Post on 17-Feb-2016
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Métodos de tinción de proteínas y ADN
MSc. Claudia Rodriguez
PARA PROTEÍNAS
Azul de Comassie
• Detecta: 8 – 25ng/ml
• Tinción fácil.
• Un paso de lavado en agua destilada es necesario para eliminar los restos de SDS del gel.
• Las proteínas pueden ser completamente desteñidas y recuperadas para análisis o secuenciamiento.
Nitrato de plata
• Seguro• Único componente
peligroso: forlmaldehído.• Detección: 0.5 ng de
proteína.• Geles 1D, 2D• Inconveniente: La fijación
liga quimicamente a las proteínas con la matriz �no sugerido para analisis de proteinas o elución.
Tinción con zinc
• Tiñe todas las áreas del gel de poliacrilamida en donde no hay proteínas
• Los iones de zinc forman complejos con imidazol, los cuales precipitan en la matriz del gel excepto donde ocurre saturación de proteínas con SDS
• Tiempo: 15min• Detección: <1ng de
proteína.• Compatible con WB
SYPRO
• Solución acidica pero no tóxica.
• Protocolo sensillo.
• Geles 1D, 2D, IEF, mebranas de nitrocelulosa
• Sensibilidad: 1- 10ng de proteína por banda
PARA ÁCIDOS NUCLEICOS
BROMURO DE ETIDIO
• Uso: 0.2 a 0.5µg/ml
• Detección: <5ng de ADN
• Extremadamente peligroso.
• Se intercala con el ADN.
• Permite la extracción del ADN de las bandas para secuenciamiento.
SYBR GREEN
• Uso: 1:10 000 x 15min
• ADNds = 20pg/ml
• ADNss = 100pg/ml
• Se puede añadir antes o después de la electroforesis.
• No es tóxico.
• Puede ser removido y no interfiere con otras técnicas de recuperación de ADN del gel.
ADN diluido del fago 174 cortado con una ER
Fast Blast DNA Stain (500X)
• Seguro � no tóxico
• Costo-efectivo � puede ser usado hasta 7 veces.
• 15 minutos para poder visualizar las bandas.
• Permite la visualización de mínimo 50ng de ADN
• Usado a 100X = 15min
• Usado a 1X = 8 horas
Nitrato de plata
• Seguro
• Único componente peligroso: forlmaldehído.
• Detección: 0.1 a 0.001ng de ADN por banda.