Post on 21-Mar-2020
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MODALIDAD: INVESTIGACIÓN
TEMA:
PARÁMETROS DE CALIDAD Y VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO DE
DILTIAZEM POR ESPECTROFOTOMETRÍA
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS.
AUTORES:
JENNIFFER LISSETH CAMPUZANO MAGALLANES
CARLA JACQUELINE GUTIÉRREZ CABRERA
TUTOR:
MIGDALIA MIRANDA MARTINEZ, PhD.
GUAYAQUIL – ECUADOR
2018
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ÍNDICE GENERAL
INTRODUCCIÓN. .................................................................................................... 1
FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ........................................................................ 2
HIPÓTESIS .............................................................................................................. 2
OBJETIVOS ............................................................................................................. 2
Objetivos Generales ............................................................................................... 2
Objetivos Específicos ............................................................................................. 2
CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO ........................................................................... 4
I.1 PARAMETROS DE CALIDAD, SU IMPORTANCIA EN LAS BUENAS PRÁCTICAS
DE MANUFACTURA (BPM). ................................................................................... 4
1.1.1 Garantía de la calidad ................................................................................ 4
1.1.2 Buenas Prácticas de Manufactura de productos farmacéuticos ......... 5
I.1.3 Control de calidad ........................................................................................... 5
I.1.3.1 Ensayos habituales en control de calidad ............................................ 6
I.1.3.2 Métodos instrumentales ......................................................................... 8
I.2 VALIDACIÓN DE MÉTODOS DE ANÁLISIS. .................................................. 10
I.2.1 Definición y Objetivos .............................................................................. 10
I.2.2 Clasificación de métodos analíticos ....................................................... 11
I.2.3 Parámetros analíticos de calidad para la validación de métodos.. ........ 12
I.2.3.1 Exactitud ................................................................................................. 12
I.2.3.2 Precisión ................................................................................................. 12
I.2.3.3 Linealidad ................................................................................................ 13
I.2.3.4 Límite de detección ................................................................................ 13
I.2.3.5 Límite de cuantificación ........................................................................ 13
I.2.3.6 Robustez ................................................................................................. 13
I. 3 DILTIAZEM ....................................................................................................... 14
I.3.1 Definición ................................................................................................... 14
I.3.2 Características Físico Químicas.............................................................. 14
I.3.3 Farmacocinética. ....................................................................................... 15
I.3.4 Farmacodinamia ....................................................................................... 16
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I.3.5 Farmacología y Uso .................................................................................. 17
I.3.6 Métodos de extracción y análisis ............................................................ 17
CAPÍTULO II. MARCO METODOLÓGICO .......................................................... 19
II.1 Población, muestra y criterios establecidos ............................................... 19
II.2. Parámetros físico-químicos .......................................................................... 20
II.2.1 Peso Promedio ......................................................................................... 21
II.2.2 Forma y Dimensiones ............................................................................. 21
II.2.3 Fuerza de ruptura ..................................................................................... 22
II.2.4 Friabilidad ................................................................................................. 23
II.2.5 Desintegración ......................................................................................... 23
II.2.6 Valoración del Principio Activo .............................................................. 24
II.2.7 Uniformidad de contenido…………………………………………………..24
II.2.8 Disolución…………………………………………………………………..….25
II.3 Validación del método de análisis para valorar Diltiazem, en Diltiazem 60 mg
tabletas, por espectrofotometría. ........................................................................ 26
II.3.1 Equipos ..................................................................................................... 26
II.3.2 Materiales y Reactivo ............................................................................... 26
II.3.3 Materias primas utilizadas en la validación del método. .................... 27
II.3.4 Requisitos previos para la validación. Características de validación.26
II.3.5 PARÁMETROS DE VALIDACIÓN: CONCEPTOS. ..................................... 27
II.3.6 Valoración del Diltiazem. ......................................................................... 30
CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ..................................................... 31
III.1 Características físico químicas .................................................................... 32
III.2 Validación del método analítico ................................................................... 36
III.2.1 Linealidad…………………………………………………………………..…..35
III.2.2 Precisión intermedia................................................................................... 40
III.2.3Repetibilidad entre concentraciones………………………………………38
III.2.4 Placebo………………………………………………………………………….39
III.2.5 Resumen de los parámetros de validación determinados ......................... 40
IV. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .................................................. 43
IV.1 Conclusiones ................................................................................................. 41
IV.2 Recomendaciones ......................................................................................... 44
V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................ 45
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ÍNDICE DE TABLA
Pag.
Tabla I. Operacionalización de las Variables. 19
Tabla II. Datos de peso promedio, diámetro y espesor de los lotes del producto Diltiazem 60 mg, innovador
31
Tabla III. Datos de Fuerza de Ruptura de las tabletas de Diltiazem. 32
Tabla IV. Datos de Friabilidad de los lotes de Diltiazem. 32
Tabla V. Datos de Desintegración de Ditliazem 60 mg 33
Tabla VI. Resultados de la uniformidad de contenido. 33
Tabla VII. Resultados de la disolución. 34
Tabla VIII (A). Estudio de linealidad de las tabletas de diltiazem 60 mg 35
TABLA VIII (B). Análisis de varianza 36
Tabla IX. Datos de Precisión intermedia 38
Tabla X. Datos de repetibilidad entre concentraciones. 39
Tabla XI. Datos de Placebo. 39
Tabla XII. Parámetros de validación para Diltiazem. 40
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ÍNDICE DE FIGURAS
Pag.
Figura 1. Estructura del Clorhidrato de Diltiazem. 14
Figura 2. Gráfica de linealidad de las tabletas de Diltiazem 60 mg.
36
Figura 3. Curvas de calibración de linealidad y exactitud.
37
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RESUMEN
En el presente trabajo se realizó el estudio de los parámetros de calidad del
Diltiazem tabletas 60 mg innovador, que se comercializa en Ecuador y se
desarrolló el método de validación por espectrofotometría para este producto. El
control de la calidad de las tabletas innovadoras, demostró que para los tres lotes
estudiados no se presentaron diferencias significativas en ninguno de los
parámetros físico-químicos evaluados. Para la validación del método se encontró
que era lineal en una concentración de 60 mg con un coeficiente de correlación r2
= 0,990, el método además fue preciso, exacto y reproducible y está conforme
para su empleo en los análisis del producto.
XiV
ABSTRACT
In the present work, the quality parameters of Diltiazem tablets 60 mg innovative, which is
marketed in Ecuador and the method of validation by spectrophotometry for this product
was developed. The quality control of the innovative tablets, showed that for the three
batches studied there were no significant differences in any of the physical-chemical
parameters evaluated. For the validation of the method, it was found to be linear at a
concentration of 60 mg with a correlation coefficient r2 = 0.990, the method was also
accurate, exact and reproducible and is suitable for use in the product analyzes.
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CERTIFICADO DEL TRIBUNAL
Acta de Registro de la Sustentación Final
El Tribunal de Sustentación del Trabajo de Titulación de las Srtas. JENNIFFER
LISSETH CAMPUZANO MAGALLANES y CARLA JACQUELINE GUTIÉRREZ
CABRERA, después de ser examinado en su presentación, memoria científica y
de defensa oral, da por aprobado el Trabajo de Titulación.
