Post on 02-May-2018
ANALISIS DE CONOCIDOS MEDIANTE
GC Y LC ACOPLADA A
ESPECTROMETRÍA DE MASAS
Jose Juan Rivero Especialista de Producto
jose.rivero@agilent.com
AGILENT TECHNOLOGIES
901.11.68.90
Seminario Alimentación
20-Octubre-2011
AGENDA 1.- Soluciones Agilent
• La extensión de una filosofía
•Agilent Kits de aplicaciones
•Agilent analizadores
2.- Algunos ejemplos de Kits/Analizadores
disponibles aplicados al mercado de la
alimentación.
AGENDA 1.- Soluciones Agilent
• La extensión de una filosofía
•Agilent Kits de aplicaciones
•Agilent analizadores
2.- Algunos ejemplos de Kits/Analizadores
disponibles aplicados al mercado de la
alimentación.
Estrategias en el análisis de trazas de residuos en
alimentación
Superar las limitaciones actuales de muchas metodologías (FDA/EPA/EU) con los últimos desarrollos en
GC/MS/MS:
Mayor productividad, sensibilidad y calidad de resultados
Extender la aplicación de los análisis multiresiduos a compuestos más polares mediante LC/MS/MS:
Mayor robustez, sensibilidad y productividad con LC/MS/MS
Desarrollo de estrategias eficaces mediante análisis por GC/MS/MS y LC/MS/MS
Cuantificación, identificación y confirmación simultáneas
Aumentar el número de residuos analizados
Aumentar la productividad con un software MS intuitivo y potente
Revisión rápida de resultados e informes: más datos con menos recursos
Cumplimiento de las normativas Comunitaritas e Internacionales
Aplicaciones y las técnicas existentes GC/MS, LC/MS, GC/QQQ, LC/QQQ, LC/Q-TOF, LC/TOF, ICP/MS
Medicinas animales
• Identificación/cuantificación de antibióticos, esteroides, y
otras hormonas de crecimiento
El desafio está en aumentar rapidez y sensibilidad mientras disminuyen costes
Pesticidas
• Cuantificación de pesticidas conocidos
• Identificación/cuantificación de nuevos pesticidas y metabolitos
Metales traza
• Identificación/cuantificación de metales como plomo y mercurio
La “solución” al problema tiene un significado
diferente en función del usuario y su entorno
TRATAR DE DAR RESPUESTA A TODO ELLO NO SIEMPRE ES SENCILLO
¿Se trata de algo nuevo para Agilent?
Se trata de extender la filosofía de trabajo ya existente hacia
campos en los que el TIEMPO DE PUESTA A PUNTO es
esencial para el usuario
+ 60 analizadores y mas de 300
configuraciones de instrumentos
Agilent Analyzers: ¿En qué consisten?
Facilitar la instalación de sistemas
preconfigurados para una aplicación
determinada en un sistema chequeado en
fábrica para tal fin. Incluye columnas,
dispositivos de flujo capilar preinstalados,
columnas, etc…
Guía para un inicio rápido que además
incluye una muestra de test
Videos incluyendo las demostraciones
necesarias
Un ingeniero especialmente entrenado
en la aplicación, instala el sistema y
chequea que se encuentra totalmente apto
para trabajar
Agilent Application Kits: ¿Qué son?
