Tipo de Fibras Musculares.fibras lisas-------------------------platelmintos
estriado en estadio larvarios ej cola cercarias de trematodos
.fibras estriadas---------------nematelmintosliso en digestivo y reproductor
Bandas Claras I y Oscuras A
• A anisotrópico (varía según de donde se la examine) COMPOSICIÓN VARIABLE
MIOSINA-ACTINA
• I isotópico (la misma propiedad independientemente desde donde se mida) IGUAL COMPOSICION: ACTINA
Músculos Asociados a las Gónadas de los Nemátodos
Gónadas de una hembra de Acrobeloides maximus por SEM (Scanning Electron Microscopy)
Filamentos de Paramiosina en las células del ovario
Ov: ovarioOd: oviductoUt: úteroSc: espermateca
Bert y col. Nematology 2007
1. músculo somático------ forma y locomociónFibras organizadas en
capa circular externacapa longitudinal internacapa diagonal (reducida o ausente en
cestodos)unidas por hemidesmosomas a la lámina basal de
los órganos y a la matriz intersticial.
2. músculo de órganos de adherencia-----incluye fibras musculares con Paramiosina y estriadas.
3. músculo de aparatos reproductor y alimentario.
Características• TIPO MUSCULO LISO: LAS MIOFIBRILLAS ESTAN
DELIMITADAS POR EL SARCOLEMA Y UNIDAS POR UNIONES GAP
• NUCLEO EN ZONA NO CONTRACTIL• MIOCITONES=CÉLULAS PARENQUIMATOSAS????• MIOFIBRILLAS: filamentos gruesos (miosina o
paramiosina) y finos (actina). Actina unida a sarcolema por desmosomas.
• MUSCULO SEUDOESTRIADO: cola de cercarias en trematodos. Estructura sarcomerica.
Representación del tegumento del un platelminto y la localización de la musculatura subtegumentaria
Capas musculares circulares (CM) y longitudinales (LM).
Tomado de Melhorn et al., 1989
tegumento (TG)
citón o células subtegumentarias (ST)
lámina basal (BL).
cuerpos densos (D).
vacuolas (v),Mitocondrias (MI),
• De la pared corporal o subtegumentarios -capas de fibras circular, longitudinal y diagonal-fibras dorso-ventrales• De los órganos adhesivos: ventosas oral y
ventralfibras meridionales (long), contracción aperturafibras ecuatoriales (circ)fibras radiales contracción cierre• Del tracto digestivo y reproductor• muy desarrollado• f. circulares y longitudinales
Detección de Actina con Faloidina-FITC
Mair et al 1998
VentosasMúsculos Sub-tegumentarios
Poro Escretor
En estadio larvarios
• Miracidio----m. subtegumentarios debajo del epitelio ciliado
• Cercaria----- cola m. longitudinales con estriación sarcomerica
• bandas A e I• zona H• línea Z• sistema de túbulos T
• Mecanismo incierto; evidencias de acción del SN sobre el músculo indirecta (Parácrina) y directa (Sinapsis).
• CANALES IONICOS ACTIVADOS POR VOLTAJE.
• NEURONAS MULTI O BIPOLARES. Son multifuncionales regulando no sólo la contracción muscular (crecimiento y reproducción). Sintetizan y secretan sustancias neuroactivas al espacio extracelular: COLINÉRGICAS, AMINÉRGICAS Y PEPTIDÉRGICAS.
• Acetilcolina---------------Inhibidor• Serotonina (5HT) -----------Excitador• Catecolaminas (adrenalina, dopamina)------ mioactivas
(inhib o exit)• PEPTIDOS: neuropéptido F y péptidos relacionados a
amida-FMRF (FaRPs)Exclusivos de gusanos planos. Acciones no bien conocidas:
ejemplos: FaRPs + 5HT----formación del huevo
FaRPs----- potentes mioexitadores. Cascadas de segundos mensajeros acoplados a protG.
