiana del propóleo
de tres regiones de Kenia (Taita, Tana y Samburu) sobre
Pseudomona aeuroginosa,Escherichia coli y Staphylococcus El
extracto etanólico de propóleo al 10% de la región de Tana y
Samburu tenían una mayor actividad.antibacteriana que el extracto
etanólico de propóleo al 10% de la región de Taita (p<0,05). aureus.
2.2 Bases del esquema conceptual
En base a Rengifo R 7 (Perú, 2013) y Moromi, H et al 8 (Perú,
2009) que demostraron la actividad antibacteriana in vitro de los
propóleos contra microorganismos patógenos orales como la
Porphyromonas gingivalis.
Así se crea el siguiente esquema conceptual: el extracto etanólico
de propóleo peruano deberá usarse para obtener mayor eficacia
inhibitoria en colonias de Porphyromonas gingivalis de la cepa
ATCC 25175 que el gluconato de clorhexidina al 0,12% in vitro.
De lo cual se deriva el siguiente contexto de investigación.
a. Aceite esencial del romero: La especie vegetal Rosmarinus
officinalis L. perteneciente a la familia Lamiaceae, y conocida
popularmente como romero, es una especie originaria de la
región mediterránea, rica fuente de metabolitos activos, esta
planta es muy usada en la medicina tradicional por sus efectos
digestivos, antiespasmódicos y carminativos (4).
El aceite esencial obtenido de sus hojas es considerado como
un antimicrobiano natural que puede ser utilizado en la
producción de nuevos agentes con actividad antimicrobiana
para la industria farmacéutica y alimentaría (5). Su actividad
contra algunas cepas patógenas ha sido reportada por varios
autores (6-11). Se han realizado estudios in vitro con extractos
de R. officinalis en los que se ha evaluado su actividad
inhibitoria Gram positivas y Gram negativas.
b. Gluconato de clorhexidina al 0.12%: El espectro antibacteriano
de la clorhexidina según lo referido por Bascones A et al
(España, 2002) incluye tanto a bacterias gram positivas como
gram negativas, algunos virus como el HIV y algunos hongos,
pero sólo es esporicida a elevadas temperaturas. Su utilización
es amplia y es el agente más efectivo para tratamientos
periodontales 11. Los vehículos de administración que se
utilizan con más frecuencia son los colutorios (a una
concentración de 0,12 y 0,2%), aerosoles (0,12 y 0,2%), geles
(0,12 y 1%) y barnices, su eficacia está relacionada con la
concentración de la misma y la frecuencia de aplicación. La
acción preventiva del barniz de clorhexidina sobre la
enfermedad periodontal, fue determinada por primera vez en
estudios in vitro por Petersson et al, donde se demostró una
alta sensibilidad a la clorhexidina, tanto de Porphyromonas
gingivalis como de Actinobacillus actinomycetencomitans,
bacterias que se hayan altamente implicadas en su etiología 12.
c. Eficacia inhibitoria: Se puede definir como la resistencia de
cepas de bacterias gram positivas y gram negativas dándose
la concentración mínima inhibitoria expuestas a fármacos
bacteriostáticos como flavonoles, flavononas y flavononoles,
se mide a través del diámetro (milímetros) de los halos de
inhibición.
2.3 Discusión del esquema conceptual
La investigación consistirá en confirmar el esquema
conceptual que se ha creado. Las razones por las que se creó el
esquema conceptual son las que refiere Takarada K. y col.