____________________________ Pilar SoledispaCañarte, MSc.
(Presidente) MIEMBRO DEL TRIBUNAL ________________________________ _______________________________ Kolenyak Dos Santos Fernanda, PhD Jiménez Heinert María Elena, MSc. DOCENTE–MIEMBRO DEL TRIBUNAL DOCENTE–MIEMBRO DEL TRIBUNAL
____________________________ Abg. FRANCISCO PALOMEQUE
SECRETARIO GENERAL
1
INTRODUCCIÓN.
En los últimos años, progresivamente se ha puesto más énfasis en las
pruebas de Validación de Métodos Analíticos dentro de la industria farmacéutica y
por las autoridades reguladoras. La garantía de calidad de los productos
farmacéuticos es un concepto amplio que abarca todos los asuntos que individual o
colectivamente influyen en la calidad de un producto.
En este sentido, debe destacarse la importancia de las pruebas de validación
para formas farmacéuticas orales sólidas de liberación inmediata, tales como
tabletas y cápsulas, ya que son esenciales para evaluar la calidad lote a lote de un
producto farmacéutico, para orientar el desarrollo de nuevas formulaciones y
garantizar la continuidad de la calidad y el rendimiento del producto después de
ciertos cambios, como cambios en la formulación, el proceso de fabricación, el sitio
de fabricación y la ampliación del proceso de fabricación (Rodríguez y col., 2014).
Tomando recuento de esto, claramente existe una necesidad real de
desarrollar pruebas de validación de métodos analíticos para productos
farmacéuticos para asegurar la calidad y atender las demandas regulatorias.
El Clorhidrato de Diltiazem es un antagonista de los canales de calcio,
benzotiazepina, utilizado principalmente en el tratamiento de la angina, la
hipertensión y las arritmias supraventriculares, y está comercialmente disponible en
tabletas, tabletas de liberación prolongada, liberación inmediata, cápsulas, cápsulas
de liberación prolongada o formas de dosificación inyectables (Cataldi, 2015).
Es un polvo cristalino blanco, inodoro, que es libremente soluble en agua,
diclorometano, alcohol metílico, cloroformo y ácido fórmico. Es ligeramente soluble
2
en alcohol deshidratado e insoluble en éter. El pH de una solución al 1% en agua es
de 4.3 a 5.3.
Este proyecto pretende evaluar el clorhidrato de diltiazem en tabletas, en el
medicamento innovador, validando el método analítico utilizado para cuantificar el
fármaco.
FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿La validación del método analítico utilizado para la determinación de
Diltiazem ayudará al aseguramiento y control de la calidad?
HIPÓTESIS
La validación del método analítico ayuda al aseguramiento de la calidad de las
tabletas de diltiazem
OBJETIVOS
Objetivos Generales
Realizar el control de calidad de tres lotes de las tabletas del diltiazem de
marca comercial y validar el método analítico.
Objetivos Específicos
Realizar el control de calidad de las tabletas de diltiazem innovadora
3
Desarrollar el protocolo para la validación del método analítico, para la
determinación de Diltiazem.
Establecer una evidencia documentada que demuestre el desempeño del
método analítico de cuantificación, si es factible para la obtención de resultados
reproducibles, confiables demostrados estadísticamente.
4
CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO
I.1 PARAMETROS DE CALIDAD, SU IMPORTANCIA EN LAS BUENAS
PRÁCTICAS DE MANUFACTURA (BPM).
1.1.1 Garantía de la calidad
Según las normas ISO 9000, en la industria farmacéutica la administración de la
calidad se define como (“…) el aspecto de la función administrativa que determina y
pone en práctica la "política de la calidad", es decir la orientación y las intenciones
generales de un organismo en lo que respecta a la calidad, en la forma como lo
expresan y lo autorizan las autoridades superiores de dicho organismo (…”).
Para la garantizar la administración de la calidad son necesarios algunos
aspectos básicos entre los cuales se pueden citar (ISO, 9000):
infraestructura apropiada o "sistema de calidad" que abarque la estructura,
procedimientos, procesos y recursos;
acciones sistemáticas necesarias para asegurar la confianza suficiente en
que el producto satisface determinadas condiciones de calidad.
La Garantía de la calidad es un concepto muy amplio que abarca todos los
aspectos que influyen en la calidad del producto individual o colectivamente. Se
puede considerar como el conjunto de medidas que se adoptanpara asegurar que
los productos farmacéuticos tengan la calidad necesaria para el uso al que están
destinados. Por tanto, la garantía de la calidad incorpora las BPM y otros factores,
incluyendo aquellos que van más allá del alcance de este trabajo, tales como el
diseño y la elaboración del producto.
5
1.1.2 Buenas Prácticas de Manufactura de productos farmacéuticos
Las Buenas Prácticas de Manufactura garantizan que los productos se fabriquen
de forma uniforme y controlada y de acuerdo con las normas de calidad apropiadas
al uso que se pretende dar a los productos, y acorde a las condiciones exigidas para
su comercialización. Las reglamentaciones que rigen las BPM tienen por objeto
principal disminuir los riesgos inherentes a toda producción farmacéutica que no
pueden prevenirse completamente mediante el control definitivo de los productos
(Mora, 2009).
I.1.3 Control de calidad
Dentro de las BPM representaal muestreo, ensayos, establecimiento de las
especificaciones así como a los procedimientos de organización, documentación, y
autorización que aseguren la calidad de los productos que se elaboren. No se limita
a las operaciones de laboratorio, sino que está presente en todas las decisiones
concernientes a la calidad del producto (Miró, 2015).
Los requisitos básicos del control de calidad son los siguientes:
a) Instalaciones adecuadas, personal capacitado, y procedimientos
aprobados.Deben llevarse a cabo muestreos, inspección, ensayo de
materias primas, materiales de envasado, y productos intermedios, a granel,
y acabados.
b) Se deben obtener muestras de materias primas, materiales de
envasado, y productos intermedios para su control de calidad.
c) Los métodos de ensayo deben ser validados.
d) Todos los procedimientos y actuaciones deben quedar
registradospara demostrar que se han llevado a cabo y que cualquier
desviación ha sido plenamente registrada e investigada.
6
e) Los productos terminados deben contener ingredientes que se
ajusten a la composición cualitativa y cuantitativa del producto, conforme a
su descripción en la autorización de comercialización; los ingredientes deben
tener la pureza exigida, los envases apropiados y las etiquetas
correspondientes.
f) Se deben registrar los resultados de la inspección y ensayo de
materiales y de productos intermedios, a granel y terminados, para verificar
si cumplen con las especificaciones; el examen de un producto debe incluir
la revisión y evaluación de la documentación de producción pertinente y un
estudio de las desviaciones de los procedimientos especificados.
g) No se debe autorizar la venta o suministro de ningún lote de
productos antes de su certificación por la(s) persona(s) autorizada(s) en el
sentido de que el lote esté conforme los requisitos de la autorización de
comercialización.
h) Debe retenerse un número suficiente de producto para posibilitar un
examen de éste en el futuro si fuere necesario; los productos retenidos
deben guardarse en el paquete final, a menos que dicho paquete sea
excepcionalmente voluminoso.
i) Debe mantenerse la documentación que respalde la calidad de la
materia prima.