• HISTAMINA---tomada del hospedero---Hay receptores (S. mansoni)
• GLUTAMATO---candidato en cestodos y algunos trematodos---contracción
• ACIDO GAMMA AMINO BUTIRICO (GABA)------ INHIBIDOR
• NO (óxido nitroso)------ MIOINHIBITORIO
Posición Relativa en Sarcómero Conectinas
Unen filam grueso a la linea ZTienen dominios tipo Ig yDominios fibronectina tipo III
Paracristales de paramiosina
ZONAS OSCURAS REPRESENTAN LOS “GAPS” entre las moléculas de Pm DONDE PENETRA EL ACETATO DE URANILO EN LOS PARACRISTALES Arreglo de moléculas polares con “gaps” y superposición de
las moléculas
Núcleo formado por paramiosina y otras proteínas
1
2
3
Miosina A y B
Miosina B
Paramiosina
Paramiosina y proteínas nucleares α,β,γ filageninas
Miosina A
Exterior
Medio
Centro
NaCl
Moerman and Fire,1997
Paramiosina
• Proteina Fibrilar de Invertebrados
• Une C1q (T. solium)• Une al Fc (S. mansoni y F. hepatica)
Paramiosina en la superficie de Schistosoma mansoni
Loukas et al 2001
Resultados Necropsia
• 57% reducción en el numero de parásitos recuperados respecto al control
• Casi 90% reducción en el numero total de huevos en bilis respecto a los controles no inmunizados
Estudio de la respuesta IgG especifica contra paramiosina de F. hepatica
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
0 2 4 7 8 9 10 11 12 15 16 18 19 20
week
A. U
.
Immunized GroupControl Group
FhPm es una Glicoproteína
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
tubo
Ab
s 28
0 n
m
Ap
licac
ión
Fh
Pm
Elu
ció
n M
ano
sa 0
,2 M
A CRCA-I PNA SBA DBA UEA-I WGA
220 KDa
97 KDa
40 KDa
RCA-I PNA SBA DBA UEA-I WGARCA-I PNA SBA DBA UEA-I WGA
220 KDa
97 KDa
40 KDa
B
Tabla 1 – Identificación de los spots de las proteínas de tegumento de Fasciola hepatica extraidos de geles bidimensionales mediante huella peptídica y búsqueda de la base de datos Swiss-prot, NCBInr por medio del software GPS (Applied Biosystems). Los spots 1,2 y 3 fueron analizados por nanoLC nano ESI-QTOF (QSTAR XI, ABI), mientras que los spots 4, 5 y 6 fueron analizados por Maldi Tof Tof (4700 PA).
Spot Nº
Descripción Especies Nº acceso (GenBa
nk)
Cobertur
a (%)
Pm (Teo/Exp; kDa)
PI Teo/Ex
p
Valores MASCO
T
Nº péptido
s
1+2+3
Paramiosina
Clonorchis sinensis
ABN79674
- 99.45/106.11
5.35/5.64
145 3
4 Actin-4ACT2-
SCHMA
Schistosoma mansoni
P53471 57 41.74/53.87
5.30/5.56
298 18
5 Actin-5ACT5-DIPDE
Diphyllobotrium
dendriticum
P53458 47 41.18/53.87
5.56/5.64
208 16
6 SJCHGC 06318
Schistosoma japonicum
AWW25537
48 41.83/53.87
5.43/5.74
185 15
Identificación de Proteínas del Tegumento de Fasciola hepatica
La Pm inhibe la formación del Complejo de Ataque a
Membrana (MAC)
Derg et al. 2003 Infection and Immunity
• Se sabe que las larvas y adultos de S. mansoni son resistentes al complemento.
• SCIP-1 • proteína de superficie de 94 kDa• inhibidor del complemento• Es reconocida por suero a-CD59• CD59: glycoproteína de 18 kDa• Se expresa en tejidos de VERTEBRADOS• Función: proteger a las células homólogas del ataque del complemento.• Mecanismo: se une a C8 y C9 e inhibe la formación del MAC.
• Por espectroscopía de masas demuestran que SCIP-1 es una forma de la paramiosina muscular del S. mansoni expuesta en la superficie.
• La Pm nativa y recombinante de S.mansoni:• Es reconocida por suero a-CD59• Se une a C8 y a C9• Inhibe la polimerizacion de C9• y su depósito sobre los eritrocitos (E)• Inhibe la lisis por complemento de• E conejo y E sensibilizados• Los anticuerpos a-Pm aumentan la muerte de los schistosomulas por
complemento.•
Mapeo sitio de unión de C9
Unión al Carboxilo Terminal
entre Ala552-Met866
Restringido a Asp744-Met866Deng J. 2006
Cisticercosis del ratón.
• La Pm de T. solium induce protección.
Vázquez-Talavera et al.Infec and Immun. 2001 69(9):5412
• Ratones inmunizados con TPmy recombinante de T.solium y desafiados con cisticercos de T. crassiceps
Los ratones inmunizados con el NH2-t tienen el siguiente perfil de
citoquinas
INFγ IL2No IL4 RESPUESTA TH1
LAS PARAMIOSINAS DE HELMINTOS PRESENTAN
EPITOPES DOMINANTES LOCALIZADOS EN DISTINTAS PARTES DE LA MOLECULA
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