Sistema instrumental
Pedido de forma separada o pre-existente en
el Laboratorio
Aportaciones:
Consumibles específicos de la
aplicación
Documentos específicos para la
aplicación
Librerías/Bases de Datos para
aplicación
Muestras de test específica de la
aplicación
Método disponible en un CD
Servicios de consultoría y formación disponibles de modo adicional
Analyzer/Applications Kits disponibles en FOOD
Applications Kits
Pesticide screening for LCTOF/LCQTOF
Pesticide screening for LCQQQ
Marine Biotoxines for LCQQQ Nueva Leg. Jul-2011
Fast Track Analyzers
Japanese list Pesticide GCMSD screening
Nitrosamine Analyzer on GC and Chemiluminescence detector
GCMSMS Pesticide Analyzer (BKF, PC, FC)
GCMSMS PAH Analyzer
(+backflush)
Muestra
Extracción
Purificacion
SIM/Scan GC/MSD Analyzer – para Conocidos/Desconocidos
256
83
401 Informe Final S
C
Q
Deconvolucion
Busqueda en
librería (+backflush)
LC/QQQ MRM App. kit – para Comp Conocidos
S
C
Q
GC/QQQ Analyzer – para Comp Conocidos S
C
Q
MS
C16 H19 N3 P Cl
C15 H25 O P S Cl
C18 H21 O P Cl
LC/QTOF or TOF App. Kits – para Comp Desconocidos
S
Accurate Mass
Database Search
Generación
Formula Molecular
Mass Hunter
MFE
MS
MS/MS
Fragmentacion Q C
LC-QQQ app. kit
Soluciones para el Screening de Pesticidas
Screenning , Confirmacion Cuantificacion C Q S
AGENDA 1.- Agilent Fast Track Solutions
• La extension de una filosofia
•Agilent Kits de aplicaciones
•Agilent analizadores
2.- Algunos ejemplos de Kits/Analizadores
disponibles aplicados al mercado de la
alimentación. (GCMS)
Portfolio de Agilent en GC/MS
PRECIO
RE
ND
IMIE
NT
O
240 IT
7000 TQ
5975C SQ
220 IT
5975E SQ 7820 GC
with Tray support
GC Q-TOF 5975T SQ
Técnicas básicas para los analizadores GCMS
-Nuevo Inyector Multimodo para alto contenido en matriz (MMI)
-Tecnologia de flujo capilar (CFT)
-Bases de datos RTL
-Sistema Triple Cuadrupolo (MRM)
-Fungibles necesarios preparación muestra (QuEChERS)
Inyector Multimodo (MMI)
Capacidad de programación de temperatura
Hot/Cold S/SL (modo pulso), PTV, Solvent vent
Flexibilidad en los volúmenes de inyección
Análisis de muestras termolábiles y mínima discriminación en la inyección para compuestos de alto peso molecular
Mayor sensibilidad en inyecciones de grandes volúmenes
Compatible con la tecnología de flujo capilar
Venteo de disolventes y uso de Backflush
Tecnología de Flujo Capilar. División Multiplicar la información desde una única inyección
Page 18
Divisor purgado de tres vías
Column in
Aux EPC in Det1 out
Det2 out Det3 out
Placas de difusión desactivadas
Alineamiento perfecto gracias a una
tecnología patentada
Sellado perfecto desde vacío a altas
presiones proporcionando un sistema
totalmente libre de fugas
La tecnología de flujo capilar usa un tipo de union que evita la presencia de colas con un mínimo volumen muerto
1.1 1.15 1.2 1.25 1.3
0
1
2
3
4
5
6 Poliimida
Unión Directa
Ultimate Union
MS-Tee QQQ
EPC Aux MMI Pres Alta
1.0 ml/min
Flujo Constante
Pres = 0 Presión RESIDUAL Presión ALTA
Backflush y análisis simultáneos: Funcionamiento
9.00 9.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00
9.00 9.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00
9.00 9.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00
a b
Backflush (BF) con la union purgada
a = comienza el backflush
(el ultimo pico sale de la columna 1)
b = incrementa el flujo a 4 mL/min
Muestra – sin backflush
Muestra – con backflush
Blanco de disolvente - sin backflush
Retention Time Locking (RTL)
¿Qué es y para que sirve?
• El tiempo de retención es el parámetro fundamental en cromatografía.
¡Es más fácil identificar los picos si el tiempo de retención se mantiene constante!
• Retention Time Locking (RTL) permite mantener de forma muy precisa los tiempos de retención de los analitos en cualquier GC Agilent 6890/7890 que emplee la misma columna y programa de temperaturas.
• RTL permite crear Librerías de Tiempos de Retención para hacer más fácil la identificación.
• Agilent ha desarrollado un método GCMS RTL que incluye 926 pesticidas y disruptores endocrinos generando una librería de espectros de masas RTL/DRS.
• Esta base de datos contiene los espectros de masas y los tiempos de retención de los compuestos y utiliza la herramienta de screening proporcionada por el software Chemstation.
• La base de datos puede ampliarse libremente con compuestos incluidos por los usuarios.
¿Cómo Funciona el RTL?
Ajustando la presion en cabeza de columna a través del
Software de la Chemstation/MassHunter gracias a la
extraordinaria Precisión de ajuste del EPC (Controlador Electrónico
de Presión) del Cromatógrafo Agilent 7890N (0.001 psi)
0
50
100
Presión original del método RTL : 16.0 psi
16.50 min.
16.34 min.