I.1.3.1 Ensayos habituales en control de calidad
Los ensayos analíticos que se realizan en un Departamento de Control de
Calidad son numerosos y diversos, debido las diferentes formas farmacéuticas que
se analizan y a las exigencias de cada producto. Algunas pruebas son específicas
para algunos productos mientras que otros ensayos son más frecuentes y se
ejecutan para casi todos los productos.
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Dentro de los análisis más frecuentes realizados se encuentran (Castellanos,
2010, Volonté et al., 2013):
Aspecto:Se realiza una descripción cualitativa sobre el producto, ya sea materia
prima, producto terminado o intermedio. Se comprueban distintas características del
producto como pueden ser: apariencia (sólido, líquido, suspensión), color, forma,
tamaño, etc.
Identificación: Este ensayo debe ser lo más específico posible. La falta de
especificidad de un método de identificación puede ser resuelta mediante
combinación de varios métodos.
Ensayo de contenido: Consiste en una determinación cuantitativa del producto,
para establecer su grado de pureza o bien para determinar el contenido de uno o
más componentes.
Sustancias relacionadas: Son posibles impurezas que puede contener una
muestra, tanto derivadas de la degradación de algunos de los componentes de la
muestra como del proceso de producción.
Propiedades físico-químicas: Estas varían en función de la naturaleza del
producto. En preparados líquidos pH, acidez; en sólidos, tamaño de partícula,
dureza, etc.
Ensayo de disolución: Es la medida de como el principio activo es liberado del
producto farmacéutico. Es un ensayo muy importante dentro del control de calidad
de preparados sólidos ya que da una aproximación de la biodisponibilidad del
medicamento en el cuerpo.
Ensayo de uniformidad de dosificación: Es una medida de homogeneidad del
producto.
Ensayos biológicos: Este tipo de ensayos se realizan utilizando organismos
microbiológicos para evaluar determinadas propiedades del fármaco. Se suelen
8
realizar para muestras líquidas de las cuales debe evaluarse su esterilidad o su
carga microbiológica, o bien para antibióticos y vacunas para determinar su
efectividad.
I.1.3.2Métodos instrumentales (Romero, 2001)
Cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC): Se aplicaen ensayos de
contenido, caracterización de impurezas (acoplada con espectroscopia de masas),
determinación de impurezas y ensayos de estabilidad.
Cromatografía de gases (CG): Se emplea en ensayos de contenido,
caracterización de impurezas (acoplada con espectroscopia de masas),
determinación de impurezas y determinación de impurezas orgánicas volátiles
(solventes residuales).
Espectrofotometría Ultravioleta-Visible (UV-VIS): Se utiliza en ensayos de
contenido, ensayos de disolución y determinación de impurezas.
Espectrofotometría en el infrarrojo (IR): Aplicación en ensayos de identificación.
Espectrofotometría de absorción/ de emisión atómica: Determinación de
contenido de metales (Na, Li, K) y determinación de impurezas metálicas (Fe, Al).
Polarimetría: Aplicación en: determinación de pureza óptica y determinación de
compuestosenantioméricos.
El Consejo Internacional para la Armonización de Requisitos Técnicos para
Productos Farmacéuticos (ICH por sus siglas en Ingles),reúne a las autoridades
reguladoras y a la industria farmacéutica para trabajar en procesos de convergencia
regulatoria y desarrollo de guías internacionales de referencia internacional sobre
los aspectos científicos y técnicos del registro de medicamentos. Este consejo tiene
como misión lograr una mayor armonización en todo el mundo para garantizar que
9
los medicamentos seguros, efectivos y de calidad se desarrollen y registren en
forma eficiente. (ICH, 2015).
10
I.2 VALIDACIÓN DE MÉTODOS DE ANÁLISIS.
I.2.1 Definición y Objetivos
La validación de un método de análisis puede definirse de diferentes formas:
Demostración, a través de estudios de laboratorio, que la capacidad del
método satisface los requisitos para las contribuciones analíticas deseadas.
Sistematización de un procedimiento analítico para documentar pruebas que
demuestren que el método de análisis cumple con un propósito.
Procedimiento mediante el cual se prueba la exactitud y confianza de un
método analítico y se demuestra que se puede aplicar en un laboratorio.
Los métodos de análisis utilizados en el control de calidad de productos
farmacéuticos deben haber sido validados previo a su uso en rutina. La validación
de un método de ensayo tiene como finalidad demostrar la idoneidad de dicho
método para llevar a cabo un análisis determinado (Vázquez, 2008; Cáñez y
Monserrat, 2015).
Mediante la validación de un método se establece si los parámetros de calidad
satisfacen los requisitos de una aplicación analítica concreta. Se requiere
experimentación y comparación con valores de referencia bien conocidos(Vázquez,
2008).
Los objetivos de una validación son (WHO, 2002):
Coherencia entre los resultados obtenidos y las necesidades.
Asegurar la calidad de la información obtenida.
Caracterizar los métodos y herramientas analíticas.
Facilitar las auditorías de calidad.
Fundamentar la transferencia, de métodos y herramientas, y la armonización
de los resultados entre los laboratorios.
11
I.2.2 Clasificación de métodos analíticos
Se clasifican de acuerdo a los siguientes criterios (Matallana, 2015):
1) En función de su estado regulatorio en:
a) Métodos farmacopéicos: Todos aquellos métodos que aparecen en
cualquier farmacopea (FEUM, USP, BP, Europea, etc.)
b) Métodos no farmacopéicos: Aquellos no compendiados en una
farmacopea.
2) En función de su aplicación en:
a) Métodos para producto a granel
b) Métodos para producto terminado
c) Métodos para materia prima
d) Métodos indicadores de estabilidad
3) En función de la naturaleza de la respuesta analítica en:
a) Métodos físico-químicos: Cuando la respuesta es de carácter físico
(absorción de luz, emisión de luz, voltaje, etc) o químico (consumo de
iones -OH, consumo de un acomplejante, etc)
b) Métodos biológicos: Cuando la respuesta es de carácter biológico
(crecimiento de un microorganismo, protección, muerte, etc)
4) En función de su propósito analítico en:
a) Métodos para cuantificar el analito (potencia).
b) Métodos para establecer la presencia del analito a un límite.
c) Métodos para identificar el analito.
5) En función de la naturaleza del sistema de medición se clasifican en:
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a) Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta
analítica, permite medir una señal de ruido (cromatógrafo de líquidos,
cromatógrafo de gases, espectrofotómetros, etc).
b) Métodos en los cuales el instrumento de medición no permite medir
una señal de ruido (buretas, medidor de halos, potenciómetros, etc).
I.2.3Parámetros analíticos de calidad para la validación de métodos. (Eurachem, 2005; Sandoval et al, 2010; Farmacopea Argentina, 2012).
I.2.3.1 Exactitud
Refleja de forma evidente, el grado de concordancia entre un valor real (medido)
y un valor teórico (verdadero) y generalmente se sustenta a través del porcentaje de
recuperación.
I.2.3.2 Precisión
Es una medida de la dispersión de los datos en torno a un valor central o el grado
de concordancia entre mediciones replicadas de la misma cantidad, puede
expresarse como, desviación estándar, porcentajes del coeficiente de variación
(%CV) o la varianza. La precisión para métodos instrumentales debe ser menor o
igual al 2%. (Christian,2009)
El nivel de exigencia de los resultados dependerá del tipo de muestra y del método
utilizado. Según ICH Q2, (2005) tres niveles:
Repetibilidad
Precisión intermedia
Reproducibilidad
13
I.2.3.3 Linealidad
La linealidad es la capacidad, dentro de un intervalo dado, para proporcionar
resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito de la
muestra en estudio (CENAM-ema, 2008).