(2004)11, comprobó que el aceite esencial de Rosmarinus
officinalis con una concentración inhibitoria mínima de 0.5%
inhibió el crecimiento de las bacterias Gram-negativas A.
actinomycetemcomitans, P. gingivalis y F. nucleatum. Dalirzani Z.
y col. (2011)20 demostró el efecto antimicrobiano del extracto
etanólico de R.officinalis sobre Streptococcus mutans, la media de
la zona de inhibición fue 11,52 ± 0,96 significativamente menor
que la clorhexidina (14.07 ±1.70). Castaño H. y Col. (2010)16
comprobaron la actividad antimicrobiana del extracto etanólico de
R. officinalis contra las bacterias S. sonnei, S. typhimurium y L.
monocytogenes. Monroy A. y Col. (2009)26 evaluaron la actividad
antimicrobiana del extracto etanólico de R. officinalis, comparado
con clorhexidina al 0,12% . in vitro contra Listeria monocitogenes,
Salmonella typhi Staphylococcus aureus, donde encontraron una
inhibición del 90% de las UFC. Alves M. y Col. (2008)12
estudiaron la actividad antimicrobiana de Rosmarinus officinalis
sobre especies de microorganismos predominantes en el biofilm
supragingival, como en cepas de Streptococcus mutans,
Streptococcus mitis, Setreptococcus sobrinus y Lactobacillus
casei demostró ser susceptible a la acción del observándose
halos de inhibición de 11 a 20mm. Silva M. y Col. (2008)13
comprobaron actividad antimicrobiana del extracto hidroalcóholico
de R. officinalis sobre cepas estándar como Streptococcus
sanguinis , Streptococcus mutans, Estreptococcus sobrinus y
Lactobacillus casei , Se observó halos de inhibición del
crecimiento bacteriano de 11 a 18 mm. En la investigación de
Albado E et al 15 (Perú, 2001) “en la actualidad existe una gran
variedad de agentes antimicrobianos, llamados colutorios, entre
estos la clorhexidina al 0,12 %, como el agente más utilizado en el
medio, dada su eficacia en la eliminación de microorganismos
cariogénicos. Sin embargo, presenta efectos adversos de este
medicamento generalmente leves y transitorios en especial
manchas pardas en los dientes, la lengua, prótesis y
restauraciones de silicato y resina, así como la alteración pasajera
de la percepción gustativa y descamación de la mucosa oral que
limitan su utilización 16. Además la clorhexidina es una sustancia
antiséptica que tiene un amplio espectro de actividad frente a
bacterias gram positivas y gram negativas, y en especial es eficaz
frente a estreptococos del grupo mutans, estreptococos simples,
Selenomonas spp y Propionibacterium spp, sin embargo, su
acción sobre los hongos es evaluada como relativa y no es
esporicida, ni virucida ni actúa sobre bacterias ácido-alcohol
resistentes. En concentraciones elevadas suele ser bactericida y
en concentraciones bajas, bacteriostática”
2.4. Definición de términos básicos
2.4.1. Aceite esencial de Romero al 10 %: Uso de Aceite
Esencial de Romero ( Rosmarinus officinalis L) al 10% .
2.4.2. Gluconato de clorhexidina al 0,12 %: Uso de gluconato
de clorhexidina al 0,12 %.
2.4.3. Eficacia inhibitoria: Diámetro del halo de inhibición.
3. HIPÓTESIS Y OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES
3.1. Hipótesis
3.1.1.Hipótesis de investigación o trabajo
Hi: Aceite escencial de Romero (Rosmarius officinalis) al 10%
debe usarse para obtener mayor eficacia inhibitoria que el
gluconato de clorhexidina al 0,12 % en colonias de
Porphyromonas gingivalis de la cepa ATCC 25175 in vitro.
1.1.1. Hipótesis nula
H0: μ Aceite escencial de Romero (Rosmarius officinalis) al 10% ≤
μ gluconato de clorhexidina al 0,12 %.
Interpretación de la hipótesis nula
La media poblacional del Aceite Escencial del Romero (
Rosmarius officinalis) tendrá menor o igual eficacia inhibitoria que
la media poblacional del gluconato de clorhexidina al 0,12 % en
colonias de Porphyromonas ginvivalis de la cepa ATCC 25175 in
vitro.
1.1.2. Hipótesis alterna
La media poblacional Alternativa del Aceite escencial del romero
(Rosmarius officinalis) tendrá mayor eficacia inhibitoria que la
media poblacional del gluconato de clorhexidina al 0,12 % en
colonias de Porphyromonas ginvivalis de la cepa ATCC 25175 in
vitro
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