RE-LOCK
Después de cortar la columna…
0
50
100
Nueva Presión: 15.7 psi
0
50
100
16.50 min.
Re-lock method
Ventajas RTL
Transferencia rápida de métodos (GC a GC o GCMS)
No se requiere actualizar los tiempos en las tablas de
calibración o de iones (Fácil mantenimiento de las
calibraciones y métodos de adquisición)
Identificación de compuestos desconocidos gracias a
las librerías RTL (Identifica isómeros, la identificación solo
es confirmada si coincide el tiempo de retención)
Base de datos generales para la puesta a punto de una
manera fácil de cualquier analito.
Revisión de resultados rápida y completa
Agilent 7000B Triple Quadrupole GC/MS
Especificaciones
Parámetros Especificaciones Agilent 7000B
EI MRM Sensibilidad (*)
EI Scan Sensibilidad (*)
100 fg OFN > 500:1 RMS S/N, 272 → 241
1 pg OFN scan desde 50 a 300 amu para ion 272 > 300:1 S/N
Resolución de masas Unidad de masas ajustable por tune, 0.7 a 2.5 Daltons
MRM Velocidad de scan (transitions/sec)
Minimo dwell time en MRM
500
1 ms
Rango dinámico 106
Rango de masas (m/z)
10 a 1050
Velocidad de scan Hasta 6,250 µ/s
Celda de colisión Hexapolo lineal con aceleración lineal
(*) Demostrado en cliente
Analizador GC-MS/MS Lineal
Inerte, fuente
de alta
temperatura (Igual que 5975)
Detector de Triple eje (igual que 5975)
Dos cuadrupolos de
cuarzo, monolitico,
hipoerbólico recubierto
de oro (igual que 5975)
Nuevo desarrollo, Celda
de colisión hexapolar
patentada
Bomba Turbo Edwards
Celda de colisión con Quenching por He
Celda de Colisión
Iones
Precursores He* + Disociación por colisión inducida
1.5 ml/min N2
Gas de Colisión
La transmisión de
Helio metaestable hacia el detector
es altamente
reducido; El detector de Triple
Eje reduce el ruido de neutros.
Fuente Detector de
Triple Eje
1erCuadrupolo 3er Cuadrupolo
Gas He Buffer
He* + He → 2 He + Calor
Iones
Productos + He*
Efecto del “Helium Quench” en el sistema 7000B
S/N 1294:1 Helium Quench Gas ON
S/N 341:1 Helium Quench Gas OFF
Tested with 1pg Hexachlorobenzene
Comparación del ruido
El incremento de la relación
S/N es debida a la reducción del ruido.
Detector de Triple Eje (Elimina el ruido en tres direcciones)
Cuarzo
Hiperbolico
Transmisión
Cuadrupolo
Analizador
Multiplicador de
electrones de
triple canal
Dinodo
de alta
energía
Barra de dirección
Haz de iones
Offset X
Offset Y
Offset
Z Pantalla para
partículas
secundarias
Contiene 7000 MRMs optimizados de 1000 pesticidas
-- basados en más de 1000 inyecciones
Máxima Flexibilidad permitiendo la optimización de métodos
• Promedio de 7 transiciones MRM por componente con sus
intensidades relativas
-- Muy util para evitar interferencias proveniente de la matriz
• Clasificado por compuestos, numero CAS etc. En formato excel
-- Permite busquedas y ordenación fácil para realizar métodos
• Tres métodos cromatográficos con RTs y RI
-- Permite máxima liberta para seguir flujo de trabajo del cliente
• Intensidades absolutas por cada transición MRM
-- Permite una semi- cuantificación sin el uso de estandares
La más completa base de datos MRMs con la máxima flexibilidad
Analyzer 2.0 Update – No sólo pesticidas
Hasta 1100 compuestos con mas de 8000 transiciones MRM
• Pesticidas
• Ftalatos
• PBDEs
• PAHs
• PCB congeneres
• EPA 8270 target compounds
Industrias Target: Alimentación y Medioambiente
Peso
molecular
promedio
y masa
exacta
Cada pesticida es
clasificad con hasta dos
categorias
Base de datos con RTs (y RIs) para ser usado
con hasta tres metodos de GC diferentes(CP,
CF-target, and CF-screening).
Flexibilidad: 7 transiciones; clasificaciones; 3 RTs y RIs
(Color Scales): Red denotes strong intensity and blue
denotes weak intensity among ALL transitions.