I.2.3.4 Límite de detección
El límite de detección (LD) es la concentración mínima que puede detectarse de
un analito en la matriz de una muestra, aunque no necesariamente cuantificarse,
bajo condiciones analíticas específicas (Thompson et al., 2002; IUPAC, 2014).
Existen diversas aproximaciones para obtener este valor:
Inspección visual en métodos no instrumentales.
Cálculos estadísticos basados en la relación señal/ruido, aplicables a
métodos con línea de base.
Cálculos estadísticos basados en la desviación estándar de la respuesta
obtenida, ya sea de los valores obtenidos o bien de parámetros de la curva
de calibración o del blanco.
Este es un parámetro para métodos de análisis de trazas y puede ser
necesario en ensayos de uniformidad y de disolución.
I.2.3.5 Límite de cuantificación
El límite de cuantificación (LC) es el valor de concentración mínima que puede
obtenerse con una imprecisión aceptable (Thompson et al., 2002; CENAM-ema,
2008).
I.2.3.6 Robustez
Es la evaluación de la susceptibilidad del método de análisis a variaciones de las
condiciones analíticas, como variaciones en reactivos y variaciones instrumentales.
14
I. 3 DILTIAZEM
I.3.1 Definición
Diltiazem (DTZ) es un bloqueador de canales de calcio que presenta actividad
óptica y tiene estructura de benzodiazepina. El fármaco que se emplea en la
terapéutica es el dextro (+) - cis-diltiazem con configuración (2S, 3S)(Quagliaa et al.,
2005).
Actúa como relajante de los músculos del corazón y los vasos sanguíneos. Se
utiliza para tratar la hipertensión, la angina de pecho y ciertos trastornos del ritmo
cardíaco (fibrilación auricular y las arritmias supraventriculares). Otras indicaciones
clínicas están en expansióncomo lo es su uso en el tratamiento de afecciones
dolorosas de la región anorrectal, incluidas las fisuras anales y el dolor
poshemorroidectomía (Fernández et al., 2009; Bernal et al., 2010).
El Diltiazem puede causar toxicidad cardiovascular grave, incluida la hipotensión
y diversos grados de bloqueo de la conducción auriculoventricular, especialmente
en los entornos de intoxicación aguda, también puede ser responsable de varios
efectos secundarios dermatológicos que incluyen erupción eritematosa, dermatitis
exfoliativa, pustulosis exantemática generalizada aguda y dermatitis fotoalérgica.
(Vademécum, 2013).
I.3.2 Características Físico Químicas
Descripción: Polvo cristalino blanco e incoloro.
Nombre químico: 1,5-benzotiazepina-4(5H)-ona,3-(acetoxi)-5-[2-
(dimetilamino)-etil]-2,3-dihidro-2-(4-metoxifenil) clorhidrato.
15
Fórmula molecular: C22H26N2O4S.HCl
Peso molecular: Diltiazem clorhidrato 450,98.
Solubilidad: Soluble en agua, cloroformo, ácido fórmico y metanol,
moderadamente soluble en etanol deshidratado. Prácticamente insoluble en
éter y benceno.
Punto de Fusión: 207 – 210°C con descomposición.
Almacenamiento: Conservar en envases bien cerrados y protegidos de la
luz.
Estructura molecular: Figura 1
Figura 1. Estructura del Clorhidrato de Diltiazem Fuente:Vademécum 2013
I.3.3 Farmacocinética. (Vademécum, 2013)
Absorción: El Diltiazem presenta una buena absorción.
Biodisponibilidad: Presenta una biodisponibilidad de +/-40%, sufriendo
metabolismo del primer paso.
16
Unión a proteínas: Relativamente alta 70-80% de los cuales una 35-40% se une
con la albúmina.
Biotransformación hepática: Se realiza a través del citocromo P450, resultando
como los metabolitos activos: desacetildiazem y N-desmetildiazem.
Vida media: oral (tabletas): +/- 20-30 minutos inicial Intravenoso: +/-3.4 horas
Duración de la acción: 30 – 60 minutos (tabletas)
Concentración máxima: se logra de 2 a 3 horas después de la administración
(tabletas).
Efecto terapéutico máximo: Antihipertensivo: en 2 semanas.
Eliminación: Biliar y renal, del 2 al 4% se elimina tal cual (para tabletas).
I.3.4 Farmacodinamia(Vademécum 2013)
Se considera que en el mecanismo de acción ocurre una inhibición de la entrada
de calcio en áreas selectivas voltaje-sensibles denominadas “canales lentos” que se
encuentran a lo largo de la membrana celular; se reduce la concentración
intracelular de calcio en las células de la musculatura lisa cardíaca y vascular y
ocurre una dilatación tanto de las arterias coronarias y periféricas como de las
arteriolas lo que podría reducir el ritmo cardíaco, disminuyendo la contractibilidad del
miocardio; creando un efecto inotrópico negativo; y disminuyendo también la
conducción nodal auriculo-ventricular.
Una dilatación periférica que produceeste fármaco, reduce la presión sistémica,
esto disminuye la tensión en la pared miocardio reduciendo a su vez el oxígeno
necesario en los tejidos del mismo. En la angina una relajación de las arterias
17
coronarias y una inhibición de los espasmos en la arteria coronaria mejorarán el flujo
sanguíneo y el suministro de oxígeno para el tejido miocárdico.
El efecto antihipertensivo se logra al reducirse la resistencia vascular periférica
total como resultado de una vasodilatación.
I.3.5 Farmacología y Uso
En un estudio realizado por Obata(2006), se examinó el efecto del diltiazem,
sobre la liberación de norepinefrina (NE) inducida por la despolarización de potasio
(K +) en el miocardio de rata utilizando una técnica de microdiálisis montada de
manera flexible. Los resultados sugierieron que el calcio (Ca2 +) puede jugar un
papel clave en la liberación de NE inducida por la despolarización de K + en el
miocardio.
La dosis inicial recomendada en humanos para el tratamiento como antianginoso
y como antihipertensivo es de 30 mg de tres a cuatro veces al día, debiendo
incrementarse la dosis gradualmente en intervalos de uno o dos días según sea
necesario. (Vademécum, 2013)
I.3.6 Métodos de extracción y análisis
Rahman, (2000), desarrolló un método espectrofotométrico para la determinación
del clorhidrato de diltiazem. El fármaco se hierve con metavanadato de sodio en
medio de ácido sulfúrico (11,0 M) durante 20 min y la absorbancia se mide a 750
nm.
18
Sanchez y Rocha (2011), Plantearon un método por microextracción líquida-
líquida sin segmentación de fase en un sistema de flujo multicommutado para la
determinación del Diltiazem. El procedimiento se basó en la formación de un par
iónico entre el fármaco y el colorante azul de bromotimol a pH 3,5. La detección se
realizó sin separación de fases en un tubo de vidrio acoplado a un
espectrofotómetro de fibra óptica.
Adibkia et al, (2014), propusieron una nueva técnica optimizada Liquisolid que es
un nuevo enfoque para formular formas de dosificación de liberación sostenida.
