Ultraestructura a la Vista:
Indicaciones de la Microscopía
Electrónica
Josep Lloreta Trull
Hospital del Mar
Universidad Pompeu Fabra
Curso de Primavera, Mayo 2010
S.E.A.P.
Microscopía Electrónica:
¿Cómo, Cuándo y Porqué?
Max Knoll Ernst Ruska
MICROSCOPIO
ELECTRONICO
• Electrones
• Campos magnéticos
• Sistema de vacío
M. ELECTRONICO
TRANSMISION
M. ELECTRONICO
SCANNINGM. OPTICO
PODER DE RESOLUCIÓN
• Capacidad de discriminar dos
puntos muy próximos como
puntos diferentes
• Se expresa como la distancia
entre estos dos puntos
PODER DE RESOLUCIÓN
PODER DE RESOLUCIÓN
M. OPTICO = 0,2 m M. ELECTRONICO = 0,2 nm
M. ELECTRONICO = M. OPTICO x 1.000
MICROSCOPIA ELECTRONICA
• Identificar fenotipos celulares
• Identificar elementos extracelulares
• Relacionar la morfología y la función
• Entender procesos biológicos
normales y patológicos
La microscopía electrónica es
la continuación morfológica natural
de la microscopía óptica
Microscopía Electrónica:
¿Cómo?
M. OPTICA vs. ELECTRONICA
Fijación importante
Formaldehido
Parafina
Cuchilla de metal
Cortes de 3 m
Portaobjetos
Colorantes
Fijación crítica
Glutaraldehido - Osmio
Resinas (polímeros)
Cuchilla de diamante
Cortes de 80 nm
Rejillas de 3 mm
Metales pesados
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
PARA M. ELECTRONICA (I)
• Tejido fresco: Fijación INMEDIATA en glutaraldehido
• Tejido en formol: Inmersión en tampón cacodilato
• Bloque de parafina: Obtención en el laboratorio de M.E. (Marcar zona de interés en preparación histológica)
• Muestras congeladas: No sirven para M.E.
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
EN FRESCO PARA M. E. (II)
• Antes de hacer nada más, tomar una lámina fina (1mm de grosor máximo) y sumergirla en glutaraldehido fresco– Utilizar hoja de bisturí nueva
– Tomar la muestra de • Zona recientemente cortada, no desecada, no
pintada ni lavada con agua u otros líquidos
• Si hace falta, “refrescar” la superficie
• Evitar áreas de necrosis, hemorragia o fibrosis
• Tomar muestras separadas de áreas macroscópicas diferentes
• Evitar desecación y compresión del tejido
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
EN FRESCO PARA M. E.(III)
• Al acabar el procesado macroscópico de la pieza, cortar la lámina de tejido en cubos de <1mm
• Usar hoja de bisturí nueva
• No comprimir ni desecar la muestra (mantenerla sumergida en glutaraldehido durante el tallado)
• Poner fragmentos en recipiente con glutaraldehido fresco y guardar en nevera
FIJACIÓN EN
GLUTARALDEHIDO
• Proteínas
–Filamentosas
–Globulares
–Cristalinas
• Hidratos de carbono
• Acidos nucleicos
• Casi no fija los lípidos
FIJACION (Y TINCION) EN
TETROXIDO DE OSMIO
• Lípidos insaturados
–Polares
• Membrana plasmática
• Membranas mitocondriales
• Vesículas y gránulos
• RER i REL
• Mielina y cuerpos mielínicos
–Vacuolas lipídicas
TINCIÓN PARA M.E.
Medios de Contraste
• Citrato de Plomo
y
• Acetato de Uranilo
Microscopía Electrónica:
¿Cuándo?
EL TRIANGULO
ULTRAESTRUCTURAL
Formación
InvestigaciónDiagnóstico
Time
Expectations
Time
Expectations
1960-80 1980-2000 2001-10
M.E. en la Sala de Tallado
Muestras Dirigidas a M.E.
• Enfermedades ciliares
• Biopsia de piel
• Enfermedades de depósito
• Hematología
M.E. en la Sala de Tallado
¿Cuándo tomar muestras?