35
The Flexibility: Excel format, relative and absolute intensity
Excel MassHunter
Format
Un Ion de Cuantificacion y varios
cualificadores por compuesto
Las intensidades
absolutas y relativas
37
Ordenar para rápidamente
seleccionar un Quant (Q0) y
seleccionar los tres cualificadores
(construccion sencilla de metodos)!
38
Click en el boton de ordenacion para
seleccionar/mostrar los compuestos que serán
añadidos al metodo de adquisición.
AGENDA 1.- Agilent Fast Track Solutions
• La extension de una filosofia
•Agilent Kits de aplicaciones
•Agilent analizadores
2.- Algunos ejemplos de Kits/Analizadores
disponibles aplicados al mercado de la
alimentación. (LCMS)
AGILENT LC/MS Portfolio
•6100 Simple Cuadrupolos
•6200 TOF
•iFunnel
•6400 Triple Quadrupoles
•DMRM, tMRM
•6500 QTOF
Agilent 1290 Infinity LC
El mejor sistema de
cromatografía líquida para
LC/MS – de la HISTORIA!
i-Funnel 6490 Triple Cuadrupolo LC/MS
Máxima sensibilidad,
Rápido, robusto.
Acomplamientos HPLC-Chip
i-Funnel 6550 UHD Accurate Mass Q-TOF LC/MS
Máxima sensibilidad,
Datos de ultra-alta definición,
resultados de investigación
en un sistema de sobremesa
Acomplamientos HPLC-Chip
• El mayor rango de potencia entre los
UHPLC disponibles
• Nuevo DAD de mayor sensibilidad
• Permite conversión de cualquier
método LC (ISET)
• Ultra-Rápido cambio de polaridad
• MRM más rápidos
• Dynamic MRM, Triggered MRM
• Cuantificación y Confirmación para análisis
complejos multi-compuesto.
• Sistema cualitativo de última generación
• Ultra alta resolución
• Exactitud de masa sub-ppm
• Excelente sensibilidad y rango dinámico
Clearly Better LC / LC/MS Nuevos Productos
Agilent 1290 Infinity LC
El mejor sistema de
cromatografía líquida para
LC/MS – de la HISTORIA!
i-Funnel 6490 Triple Cuadrupolo LC/MS
Máxima sensibilidad,
Rápido, robusto.
Acomplamientos HPLC-Chip
i-Funnel 6550 UHD Accurate Mass Q-TOF LC/MS
Máxima sensibilidad,
Datos de ultra-alta definición,
resultados de investigación
en un sistema de sobremesa
Acomplamientos HPLC-Chip
• El mayor rango de potencia entre los
UHPLC disponibles
• Nuevo DAD de mayor sensibilidad
• Permite conversión de cualquier
método LC (ISET)
• Ultra-Rápido cambio de polaridad
• MRM más rápidos
• Dynamic MRM, Triggered MRM
• Cuantificación y Confirmación para análisis
complejos multi-compuesto.
• Sistema cualitativo de última generación
• Ultra alta resolución
• Exactitud de masa sub-ppm
• Excelente sensibilidad y rango dinámico
Clearly Better LC / LC/MS Nuevos Productos
Agilent 1290 Infinity LC
El mejor sistema de
cromatografía líquida para
LC/MS – de la HISTORIA!
i-Funnel 6490 Triple Cuadrupolo LC/MS
Máxima sensibilidad,
Rápido, robusto.
Acomplamientos HPLC-Chip
i-Funnel 6550 UHD Accurate Mass Q-TOF LC/MS
Máxima sensibilidad,
Datos de ultra-alta definición,
Acomplamientos HPLC-Chip
• El mayor rango de potencia entre los
UHPLC disponibles
• Nuevo DAD de mayor sensibilidad
• Permite conversión de cualquier
método LC (ISET)
• Ultra-Rápido cambio de polaridad
• MRM más rápidos
• Dynamic MRM, Triggered MRM
• Cuantificación y Confirmación para análisis
complejos multi-compuesto.