Parece que la solubilidad de un ingrediente activo en el disolvente juega un papel
importante en el perfil de liberación del fármaco. El objetivo que tuvo ese estudio fue
investigar el efecto del tipo de disolvente sobre el perfil de liberación de clorhidrato
de diltiazem a partir de compactos liquisólidos.
19
CAPÍTULO II. MARCO METODOLÓGICO
El tipo de Investigación es experimental, de laboratorio, correlacional. Se seguirá
un método empírico experimental.
II.1 Población, muestra y criterios establecidos
La población estará constituida por tres lotes de las tabletas de Diltiazem
clorhidrato, producidas y comercializadas por una multinacional radicado en
Ecuador. La muestra utilizada es finita y está en función de los requerimientos de las
técnicas de análisis empleadas, con repeticiones en cada caso.
Criterio de inclusión: tabletas que no estén caducadas, que pertenezcan al
mismo laboratorio y a los lotes seleccionados.
Criterios de exclusión: tabletas caducadas, de lotes diferentes a los utilizados y
de otro laboratorio.
Variable dependiente: Validación del método
Variables independientes: Linealidad, Precisión, Robustez, Repetibilidad y
Exactitud.
Variable interviniente: Equipo empleado; Analista
20
Tabla I. Operacionalización de las Variables
VARIABLE DEFINICIÓN INDICADOR UNIDAD
VALIDACIÓN
(Dependiente) Demostración, a través de
estudios de laboratorio, que
la capacidad del método
satisface los requisitos para
las contribuciones analíticas
deseadas
Se puede determinar
por medio de ensayos
químicos, con
repetibilidad y
reproducibilidad.
%
Linealidad
(Independiente) Capacidad, dentro de un intervalo dado, para proporcionar resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito de la muestra en estudio
Corresponde a la ecuación de la recta.
SD
Precisión (Independiente)
Es una medida de la dispersión de los datos en torno a un valor central o el grado de concordancia entre mediciones replicadas de la misma cantidad,
Puede expresarse como, desviación estándar, porcentajes del coeficiente de variación o la varianza.
%, CV, SD
Robustez
(Independiente)
Es la evaluación de la susceptibilidad del método de análisis a variaciones de las condiciones analíticas, como variaciones en reactivos y variaciones instrumentales
En tal caso, se utiliza para métodos para
HPLC %
Exactitud
(Independiente)
Refleja de forma evidente, el grado de concordancia entre un valor real (medido) y un valor teórico (verdadero)
Es el porcentaje de los resultados obtenidos con el de referencia
aceptado.
%
II.2. Parámetros físico-químicos
Las tabletas de Clorhidrato de Diltiazem 60 mg, fueron adquiridas en el mercado
farmacéutico ecuatoriano, en las farmacias y droguerías de la ciudad de Guayaquil.
Se realizaron los estudios a 150 tabletas de 3 lotes de un solo laboratorio, todos
dentro del periodo de vida útil y se codificaron por marca con letras mayúsculas de
la A hasta la C.
21
Todos los ensayos fueron realizados siguiendo los métodos descritos en la USP-
38/NF33 (2015), previa validación de algunos parámetros. Las comparaciones se
realizaron frente a un estándar de Diltiazem Clorhidrato.
II.2.1 Peso Promedio
Tomar 10 tabletas, pesarlas, y anotar los datos, hacer un promedio de las 10, se
realizó la prueba por triplicado. Se empleó una balanza analítica Mettler Toledo.
II.2.2 Forma y Dimensiones
La forma se determinó visualmente y se midió con vernier el ancho y largo de 10
tabletas y se anotaron los resultados para calcular el valor promedio, se realizó por
triplicado por cada lote.
22
II.2.3 Fuerza de ruptura
La fuerza de ruptura y el grado de compactación de las tabletas también llamada
dureza, se lo determino con 20 tabletas, colocándolas en un durómetro DR
SCHELEUNIGER, 6 D, Código DUR – 0710, que tiene dos superficies separadas,
que al encenderla, se origina un desplazamiento directo a la tableta hasta que se
produce la ruptura de las mismas, en esta equipo los resultados se reportan en KgF.
La prueba se realizó por cada lote en estudio por triplicado.
23
II.2.4 Friabilidad
Controlar la resistencias de los comprimidos al desgaste por rodadura, friccion o
caída asi como la resistencia a los esfuerzos mecánicos a los que son sometidos en
los procesos de envasado, grageado y transporte, se pesa alrededor de 6 g de
muestra, pesando previamente, colocar las tabletas en el tambor giratorio
(friabulómetro marca VANKEL, Código: RFQFR-251), durante unos 5 minutos,
pasado el tiempo tomar las tabletas y proceder a pesarlas nuevamente, con esto se
verificara si en este proceso, tableta sufrió algún cambio, con respecto a su peso.
Se realiza esta prueba por triplicado por cada lote.
II.2.5 Desintegración
Se empleó un equipo de desintegración VANKEL, Código VK -7. Se tomaron 6
tabletas para su respectiva desintegración, se colocó cada tableta en cada tubo de
24
la canastilla del desintegrador para que se sumerja en agua a 37°C, que se
mantiene con el calefactor prendido, propio de la máquina, añadir un disco a cada
tubo de canastilla, se sostiene la canastilla con la varilla del soporte del equipo,
anotar el tiempo inicial, observar constantemente la desintegración de la tableta, una
vez que se desintegro, anotar el tiempo final, y restar el final con el inicial. Se realizó
la prueba por triplicado en cada uno de los lotes en estudio.
II.2.6 Valoración del Principio Activo
Pesar 100 mg que contenga aproximadamente 25 mg de Diltiazem y transferir a un
matraz volumétrico de 100 mL con unos 70 mL de agua, disolver la muestra
agitando y enrasar con agua, pipetear 1 mL a un matraz de 50 mL y enrasar a
volumen final con agua. La valoración siguió una técnica espectrofotométrica, en la
cual aplicamos la fórmula para obtener el porcentaje de concentración. Esta
metodología la aplico tanto para estándar secundario como para el primario (USP),
ya que existirá una comparación de sus porcentajes, para poder decir que el
25
estándar secundario es óptimo para siguientes análisis. El equipo a utilizar es un
PerkimElmers, a una longitud de onda de 237 nm, y su blanco es agua.
II.2.7 Uniformidad de contenido
Pesar 100 mg que contenga aproximadamente 25 mg de Diltiazem y transferir
a un matraz volumétrico de 100 mL con unos 70 mL de agua, disolver la muestra
agitando y enrasar con agua, pipetear 1 mL a un matraz de 50 mL y enrasar a
volumen final con agua. La valoración siguió una técnica espectrofotométrica, en la
cual aplicamos la fórmula para obtener el porcentaje de concentración. El equipo a
utilizar es un PerkimElmers, a una longitud de onda de 237 nm, y su blanco es agua.
Este análisis repetimos 10 veces, por 3 lotes.
II.2.8 Disolución
Llevar 6 tabletas en los vasos de disolución a 900 mL de Agua como medio,
con el aparato 2 a 75 rpm durante 30 minutos, pasado el tiempo, filtrar y tomar una
26
alícuota de 1 mL a 10 mL con agua, leerlo a 237 nm, el blanco es agua. Este
análisis se lo repite por 3 lotes.
II.3 Validación del método de análisis para valorar Diltiazem, en
Diltiazem 60 mg tabletas, por espectrofotometría.