• Biopsias de músculo y nervio
• Biopsia renal y nefrectomía (tumoral y no tumoral)
• Tumores pleurales y mediastínicos
• T. cerebrales
• T. endocrinos-neuroendocrinos
• T. de partes blandas
• T. pediátricos y/o de cél. pequeñas
• Metástasis
MICROSCOPIA ELECTRONICA
COSTOS
• Muestra en stock 6€
• Estudio completo 120€
Microscopía Electrónica:
¿Porqué?
¿Para qué?
INDICACIONES GENERALES
• Complemento con la MO, la IHQ y otras
técnicas
• Interés pronóstico, terapéutico o
científico
• Control de calidad (estudio de casos
aparentmente resueltos sin dudas)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Enfermedades ciliares
• Biopsia renal
• Músculo y nervio
• Bacterias, virus, protozoos
• Biopsia de piel
• Enfermedades de depósito
• Hematología
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Discinesia ciliar
–Síndrome de Kartagener (“cilio inmóvil”,
esterilidad, dextrocardia)
–Alteraciones primarias de la motilidad
ciliar
DEFECTO PARCIAL BRAZOS DE DINEINA
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Biopsia renal: M.E. Imprescindible
–Nefropatía de cambios mínimos
–Enfermedades de la membrana basal
–Glomerulopatía del trasplante
–GMN con depósitos densos (MC tipo II)
–Acúmulos incipientes
(amiloide, fibrilar, IgA, cadenas ligeras)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Biopsia renal: M.E. Aconsejable
–Casos sin glomérulos en IF
–Confirmación glomerulonefritis
–Estadificación nefropatía lúpica
–Patología del trasplante
NEFROPATIA DE CAMBIOS MÍNIMOS
ALPORT HEMATURIA FAMILIAR
GLOMERULOPATIA DEL TRASPLANTE
GLOMERULONEFRITIS CON DEPÓSITOS DENSOS
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Biopsia de piel
–Enfermedades ampollosas
–Enfermedades de la colágena
– Ictiosis
–CADASIL
EPIDERMOLISIS BULLOSA SIMPLEX
EPIDERMOLISIS BULLOSA ATRÓFICA
EPIDERMOLISIS BULLOSA DISTRÓFICA
EPIDERMOLISIS BULLOSA DISTRÓFICA
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Enfermedades de depósito:
alteraciones lisosomales
–Lipoidosis y lipoproteinosis
–Mucopolisacaridosis
–Glucogenosis
ENFERMEDAD DE FABRY
Biopsia Muscular
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
DISTROFIA MUSCULAR OCULOFARINGEA
DISTROFIA MUSCULAR OCULOFARINGEA
MIOSITIS CON CUERPOS DE INCLUSION
MIOPATIA MITOCONDRIAL
MIOPATIA MITOCONDRIAL
MIOPATIA MITOCONDRIAL
0º 40º
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• INFECCIONES
–Protozoos: Toxoplasma
Criptosporidio
Leishmania
–Bacterias: Angiomatosis bacilar
Enf. de Whipple
Espiroquetosis intestinal
–Virus: CMV, Herpes, HIV, LMP, PES
ABSCESO CEREBRAL
TOXOPLASMA GONDII
CRIPTOSPORIDIO
ANGIOMATOSIS BACILAR
VIRUS HERPES
INCLUSION TUBULAR: CA. BRONQUIOLOALVEOLAR
INDICACIONES M.E.
Patología tumoral I
• Carcinoma/ melanoma/ sarcoma
• Adenocarcinoma/ mesotelioma
• Tumores de células pequeñas
• Tumores de tejidos blandos
• Tumores de mediastino anterior
INDICACIONES M.E.
Patología tumoral II
• Sistema nervioso y meninges
• Tumores endocrinos
• Tumores renales
• Metástasis de origen desconocido
• Lesiones raras
LIMITACIONES DE LA M.E.
• No reconoce tumor
• No distingue benigno de maligno
• Puede identificar rasgos muy
escasos dispersos en el tumor
ADENOCARCINOMA
MESOTELIOMA
CA. LOBULILLAR DE MAMA
DIFERENCIACION ENDOTELIAL
DESMOSOMAS
CARCINOMA RENAL CROMÓFOBO
ZIMÓGENO
NORADRENALINA
Melan A
MELANOSOMA
MELANOSOMA
T. CÉLULAS PEQUEÑAS
T. CÉL. PEQUEÑAS: NEUROBLASTOMA
T. CÉL. PEQUEÑAS: RABDOMIOSARCOMA
Muchas gracias
Top Related