• Sistema cuant/cual de última generación
• Ultra alta resolución
• Exactitud de masa sub-ppm
• Excelente sensibilidad y rango dinámico
•Alta velocidad + Alta resolución
Clearly Better LC / LC/MS Nuevos Productos
Nueva serie
LC Agilent
1200 Infinity
Presentación de los instrumentos LC de la nueva plataforma
Agilent – 1220, 1260 y 1290
Nueva Serie Agilent 1200 Infinity Elevando el Estandard en HPLC – UHPLC para el Laboratorio
1260
Infinity LC
Modular
600 bar
80 Hz
2x ó 10x Sensivilidad UV
100% HPLC Compatible
Precio HPLC
Capacidades UHPLC
1220
Infinity LC
Integrado
600 bar
80 Hz
El más económico
HPLC y UHPLC
Tecnologia 1260/1290
1290
Infinity LC
Modular
1200 bar
160 Hz
Máximo rendimiento UHPLC
Máxima Flexibilidad
Coste Servicio HPLC
Nueva Serie Agilent 1200 Infinity - Rangos de Potencia
0
200
400
600
800
1000
1200
0 2 4 6 8 10
Toda Columna analítica
Transferencia de método
Mayor Resolución
Análisis más rápidos
Disolventes más viscosos
Bajas Temperaturas
Semi-preparativo
1290 Infinity LC
1260 Infinity Quat./Iso LC
1220 Infinity LC
Presión (bar)
Flujo (ml/min)
1260 Infinity Binary LC
Un nuevo rango de potencias capaz de proporcionar el máximo
rendimiento, flexibilidad, compatibilidad y protección de la inversión
LC/MS Portfolio
Triple Cuadrupolos
Serie 6400
La herramienta definitiva en
cuantificación / confirmación
Agilent ha desarrollado un
nuevo LC Triple Quad cada
año desde 2007
6460
Triple
Quad
6430
Triple
Quad
6420
Triple
Quad
6490
Triple
Quad
6460
Triple
Quad
Ren
dim
ien
to
La última tecnología en LC Triple Quads
6420
Easy Choice – Rango medio
Análisis de trazas en
rutina
6430
6460
Cuantificación Rutinaria
Tecnología
iFunnel
Análisis de Ultra-
trazas y alta
velocidad
6490
Técnicas básicas para los analizadores LCMS
-Tecnología iFUNNEL
-Herramientas de Cuantificación, barrido e identificación
-Sistema Triple Cuadrupolo (MRM,tMRM)
-Fungibles necesarios preparación muestra (QuEChERS)
Nuevo 6490 Triple Quadrupole ¡Sensibilidad a niveles de Zeptomol!
Zeptmole Sensitivity • microdosis
• analisis en gota de sangre
• analysis hormonal
• contaminantes emergentes en agua
• pesticidas – diluir e inyectar
Rango Dinámico de 6 ordenes de linealidad • elimina la dilución en serie de muestras
• analiza impurezas a nivel de trazas en una sola
inyección
Triggered MRM (tMRM) • búsqueda en librerías
• NIST data base
• librerias propias
10-21
T EC NOLOGÍA IF UNNE L C U A N T I F I C A C I Ó N - S E N S I B I L I D A D
“…sólamente somos capaces de detectar
1 de cada 103 a 105 iones
generados por electrospray (ESI) a presión
atmosférica con los diseños instrumentales
actuales.”
(Page, Smith, et al; JASMS, 2007, 18, 1582-1590)
iFunnel Technology Captura x10 veces más Iones
Hexabore Capillary
• Capilar con 6 entradas.
• Muestrea x10 más gas
rico en iones de la fuente.
• Captura la mayor parte del gas de la región de la
fuente.
Agilent Jet Stream
• Confinamiento térmico de la pluma de ESI.
• Muy eficiente
desolvatación para crear
iones en fase gaseosa.
• Crea una zona rica en iones.
Dual Ion Funnel
• Elimina el gas, pero
captura los iones
• Elimina el ruido de
neutros
• Prolonga la vida útil de
la bomba turbo
Nuevo: Agilent Jet Stream. Thermal Gradient Focusing Technology
Elevada mejora en Sensibilidad.
Mejora en la Nebulización.
Mejora en la Desolvatación.
Iones Focalizados en una zona colimada por contención térmica y muy rica en iones.
Mejora en la Eficiencia de la Ionización y Muestreo.
Gas de
nebulización
Gas de
secado
Entrada LC
Sheath gas
calentado (hasta 400ºC)
La ganancias en muestreo de iones es mayor con la
combinación de las tecnologías de Agilent Jet
Stream y el “Hexabore Capillary”.
Hexabore Sampling Capillary: Capilar de Muestreo
con 6 Conductos
* Capilar 18cm 9cm
• El muestreo con un capilar de 6 conductos aumenta
la eficiencia de muestreo de iones hasta x10 veces en
comparación con un capilar de un solo
orificio.