Esta validación será aplicable al Método analítico por espectrofotometría para la
identificación y cuantificación de Diltiazem en Diltiazem 60 mg.
II.3.1 Equipos
EQUIPO MARCA CÓDIGO CALIBRACIÓN CALIFICACIÓN
BALANZA
ANALITICA
METTLER
TOLEDO
RFQBA-
269268
Fecha de
Calibración:
Oct
2017
Próxima
Calibración:
Abril
2018
Calificación
Desempeño/
Calificación
Operacional
Fecha de
realización:
Oct 2017.
II.3.2 Materiales y Reactivos
Matraces volumétricos de 50 mL, 100 mL Agua Pipeta Volumétrica de 1 mL
MATERIAL MEDIDA TOLERANCIA LOTE DESVIACIÓN
STANDAR
CAPACIDAD
DE
VOLUMEN
Matraz
Volumétrico
100 mL ± 0,100 mL 01,15 0,012 mL 100,008 mL
Matraz
Volumétrico
50 mL ± 0,060 mL 05,13 0,013 mL 49,984 mL
Pipeta
Volumétrica
1 mL ± 0,008 mL 05,13 0,002 mL 0,997 mL
27
II.3.3 Materias primas utilizadas en la validación del método.
MATERIAS PRIMAS NÚMERO DE CONTROL FECHA EXPIRACIÓN
DILTIAZEM USP J1M121 VIGENTE
DILTIAZEM 0040073 MAR/19
II.3.4 Requisitos previos para la validación. Características de
validación.
II.3.4.1 Antes de iniciar el estudio de validación, verificar que las calibraciones y
mantenimientos preventivos de todos los equipos que se van a utilizar se
encuentren vigentes.
II.3.4.2 Verificar que el estándar USP DILTIAZEM tenga vigente la fecha de
caducidad.
II.3.4.3 Verificar que el estándar secundarioDILTIAZEMa emplear haya sido
debidamente valorado contra el estándar USP.
II.3.4.4 Verificar que todos los métodos estén documentados.
II.3.4.5 Realizar la preparación de las muestras y el estándar siguiendo los pasos
detallados en la metodología analítica para DILTIAZEM en DILTIAZEM 60
mg Tabletas.
II.3.5 PARÁMETROS DE VALIDACIÓN: CONCEPTOS.
1. Linealidad. 1.1 Que la curva de calibración obedezca a la ecuación de una recta (Abs= mC+b) 2. Intervalo de trabajo. 2.1 60 mg.
3. Precisión. 3.1 Desviación Estándar por Reproducibilidad.
3.2 Desviación Estándar por Repetibilidad.
4. Exactitud.
28
5. Límite de Cuantificación. 6. Límite de Detección.
Linealidad.- Define la capacidad de un método para dar resultados proporcionales
a la concentración del analito. Responde a la ecuación de una recta. Enla
comprobacióndelalinealidad seprocedióarealizarunacurvade
calibracióndeáreavsconcentracióndelestándar.
. Para definir la linealidad del métodosedeterminaron loscoeficientes de
correlación r (>0,99); coeficiente de determinación r2
(>0,99), factor de respuesta
f cuyo coeficiente de variación (Cvf) debe ser < 5%; significación estadística de la
varianza de la pendiente a través de t studentdonde el valor
detexperimentaldebesermayorque ttabuladaytestdeproporcionalidadparael intercepto
donde texperimentaldebe ser menor que ttabulada.
Intervalo de trabajo.- Será por concentración de 90%- 110% para Diltiazem 60 mg
tabletas.
Precisión.- Es el grado de semejanza entre resultados analíticos independientes,
obtenidos bajo condiciones específicas y del mismo lote de material homogéneo. La
precisión se evaluó en términos derepetibilidad y precisión intermedia.
Precisión intermedia.-
Seefectuóconunsoloniveldeconcentracióndelamuestraequivalenteal
100%,porquintuplicado,pordiferentesanalistas,díasdiferentes.Serealizó
unapruebadeFischerparadeterminarsiexistíandiferenciassignificativas entre la
precisión alcanzada por losanalistas y un test de student para
determinarsiexistendiferencias significativasentrelasmediasalcanzadaspor
losanalistas.
29
Como criterio se exige que el coeficiente de variación (Cv)sea≤2%.
Repetibilidad.- Determina cómo se repiten los resultados dentro de la aplicación
para la cual ha sido diseñado el método en un mismo intervalo determinado de
tiempo. El coeficiente de variación debe ser menor del 2%.
Reproducibilidad.- Determina con facilidad con que se puede reproducir un
resultado aplicando adecuadamente un método entre distintos intervalos
determinados de tiempo.
Para estos parámetros se realizaron los ensayos en 5 días con intervalos de 48
horas cada análisis. Se realizaron 5 repeticiones entre las horas del día.
Exactitud.- Es el grado de concordancia entre el resultado de un ensayo y el valor
de referencia aceptado. También se conoce como sesgo.
Para el análisis de este parámetro se utilizó un diseño similar alde linealidad
peroempleando3nivelesdeconcentraciones(bajo,medioyalto),cadauno portriplicado
ysedesarrolló elmétodo propuesto.
Se determinó el porcentaje de recobro R y el coeficiente de variación.
Concentración medida
%Recobro =------------------------------------ x 100
Concentración añadida
Seanalizóestadísticamentelarelaciónentrelasconcentracionesmedidasy
30
añadidas, a través de una curva de recuperación.
Paraqueelmétodoseaexacto,nodebenexistirdiferenciassignificativasentre
elvalordelrecobradomedioyel100%yelcoeficientedevariacióndebeser ≤2%.
Límite de detección (LOD).- Es la mínima cantidad de analito en una muestra que
puede detectarse.
Límite de cuantificación (LOC).- Es la mínima cantidad de analito en una muestra
que puede determinar con precisión y exactitud.
Preparación de los estándares secundarios de la curva.
La curva de calibración se realizará con el Estándar secundario el cual se elaboró
a tres concentraciones diferentes, de la siguiente forma:
Concentración 1: 0.004 mg/mL
Pesar exactamente 20 mg de Diltiazem transferir a un matraz de 100 mL, disolver
y llevar a volumen con Agua, de esta solución se pipetea 1 mL y se lleva a volumen
a un matraz volumétrico de 50 mL con agua.
Concentración 2: 0.005 mg/mL
Pesar exactamente 25 mg de Diltiazem transferir a un matraz de 100 mL, disolver
y llevar a volumen con Agua, de esta solución se pipetea 1 mL y se lleva a volumen
a un matraz volumétrico de 50 mL con agua.
31
Concentración 3: 0.006 mg/mL
Pesar exactamente 30 mg de Diltiazem transfiera a un matraz de 100 mL
disuelva y lleve a volumen con Agua, de esta solución pipetee 1 mL y lleve a
volumen a un matraz volumétrico de 50 mL con agua.
Longitud de Onda: 237 nm
Se realizaron 3 curvas de calibración, de las cuales cada una tenía 3
concentraciones. Las curvas de calibración se realizaron en 3 días consecutivos
cada una. Al final, cuando se obtuvieron los resultados de la curva de calibración, se
seleccionó una de las tres curvas, la que tuviera un r2(Coeficiente de correlación),
más cercano a 1. En el caso de este método analítico se procedió a realizar tanto la
curva de calibración con estándar USP como secundario.
