El desarrollo del ADN recombinante, ha dado tresdesarrollos científicos importantes que puedenconsiderarse como las piedras angulares de latecnología: Introducir ADN en E. Coli (transformación) y
después seleccionar las bacteriastransformadas.
Purificar el ADN plasmídico con altosrendimientos.
Descubrimiento y la purificación de lasenzimas de restricción.
Con estos tres sencillos procedimientos puedellevarse a cabo la ingeniería genética.
Se ha descrito en muchas especies de bacterias quetienen la capacidad de fijar ADN en forma natural.Sólo un pequeño porcentaje de una poblaciónbacteriana tiene ésta capacidad, y se dice que éstaspocas células son competentes.
En E. Coli, las células competentesno existen en forma natural, sinoque tienen que fabricarse portratamiento con soluciones de CaCL2en frío. Después de éstetratamiento, las células se mezclancon el ADN que va a introducirse,se les somete a un ligero choquetérmico y se les permite que serecuperen.
No se conoce el mecanismo preciso por el cualentra el ADN en la bacteria. El proceso no esmuy eficiente, pero puede lograrse unatransformación de 10^7 bacterias por organismode ADN, que es suficiente para los objetivos dela ingeniería genética
Son moléculas de ADN que se mantienen en
forma autónoma y que se encuentran con
frecuencia en bacterias y en algunos
eucariontes inferiores.
No son esenciales para el crecimiento, pero
confieren algunas propiedades poco
usuales a las células que los albergan. Los
plásmidos se replican independientemente
del cromosoma y algunas veces se les
describe como ADN extracromosómico.
La mayoría de los
plásmidos son
moléculas circulares
de ADN, aunque se han
encontrado modelos
lineales.
Las propiedades que confierenlos plásmidos sonextremadamente variadas.
El primer plásmido que
se identificó en E. Coli
confiere la habilidad de
participar en el
intercambio conyugal
simple de formación
genética
Éste plásmido se conocecomo factor F (DeFertilidad). El factor F esbastante grande, delorden de 96 000 pares debases. También estransmisible, es decir,que tiene la capacidadde promover el acto deconjugación otransferirse de unacélula bacteriana a otra
Otros plásmidos que
son similares y que en
algunos casos están
relacionados con el
factor F, son los
factores R (
resistencia). Éstos
confieren resistencia a
los antibióticos y
también son
transmisibles y
provocan graves
problemas clínicos.
Algunos plásmidos proporcionan
propiedades poco usuales a las bacterias
huésped por ejemplo los plásmidos TOL
permiten que Pseudomonas sp degraden el
tolueno y lo utilice como fuente de carbono
Fig. Pseudonomas sp
Todos los plásmidos que se
han descrito hasta ahora
son grandes, algunos
plásmidos como el
Rhizobium tiene hasta 300
Kb de longitud y solo
existen una o dos copias por
cada célula. La purificación
de estos plásmidos es difícil
y en general los
rendimientos son bajos
Sin embargo también se conocen muchos
tipos de plásmidos pequeños de menos de
0 Kb. Éstos por lo general no son
transmisibles y con frecuencia sólo
confieren un fenotipo simple a la bacteria
huésped.
.Existen de 20 a 40
copias por célula y
pueden purificarse con
facilidad.
Uno de los primeros deestos plásmidos que secaracterizó se aisló deE. Coli y se le llamóColE1 . Produce unaproteína llamadacolicina E1 que destruyeotras cepas de E. Coli.Sin embargo lasbacterias que contienenéste plásmidos sonresistentes a la colicinaE1
*Alvarado Muñoz Carlos Enrique
*Balam Villarreal Wendy L.
*Montero Espinosa Leopoldo
*Ortega Morales Claudia Margarita
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