TIPOS DE MUTACIONES
•ANOMALÍAS CROMOSÓMICAS
•EXPANSION DE TRIPLETES
•PEQUEÑAS DELECIONES (EN FASE O FRAMESHIFT)
•PEQUEÑAS INSERCIONES (EN FASE O FRAMESHIFT)
•MUTACIONES PUNTUALES
– MISSENSE
– NONSENSE
– SPLICING
metATG TAT AGC ATT CCA TAA AAATATATA.......GGC
glyAAAlys tyr ser ile pro stop
metATG TAT AGC ATT CCA TAA AAATATATA.......GGC
gly
AAAlys
tyr ser ile pro stop
metATG ATA GCA TTC CAT AAA AAT ATA .........GGA
glyAATasn ile ala phe his lys
C
asn ile
TIPOS Y EFECTO DE MUTACIONES
metATG TAT AGC ATT CCA TAA AAATATATA.......GGC
glyAAAlys tyr ser ile pro stop
GGAgly
ATAile
TAAstop
MISSENSE
NONSENSESILENTCAMBIOS PUNTUALES ENSECUENCIA CODIFICANTE
DELECIONES E INSERCIONESEN SECUENCIA CODIFICANTE
DELECIÓN (FRAMESHIFT)
DELECIÓN (EN FASE)
missense/nonsense
splicing
small ins/del
gross ins/del
repeat variations
complex rearrangements
Nombre común Nombre sistemático Efecto
MissenseR243Q c.728 GA cambio de Arg por Gln en la posición 243
I65T c.194 TC cambio de Ile por Thr en la posición 65
Nonsense R111X c.331CT cambio de Arg 111 por codón de parada
Inserción K452fsinsA c.1355insA cambio de la fase de lectura (frameshift)
Deleción P211fsdelC c.632delC cambio de la fase de lectura (frameshift) Y198fs c.593-641del22pb cambio de la fase de lectura (frameshift) DelE3 delE3 deleción del exon 3
Splicing IVS10nt-11g>a c.1066-11ga alteración del splicing IVS12nt1g>a c.1315+1ga alteración del splicing
NOMENCLATURA DE MUTACIONES
aagccagTGACAT....CAGgtga.......ttagCTGG....
EXON 3 EXON 4
IVS3+1 (c.165+1)
IVS3+2 (c.165+2)
INTRON 3
IVS3-3 (c.166-3)IVS3-2 (c.166-2)
IVS3-1 (c.166-1)
nt 100 165 166
NOMENCLATURA DE MUTACIONESDE SPLICING
http://www.hgvs.org/rec.html
Detección de mutaciones
• Muestras : sangre total, raspadura bucal, villi coriónico, amniocitos, biopsias de piel: se extrae el material genético, PCR y secuenciación
- DNA: todo tipo de muestras
- RNA: gen no caracterizado o con muchos exones. Sólo en tejidos que se expresa el gen. Imprescindible para ver mutaciones de splicing. Extracción de RNA, RT-PCR y secuenciación
Exón 11 PAH
Primers para PCR
• 11A: 5’-TGAGAGAAGGGGCACAAATG-3’
• 11B: 5’-GTAGACATTGAGTCCACTCT-3’
AG/GU AGU
EXON EXONYnNYAG/G
UNCURAC
38-18
SITIO 5’ DONADOR DE SPLICING
SITIO 3’ ACEPTOR DE SPLICING
SECUENCIA DE RAMIFICACION
C A A G
EFECTO DE MUTACIONES DE SPLICING
EXON SKIPPING
EFECTO DE MUTACIONES DE SPLICING
RETENCION DE SECUENCIA INTRÓNICA POR UTILIZACION DE SECUENCIA CRIPTICA DE SPLICING
CREACION DE UN SITIO DE SPLICING
In 10Ex 10 Ex 11g t.... ....t t g g g g c c t a c a g
Ex 10 Ex 11
SECUENCIA NORMAL
In 10Ex 10 Ex 11g t... ..... t t a g g g c c t a c a g
Ex 10 Ex 11- ggc cta cag -
SECUENCIA MUTANTE (IVS10nt-11ga)
mRNA NORMAL mRNA MUTANTE
Gly Leu Gln
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