II.3.6 Valoración del Diltiazem.
Diltiazem 60 mg Tabletas.
Se pesaron 100 mg que contenían aproximadamente 25 mg de Diltiazem y se
transfirieron a un matraz volumétrico de 100 mL con unos 70 mL de agua, se
disolvió la muestra agitando y se enrasó con agua, se pipeteó 1 mL a un matraz de
50 mL y se enrasó a volumen final con agua.
32
CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
III.1 Características físico químicas
Tabletas del Laboratorio Innovador.- Tabletas blancas, biconvexas en un lado
de la cara tiene el nombre de la empresa y en la otra, presenta una ranura.
En la tabla II se presentan los resultados que se obtuvieron del ensayo peso
promedio, diámetro y espesor de las tabletas del producto innovador, cumpliendo
con las especificaciones de la farmacopea.
Tabla II. Datos de peso promedio, diámetro y espesor de los lotes del
producto Diltiazem 60 mg, innovador
Entre los pesos promedios, encontramos una similitud entre sus pesos prácticos,
aunque el USP me indique que el intervalo es ≤ 5%, cuando se obtiene datos a
partir de análisis realizados se puede disminuir ese rango de aceptación a un 3%, y
de esta manera disminuir el margen de error. Para ninguna de las tres variables
estudiadas se encontraron diferencias significativas entre los lotes estudiados
(anexo 1).
Producto
Peso de las Tabletas
(mg) ± ESM
Diámetro de las
Tabletas mm
Espesor de las Tabletas mm
Lote A 239,67 ± 2,13 8,14 ± 0,01 3,75 ± 0,01
Lote B 239,09 ±1,14 8,14 ± 0,01 3,75 ± 0,01
Lote C 239,07 ± 2,40 8,14 ± 0,01 3,75 ± 0,00
33
En la tabla IIIse presentan los resultados obtenidos del ensayo de la dureza de
las tabletas de los diferentes lotes; en los 3 casos el ensayo respondió de manera
satisfactoria con valores entre 10 - 20 kgFque cumplen con lo establecido en por los
controles internos para que de la mejor manera se optimice el proceso de
manufactura, ya que la USP no indica un rango de aceptación, más bien,
recomienda utilizar un método de análisis. Por lo tanto el estudio demostró que no
hubo diferencias significativas entre los diferentes lotes (anexo 2).
Tabla III. Datos de Fuerza de Ruptura de las tabletas de Diltiazem.
Producto DurezakgF
Lote A 11,25 ± 0,38
Lote B 10,93 ± 0,55
Lote C 11,0 ± 0,53
De la misma manera, para el estudio de ruptura en las tabletas, la USP
recomienda un tipo de análisis pero no un rango de aceptación. Los resultados
obtenidos del ensayo de friabilidad de las tabletas, se presentan en la tabla IV.
Tabla IV. Datos de Friabilidad de los lotes de Diltiazem.
Producto Friabilidad %
Lote A 0,23 ± 0,00
Lote B 0,29 ± 0,00
Lote C 0,17 ± 0,00
34
Todos los lotes cumplieron con lo establecido en la Farmacopea No mayor 1%.
No encontrándose para ellos diferencias de significación.
Para el tiempo de desintegración, los resultados se presentan en la tabla V. La
farmacopea plantea que el tiempo de desintegración no debe superar los 30 min,
por lo que los resultados obtenidos se encuentran dentro del rango planteado y
estadísticamente no se presentan diferencias significativas para p<0,05 (anexo 3).
Tabla V. Datos de Desintegración de Ditliazem 60 mg.
Producto Desintegración %
Lote A 3,83 ± 0,75
Lote B 4,66 ± 0,51
Lote C 3,66 ± 0,51
Como se observa, los tiempos de desintegración para las tabletas fueron bajos.
En el análisis físico-químico realizado a los tres lotes de las tabletas de el
Diltiazem innovador, se observó que todos los parámetros cumplían con lo
establecido en la Farmacopea y que no existían diferencias significativas para
p<0,05 entre los lotes estudiados, para ninguno de los parámetros analizados.
En el análisis de uniformidad de contenido, encontramos un coeficiente de
variación por debajo del 2%. Como lo explicala tabla VI.
35
Tabla VI. Resultados de la uniformidad de contenido.
RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza DESVEST CV
LOTE A 10 998,81 99,881 0,43952111 0,66296388 0,66375375
LOTE B 10 1002,34 100,234 0,34904889 0,5908036 0,58942434
LOTE C 10 1000,03 100,003 0,17211222 0,4148641 0,41485166
PROM. TOTAL 100,039333
La uniformidad de contenido se la realiza para controlar las variaciones de
contenido del principio activo, En todos los lotes los porcentajes de principio activo
cumplieron con lo establecido en la farmacopea y estuvieron entre 98,91 y 101,25
%.
En la disolución, el coeficiente de variación obtenido también se encuentra en el
rango de aceptación (tabla VII). Declarando que las tabletas cumplen las
especificaciones en el tiempo determinado a un rpm establecido,
LOTE A LOTE B LOTE C
100,34 100,25 99,18
99,82 100,19 99,68
100,8 100,86 100,02
100,71 101,25 100,66
99,81 99,4 100,52
99 100,22 100,18
99,29 100,06 100,04
100,25 100,71 99,83
98,91 100,01 99,93
99,88 99,39 99,99
36
Tabla VII. Resultados de la disolución.
Análisis de varianza de un factor
RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza DESVEST CV
LOTE A 6 601,47 100,245 0,40115 0,63336403 0,63181608
LOTE B 6 601,7 100,283333 0,33518667 0,57895308 0,57731735
LOTE C 6 601,09 100,181667 0,36925667 0,60766493 0,60656301
PROM. TOTAL 100,236667
LOTE A LOTE B LOTE C
100,56 100,89 99,65
99,67 100,67 99,38
100,87 100,56 100,76
100,94 99,67 100,87
99,45 99,46 100,45
99,98 100,45 99,98
Se observó que a los 30 minutos en todos los lotes se disolvía entre el 99,67
al 100,89%.
III.2 Validación del método analítico
III.2.1 Linealidad
Para definir la linealidad se determinaron los coeficientes de correlación y el
coeficiente de variación que debe ser inferior al 5%. El ensayo que se realizó,
mostró que la linealidad alcanzó un coeficiente de variación de 0,990, por encima
del rango de especificación, que es >0,980, con una ecuación de la recta y= 42,533x
+ 0,0195 (tabla VIII, figura 2).
37
Tabla VIII (A). Estudio de linealidad de las tabletas de diltiazem 60 mg
Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza DESVEST %CV
ENE/02/18 5 1,2349 0,24698 7E-09 8,3666E-05 0,033875619
ENE/04/18 5 1,2349 0,24698 1,7E-08 0,000130384 0,052791339
ENE/05/18 5 1,2341 0,24682 1,2E-08 0,000109545 0,044382348
ENE/08/18 5 1,2353 0,24706 7,3E-08 0,000270185 0,109360124
ENE/10/18 5 1,2356 0,24712 5,7E-08 0,000238747 0,096611657
PROM. TOTAL 0,246992
38
TABLA VIII (B). ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de
libertad
Promedio de los
cuadrados F Probabilidad Valor crítico
para F
Entre grupos 2,544E-07 4 6,36E-08 1,91566265 0,147132091 2,866081402
Dentro de los grupos 6,64E-07 20 3,32E-08
Total 9,184E-07 24
Sr 0,00018221 %CVr 0,073771082
SL2 6,08E-09
SR 0,00019819 %CVR 0,080242205
Figura 2. Gráfica de linealidad de las tabletas de Diltiazem 60 mg.