• Longitud capilar reducida en un 50%*:
• minimiza la pérdida de iones de alta movilidad.
• aspira más gas rico iones.
Ion Funnel de 2 Etapas Desalineadas
1ª Etapa: 8-12 Torr 2ª Etapa: 1-3 Torr
• Elimina una elevada carga de gas
• Reduce neutros
• Mejora la robustez
• Transmite iones muy
eficientemente hacia óptica de Q1
2 etapas desalineadas -----: favorece la transmisión de sólo iones
Innovaciones Instrumentales Triple Cuadrupolos
LC/MS: 6460 vs 6490
6460 LC/MS (Skimmer Configuration)
6490 LC/MS (iFunnel Configuration)
HB Cap Dual Ion Guía de Q1
Funnel Iones por RF
Curved Collision cell
Q3
Ion Detector
Ion Detector
Cap Guía de Q1 Celda Q3
Iones Colisión por RF
AJS
AJS
con
Aceleración Lineal
Axial
Conica con
Aceleración Lineal Axial
Skimmer
MRM dinámico (DMRM)
Mejora de la sensibilidad basado en la
especificidad de la transición a su tiempo
tMRM Confirmación espectral de los target sin barrido
ni perdida de sensibilidad
Optimizer
Si no se dispone de Kits de Agilent permite
buscar los valores de adquisición óptimos
para la cuantificación
Counts vs. Acquisition Time (min)
x105
1
2
3
4
5
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Segmento 1 Segmento 2
Segmento 3
Segmento 4
Análisis por segmentos vs. MRM dinámico
MRM Dinámico: No hay segmentos de tiempo
La lista de MRM se confecciona de modo dinámico basándose en el RT de los compuestos de interés
Menor tiempo de ciclo/Mejor definición de pico
Time (min) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Compounds (10/block)
Cycle Time (sec)
Max Coincident
Cycle Time (sec)
MRM
50 80
0.4 0.4 0.4 0.4
20 40 40
Dynamic MRM
0.5 0.8 1
30
Time Segment 1 Time Segment 2 Time Segment 3 Time Segment 4
0.7
100 70
Ciclos 2 x menores permiten manejar picos cromatográficos más estrechos,
más analitos y dwell times mayores por compuesto
Principios de funcionamiento de Dynamic
MRM
Fragmentor Voltage Collision Energy
QQQ Analyte Optimizer: Máxima Sensibilidad
Optimización Automática de 2 Settings clave
Aflatoxin B1
220 V 200 V
180 V 160 V 100 V 80 V 60 V 40 V 140 V 120 V
Maximum transmission of AFL B1 [M+H]+ = 130 V Fragmentor Voltage Optimization
25 eV
20 eV
35 eV
30 eV
40 eV
15 eV
10 eV
5 eV
Product Ion Spectra Overlaid;
(All Collision Energies)
Collision Energy = 20 eV
5 eV
15 eV
10 eV
25 eV
20 eV
FIA TIC – AFL B1
Collision Energy Optimization
“Triggered MRM (tMRM) Data Dependent”: ~“Scan”
Especifico con la Sensibilidad y Rapidez de un MRM
Cuantificar e Identificar con la sensibilidad y rapidez de un MRM
1 MRM de monitorización por compuesto dispara hasta 8 MRM de
confirmación de cada uno de los compuestos detectados
Muy útil para cuantificación y confirmación masiva de analitos con Triple
Cuadrupolo: análisis multiresiduos, metabolitos …
Threshold
Secondary MRM
Transitions are “Triggered”
Primary cycle (below threshold)
Triggered cycle (above threshold)
tMRM Product Ion Spectrum
x103
8
7
6
5
4
3
2
1
0 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340
334.2 171.1
145.0
132.1
117.0
105.1 91.1 76.0
tMRM Product Ion
Spectrum
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 80
76.0
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 80 100
91.1
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 80 100 120
105.1
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 80 100 120
117.0
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 100 140
132.1
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 80 100 120
119.0
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 100 140 180
145.0 x103
8
7
6
5
4 3
2
1