En el análisis estadístico de la varianza, demostró que la texperimental es mayor que
la ttabulada 2,86 > 1,96. De acuerdo de los parámetros de desviación estándar para
Repetibilidad y reproducibilidad, sería no más del 2%, del cual su SR en porcentaje
es 0,08% y su Sr es 0,073%, lo cual indica que en 5 días alternos, 5 veces al día, el
método analítico que ha sido desarrollado, se puede ejecutar sin complicación
alguna.
Los resultados obtenidos por los tres días consecutivos para la curva de
calibración en este caso del estándar secundario, se reflejan en la figura 3 A, B, C
y = 42,533x + 0,0195R² = 0,99
0,1500
0,1800
0,2100
0,2400
0,2700
0,3000
0,0000 0,0010 0,0020 0,0030 0,0040 0,0050 0,0060 0,0070
39
en el que por medio de herramientas estadísticas se pudo reflejar el coeficiente de
variación antes mencionado.
A B
C
Figura 3. Curvas de calibración de linealidad y exactitud.
(A), (B), (C) Curva de calibración de la linealidad del método analítico por
espectrofotometría (UV).
40
III.2.2 Precisión intermedia
Como consecuencia del cotejo de las varianzas en los días en el análisis de cada
analista y entre las analistas en el propio día se consiguió, para ambos casos, que la
F experimental es menor que la F tabulada para un grado de significación del 95 %
y 14 grados de libertad, lo que aprueba a decir que no existen diferencias
significativas entre las dispersiones. El coeficiente de variación total calculado fue de
0,14 %, inferior al 2 % establecido como límite de este ensayo (tabla IX).
Tabla IX. Datos de Precisión intermedia
III.2.3Repetibilidad entre concentraciones.
Los coeficientes de variación por concentración estuvieron muy por debajo del
2% especificado, pudiendo decir que el método es repetible a concentraciones de
90 al 110 %. (tabla X)
41
Tabla X. Datos de repetibilidad entre concentraciones.
NIVEL DE CONCENTRACIÓN
ẋ% S2 DESV VC%
90% 90,1973 0,09174 0,3029 3,4E-05
100% 99,388 0,04168 0,2042 2,1E-05
110% 110,687 0,79609 0,8922 8,1E-05
III.2.4 Placebo
Se realiza el ensayo, en cinco días, cinco veces cada día, con la fórmula de la
tableta sin el principio activo, en tal caso, no existió ningún tipo de interferencia por
parte del placebo en ninguno de los cinco días, existió una repetibilidad y
reproducibilidad por debajo del 2% de especificación. (tabla XI).
Tabla XI. Datos de Placebo.
ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los
cuadrados F Probabilidad Valor crítico
para F
Entre grupos 1,064E-07 4 2,66E-08 1,11764706 0,375984425 2,866081402 Dentro de los grupos 4,76E-07 20 2,38E-08
Total 5,824E-07 24
Sr 0,00015427 %CVr 0,636122737
SL2 5,6E-10
SR 0,00015608 %CVR 0,643563022
42
III.2.5 Resumen de los parámetros de validación determinados.
En la tabla la tabla XII, se resumen los parámetros de validación establecidos
para la técnica analítica por espectrofotometría UV para las tabletas del Diltiazem 60
mg.
TABLA XII. Parámetros de validación para Diltiazem.
Parámetros DILTIAZEM 60 mg Tabletas
%CV REPETIBILIDAD 0,073771082 %
%CV REPRODUCIBILIDAD
0,080242205 %
EXACTITUD 1,8%
INCERTIDUMBRE 0,00531%
LINEALIDAD 0,990
Los resultados obtenidos permiten demostrar que el método de cuantificación es
capaz de producir resultados confiables y reproducibles dentro de un intervalo
determinado, por lo tanto se considera validado.
43
IV. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
IV.1 Conclusiones
Los resultados obtenidos nos permiten arribar a las siguientes conclusiones:
Los parámetros físico químicos determinados para el Diltiazem 60 mg
innovador, cumplen con los estándares establecidos en la farmacopea, no se
observaron diferencias significativas entre los tres lotes estudiados,
comercializados en Ecuador.
Se validó un método espectrofotométrico para cuantificar al Diltiazem,
encontrándose que el método resultó lineal, exacto y reproducible.
El método realizado para Diltiazem 60 mg tabletas, cumple con las
condiciones para asegurar y demostrar de manera documentada que el
método es capaz de producir resultados confiables y reproducibles dentro de
un intervalo determinado, por lo tanto se considera validado.
44
IV.2 Recomendaciones
Realizar el estudio comparativo del medicamento genérico que se
comercializa en Ecuador, contra el innovador, para comprobar su
equivalencia.
45
V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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ANEXO 1
Peso Promedio
Análisis de varianza de dos factores con una sola muestra por grupo
RESUMEN Cuenta Suma Promedio Varianza Fila 1 3 711,7 237,233333 6,09333333 Fila 2 3 715,3 238,433333 1,77333333 Fila 3 3 724,7 241,566667 3,10333333 Fila 4 3 724,3 241,433333 4,72333333 Fila 5 3 716 238,666667 3,16333333 Fila 6 3 716,9 238,966667 2,50333333 Fila 7 3 721,2 240,4 6,79 Fila 8 3 716,2 238,733333 0,90333333 Fila 9 3 715,2 238,4 3,61 Fila 10 3 716,8 238,933333 0,09333333
Columna 1 10 2396,7 239,67 5,05122222 Columna 2 10 2390,9 239,09 1,441 Columna 3 10 2390,7 239,07 6,42677778
ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de
libertad Promedio de los cuadrados F Probabilidad
Valor crítico para F
Filas 53,0803333 9 5,89781481 1,68000549 0,16670327 2,45628115 Columnas 2,32266667 2 1,16133333 0,33080835 0,72261864 3,55455715 Error 63,1906667 18 3,51059259
50
ANEXO 2
Dureza
Análisis de varianza de un factor
RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza
Columna 1 6 67,5 11,25 0,147 Columna 2 6 65,6 10,9333333 0,30666667 Columna 3 6 66 11 0,284
ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las
variaciones Suma de
cuadrados Grados de
libertad Promedio de los
cuadrados F Probabilidad Valor crítico
para F Entre grupos 0,33444444 2 0,16722222 0,6800723 0,52153194 3,68232034 Dentro de los
grupos 3,68833333 15 0,24588889
Total 4,02277778 17
51
ANEXO 3
Tiempo de desintegración
Análisis de varianza de un factor
RESUMEN Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza
Columna 1 6 23 3,83333333 0,56666667 Columna 2 6 28 4,66666667 0,26666667 Columna 3 6 22 3,66666667 0,26666667
ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los cuadrados F
Probabilidad
Valor crítico para
F
Entre grupos 3,44444444 2 1,72222222 4,6969697
0,06606573
3,68232034
Dentro de los grupos 5,5 15 0,36666667
Total 8,94444444 17