0 100 140 180
147.0
x103 8
7
6
5
4 3
2
1
0 80 100 120 140 160 180
171.1
334 > 76 334 > 91 334 > 105 334 > 117 334 > 119
334 > 132 334 > 145 334 > 147 334 > 171
Control de 300 Pesticidas en matriz de manzana niveles de ppb cuantificados en 15 min con 1290 LC/6460 QQQ
UHPLC: Agilent 1290 Infinity LC System
1290 Infinity bomba con desgasificador integrado,
1290 Infinity Autosampler, 1290 Infinity Compartimento
termostatizado de columna con valvula de selección
Column: Aquity UPLC® BEH C18, 2.1 x 150mm, 1.7µm
VanguardTM 2.1 x 5mm BEH C18, 1.7µm pre-column
Column temperature: 70°C
Injection volume: 35µL (stacked injection, 5µL sample + 30 ul H2O)
Autosampler temp: Not controlled
Needle wash: flushport (75:25 MeOH/H2O + 0.01% formic), 10 seconds
Mobile phase: A = H2O w/5 mM ammonium formate + 0.01% formic
B = MeOH w/5 mM ammonium formate + 0.01% formic
LC flow rate: 0.5 ml/min
LC Gradient: 8%B (T=0) to 92%B (T=15 min), hold 3 min
MS: Agilent G6460A QQQ con Agilent Jet Stream
Sheath gas flow: 11 L/min
Sheath gas heater: 375ºC
Charging Electrode: 300 V (pos ion mode)
Capillary voltage: -4 kV (pos ion mode)
Nebulizer pressure: 35 psig
Drying gas temperature: 325ºC
Drying gas flow: 8 L/min
Analisis de 300 Pesticidas en una inyección de 15 min.
Nota: Con el Agilent Jet
Stream se es capaz de
analizar compuestos tipicos
de ESI y tambien
compuestos que se realizan
mejor por APCI
Agilent 1290 Infinity LC + 6460A Triple Quad con tecnología Agilent Jet Stream
~600 Transiciones en Dynamic MRM
9 replicados inyectados a nivel de 200 pg
Area %RSD = 3.2
Altura %RSD= 3.6
Analisis de 300 Pesticidas en 15 min.
ventana de 1
minuto ~ 40
Pesticidas
Avg. Signal Area: 572,160
Avg. Signal Height: 204,142
8 data points above FWHM
2.4 sec FWHM
6.0 sec @10% valley (14 data pts)
14.2 sec peak width baseline-to-
baseline (30 data points total)
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10% valley
2.4 sec FWHM
500 pg Atrazine on-column
Avg. Signal Area: 6,069
Avg. Signal Height: 2,371
7 data points above FWHM
2.2 sec FWHM
4.8 sec @10% valley (14 data pts)
10.2 sec peak width baseline-to-
baseline (27 data points total)
S/N: 119:1 (5*RMS noise)
Estimated LOQ: 500 fg or less
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2.2 sec FWHM
10%
valley
5 fg Atrazine on-column
Desisopropyl atrazine
10 pg 10 pg
Cymoxanil
Butylate
10 pg
Bromuconazol (diastereomers)
10 pg
R2= 0.99883
R2= 0.99830
R2= 0.99873
R2= 0.99859
Rectas de calibración con Dynamic MRM (10 pg – 1 ng)
5990-4254EN
Kits de Aplicaciones para
LC/MS-QQQ
Kits Base de Datos DMRM
• Adaptables a la cromatografía del usuario.
• Chequeo opcional de la aplicación on-site.
• Kit 600 pesticidas incluye:
– Columna y mezcla de test específica.
– QuEChERS Trial pack para preparación muestra.
– DVD con los parámetros del métodos/s (LC y MS).
– Nota de aplicación y guía de inicio rápido.
– Ejemplos con distintas configuraciones y HPLC’s.
• Kit 200 compuestos de interés Toxicológico incluye:
– Columna y mezcla de test específica.
– DVD con los parámetros del métodos/s.
– Nota de aplicación y guía de inicio rápido.
– Contiene esencialmente drogas de abuso y fármacos
5990-4253EN
Resumen: Aporte de Agilent al mercado de Alimentación
Extenso portfolio:
- Instrumentación, y
- Analizadores y Kits de aplicaciones.
Conocimiento
- Preparación de muestra (Kit Quechers, SPE…)
- Desarrollo de metodologías
- Resolución de problemas
Software potente
- MassHunter
MUCHAS GRACIAS
Jose Juan Rivero Especialista de Producto
jose.rivero@agilent.com
AGILENT TECHNOLOGIES
901.11.68.90